日本血吸虫中国大陆株62kDa重组抗原的表达、纯化及鉴定

目的：获得并鉴定日本血吸虫62kDa重组抗原。方法：将Sj62/pGEX-1 λT／TG2克隆菌用IPTG诱导表达,经超声粉碎,离心后取上清过GS4B柱,用还原型谷胱甘肽洗脱液洗脱后获得纯化的rSj62/26GST重组融合蛋白,用Thrombin酶切后获得纯化的rSj62重组蛋白,并对重组蛋白进行SDS－PAGE和Western blotting鉴定。结果：重组蛋白纯度较高,且可被血吸虫感染的鼠血清识别。结论：用重组的方法获得了与天然虫源蛋白性质相似的重组抗原蛋白。     

日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj338的免疫细胞化学定位

目的　应用免疫电镜技术观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 方法　收集新鲜的日本血吸虫成虫 ,常规固定、包埋 ,制备日本血吸虫成虫超薄冷冻切片。用纯化的抗rSj338单特异多克隆抗体为一抗 ,同时 ,以正常兔血清作阴性对照 ;以直径为 10nm胶体金颗粒标记的蛋白A进行定位 ,进行组织化学反应 ,透射电镜观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 结果　高密度胶体金颗粒主要分布于日本血吸虫线粒体外膜上 ,在线粒体的嵴上也见分布。结论　rSj338蛋白确为日本血吸虫线粒体相关蛋白 ,与采用BLAST网分析结果同源性一致     

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

目的为探索血吸虫病疫苗的新路径,对日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定.方法分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的一cDNA片段(Sj338/24)的开读框序列,在其上下游分别设计引物A和B,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后将该片段重组于pGEM-T中并进行DNA测序鉴定及检索.再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX-6P-1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定.结果该目的基因PCR产物全长共487bp,其开读框由459bp组成,编码153个氨基酸残基组成的多肽.DNA序列同源性分析发现,Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源.重组质料pPEX-6P-1/Sj338能高效融合表达,融合蛋白的分子量为43kDa.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性.结论·Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因,重组蛋白有望成为新的疫苗侯选分子.     

日本血吸虫(中国大陆株)26kDa基因重组蛋白(rSjc26GST)对虫卵肉芽肿形成的影响

用日本血吸虫虫卵肉芽肿的小鼠肺模型进行研究。ＩＣＲ雄性小鼠３２只,分成免疫组和佐剂对照组各１６只,免疫组小鼠经ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫。免疫结束后第５天两组小鼠均由尾静脉注射新鲜日本血吸虫虫卵悬液０．２ｍｌ（内含活卵１５００－２０００个）,于注卵后第８天、１６天和２１天分批剖杀小鼠,观察肺部形成的虫卵肉芽肿病变。结果发现免疫鼠肺内肉芽肿大小受到明显抑制,免疫后第８天、１６天、２１天肺肉芽肿平均直径分别为１００．００±１２．６μｍ,１０６．４３±１１．４μｍ,１０５．７０±１１．８μｍ,对照鼠在相应时间分别为１４１．９０±２３．４μｍ,１７６．６７±３４．９μｍ,１９９．５３±２１．７μｍ,抑制率从８天的２９．５％、１６天的３９．８％到２１天的４７．０％逐渐增加,并且免疫组肺相对湿重也较佐剂对照组有所减少,证实ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ具有明确的抗肉芽肿病变效应。     

日本血吸虫大陆株GST抗原

谷胱苷肽转移酶(GST)是以谷胱苷肽为共同底物的一组具有解毒功能的同工酶。国外研究证明血吸虫的GSTs含量丰富,是研究日本血吸虫疫苗的主要侯选抗原之一。有关日本血吸虫大陆株GST抗原的研究,作者曾在日本血吸虫24—26kDa和90kDa蛋白质“靶抗原”的抗原性研究,应用24—26kDa和90kDa蛋白质“靶抗原”免疫小鼠研制抗血吸虫“靶抗原”单克隆抗体,24—26kDa和90kDa蛋白质抗原用于血吸虫病诊断的可能性探讨,日本血吸虫24—26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究等论文以及有关血吸虫疫苗研制的综     

日本血吸虫（中国大陆株）26kDa基因重组蛋白（rSjc26GST）对虫卵？…

用日本血吸虫虫卵肉芽肿的小鼠肺模型进行研究。ＩＣＲ雄性小鼠３２只,分成免疫组和佐剂对照组各１６只,免疫组小鼠经rＳjc２６ＧＳＴ免疫。免疫结束后第５天两组小鼠均由 尾静脉注射新鲜日本血吸虫虫卵悬液０．２ml（内含活卵１５００－２０００个）,于注卵后第８天、１６天和２１天分批剖杀小鼠,观察肺部形成的虫卵肉芽肿病变。结果发现免疫鼠肺内肉芽肿大小受到明显抑制,免疫后第８天、１６天、２１天肺肉芽肿平均直径分别为     

日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白对小鼠免疫保护性的初步研究

目的 研究日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白（rSj338/26GST)对小鼠的免疫保护性，预测其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能。方法 将编码日本血吸虫线粒体相关蛋白的cDNA经PCR扩增后亚克隆人载体质粒pGEX-6p-1进行表达，并用表达的重组抗原的融合蛋白免疫BABL／c小鼠。结果 与对照组相比，rSj338/26GST重组蛋白免疫小鼠获得了32．3％的减虫率及46．5％肝总减卵率；与Sj26GST免疫组相比，rSj338抗原可能使小鼠获得22．5％的减虫率及30．0％的肝总 减卵率。结论 证明重组的日本血吸虫线粒体相关蛋白(rSj338/26GST及rSj338)可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力，可望成为新的疫苗候选分子。     

日本血吸虫rSj338及膜蛋白rSj22.6抗原表位联合免疫对小鼠的保护性研究

目的 观察日本血吸虫（中国大陆株）的线粒体相关蛋白rSj338及膜蛋白rSj22.6有效抗原表位混合后对小鼠的免疫保护性，为将来复合疫苗的研制提供理论依据。方法 分别用特异性抗rSj338抗体和抗rSj22.6的抗体筛选噬菌体随机12肽库，将获得的rSj338的有效抗原表位与rSj22.6有效抗表位混合后免疫BALB／c小鼠，并与rSj338的有效抗原表位混合免疫组进行比较。结果 rSj338的4种表位和rSj22.6抗原的4种表位混合免疫组小鼠获得了45．4％（P＜0．01）的减虫率及59．1％（P＜0．01）肝总减卵率，rSj338的4种表位混合免疫组小鼠获得了34．2％（P＜0．01）的减虫率及46．8％（P＜0．01）肝总减卵率；rSj338 4种表位和rSj22.6的4种表位混合免疫组获得的减虫率和肝总减卵率均高于rSj338的4种表位混合免疫组，差异有显著性（P＜0．05）。结论 两种抗原分子的有效抗原表位联合免疫的效果优于单个抗原分子的有效抗原表位。     

日本血吸虫重组抗原的免疫原性鉴定

为发展新的日本血吸虫病疫苗候选抗原分子，对已构建的阳性表达克隆PGsj24进行大量诱导表达，制备为20kD的重组抗原。以之免疫家兔，产生了较强的抗体反应。该单特导抗血清可识别成上天然蛋白中与重组蛋白相对应的抗原成分。两者分子量及Westernblot识别反应带型均基本一致，说明约20kD重组蛋白确为日本血吸虫基因编码产物，具有较强的免疫原性，可刺激机体产生较强的免疫应答。     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6kDa重组抗原的免疫原性研究

用日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa重组抗原（rSj22．6）免疫一批昆明小鼠，获得特异性免疫血清，其与22．6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验（Westernblot），结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22．6kDa分子，而正常鼠血清则不能识别。实验中，血清经去除抗大肠杆菌抗体的处理后，其与大肠杆菌的非特异性反应条带被去除，特异性反应的条带则增强。     

日本血吸虫22.6 kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的： 大量获得纯化的日本血吸虫２２６ ｋ Ｄａ 重组抗原。方法： 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ １λ Ｔ 进行表达。结果： 得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大, 用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组２２６ ｋ Ｄａ 抗原。结论： 以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验, 表明 Ｓｊ２２６／ Ｓｊ２６ Ｇ Ｓ Ｔ 融合重组蛋白具有与 Ｓｊ２２６ 蛋白一样的免疫学活性。     

重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性作用的研究

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjC－TPI）分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用IPTG诱导表达,制备纯化的重组TPI蛋白,将重组TPI抗原免疫C57BL／6及昆明鼠,8周后用血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果C57BL／6获得27．78％的减虫率;昆明鼠获得21．39％的减虫率,54．00％的减卵率。结论重组SjC－TPI对血吸虫感染具有一定的保护作用,可能为日本血吸虫病疫苗候选分子之一。     

日本血吸虫(大陆株)卵壳蛋白编码基因的克隆和序列测定

目的：克隆和鉴定日本血吸虫虫卵卵壳蛋白（SjEP）编码基因，以寻找血吸虫新的候选疫苗和诊断分子。方法：设计合成引物，分别以日本血吸虫雌、雄成虫cDNA第一链为模板，用PCR法从中扩增出SjEP基因编码序列，将其克隆入pGEM-T载体，用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定。结果：PCR法从雌虫cDNA中扩增出大小为624bp SjEP基因编码序列，重组质粒pGEM-SjEP经双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增，均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段，序列测定结果表明具有一个长度为624bp的完整开放阅读框，与日本血吸虫（菲律宾株）虫卵卵壳蛋白核苷酸序列有高度同源性（99．9％）。结论：本实验成功地克隆了SjEP编码基因，并进行了序列测定，为进一步研究提供了条件。     

日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因克隆及特性鉴定

[目的 ]探索研制血吸虫病疫苗的新路径 ,对日本血吸虫线粒体相关蛋白进行基因克隆及特性鉴定。[方法 ]分析本室筛选日本血吸虫成虫cDNA文库获得的 1个cDNA片段 (Sj338 2 4)的开读框序列 ,在其上下游分别设计引物A和B ,并以该cDNA片段为模板进行PCR扩增后 ,将该片段重组于pGEM T中并进行DNA测序鉴定及检索。再经酶切后将该基因片段亚克隆入表达载体pGEX 6P 1,并进行蛋白表达、纯化及抗原性鉴定。 [结果 ]该目的基因PCR产物全长共 487bp ,其开读框由 45 9bp组成 ,编码 15 3个氨基酸经残基组成的多肽。DNA序列同源性分析发现Sj338克隆基因与人及褐鼠的线粒体外膜蛋白的部分编码基因较高度同源。重组质粒pPEX 6P 1 Sj338能高效融合表达 ,理论蛋白的分子量为 17kDa。SDS PAGE和Westernblotting检测结果表明 ,重组蛋白rSj338具有良好的抗原性。 [结论 ]Sj338可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白的基因 ,重组蛋白有望成为新的疫苗候选分子。     

日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白基因在家蚕幼虫中的表达

目的应用家蚕核型多角体病毒载体,在家蚕幼虫中表达日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白基因。方法采用DNA重组技术,构建含Sj23基因的重组转移载体pBSj2。将此转移载体与经CvnⅠ酶切线形化的亲本病毒Bm－BacPAK6DNA通过脂质体法共转染BmN细胞,通过蓝白斑筛选,结合点杂交,纯化得到重组病毒。该重组病毒接种家蚕5龄幼虫,在家蚕中进行表达,用SDS－PAGE及Western－blot分析表达产物。结果Sj23基因在家蚕幼虫中成功地得到了表达,表达产物的分子量为23．7kDa,并具抗原性。结论该研究为发展基因工程血吸虫疫苗提供了一条新的途径。     

重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白的动物免疫试验

目的观察重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ）免疫动物所诱导的免疫保护效果。方法用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ分别对昆明系小鼠、Ｗｉｓｔａｒ大鼠及绵羊进行３次免疫,于第３次免疫后２周,分别用４０、６００、及３００条尾蚴攻击,于攻击后６～８周剖杀小鼠和大鼠,１１周剖杀绵羊,观察各实验组的减虫率及绵羊免疫组的组织、粪便减卵率。结果在小鼠试验中,以ＢＣＧ为佐剂进行皮内免疫获得３３． ７％的减虫率（Ｐ＜０．０５）,明显高于以 ＦＣＡ／ＦＩＡ为佐剂进行肌肉免疫所获得的减虫率４．７％（Ｐ＞０．０５）。用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ皮内免疫大鼠,获得的减虫率为３１．９％,但和对照组相比无显著性差异。用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ皮内免疫绵羊,减虫率为５９．２％（Ｐ＜０．０１）,同时,自攻击后第６周至１１周,绵羊免疫组粪便中平均每克虫卵数（ＥＰＧ）分别比对照组减少２３．６％～６３．３％,第１１周解剖时,肝组织ＥＰＧ减少４４．９％,小肠ＥＰＧ减少６９．６％,大肠ＥＰＧ未见减少。结论ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ能诱导抗日本血吸虫攻击感染的部分保护作用,值得作为抗日本血吸虫候选疫苗抗原进一步探讨。     

日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶特异性肽段的基因克隆表达及特性鉴定

目的：应用基因工程方法制备SjC-TPI中特有抗原表位区域的肽段,方法：用PCR法对SjC-TPI与人的TPI相应部位同源性较低的两个亲水区15－66aa和129－163aa的DNA的基因列进行扩增,采用基因拼接法连接后,克隆入表达质粒载体pMAL－c2x,转化入大肠杆菌TB1,进行表达和鉴定。结果：该目的基因片段被成功地克隆入表达质粒载体pMAL-c2x并能融合表达,经进一步纯化获得特异的重组肽段具有良好的抗原性,能被日本血吸虫病人血清识别,而不被正常人血清识别,结论：获得与人的TPI同源性较低的特异重组肽段,为日本血吸虫复合多肽抗疫苗的制备提供了物质基础。