细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤机制及应用

摘要： 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一群体外诱导的以CD3⁺CD56⁺ T细胞为主的异质细胞群,具有效应CD8⁺ T细胞的TCR特异性和非MHC限制性抗肿瘤活性的特点。采用荷瘤小鼠模型进行CIK临床前研究,结果表明CIK对实体肿瘤和血液系统肿瘤均有明显的抗肿瘤效应。临床研究证实CIK可用于治疗多种恶性肿瘤,显著延长患者的生存期且无毒副作用。用免疫学与基因工程方法增强CIK疗法的特异性和细胞毒活性,寻求其疗效判断的生物学标志及CIK治疗的纳入与排除标准是目前研究的热点。     

细胞因子诱导杀伤细胞抗淋巴瘤细胞作用的研究

目的:探讨体外细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对淋巴瘤细胞的杀伤作用.方法:采集健康人外周血单个核细胞(PBMC),经IL-2、CD3Mc-Ab、IL-1、IFN-γ诱导,制备CIK细胞,同时以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,LDH释放法检测其对淋巴瘤细胞株的杀伤活性.结果:CIK细胞与LAK细胞增殖在前期无明显差异,CIK细胞在培养14d后大量增殖,21d后扩增能力显著高于LAK细胞(P＜0.05);表型分析表明CIK细胞主要由CD3+和CD56+双阳性细胞构成;同一效靶比时,CIK细胞对淋巴瘤细胞株的杀伤活性明显高于LAK细胞(P＜0.05).结论:CIK细胞对淋巴瘤细胞株的杀伤作用强于LAK细胞,具有较强的抗淋巴瘤细胞活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.     

细胞因子诱导的杀伤细胞在临床抗肿瘤治疗中的研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-Induced killer cells,CIK)是继淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer cells,LAK)、肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)和CD3Mc Ab激活的杀伤细胞之后,具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广及选择性高等优势的新一代抗肿瘤过继免疫细胞。CIK细胞对多种肿瘤细胞系均表现出强大的杀伤活性,也可提高肿瘤患者的自身免疫功能,被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。目前以CIK细胞为主的过继免疫治疗在国内外临床广泛应用,有望联合多种抗肿瘤治疗技术成为未来肿瘤综合治疗的新趋势。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应

目的探讨多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应。方法用健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外用多种细胞因子诱导成CIK细胞,流式细胞术分析其表型特征,将培养14d的CIK细胞和对数生长期的SKOV-3细胞按不同效靶比共培养,MTT法检测CIK细胞对SKOV-3细胞的杀伤效应;将CIK细胞培养液上清作用于对数生长期的SKOV-3细胞,于培养24及48h用流式细胞仪检测卵巢癌细胞的凋亡情况。结果CIK细胞体外培养14d,CD3^＋CD56^＋双阳性细胞数量达（31．6±5．5）％。CIK对SKOV-3的杀伤效应在效靶比为5：1时,24h及48h抑制率分别为（16．52±2．52）％和（24．20±5．59）％,当效靶比为40：1时,其24h及48h抑制率分别为（53．98±5．02）％和（74．74±6．87）％。CIK细胞对SKOV-3细胞的抑制率随着效靶比的提高及作用时间的延长而提高。SKOV-3与CIK细胞培养液上清共培养24h及48h后凋亡率分别为（12．30±1．47）％和（27．13±2．03）％。结论CIK细胞可通过诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡发挥较强的杀伤作用。     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗难治性淋巴瘤的临床研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞在难治性淋巴瘤患者中的应用及临床效果.方法:8例难治性淋巴瘤患者,通过血细胞分离机采集外周血单个核细胞.培养和扩增细胞因子诱导的杀伤细胞后回输至难治性淋巴瘤患者体内,评价其疗效.结果:细胞因子诱导的杀伤细胞治疗后患者自觉症状改善,影像学复查显示1例多发侵犯肿块基本消失,7例肿块均有不同程度缩小,T细胞亚群水平在回输后均有明显升高.结论:细胞因子诱导的杀伤细胞治疗难治性淋巴瘤患者可改善生活质量.不良反应小,有较好的,临床效果,为难治性淋巴瘤提供了一种新的治疗方案.     

树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对耐药K562细胞的体外杀伤作用

目的研究细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞与同源树突细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性及表型的变化,并观察其对K562、K562/ADM细胞毒作用的影响。方法采集健康供者外周血单个核细胞(MNC)用于诱导培养CIK细胞及成熟DC,将成熟DC和CIK细胞混合培养,用MTT法检测DCCIK共培养细胞杀伤K562细胞及其耐药株的活性。结果在2.5～20.0效靶比范围内,CIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(20.0±1.2)%～(61.1±2.2)%和(17.5±2.1)%～(45.2±3.3)%;DCCIK共培养细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(25.2±2.3)%～(70.9±4.1)%和(22.4±2.7)%～(62.3±5.0)%。CIK细胞对K562敏感株和耐药株杀伤率的差异无统计学意义,DCCIK细胞对敏感株和耐药株的杀伤作用差异亦无统计学意义;DCCIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤活性均高于单纯CIK细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论DC与CIK共培养细胞的增殖活性和细胞毒活性高于CIK细胞。     

细胞因子诱导的杀伤细胞局部治疗脑恶性胶质瘤的护理

目的 了解Ommaya储液囊的构造,埋置方法;细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)的制备方法;掌握通过Ommaya储液囊向瘤腔内注入CIK细胞的操作方法、并发症的观察和护理要点等.方法 开展该项目前,组织全体护士学习,使她们充分了解CIK细胞的来源;Ommaya储液囊的构造、埋置方法;CIK细胞回输的技术;强调操作过程中严格执行各项操作规程的重要性;严密观察治疗后并发症的发生,及时采取恰当的护理干预,保证治疗的顺利进行.结果 本组6例病人均能按计划顺利完成治疗.结论 掌握CIK细胞局部回输的操作方法、并发症的观察及护理要点,有利于治疗的顺利进行,减少了病人的痛苦,提高了护理质量,提高了病人及家属的满意度.     

细胞因子诱导的杀伤细胞

正常人或患者外周血，骨髓单个核细胞/淋巴细胞中定期加入γ-干扰素（IFN-γ），白细胞介素-1（IL-1），白细胞介素-2（IL-2），抗CD3抗体（CD3mAb)经2-4周的诱导可获得大量的新型肿瘤杀伤细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK)，增殖旺盛及肿瘤杀伤活性高，包含大量CD3^ CD56^ 细胞，有关基础及临床研究证明，CIK细胞较细胞毒性T淋巴细胞（CTL），淋巴细胞因子活化的杀伤细胞（lymphokine-activted killer,LAK)，肿瘤细胞浸润的淋巴细胞（tumer infiltrating-lym-phocyte,TIL）更适用于肿瘤的生物治疗，本文就CIK细胞的来源与生物学特征，对肿瘤细胞的杀伤及临床应用进行综述。     

细胞因子诱导的杀伤细胞体外研究及临床应用进展

随着恶性肿瘤发病率逐渐升高,对人类生命健康的威胁日趋严重,传统的放化疗及手术治疗方式虽在治疗肿瘤方面取得了一定的进步,但对于年龄较大及失去治疗机会的中晚期肿瘤患者却束手无策,因此各种肿瘤生物治疗的新方法应运而生,以细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为代表的细胞过继免疫治疗即是其中一种。CIK细胞由Schmidt-Wolf等[1]于1991年     

肿瘤自体CIK细胞免疫治疗前后T细胞亚群的变化

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）具有增殖快、杀瘤活性强和杀瘤谱广的特点。目前，用于临床治疗肿瘤的报告较少。本文用CIK细胞过继性免疫治疗肿瘤患者，探讨其对细胞免疫的影响。方法：用CS-3000得到肿瘤患者未梢血单个核细胞（PBMC），用含有IFN-r、IL-2和CD3单抗的培养液进行培养扩增，于培养的第11天和第12天回输给病人，并检测CIK治疗前后患者的外周血T细胞亚群的变化。结果：38例肿瘤患砉输注CIK细胞一疗程后，患者外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞都较治疗前明显提高（P〈0．01）。结论：用自身CIK细胞过继性回输治疗能明显提高肿瘤患者细胞免疫功能。     

肺部感染患者外周血中性粒细胞黏附分子CD11b CD18髓过氧化物酶的变化及临床意义

目的了解肺部感染患者外周血中性粒细胞功能即表达黏附分子CD11b、CD18、髓过氧化物酶（MPO）的变化及临床意义。方法应用流式细胞舣检测30例普通肺部感染患者治疗前后、18例重症肺部感染患者治疗前外周血中性粒细胞表面表达黏附分子CD11b、CD18、MPO的变化，并与25例健康人进行比较。结果①普通组和重症组患者外周血中性粒细胞黏附分子CD11b、CD18表达明显高于正常对照组，有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01）；普通组MPO表达明显高于正常对照组和重症肺炎组，有统计学意义（P＜0．01）；重症组MPO明显低于普通组，有统计学意义（P＜0．01）。②普通组常规治疗10d后CD11b、CD18与治疗前相比变化不明显（P＞0，05）；治疗10d后普通组MPO表达较治疗前明显降低，有统计学意义（P＜0．01）；殆疗后各组数据均较治疗前有所降低，但仍未降至正常对照组水平，有统计学意义。结论肺部感染患者外周血中性粒细胞处于活化状态，表达黏附分子CD11b、CD18增多；中性粒细胞杀菌功能增强，表现为MPO表达增多；重症肺部感染可抑制MPO表达，从而影响中性粒细胞的杀菌功能，对患者预后不利。     

高压氧干预下急性脑梗死患者CD11及CD54变化及其对预后的影响

目的 探讨高压氧干预下急性脑梗死(ACI)患者CD11和CD54变化及其对预后影响.方法 将ACI患者64例分为对照组33例和高压氧治疗组(高压氧组)31例.对照组行常规治疗,高压氧组行常规治疗并高压氧治疗.2组患者均在发病≤72 h及发病第7,10,12和20天晨抽取外周静脉血测定CD11a、CD11c和CD 54,并在相同发病时间采用神经功能缺损程度评分(NDS).另外选取健康者25例作为正常对照,仅抽取周围静脉血测定CD11a、CD11 c和CD54.结果 高压氧组和对照组在发病≤72 h时CD11a、CD11c和CD54表达达到高峰,2组之间各指标差异不显著,第7天都开始呈现下降趋势.高压氧组CD11a、CD11 c高峰持续时间7 d,对照组持续10 d;CD54高峰持续时间高压氧组为10 d,对照组为12 d.经相关和线性回归分析发现,发病第20天时NDS的水平(近期疗效)和发病半年、1年时NDS的水平(远期疗效)分别有97.3%、96.7%及96.6%可用发病前CD11a和/或CD11c和/或CD54的水平以及其他相关因素解释.结论 高压氧治疗可缩短ACI患者CD11a、CD11 c和CD54高峰维持时间.高压氧可干预细胞黏附分子的变化过程,缩短异常时限,减少它们的表达,对ACI患者有保护作用.同时治疗前CD11a、CD11c和CD54的表达可预测病情的轻重,影响近远期疗效,预测预后.

Abstract：

Objective To observe the changes of CD11 a, CD11c and CD54 and its' influence on prognosis after the intervention of hyperbaric oxygen(HBO) in patients with acute cerebral infarction (ACI).Methods Sixty-four ACI patients were divided into control group( C group) and HBO therapy group( HBOT group).C group (33 cases) received routine treatment only, HBOT group ( 31 cases) received routine treatment and hyperbaric oxygen therapy.CD 11 a, CD11 c and CD54 were measured in both groups at ≤72h, the 7th d, 10th d, 12th d, 20th d after ACI, and neural functional damage scores(NDS) were evaluated at the same time.CD11a, CDllc and CD54 were also measured in normal control group (25 cases).Results Plasma levels of CD11a, CD11c and CD54 rose significantly both in HBOT group and C group and peaked at≤72 h after ACI, there was no significant difference between two groups (P > 0.05), then declined at the 7th d.Levels of CD11 a, and CD11c maintained at the peak for 7 d in H BOT group and for 10 d in C group.CD54 peak remained for 10 d in HBOT group, and for 12 d in C group.A correlation analysis and linear regression analysis showed that the NDS levels at 20th d (short-term curative effect), 6 months and 12 months (long-term outcome) could be explained by 97.3 % , 96.7% and 96.6% , respectively by the admission levels of CD11 a and/or CD11 c and/or CD54 and other related factors.Conclusion After hyperbaric oxygen therapy peak level duration of CD11a, CD11c and CD54 could be shortened.Hyperbaric oxygen could influence intercellular adhesion molecule changing process, reduce leukocytes adhesion, decrease expressions of CD11a CD11c and CD54, and protect ACI patients.Before treatment, expression of CD11a, CD11c and CD54 may predict the severity, short or long-term outcome and prognosis of ACI patients.     

高压氧干预下急性脑梗死患者CD11及CD54变化及其对预后的影响

Objective To observe the changes of CD11 a, CD11c and CD54 and its' influence on prognosis after the intervention of hyperbaric oxygen(HBO) in patients with acute cerebral infarction (ACI).Methods Sixty-four ACI patients were divided into control group( C group) and HBO therapy group( HBOT group).C group (33 cases) received routine treatment only, HBOT group ( 31 cases) received routine treatment and hyperbaric oxygen therapy.CD 11 a, CD11 c and CD54 were measured in both groups at ≤72h, the 7th d, 10th d, 12th d, 20th d after ACI, and neural functional damage scores(NDS) were evaluated at the same time.CD11a, CDllc and CD54 were also measured in normal control group (25 cases).Results Plasma levels of CD11a, CD11c and CD54 rose significantly both in HBOT group and C group and peaked at≤72 h after ACI, there was no significant difference between two groups (P > 0.05), then declined at the 7th d.Levels of CD11 a, and CD11c maintained at the peak for 7 d in H BOT group and for 10 d in C group.CD54 peak remained for 10 d in HBOT group, and for 12 d in C group.A correlation analysis and linear regression analysis showed that the NDS levels at 20th d (short-term curative effect), 6 months and 12 months (long-term outcome) could be explained by 97.3 % , 96.7% and 96.6% , respectively by the admission levels of CD11 a and/or CD11 c and/or CD54 and other related factors.Conclusion After hyperbaric oxygen therapy peak level duration of CD11a, CD11c and CD54 could be shortened.Hyperbaric oxygen could influence intercellular adhesion molecule changing process, reduce leukocytes adhesion, decrease expressions of CD11a CD11c and CD54, and protect ACI patients.Before treatment, expression of CD11a, CD11c and CD54 may predict the severity, short or long-term outcome and prognosis of ACI patients.     

慢性再生障碍性贫血患者治疗前后细胞粘附分子CD11a、CD49d表达的变化

为探讨细胞粘附分子(CAMs)CD11a、CD49d在慢性再生障碍性贫血(CAA)患的表达及与临床的关系，采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法(APAAP法)测定20例慢性再生障碍性贫血患在SSL／C方案治疗前后骨髓及外周血单个核细胞(MNC)粘附分子CD11a和CD49d表达的阳性细胞百分率。结果发现，慢性再生障碍性贫血患治疗后骨髓及外周血MNC的CD11a及骨髓MNC的CD49d表达的阳性细胞百分率较治疗前升高，外周血MNC的CD49d表达治疗前后无显差异。结论：细胞粘附分子表达降低在慢性再生障碍性贫血的发病中发挥了一定作用，随着病情的缓解粘附分子表达增强，纠正再生障碍性贫血患粘附分子的异常表达，可以改善其骨髓造血功能。     

高压氧干预下急性脑梗死患者CD11及CD54变化及其对预后的影响

Objective To observe the changes of CD11 a, CD11c and CD54 and its' influence on prognosis after the intervention of hyperbaric oxygen(HBO) in patients with acute cerebral infarction (ACI).Methods Sixty-four ACI patients were divided into control group( C group) and HBO therapy group( HBOT group).C group (33 cases) received routine treatment only, HBOT group ( 31 cases) received routine treatment and hyperbaric oxygen therapy.CD 11 a, CD11 c and CD54 were measured in both groups at ≤72h, the 7th d, 10th d, 12th d, 20th d after ACI, and neural functional damage scores(NDS) were evaluated at the same time.CD11a, CDllc and CD54 were also measured in normal control group (25 cases).Results Plasma levels of CD11a, CD11c and CD54 rose significantly both in HBOT group and C group and peaked at≤72 h after ACI, there was no significant difference between two groups (P > 0.05), then declined at the 7th d.Levels of CD11 a, and CD11c maintained at the peak for 7 d in H BOT group and for 10 d in C group.CD54 peak remained for 10 d in HBOT group, and for 12 d in C group.A correlation analysis and linear regression analysis showed that the NDS levels at 20th d (short-term curative effect), 6 months and 12 months (long-term outcome) could be explained by 97.3 % , 96.7% and 96.6% , respectively by the admission levels of CD11 a and/or CD11 c and/or CD54 and other related factors.Conclusion After hyperbaric oxygen therapy peak level duration of CD11a, CD11c and CD54 could be shortened.Hyperbaric oxygen could influence intercellular adhesion molecule changing process, reduce leukocytes adhesion, decrease expressions of CD11a CD11c and CD54, and protect ACI patients.Before treatment, expression of CD11a, CD11c and CD54 may predict the severity, short or long-term outcome and prognosis of ACI patients.     

microRNA-16在脂肪基质细胞脂向分化过程中的表达变化

背景:触发和控制脂肪基质细胞脂向分化的调控研究将有助于人为控制脂肪基质细胞的分化方向,促进对细胞分化的深入了解.目的:了解脂肪基质细胞脂向分化过程中microRNA-16的表达变化情况.设计、时间及地点:观察对比试验,2007-10/2008-03在四川大学口腔疾病研究国家重点实验室完成.材料:出生30 d雄性体健SD幼鼠8只.成脂诱导培养液[DMEM培养液中加入地塞米松(1μmol/L)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(0.5 mmol/L)、胰岛素(10 mg/L)].方法:从SD幼鼠体内取出脂肪,采用密度梯度离心结合贴壁培养法获得了纯度高的脂肪基质细胞,采用脂向诱导液对第3代的脂肪基质细胞进行诱导培养,并以来诱导的细胞为对照.主要观察指标:应用microRNA芯片技术检测脂肪基质细胞脂向诱导后7 d和未诱导microRNA-16的表达差异.采用实时定量PCR检测microRNA-16在脂肪基质细胞脂向分化前后表达量变化.结果:①成功获得纯度较高的脂肪基质细胞,成功诱导其脂向分化,诱导培养后7 d观察到细胞形态学上表现出典型的脂肪细胞改变:细胞相互融合,成片生长,变为细长纺锤形;PPAR γ免疫细胞化学染色呈阳性;油红O染色脂滴被染成橙红色.②成脂诱导前后microRNA-16表达明显下调,诱导前microRNA-16表达量为90.25.诱导后microRNA-16表达量为56.75,③实时定量PCR结果显示microRNA-16表达显著下调,与microRNA芯片结果一致.结论:PCR及芯片结果一致支持microRNA-16在脂肪基质细胞脂向分化过程中表达显著下调,可能在脂肪基质细胞脂向分化过程参与调控.     

感染性休克急性肺损伤CD11b表达与纤维蛋白原相关性研究

目的探讨感染性休克急性肺损伤（ALI）患儿粒细胞表面CD11b表达与纤维蛋白原（FIB）水平的变化及意义。方法用流式细胞术检测感染性休克ALI（观察组）患儿25例中性粒细胞CD11b与纤维蛋白原，并与对照组18例和正常组20例比较。结果在急性期、恢复期，观察组中性粒细胞CD11b，与对照组和正常组比较，P〈0．05。ALI患者外周血纤维蛋白原（FIb）水平，其均值（5．15±1．02）q／L，明显高于正常参考值（3．50q／L），差异有统计学意义（P〈0．01）；恢复期与正常组无显著差异。结论CD11b与纤维蛋白原参与感染性休克ALI病理发展过程，表达水平与预后密切相关。可作为预测肺损伤发展的重要指标。提示给予纤溶治疗可作为一种提高疗效的尝试。     

急性冠脉综合征患者白细胞CD11b/CD18和血清C-反应蛋白的临床价值

目的观察外周静脉血中性粒细胞和单核细胞膜CD11b/CD18的表达和血清C-反应蛋白在急性冠脉综合征患者中的变化,探讨其与斑块稳定性的关系.方法选30例急性冠脉综合征患者(ACS组),24例稳定型心绞痛患者(SA组),30例冠状动脉造影阴性作对照组.流式细胞仪直接免疫荧光法检测CD11b/CD18的表达,免疫速率散射测浊法测定C-反应蛋白水平.结果ACS组中性粒细胞和单核细胞膜CD11b/CD18的表达和血清C-反应蛋白水平显著高于SA组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01).结论急性冠脉综合征患者中性粒细胞和单核细胞膜CD11b/CD18的表达增加和血清C-反应蛋白升高与斑块不稳定性有关.     

CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化

为了了解CD117／CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化，探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义，采用CD45／SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析，应用RT—PCR技术检测骨髓中PML／RARα融合基因的mRNA表达。结果表明：APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33，而几乎不表达CD34、HLA—DR及T，B淋巴系列标志。有14．5％的APL患者表达cD56，有48，2％的APL患者表达CD15，CD15在APL的表达明显低于CML慢性期（48，2％船95．2％，P〈0．01）。有78．3％的APL患者表达CD117，而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16．9％，而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72．3％的APL患者呈CD117^＋CD11b^-表型，而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型，它几乎均呈CD117^＋CD11b^-表型。11例表型为CD117^＋CD11b^-的APL患者经治疗获完全缓解，在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5％，同时细胞高表达CD11b，呈CD117^-CD11b^＋表型。检测31例APL患者PML／RARα融合基因，25例该融合基因阳性，阳性率为80．6％，其中16例（64％）为PML／RARα基因L型，9例（36％）为S型。16例PML／RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例（87．5％），9例S型CD117表达有4例（44．4％），6例PML／RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例（33．3％）。结论：CD117／CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别，CD117’CD11b一表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分，对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。