硫化氢对大鼠内毒性急性肺损伤炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1相关蛋白表达的影响

目的 探讨吸入硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白（single immunoglobin IL-1 receptor related protein,SIGIRR）表达的影响。方法 雄性SD大鼠40只分4组,每组10只。正常小鼠组;H₂S吸入组：仅吸入H₂S 80mg/m³ 6h;ALI模型组：腹腔注射15mg/kg LPS;ALI+H₂S吸入组：腹腔注射15mg/kg LPS 1h后即吸入H₂S 80mg/m³ 6h,实验结束处死大鼠,观察肺组织病理学改变;ELISA法测肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平;Western blot法检测肺组织SIGIRR蛋白表达水平。结果 与正常大鼠及吸入H₂S组比较,ALI模型组大鼠出现典型急性肺损伤病理改变,肺损伤评分升高（P<0.05）,肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平增加（P <0.05）;而给予吸入H₂S后,可减轻大鼠肺损伤程度（P<0.05）,肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平下降（P<0.05）,且与ALI模型组相比,给予吸入H₂S后可上调肺损伤大鼠肺组织内SIGIRR的表达。结论 吸入H₂S对内毒素性急性肺损伤大鼠具有保护作用,抑制肺组织匀浆及血浆中炎性因子产生,促进负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。     

不同齿科合金对成纤维细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的 探讨不同齿科合金对成纤维细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 小鼠成纤维L929细胞分为阴性对照组、金合金组、镍铬合金组和铜合金组,各组细胞培养48h后,MTT实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 金合金组和镍铬合金组细胞增殖率与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,铜合金组细胞细胞增殖率显著低于阴性对照组（P<0.01）;金合金组G₁期、S期和G₂期细胞与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）,镍铬合金组和铜合金组G₁期细胞显著低于阴性对照组,S期和G₂期细胞显著高于阴性对照组（P<0.05）;金合金组细胞凋亡率及Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达与阴性对照组差异无统计学意义（P>0.05）,镍铬合金组和铜合金组细胞凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达均显著高于阴性对照组,Bcl-2蛋白表达显著低于阴性对照组（P<0.01）。结论 金合金组、镍铬合金组和铜合金组对成纤维细胞增殖凋亡均有一定的影响,金合金组的影响最小,不同齿科合金引起成纤维细胞凋亡的机制可能与调控Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

银杏内酯B对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤保护作用研究

目的 研究银杏内酯B（ginkgolide B,GB）对H₂O₂诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为4组：空白对照、H₂O₂（200μmol/L）干预、GB（100μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预、GB（200μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预,每组设10个复孔。经药物干预16h后观察各组细胞形态,采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶（AST、CPK、LDH）活性;测定细胞中抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性和丙二醛（MDA）含量;酶联免疫法（ELISA）测定培养液中炎性因子（CRP、TNF-α、IL-1、IL-6）含量水平;采用流氏细胞术检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率,采用反转录PCR（RT-PCR）技术检测细胞中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果 与H₂O₂干预组比较,GB（100、200μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预组细胞培养液中AST、CPK活性和TNF-α、IL-6、CRP、MDA含量均显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡率显著降低;bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;其中GB（200μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预组细胞生存状态明显改善、存活率显著升高,LDH活性、IL-1含量以及NF-κB蛋白表达量显著降低,细胞中GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 GB对H₂O₂诱导损伤H9C2心肌细胞具有保护作用,作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,上调抑凋亡基因bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高bcl-2/Bax表达比值,下调NF-κB蛋白表达,降低炎性因子含量相关。     

胰岛素对高糖培养海马神经元凋亡及IRS/PI3K/AKT信号通路、Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的 探讨胰岛素对高糖培养海马神经元的保护作用及其作用机制。方法 选择新生24h SD大鼠,取海马神经元进行原代培养,分为正常对照组（NC组）,高糖模型组（HG组）,实验组（RI组）,采用Tunel检测海马神经元的凋亡,Western blot法检测各组P-IRS、IRS1、P-AKT、AKT、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 与NC组相比,HG组海马神经元凋亡率显著增加（P<0.01）;与HG组相比,RI组凋亡率显著降低（P<0.01）。与NC组相比,HG组P-IRS、IRS1蛋白表达显著降低（P<0.05）;RI组P-IRS表达及P-IRS/IRS1显著升高（P<0.01）。与HG组相比,RI组P-IRS表达及P-IRS/IRS1显著升高（P<0.01）。与NC组相比,HG组AKT表达显著降低（P<0.01）;RI组P-AKT、AKT表达及P-AKT/AKT显著升高（P<0.01）。与HG组相比,RI组P-AKT、AKT表达及P-AKT/AKT显著升高（P<0.01）。与NC组相比,HG组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）;RI组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）。与HG组相比,RI组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,bax蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 胰岛素能够抑制高糖培养海马神经元的凋亡,其作用可能是通过活化IRS1/PI₃K/AKT信号通路,同时上调Bcl-2/Bax实现的。     

BrdU标记法探讨糖尿病大鼠H2S与细胞外基质积聚的关系

目的 探讨硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）与糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾细胞外基质过度积聚的关系。方法 21只SD大鼠随机分成正常对照组（对照组）、糖尿病肾病组（DN组）、硫化氢干预组（DN+H₂S组）。链脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病大鼠模型,DN+H₂S组给予NaHS治疗8周,其他组给予同等剂量的0.9%生理盐水治疗。观察3组大鼠肾脏病理改变、BrdU阳性细胞和α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）分布差异。结果 与对照组比较,DN组大鼠尿蛋白量、相对肾重均明显增多,病理呈典型的DN改变,BrdU阳性细胞比值、肾小球α-SMA表达和分布显著增多（P<0.01）;应用NaHS治疗后,大鼠肾脏DN改变明显减轻（P<0.01）,BrdU阳性细胞比值、肾小球α-SMA表达和分布与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 H₂S可以抑制DN大鼠肌性成纤维细胞增殖,减少α-SMA表达和分布,减缓DN大鼠的肾小球细胞外基质积聚。     

白藜芦醇对Gc-1 spg细胞氧化应激损伤的作用研究

目的 观察白藜芦醇（RES）对过氧化氢H₂O₂诱导的小鼠精原细胞（Gc-1 spg）氧化应激损伤的作用。方法 H₂O₂复制Gc-1 spg细胞氧化应激损伤模型,设置空白组、H₂O₂组（800 μmol/L）、H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组和H₂O₂+15 μmol/L RES组。检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,CCK-8法检测细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,Mito Tracker^?? Green FM试剂盒检测活细胞线粒体水平,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达。结果 浓度为800 μmol/L H₂O₂处理Gc-1 spg细胞6 h时达到实验要求（P <0.05）。与空白组比较,各H₂O₂组细胞活力降低（P <0.05）,与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞活力升高（P <0.05）。与空白组比较,各H₂O₂组的GSH-Px和SOD水平降低（P <0.05）,LDH和MDA水平升高（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组GSH-PX和SOD水平降低（P <0.05）,LDH和MDA水平升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞的红/绿荧光比值降低,提示线粒体膜电位降低（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂+5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组JC-1红/绿荧光比值升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞线粒体数明显减少（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞荧光强度升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组大量细胞核皱缩、碎裂,染色程度明显增强,细胞凋亡严重;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞凋亡率降低（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组凋亡蛋白Bax和Caspase-3相对表达量增加（P <0.05）,Bcl-2相对表达量减少（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组Bax和Caspase-3相对表达量降低（P <0.05）,Bcl-2相对表达量增加（P <0.05）。结论 RES对H₂O₂诱导的Gc-1 spg细胞氧化应激损伤具有保护作用,这种保护作用与RES浓度有关。     

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡以及细胞周期的影响并初探其机制。[方法]取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组、大蒜素（50、25、12.5 μg/mL）组和顺铂（40 μg/mL）组,给药48 h后流式细胞术分析细胞周期的改变并检测细胞凋亡状况,逆转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）mRNA、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白（cyclin B1、cyclin D1）和周期蛋白依赖性激酶（CDK1、CDK2）表达。[结果]与空白对照组比较,大蒜素（50、25 μg/mL）组细胞周期G₂/M期比例显著提高（P<0.05）,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达显著下调且Bax mRNA表达显著上调（P<0.05或P<0.01）,Bax/Bcl-2值显著提高（P<0.01）,cyclin B1蛋白和CDK1蛋白显著上调、cyclin D1蛋白和CDK2蛋白显著下调（P<0.05或P<0.01）。[结论]大蒜素具有促进人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡、阻滞细胞有丝分裂的作用,其机制可能与大蒜素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。     

番茄红素对人骨肉瘤细胞顺铂增敏作用及机制研究

目的 研究番茄红素（lycopene,LP）对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗敏感度的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法 体外培养并取对数生长期人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组、LP组（10μg/ml）、顺铂组（40μg/ml）和联合组[LP（10μg/ml）+顺铂（20μg/ml）];药物干预48h后,采用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞周期和细胞凋亡状况,反转录PCR（RT-PCR）法检测Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2比值,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测caspase-3蛋白表达。结果 联合干预组与顺铂组比较发现,联合干预组人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,细胞周期G₀/G₁期显著延长（P<0.05）、S期和G₂/M期显著缩短（P<0.05,P<0.01）,细胞凋亡率（apoptosis index,AI）显著升高（P<0.01）,Bax mRNA表达明显上调、bcl-2 mRNA表达显著下调（P<0.05）且Bax/bcl-2比值显著升高（P<0.01）,caspase-3蛋白表达上调（P<0.01）。LP组与空白对照组比较发现,LP组MG-63细胞周期明显改变（G₀/G₁期延长、G₂/M期缩短）,bcl-2 mRNA显表达著下调（P<0.05）、Bax/bcl-2比值显著升高（P<0.05）,caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 LP具有提高人骨肉瘤MG-63细胞顺铂敏感度的药理学作用,其机制可能与LP能够阻滞细胞周期以及调节凋亡相关调控基因和蛋白表达有关。     

丹参多酚酸盐对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞凋亡的影响

[目的] 研究丹参多酚酸盐（Salvianolate）对过氧化氢（H₂O₂）所致乳鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。[方法] 于无菌环境下分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白对照组、H₂O₂组、丹参多酚酸盐（50、100和200 mg/L）+H₂O₂组,每组设8个复孔;给药干预24 h后,检测培养液中谷草转氨酶（AST）、磷酸肌酸激酶（CPK）、乳酸脱氢酶（LDH）含量,四甲基噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率,通过流氏细胞术（Flow Cytometry）检测细胞凋亡状况并计算凋亡率;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测AKT mRNA和bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值,Western blotting法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、核转录因子-κB（NF-κB）表达并进行半定量分析,测定细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量。[结果] 与H₂O₂组比较,丹参多酚酸盐（100、200 mg/L）+H₂O₂组培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低,细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低。细胞中细胞中AKT mRNA、bcl-2 mRNA表达显著上调,Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,caspase-3、NF-κB表达显著下调,SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,上述差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。[结论] 丹参多酚酸盐对H₂O₂所致乳鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

IL-6、HMGB1、S100B及NSE与新生儿窒息后脑损伤的相关性分析

目的 研究白细胞介素-6（IL-6）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、星形胶质原性蛋白（S100B）及神经元特异性烯醇化酶（NSE）与新生儿窒息（NA）后脑损伤的相关性。方法 回顾性分析2017年2月—2019年2月三亚市人民医院收治的符合入选标准的120例NA患儿的病历资料,按照不同窒息程度分成轻度窒息组92例与重度窒息组28例,另选取同期于该院分娩的足月新生儿100例作为对照组。比较各组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平。此外,对120例NA患儿进行头颅CT检查,按照头颅CT检查结果分成头颅CT正常组57例与头颅CT异常组63例,比较两组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平,采用Spearman法分析血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平与NA后脑损伤的相关性。对所有NA患儿均进行为期1年的随访,将其按照随访结果分成预后良好组88例与预后不良组32例,比较两组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平。结果 对照组、轻度窒息组、重度窒息组新生儿血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平整体比较,差异有统计学意义（P <0.05）,轻度窒息组、重度窒息组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平均高于对照组（P <0.05）,且重度窒息组高于轻度窒息组（P <0.05）。NA患儿头颅CT异常组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平高于头颅CT正常组（P <0.05）。Spearman相关性分析显示：血清IL-6、HMGB1、S100B、NSE水平与NA后脑损伤均呈正相关（r_s =0.428、0.442、0.385和0.430,均P <0.05）。NA后脑损伤预后不良组血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平均高于预后良好组（P <0.05）。结论 血清IL-6、HMGB1、S100B及NSE水平与NA程度及NA后脑损伤密切相关,可能作为NA患儿病情评估及预后预测的辅助指标。     

灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的 观察灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子 （PDGF）诱导的活化大鼠肝星状细胞 （HSC-T6）凋亡的作用,并观察其对凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其可能的抗肝纤维化机制。方法 首先制备含药血清:SD大鼠随机分为3组,分别用生理盐水 （A组,10 mL/kg）,复方鳖甲软肝片药液 （B组,1.5 g/kg）,灵芪蠲肝胶囊药液 （C组,4.25 g/kg）灌胃7 d,每日1次。经腹主动脉采血,静置、离心、灭活、过滤,取得含药血清。以PDGF 10 ng/mL刺激活化HSC-T6。将各组含药血清按200 mL/L分别作用于HSC-T6。0、12、24、48 h后采用流式细胞技术检测各组HSC-T6凋亡情况以及Bcl-2、Bax的表达。结果 B、C组含药血清作用于HSC-T6细胞12、24、48 h,细胞凋亡率较A组升高,差异有统计学意义 （P<0.05）,而B、C组间的差异无统计学意义（P>0.05）。各组组内不同时间点比较,除A组外,B、C组在不同时间点的两两比较差异均有统计学意义,细胞凋亡率随时间的延长出现明显上升 （P<0.05）。含药血清作用于HSC-T6细胞12、24、48 h,B组、C组Bcl-2的表达较A组明显下降,Bax的表达出现明显上升,差异均有统计学意义 （P<0.05）,而B组与C组间差异均无统计学意义 （P>0.05）。除A组外,B组和C组在不同时间点的两两比较差异均有统计学意义 （P<0.05）,Bcl-2蛋白的表达在0 h最高,随时间的延长表现为下降趋势 （P<0.05）,Bax蛋白的表达随着时间的延长,整体表现为上调趋势 （P<0.05）。结论 灵芪蠲肝胶囊可以诱导活化的HSC-T6凋亡,其机制可能为影响Bcl-2/Bax表达失衡,从而发挥其抗纤维化作用。     

清润方对糖尿病大鼠肝脏PI3K/AKT/mTOR信号的影响

目的 研究清润方对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠PI₃K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法 采用脂肪乳灌胃和腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）建立2型糖尿病胰岛素抵抗模型。将大鼠随机分成空白对照组、模型组、清润方大剂量组[11.2g/（kg·d）]、清润方中剂量组[5.6g/（kg·d）]、清润方小剂量组[2.8g/（kg·d）]、二甲双胍组[250mg/（kg·d）]。各组均灌胃给药。每天1次,连续8周。干预后检测血清中血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL-C）和高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL-C）,检测肝组织中p-AKT、p-PTEN及p70S6K的mRNA以及蛋白表达水平。结果 与模型组比较,清润方大剂量组和二甲双胍组的TC、TG和LDL-C降低,HDL-C升高（P<0.05）。清润方大剂量组的AKT和PTEN的mRNA表达升高（P<0.05）,p70S6K的mRNA表达下降（P<0.05）,与模型组比较,清润方大剂量组的p-AKT和p-PTEN的蛋白表达升高（P<0.05）,p-p70S6K的蛋白表达下降（P<0.05）。结论 清润方可能通过PI₃K/AKT/mTOR信号通路来改善胰岛素抵抗。     

和颜坤泰胶囊对卵巢去势大鼠子宫形态及细胞凋亡的影响

[目的]研究和颜坤泰胶囊对卵巢去势模型大鼠子宫形态及细胞凋亡的影响。[方法]以雌性去势大鼠为动物模型,分为空白对照组,假手术组,模型组,补佳乐组,莉芙敏组,和颜坤泰胶囊8、4、2 g生药/kg剂量组。给药8周后,观察药物对子宫病理学的影响,检测子宫细胞凋亡率及Bcl-2 mRNA、Bax mRNA和蛋白的表达。[结果]和颜坤泰胶囊可增加去势大鼠子宫横截面及壁厚,肌层面积及厚度,内膜面积及厚度,上皮厚度和腺体数（P<0.01,P<0.05）;能降低去势大鼠子宫细胞的凋亡率（P<0.01,P<0.05）,升高子宫Bcl-2 mRNA和蛋白的表达（P<0.01,P<0.05）,降低BaxmRNA和蛋白的表达（P<0.01,P<0.05）。[结论]和颜坤泰胶囊有一定的子宫营养作用,可通过调控Bcl-2和Bax基因与蛋白的表达来抑制子宫细胞的凋亡。     

宫瘤消胶囊对子宫内膜异位症大鼠异位内膜中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察宫瘤消胶囊对子宫内膜异位症(内异症)模型大鼠异位内膜中凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白的表达的影响,为该药治疗内异症提供理论依据。方法:于大鼠动情期行自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、桂枝茯苓胶囊组及宫瘤消胶囊小、中、大剂量组,各组分别给予指定药物进行灌胃干预,另取一组正常大鼠为正常内膜组,用生理盐水灌胃。用免疫组织化学法检测各组大鼠异位内膜中凋亡基因Bcl-2和Bax的蛋白表达情况。结果:与正常内膜组比较,模型组Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白的表达明显升高,Bax/Bcl-2比值降低(P0.01);与模型组比较,宫瘤消胶囊各剂量组Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax/Bcl-2比值增加(P0.05,P0.01),且作用随药物剂量增加而增加(P0.05,P0.01)。结论:宫瘤消胶囊可能通过调节凋亡基因Bcl-2和Bax的表达来实现对异位内膜的凋亡的控制。     

长链非编码RNA CCAT1在支气管哮喘中的表达及对气道平滑肌细胞的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对气道平滑肌细胞的影响。方法 选取2016年10月至2018年10月邯郸市中心医院收治的56例支气管哮喘急性发作期患儿,及56例同期健康体检儿童。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测支气管哮喘患儿和健康儿童血浆lncRNA CCAT1表达水平。Lipofectamine 2000^TM法构建lncRNA CCAT1过表达、低表达人气管平滑肌细胞系(分别记为pc-CCAT1组、si-CCAT1组),同时设置相应阴性对照(分别为pc-NC组、si-NC组),使用qRT-PCR进行验证;CCK-8实验、BrdU实验分别检测细胞活力、增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果 哮喘组儿童血浆lncRNA CCAT1表达高于健康组(P<0.001),pc-CCAT1组细胞中lncRNA CCAT1表达水平高于pc-NC组(P<0.001),si-CCAT1组细胞中lncRNA CCAT1的表达水平低于si-NC组(P<0.05)。48、72、96小时,pc-CCAT1组细胞的OD值高于pc-NC组(P<0.001),si-CCAT1组细胞的OD值低于si-NC组(P<0.001)。与pc-NC组相比,pc-CCAT1组BrdU阳性细胞百分比、细胞迁移率、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-CCAT1组BrdU阳性细胞百分比、细胞迁移率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.001)。结论 支气管哮喘患儿血浆CCAT1表达上调,lncRNA CCAT1参与气道平滑肌细胞的增殖、迁移和凋亡过程。     

推拿疗法对骨骼肌纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1表达的影响

[目的]观察推拿疗法对大鼠急性腓肠肌钝挫伤后纤维修复的影响,探讨其可能的作用机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、推拿治疗组(n=10),运用自制砸伤装置复制经典骨骼肌钝挫伤模型。治疗组进行推拿治疗,每次干预10 min,每日1次,连续实施25 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠腓肠肌纤维化程度;qPCR和蛋白印迹检测大鼠腓肠肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达情况。[结果]HE染色镜下发现对照组大鼠骨骼肌纤维排列整齐,形态结构完整;模型组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱,甚至断裂,肌成纤维细胞增多,细胞外基质ECM)增多且胶原纤维明显沉积;治疗组大鼠骨骼肌纤维排列较整齐、间距小,且大小均一,胶原纤维生成减少,仅有少量ECM生成,损伤基本恢复。qPCR和蛋白印迹结果显示模型组大鼠损伤腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白表达量及MMP-1/TIMP-1比值明显降低(P<0.01),而TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平明显升高;给予推拿治疗后可明显提高损伤大鼠腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白水平及MMP-1/TIMP-1的比值(P<0.01,P<0.05),且降低TIMP-1的转录水平(P<0.01,P<0.05)。[结论]推拿治疗可有效减轻骨骼肌钝挫伤后纤维化程度,其作用可能与上调MMP-1/TIMP-1比值有关。     

KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 （1）在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取cDNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的pEGFP-C1连接,重组的pEGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒pEGFP C1/kir6.2,pEGFP C1/kir6.2（E23K）及pEGFP C1/SUR2A。（2）重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。（3）生理盐水与1mg/L阿霉素（Adriamycin,ADR）分别处理转染后细胞,分为4组：A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组（WT+NS）;B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组（E23K+NS）;C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组（WT+ADR）;D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组（E23K+ADR）。（4）采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（AI）。（5） Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。AlphaEase FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 （1） TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高（P<0.05）。（2）阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白（caspase-3、Bax）表达均增高,抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组（P<0.05）。结论 K_ATP通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。