肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答，并观察其抵抗野生性肿瘤攻南听免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法采用本室建立的骨髓树状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法，并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫功苗。     

树突状细胞及其抗肿瘤疫苗

肿瘤的免疫治疗是继手术、放疗、化疗之后于20世纪90年代逐渐发展、成熟起来的一种新的肿瘤治疗方法。其基本理论依据是:通过调节或增强机体固有的内在性防御机制(主要为机体对肿瘤细胞的免疫监视和免疫排斥)来抑制或杀伤肿瘤细胞,或通过抑制肿瘤细胞转化,促进恶性细胞分化来降     

RT-PCR检测MUC1基因转染树突状细胞的表达

目的 向人外周血来源的树突状细胞(DCs)转染人MUC1质粒，使DCs特异性的表达和提呈MUCl。方法 应用脂质体将人MUCl质粒转染体外培养的外周血来源的DCs，RT-PCR检测转染人MUC1质粒DCs的表达。结果转染MUC1质粒的DCs，RT-PCR检测有一特异性扩增带。结论 用脂质体能成功地将人MUC1质粒转入DCs并表达。     

负载辐射凋亡MB49肿瘤细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗对小鼠膀胱癌的抑制作用

 目的 研究辐射凋亡MB49肿瘤细胞诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的制备及对C57BL/6小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应。方法 采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型,随机分为实验组和对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗或者PBS,每组分为2个亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。结果 负载辐射凋亡肿瘤细胞DC疫苗的实验组荷瘤小鼠,其肿瘤的平均体积和平均质量均显著低于对照组(P<0.01),生存期长于对照组。DC疫苗实验组中有2只小鼠30天内无肿瘤生长,再次皮下接种MB49细胞观察30天仍无肿瘤发生。结论 负载辐射凋亡肿瘤细胞的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和延长生存期的作用。     

树突状细胞疫苗抗肿瘤免疫研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)生物学功能的进一步研究显示了其在免疫系统中的关键作用,也为以DC为基础的肿瘤免疫疗法提供了理论依据。但DC疫苗还处于初级阶段,近年来,已经发现了许多扩增DC及其负载抗原的方法,使DC疫苗在肿瘤患者身上开始临床研究成为可能。本文就DC疫苗的临床应用及进展做一综述。     

mRNA疫苗冲击树突状细胞诱导抗肿瘤免疫反应的研究

目的：以消化道肿瘤组织mRNA冲击自体DC，诱导特异性免疫应答。方法：20例消化道肿瘤患者外周血分离PBMC(外周血单核细胞)，在IL-4、GM-CSF联合作用下诱导DC，从消化道肿瘤组织中提取mRNA并分别在有脂质体或无脂质体介导下冲击DC，与未经纯化的T细胞混合培养，诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞)。以CTL作为效应细胞，以胃癌细胞系803为靶细胞，LDH释放实验检测杀伤活性。结果：细胞表面标记检测显示诱导前后CD3、CD4、CD14显著下降，CD40、CD86、CD1a、CD83、HLA-DR显著升高，表明IL-4、GM-CSF、联合作用下有效诱导出DC，混合淋巴细胞增殖实验表明该DC具有抗原递呈，刺激淋巴细胞增殖的功能。经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应与未经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应比较，其杀伤率经统计学分析无显著性差异。而二者与单纯经IL-2诱导的未经纯化的T细胞产生的非特异性杀伤比较均有显著性差异。结论：以肿瘤细胞mRNA冲击DC诱导CTL可有效杀伤肿瘤细胞，有可能成为一独特的免疫治疗方法。     

肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

目的：进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答,并观察其抵抗野生性肿瘤攻击的免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法：采用本室建立的骨髓树突状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法,并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫苗,然后进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：可从１只小鼠股骨中获得（３～５）×１０５个树突状细胞（ＤＣ）,其纯度为９５％以上,对混合Ｔ淋巴细胞具有强刺激活性。主动免疫同系健康ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的试验显示,ＤＣ疫苗能诱导抗原特异的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性,免疫１次的动物首次受到肿瘤攻击后诱发肿瘤形成率为０％,再次攻击的肿瘤形成率为２０％;而免疫３次的动物两次攻击的肿瘤形成率皆为０％。主动免疫治疗同种荷瘤动物的试验表明,ＤＣ疫苗也能抑制肿瘤生长,荷瘤动物存活率提高及生存期明显延长。结论：肿瘤抗原体外致敏的树突状细胞能诱导宿主体内的抗肿瘤免疫保护性反应,且对荷瘤模型动物具有明显的免疫治疗作用。     

树突状细胞抗肿瘤作用研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DCs)是体内最有效的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),是识别病原侵入的第一道防线.机体的免疫识别首先由DCs捕获、加工和处理抗原,再将抗原递呈给T、B淋巴细胞,从而引发一系列免疫应答,在体内发挥强大的免疫监视功能[1].近年来,DCs在抗肿瘤免疫中所发挥的重要作用日益受到人们的重视.随着对DCs肿瘤抗原识别、摄取、加工处理及提呈的分子基础和作用机制的进一步阐明,以DCs为基础的肿瘤疫苗治疗得到快速发展.目前在DCs疫苗抗肿瘤实验研究和临床研究方面已取得了令人振奋的进展,显示了广泛的应用前景.     

体外树突状细胞疫苗策略抗肿瘤免疫治疗研究进展

树突状细胞(DCs)在激活天然的免疫反应和获得性免疫反应中具有独一无二的作用,应用DCs为基础的肿瘤免疫治疗已成为肿瘤治疗的研究焦点.改善DCs疫苗的效能的方法有体外DCs策略和体内DCs策略.本文就体外DCs疫苗策略在肿瘤免疫治疗中的研究进展做一综述.     

树突状细胞肿瘤疫苗研究进展

树突状细胞（dendriti ccells,Dc）是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞,成熟DC表面高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子,共刺激分子（CD40、CD80、CD86等）和黏附分子（LFA-3、ICAM-1等）,而有效将肿瘤抗原提呈给T细胞,T细胞与DC结合后,大量分泌IL-12,诱导Th0细胞向Th1细胞分化,增强细胞免疫应答,有利于肿瘤清除。DC尚能分泌多种趋化因子,作用于初始型T细胞,增强T细胞的激活,使DC具有高水平抗肿瘤免疫功能,以DC为基础的肿瘤疫苗成为肿瘤免疫治疗的新策略和研究方向,并获得快速发展。现将近期DC肿瘤疫苗研究进展做一综述。     

稳定表达人MUC1小鼠膀胱癌细胞株和荷瘤鼠模型的建立

目的建立稳定表达人MUC1，1739小鼠膀胱癌细胞株和荷瘤小鼠模型。方法通过脂质体介导人MUC1全长eDNA转入T739小鼠膀胱癌细胞中，G418筛选及克隆化培养，基因组PCR、RT-PCR、免疫组化、流式细胞仪检测；皮下注射转染细胞，建立皮下荷瘤鼠模型，观察转染细胞体内外生长特性。结果MUC1成功转入BST739细胞中并主要表达在细胞膜和细胞浆。转染细胞体内外生长特性无明显改变。结论建立稳定表达人MUC1739小鼠膀胱癌细胞株和T739荷瘤小鼠模型，可用于肿瘤疫苗研究。     

树突状细胞肿瘤疫苗治疗恶性肿瘤的研究进展

肿瘤的免疫治疗是肿瘤学研究的热点,并被称为继手术、化疗、放疗之后的第4种治疗模式,随着对树突状细胞(DCs)在抗肿瘤免疫中所起中心作用的认识的加深,以及体外大量培养DCs方法的建立,以DCs为平台的肿瘤免疫治疗受到广泛关注。在体外制备负载肿瘤抗原的肿瘤特异性的DCs肿瘤疫苗,再注射回体内以激发机体产生主动性抗肿瘤免疫反应,是具有良好前景的生物治疗方案,目前已应用多种肿瘤的临床治疗。     

树突状细胞疫苗治疗脑胶质瘤的研究现状及进展

目的:脑胶质瘤是人体颅内最为多见的恶性肿瘤。方法:现有的手术 放疗 化疗的综合治疗措施仍难以根治。结果:树突状细胞(Dendritic cell,DC)作为体内功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),能够诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成。结论:本文就DC疫苗在脑胶质瘤治疗研究中的现状及进展进行综述。     

CpG ODN与聚肌胞在肿瘤免疫中联合应用的研究

目的选择两种新型的生物型免疫刺激剂CpGODN和poly(I:C)联合作为多肽抗原佐剂,通过体外及体内多种免疫功能指标检测,探讨二者联合应用的免疫增效作用。方法体外实验中用CpGODN和poly(I:C)单独或联合与正常小鼠脾细胞混合培养,24h后检测细胞培养上清中细胞因子分泌情况;体内实验中用CpGODN和poly(I:C)单独或者联合作为MUC1多肽抗原的佐剂免疫小鼠,通过ELISA方法检测免疫血清中抗体效价及应用细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验对各组间免疫水平的差别进行评价。结果CpGODN与poly(I:C)联合应用体外能有效诱导脾细胞分泌IL-12p40和TNF-α。体内实验联合组小鼠血清中TNF-α和IFN-γ水平升高,IL-4水平降低。小鼠血清中抗MUC1多肽抗体效价各组间差别无统计学意义(P>0·05),但细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicityTlympho-cyte,CTL)杀伤实验显示联合组能有效杀伤靶细胞。结论CpGODN和poly(I:C)联合作为可溶性多肽MUC1的免疫佐剂,与单用相比能有效地增强机体的抗肿瘤免疫应答反应。     

粘蛋白MUC1、MUC2在胆囊癌中的联合表达和意义

目的探讨MUC1、MUC2在原发性胆囊癌组织中的表达及其在胆囊癌诊断和免疫治疗中的意义。方法采用免疫组化方法检测42例原发性胆囊癌组织和17例正常胆囊组织中MUC1、MUC2的表达。结果MUC1﹑MUC2在胆囊癌组织中的阳性表达率分别为76.19%和47.62%;明显高于正常胆囊组织(29.41%)(P=0.001)和11.76%(P=0.010)。MUC1、MUC2在胆囊癌组织中的阳性表达率与正常胆囊组织之间存在统计学差异(P<0.05)。MUC1、MUC2在胆囊癌组织中阳性表达率与胆囊癌组织病理类型、组织学分化、淋巴结转移及Nevin分期也有相关关系。但与有无合并胆囊结石无相关关系。结论MUC1、MUC2可作为胆囊癌患者预后评价指标,有可能作为肿瘤微转移的诊断及免疫治疗的靶抗原。     

脐血源树突状细胞的扩增及其杀肿瘤细胞效应研究

目的:探讨不同细胞因子组合对脐带血来源的树突状细胞(Dendritic cells,DC)扩增率的影响,优化扩增方案,并对所诱导的脐带血DC的生物学特征进行鉴定。方法:收集健康孕妇正常顺产儿脐带血,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,加入不同组合的细胞因子,联合诱导脐带血单个核细胞前体细胞分化为DC。然后对诱导细胞进行流式细胞仪检测,其中包括CD83,CD1a在DC表面的表达。激光共聚焦显微镜观察DC的形态。用MTT法检测所诱导的DC活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。结果:单个核细胞经细胞因子诱导后第3d成均匀散在分布的细胞,部分细胞变形,胞体拉长;第7d可见胞浆突起,细胞形态不规则,呈疏松贴壁生长或悬浮生长;第12 d细胞集落样生长,具有典型的DC特征。检测所诱导的DC活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应,实验组DC活化的T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤效应明显优于对照组。结论:采取细胞因子GM-CSF、IL-4、FL、SCF联合刺激成功诱导出形态典型、纯度较高的脐带血DC,收获的细胞数比常规方案(加细胞因子GM-CSF、IL-4)明显增多。优化方案所诱导的DC能增强T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。     

子宫颈癌患者树突状细胞体内外诱导抗肿瘤免疫

目的探讨子宫颈癌患者的树突状细胞(dendritic cells,DCs)在体内外能否诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫应答。方法应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)从子宫颈癌患者外周血诱导DCs,Hela子宫颈癌抗原致敏,MTT法检测DCs激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对肿瘤细胞的细胞毒作用。皮下接种Hela子宫颈癌建立荷瘤鼠,给予抗原致敏的DCs回输;或先给予DCs免疫,后用癌细胞攻击,观察其抑制肿瘤的效果。结果从子宫颈癌患者外周血诱导的DCs高表达CD86、CD12、HLA-DR、CD54和CD83,激活的CTLs在体外特异性杀伤子宫颈癌细胞。DCs回输小鼠具有免疫保护作用,减低成瘤率;又能引起免疫治疗作用,有效抑制肿瘤的生长。结论用GM-CSF及IL-4从子宫颈癌患者诱导的DCs能有效提呈Hela子宫颈癌抗原给T淋巴细胞,并且在体内外诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫,有望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径。     

抗原负载的树突细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的影响

目的：研究树突细胞(DC)负载不同形式的抗原对其成熟和功能的影响,及DC对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖和功能的影响。方法：外周血单个核细胞(PBMC)经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,将Bel 7402细胞制备成肿瘤细胞冻融物、坏死肿瘤细胞及正常生长的肿瘤细胞,并作为不同状态的肿瘤抗原刺激DC,以流式细胞仪检测DC表面分子的表达。应用MTT法检测肿瘤抗原负载的DC刺激的CIK对肿瘤细胞的杀伤力。结果：负载肿瘤细胞冻融物的Dc其表面cDla、CD80、CD83、HLA-DR高表达,促进CIK增殖和杀伤力的功能最强;与正常肿瘤细胞共培养的DC细胞成熟程度受到抑制;负载Bel 7402抗原的DC刺激的CIK对Bel 7402有较强杀伤力,而对HerpG2杀伤力弱。结论：肿瘤细胞冻融物预刺激的DC成熟程度最高,诱导抗原特异性CIK细胞的功能最强,为临床DC瘤苗和CIK的应用提供了实验依据。     

基于流感样症状发病率的甲型H1N1疫苗保护效果观察

目的了解健康人群接种甲型H1N1流感(甲流)疫苗后的流行病学保护效果。方法采用描述流行病学、队列研究方法对2 116名接种和2 762名未接种甲流疫苗的师生随访1年,观察其流感样病例发病情况。结果接种组流感样病例发病率3.2%,未接种组发病率4.5%,差异有统计学意义(χ2=4.869,P=0.027),疫苗保护率为28.9%。OR值随接种率升高而降低。季节性流感疫苗并不是保护因素。结论甲流疫苗对包括甲流在内的流感样病例有较好的流行病学保护效果。     

树突细胞疫苗与恶性黑色素瘤免疫治疗研究进展

以免疫治疗为代表的生物治疗日益受到重视。树突细胞（DC）是体内抗原提呈功能最强的细胞,在肿瘤免疫治疗中占重要地位。DC具有加工、提呈抗原的功能,同时DC在启动特异性抗肿瘤免疫反应中发挥着关键性作用。通过不同形式的抗原修饰的DC可增强其抗肿瘤的免疫原性。就DC疫苗与恶性黑色素瘤的免疫治疗研究进展做一综述。