大鼠角膜碱烧伤后角膜及房水中缺氧诱导因子-1α的表达

目的 检测大鼠角膜碱烧伤后角膜及房水中缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α的表达情况,探讨角膜碱烧伤后早期HIF-1α在其损伤机制中的作用.方法 选择健康成年SD大鼠25只,右眼建立大鼠角膜碱烧伤模型为实验组,左眼不作处理为正常对照组,免疫组织化学法检测碱烧伤后1d、4d、7d、10 d、14 d HIF-1α在角膜中的表达情况,ELISA法检测各时间点房水中HIF-1α的表达量.结果 正常对照组中,HIF-1α在角膜及房水中均无表达.实验组碱烧伤后,HIF-1 α在角膜上皮细胞层和基质层组织中的表达均较对照组增强,且随碱烧伤时间延长而逐渐增强,至14 d时达到峰值.房水中HIF-1α在碱烧伤后1d的表达量为(0.056±0.013) μg·L-1,随后持续增高,至14 d时达(0.823±0.114) μg·L-1.房水中HIF-1α的表达量与其在角膜中的表达量呈正相关(r=0.87,P＜0.01).结论 HIF-1α参与了角膜损伤的病理机制,其表达变化与角膜新生血管的生长情况相关.     

改良内皮抑素基因转移对碱烧伤角膜新生血管的抑制作喻

目的 观察含重复RGD序列的改良内皮抑素(endostatin,ES)(poly RGD-ES)基因转移抑制碱烧伤诱导的兔角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的效果,探讨其作用机制.方法 将27只(54眼)兔随机平均分为3组,采用1 mol·L-1 NaOH碱烧伤法诱导兔CNV形成.碱烧伤后分别在结膜下注射50 g·L-1pCI-poly RGD-ES转染液、50 g·L-1pCI-ES转染液和PBS缓冲液各0.2 mL;每周2次,共2周.动态观察CNV的生长状况,计算CNV面积.第3天、第7天、第14天利用免疫组织化学方法 观察血管内皮生长因子(yascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,ELISA法检测房水中VEGF蛋白的表达.结果 pCI-poly RGD-ES转染组CNV面积7 d时达高峰,为(6.368±0.739)mm2,各时间点均明显少于其他2组,差异有显著统计学意义(P<0.001);7 d时pCI-poly RGD-ES转染组房水中VEGF表达为(0.644±0.082)μg·L-1,7 d后开始下降,各检测点与其他2组比较,差异有显著统计学意义(P<0.001).结论 poly RGD-ES可有效抑制碱烧伤诱导的CNV的生长,活性强于ES.     

VEGF、NO在角膜碱烧伤新生血管形成中的影响

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、一氧化氮(nitric oxide,NO)对角膜碱烧伤新生血管形成的影响。方法40只兔制作角膜新生血管模型,观察角膜碱烧伤后不同时期的角膜新生血管生长情况,检测角膜VEGF的表达和NO的含量,与应用一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitro-l-argininemethyl ester,L-NAME)组相比较。结果VEGF的表达及NO含量在伤后即迅速升高,至高峰后逐渐下降,L-NAME组的角膜新生血管面积和VEGF表达及NO的含量在伤后同期均较碱烧伤组显著下降(P<0.01,P<0.05)。烧伤后第4d、7d、14d碱烧伤组和L-NAME组的角膜新生血管面积分别为(20.93±0.65)mm2、(29.73±1.78)mm2、(48.72±2.62)mm2和(16.70±0.64)mm2、(21.87±0.97)mm2、(34.74±1.47)mm2;烧伤后第1d、4d、7d、14d2组VEGF面密度值分别为0·0812±0.0025、0.1029±0.0044、0.0764±0·0023、0.0172±0.0008和0.0516±0·0026、0.0823±0.0019、0.0363±0.0015、0·0169±0·0005;2组NO含量分别为(6.58±0.07)μmol·gprot-1、(6.90±0.03)μmol·gprot-1、(6·41±0.03)μmol·gprot-1、(6.04±0.05)μmol·gprot-1和(6.44±0.06)μmol·gprot-1、(6.61±0·05)μmol·gprot-1、(6.21±0.02)μmol·gprot-1、(5.95±0.03)μmol·gprot-1;且VEGF表达和NO含量变化呈显著正相关(r=0.962,P<0.01)。结论VEGF和NO均可能参与了角膜新生血管的形成过程;L-NAME可通过抑制NO的产生而降低VEGF的表达,从而抑制角膜新生血管的生长。     

地塞米松对碱烧伤后大鼠角膜核转录因子-κB活化的影响

目的 探讨1g·L-1地塞米松对大鼠角膜碱烧伤后核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活化的影响.方法 24只SD大鼠右眼角膜碱烧伤后随机分为地塞米松组(造模后1g·L-1地塞米松滴眼)和生理盐水组(造模后生理盐水滴眼),每日滴眼4次,连续7d.碱烧伤后7d,裂隙灯观察角膜新生血管、炎症和角膜上皮缺损情况;制备角膜标本,采用苏木精-伊红染色法检测角膜组织病理学变化;免疫荧光染色检测角膜组织中NF-κB活化率,ELISA法测定IL-1β和VEGF蛋白表达水平.结果 碱烧伤后7d,NF-κB活化率比较,角膜基质层地塞米松组为3.81％,生理盐水组为9.58％,差异有统计学意义(P＜0.01);角膜上皮层地塞米松组为14.91％,生理盐水组为15.12％,差异无统计学意义(P=0.70).角膜新生血管面积、炎症指数、IL-1β和VEGF表达水平,地塞米松组分别为(13.15±0.93) mm2、0.27±0.08、(105.71±14.77) ng·L-1和(532.86±74.79)ng·L-1,均低于生理盐水组的(30.07±4.32) mm2、0.65±0.21、(178.17±10.96) ng·L-和(795.01±124.14) ng·L-1,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).碱烧伤后7d,两组角膜上皮细胞均完整覆盖伤区.结论 地塞米松抑制大鼠角膜碱烧伤后炎症和新生血管的作用与抑制角膜基质细胞内NF-κB的活化有关,地塞米松不影响角膜上皮的修复.碱烧伤后1周内,1g·L-1地塞米松眼液滴眼是安全、有效的治疗措施.     

As2O3对角膜新生血管中VEGF表达的影响

目的 探讨角膜新生血管形成的不同时期血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在角膜内的表达,研究三氧化二砷(As2O3)对VEGF表达的影响.方法 健康日本大耳白兔48只,碱烧伤法建立兔角膜碱烧伤动物模型,随机分成实验组(1组、2组、3组)和对照组,每个小组各12只.1、2、3组分别给予0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL As2O3结膜下注射;对照组给予生理盐水0.3 mL结膜下注射.免疫组织化学法及反转录-聚合酶链反应法检测碱烧伤后第7天、第14天、第28天各组角膜内VEGF的表达.结果 兔角膜碱烧伤后,采用免疫组织化学法检测1组、2组、3组、对照组角膜新生血管中VEGF表达:第7天时阳性细胞所占百分比分别为(1.90±0.64)%、(1.30±0.54)%、(0.60 ±0.59)%、(5.80±0.90)%;第14天时分别为(3.60 ±0.86)%、(2.60 ±0.74)%、(1.60±0.75)%、(8.50±0.83)%;第28天时分别为(1.30±0.75)%、(1.00±0.38)%、(0.30 ±0.59)%、(3.20±0.65)%.反转录-聚合酶链反应法检测1组、2组、3组、对照组角膜新生血管中VEGF表达量:第7天时分别为(168.18 ±11.50)μg、(110.57±11.89)μg、(35.58 ±8.56)μg、(249.58±13.34)μg;第14天时分别为(195.42±11.58)μg、(145.58±12.36)μg、(59.52±5.28)μg、(329.48±11.69)μg;第28天时分别为(111.58±9.56)μg、(87.25±6.06)μg、(25.26±6.54)μg、(194.85±13.24)μg 2种检测结果显示:角膜新生血管中VEGF表达量初期逐渐增加,第14天时达高峰,以后随时间延长逐渐减少,且随As2O3剂量的增加其表达量减少;实验组角膜组织中各时间点VEGF的表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 VEGF是重要的角膜新生血管形成因子,As2O3对碱烧伤后兔VEGF的表达具有抑制作用;抑制VEGF的表达是As2O3抑制角膜新生血管形成的重要机制.     

鼠角膜碱烧伤后血管内皮细胞生长因子在其角膜中的表达及意义

目的：探讨角膜碱烧伤后血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)在鼠角膜中的表达及意义。方法：采用1mol/L氢氧化钠溶液烧伤Sprayue-Dawley(SD)大鼠角膜,建立炎症性角膜新生血管动物模型;用免疫印迹分析SD大鼠角膜烧伤后不同时间段VEGF蛋白在角膜中的表达量;免疫组织化学染色方法检测SD大鼠角膜烧伤后VEGF蛋白在角膜各层中的分布。结果：正常SD大鼠角膜中未检出VEGF蛋白;伤后6h,鼠角膜可检测出VEGF蛋白;伤后96h时,角膜中VEGF蛋白达高峰;伤后168hVEGF蛋白表达量下降,伤后SD大鼠角膜基质层,尤其是毗邻于烧灼区的浅基质层中有大量炎性细胞浸润,浸润的炎性细胞和新生血管内皮细胞均有VEGF蛋白表达。结论;炎性细胞分泌的VEGF蛋白参与了炎症性角膜新生血管增殖的调控,对新生血管的生长有诱导和维持作用。     

新鲜羊膜移植对兔角膜碱烧伤房水中TNF-α的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)在兔角膜碱烧伤新鲜羊膜移植术(amnioticmembranetransplantation,AMT)后不同时期房水中的表达状况。方法将24只新西兰白兔双眼碱烧伤,并于24h内右眼行人新鲜AMT,左眼滴氯霉素滴眼液(2次·d-1)作为对照眼,分别于术后3d、7d、14d、28d观察双眼眼内炎症反应,包括房水细胞计数和TNF-α含量的测定。结果7d、28dAMT眼房水细胞数量分别为(12.9±6.8)×106·L-1、(2.9±3.7)×106·L-1,明显低于对照眼[(21.7±6.6)×106·L-1、(16.3±8.8)×106·L-1](P<0.05),2组之间有显著差异;术后AMT眼TNF-α浓度随时间的延长而降低,而对照眼TNF-α浓度则保持较高水平,所有时间点AMT眼TNF-α浓度与对照眼对比差异均有显著意义(P<0.05)。结论角膜碱烧伤后早期实施新鲜AMT能有效控制眼内炎症反应。     

角膜碱烧伤后VEGF与新生血管渗漏性的相关性实验研究

目的 研究大鼠角膜碱烧伤后新生血管渗透率的变化并探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对渗透率的影响.方法 建立大鼠角膜碱烧伤模型,于术后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10d伊文兰示踪法检测新生血管渗透率,PCR法检测角膜组织中VEGF-RNA的表达.以正常大鼠角膜作为对照.结果 正常及碱烧伤后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d大鼠角膜新生血管渗透率依次为0 mg·L-1·mm-2(1.14±0.17)mg·L-1·mm-2,(0.24±0.08)mg·L-1·mm-2,(0.29±0.16)mg·L-1·mm-2,(0.14±0.10)mg·L-1·mm-2,(0.09±0.06)mg·L-1·mm-2和(0.05±0.04)mg·L-1·mm-2;角膜组织中VEGF-RNA水平依次为(1.09±0.31)×106拷贝·μg-1总RNA,(7.01±1.99)×106拷贝·μg-1总RNA,(1.01±0.59)×106拷贝·μg-1总RNA,(2.43±0.43)×106拷贝·μg-1总RNA,(0.99±1.31)×106拷贝·μg-1总RNA,(0.95±0.03)×106拷贝·μg-1总RNA和(0.17±0.15)×106拷贝·μg-1总RNA,其中7 d和10 d的VEGF-RNA低于正常水平(P7=0.011,P10=0.006).经Pearson相关分析,新生血管渗透率和VEGF-RNA水平呈正相关改变(r=0.866,P＜0.01).结论 VEGF在新生血管渗漏的调节机制中起着重要作用;大鼠角膜碱烧伤后期,新生血管渗漏性增高难以应用VEGF机制进行解释的现象,提示可能存在其他的新生血管渗漏调节机制.[眼科新进展 2009;29(1):18-20]     

SDF-1和CXCR4在鼠角膜碱烧伤新生血管中的表达

目的 探讨大鼠角膜碱烧伤后基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)及其CXC受体4(CXC chemo-kine receptor 4,CXCR4)在角膜组织中的表达变化规律,以及CXCR4特异性桔抗剂AMD3100对角膜新生血管的影响.方法 采用1 mol·L-1氢氧化钠溶液建立SD大鼠角膜碱烧伤模型,用RT-PCR和Western blot检测大鼠角膜碱烧伤后不同时间点SDF-1和CXCR4的mRNA和蛋白的表达,用免疫组织化学SP法检测大鼠角膜碱烧伤后SDF-1和CXCR4在角膜组织中的阳性表达.另设碱烧伤对照组和碱烧伤治疗组,碱烧伤后分别给予0.1 mL生理盐水和AMD3100球结膜下注射,比较2组大鼠角膜新生血管面积和角膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的含量.结果 碱烧伤后SDF-1阳性表达于浅层角膜基质细胞、角膜上皮细胞和炎性浸润细胞,CXCR4阳性表达于炎性浸润细胞、角膜上皮细胞和血管内皮细胞.正常大鼠角膜组织中可检出微量SDF-1和CXCR4 mRNA和蛋白表达;碱烧伤后2 d,SDF-1 mRNA和蛋白水平明显升高,7d、10 d分别是正常水平的3.8倍和21.0倍;CXCR4 mRNA和蛋白水平在碱烧伤后2 d明显升高,7 d、10 d分别是正常水平的1.9倍和17.5倍.碱烧伤治疗组碱烧伤后7 d、10 d、14 d时新生血管面积均小于碱烧伤对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05).碱烧伤治疗组碱烧伤后2 d、5 d、7 d、10 d、14 d角膜组织中VEGF蛋白的含量均稍低于对照组,差异均无统计学意义(均为P>0.05).结论 SDF-1与其受体CXCR4的相互作用可能参与了碱烧伤诱导的角膜新生血管形成,AMD3100能有效抑制角膜新生血管的形成,有可能成为治疗角膜新生血管的方法之一.     

VEGF siRNA对兔眼碱烧伤后角膜VEGF表达的作用

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)小干扰RNA(VEGF siRNA)对兔眼碱烧伤后角膜VEGF表达的调控作用.方法 25只普通家兔以碱烧伤法(1 moL/L NaOH溶液)诱导角膜新生血管(CNV).碱烧伤后立即以脂质体(LF2000)为载体,右眼球结膜下注射VEGF siRNA重组质粒,左眼球结膜下注射pSilencer 2.1-U6 hygro空白质粒作为对照.碱烧伤后1、3、 5、 7、14 d,RT-PCR法检测角膜组织中VEGF mRNA的表达,免疫组织化学法检测角膜组织中VEGF蛋白的表达.结果 与对照眼相比,实验组在各时间段RT-PCR结果 显示角膜组织中VEGF mRNA的表达明显下调,免疫组织化学结果 显示角膜组织中VEGF蛋白的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 VEGF siRNA能有效地抑制兔眼碱烧伤后角膜组织中VEGF mRNA及蛋白的表达.     

角膜细胞凋亡

细胞凋亡是一种程序性细胞死亡 ,在维持正常组织器官的稳定平衡及病理状态组织器官的损伤、修复中起着重要作用。许多因素对细胞凋亡既有诱导作用 ,又有抑制作用 ,如细胞因子、基因、病毒、类固醇、辐射、营养不良、T淋巴细胞等。在正常和损伤角膜中也有凋亡的证据。上皮、内皮及基质中的IL l通过角膜细胞凋亡来调节角膜细胞和损伤愈合 ,上皮损伤 (如紫外线照射、准分子激光PRK手术、病毒感染等 )导致前基质下大量角膜细胞凋亡和IL l释放。许多角膜疾病 (如病毒性角膜炎、圆锥角膜、大泡性角膜病变等 )IL l、上皮基质系统可起到保护作用 ,或与其发病机理有关。对正常和疾病角膜细胞凋亡的进一步研究可能会发现稳定正常角膜组织 ,促进损伤愈合过程的更好方法。     

角膜保存的进展

介绍角膜保存方法的研究进展。非活性保存是一种防腐保存,常用的脱水干燥剂有变色硅胶、分子筛、无水氯化钙以及甘油,而它只能用于板层角膜移植。活性保存就能使角膜内皮细胞存活率达到70％以上,可用于穿透角膜移植术。根据保存时间的不同,活性保存分为短期、中期与长期3类。短期保存是将全眼球消毒无菌处理后湿房4℃保存。中期保存一般采用角膜片组织营养液4℃保存,最常用培养液为M-K液。本院眼库在1980年代初研究使用改进的RPMI1640营养液,对人角膜有效保存时间4—5d,最长7d,并且于临床穿透角膜移植效果满意。近年国外报导改进出几种其他角膜保存液,以提高组织质量和延长保存时间,如K-SOK、CSM、Dexsol和Optisol。以器官培养法保存角膜用于临床角膜移植一般在保存4周内、最长保存至7周。临床效果包括角膜透明率,内皮细胞密度,植片厚度及脱水情况优于其他保存方法。长期保存此法由Caopella和Kaufman(1972年)首先详细报告其临床应用。本院眼科在1980年代中期已经成功地将人角膜冷冻保存,最长保存时间为1a以上,并用于临床穿透角膜移植,获满意疗效。但其保存过程中所需费用昂贵,一般眼库和基层医院难于开展这项工作。鉴于此,本院眼库近年又研究一冷冻保存方法-全眼球甘油冷冻保存。该方法既克服了竞用经济     

Aqueous to cornea fluorescein distribution ratio in normal and swollen cornea

Intravitreal sodium fluorescein was used to simulate equilibrium fluorescein kinetics, thereby allowing simple measurement of the aqueous to cornea fluorescein distribution ratio. Two groups of rabbit corneas were studied: normal corneas and corneas wounded by freezing. The aqueous to cornea fluorescein distribution ratio was approximately 0.4, was not significantly different in groups of normal or wounded eyes and little variability was noted. In addition, a comparison of in vivo and in vitro measurements of corneal fluorescein concentration in wounded eyes suggests that in vivo protein-bound fluorescein in the cornea fluoresces less efficiently than free fluorescein.     

Brown cornea

Background A brown cornea is relatively rare. We report a case of progressive brown corneal pigmentation in a patient with a primary acquired melanosis of the conjunctiva. Later the patient developed an iris melanoma. Methods Case report with clinico-pathological correlation and discussion of possible mechanisms of particle clearance of the cornea. Results A 36-year-old female developed a corneal stromal pigmentation adjacent to a pigmented conjunctival lesion of the left eye. The corneal pigmentation had progressed through 8 years. The conjunctival lesion was surgically removed, and proved histopathologically to be a compound nevus with slight atypia and an acquired melanosis. Despite surgery the corneal pigmentation increased, and visual acuity dropped in the diseased eye. A perforating keratoplasty was performed, and two small pigmented iris nodules were now noted. Three years after grafting, growth of the two iris tumours was obvious. In addition, pigmentation of the trabecular meshwork and large, pigmented endothelial precipitates were observed. The corneal pigmentation also increased. The eye was enucleated. Histopathologic evaluation demonstrated a marked accumulation of melanophages on the endothelium of the graft. The host cornea contained pigmented cells in the mid-stroma. The iris contained two melanomas. Conclusions The brown pigmentation of the cornea was due to pigment granules from the iris tumours liberated to the anterior chamber. The pigment was transported into the cornea through the endothelium and accumulated in melanophages between corneal lamellas. The pigment subsequently cleared via the corneal limbus in a process resembling clearance of corneal haemochromatosis. No financial relationships with organisations or firms exist for any of the authors. All data are original and are in full control of the authors. The authors agree that Graefe’s Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology may review primary data on request.     

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜瓣及瓣下角膜厚度对角膜强度影响的实验研究

目的　研究准分子激光原位角膜磨镶术 (laserinsitukeratomileusis ,LASIK)后角膜瓣及瓣下角膜厚度对角膜强度的影响。方法　选取成年家猫 2 8只随机分成 4个组 ,建立LASIK动物模型。A组 8只 ,制作厚度为 16 0 μm的角膜瓣 ,激光切削至剩余瓣下角膜厚度为 30 0 μm ,复位角膜瓣。B组8只 ,弃去角膜瓣 ,剩余瓣下角膜厚度为 30 0 μm。C组 6只 ,处理方法同A组 ,但剩余瓣下角膜厚度为180 μm。D组 6只 ,处理方法同B组 ,但剩余瓣下角膜厚度为 180 μm。分别于术前 ,术后 1周 ,1、2及3个月行中央角膜厚度及前房深度的测量 ,并分析角膜后表面地形图。术后 3个月行组织病理学及透射电镜检查。结果　术后 3个月时 ,A、B、C及D组前房深度增加量分别为 ( 0 16± 0 0 8)、( 0 2 1± 0 16 )、( 0 33± 0 0 9)及 ( 0 41± 0 10 )mm。A组与B组、C组与D组相比 ,差异无显著意义 (t=0 6 85 ,1 45 7;P >0 0 5 ) ;A组与C组、B组与D组相比 ,差异有显著意义 (t=3 45 8,2 5 97;P <0 0 5 )。A、B、C及D组角膜后表面前突的增加量分别为 ( 2 7 78± 9 5 2 )、( 39 5 7± 7 6 8)、( 5 8 5 7± 8 6 6 )及( 6 8 14± 19 6 9) μm。A组与B组、C组与D组相比 ,差异无显著意义 (t=2 36 1,1 0 90 ;P >0 0 5 ) ;A组与C组、B组