胆汁纳米细菌培养及鉴定

①目的 探讨胆汁中纳米细菌的培养、鉴定方法及微生物学特性.②方法 对6例胆结石患者胆汁标本进行纳米细菌培养,观察其生长情况.采用透射电镜、间接免疫荧光染色、Von KOSSA钙染色进行纳米细菌鉴定并采用扫描电镜对其进行能谱分析.③结果 6例胆结石患者胆汁标本纳米细菌培养均为阳性;透射电镜下观察,纳米细菌约为80～350...     

胆汁纳米细菌培养及鉴定

①目的 探讨胆汁中纳米细菌的培养、鉴定方法及微生物学特性.②方法 对6例胆结石患者胆汁标本进行纳米细菌培养,观察其生长情况.采用透射电镜、间接免疫荧光染色、Von KOSSA钙染色进行纳米细菌鉴定并采用扫描电镜对其进行能谱分析.③结果 6例胆结石患者胆汁标本纳米细菌培养均为阳性;透射电镜下观察,纳米细菌约为80～350nm,呈椭球形或短棒状,聚集成簇状,其表面被覆细菌被膜;经Von KOSSA法钙染色,其形成的矿化外壳呈黑色;间接免疫荧光染色显示纳米细菌被荧光标记抗体结合,呈绿色荧光颗粒.扫描电镜能谱分析(EDX)显示,纳米细菌外壳含有钙、磷、镁等元素,其钙/磷比值为1.62;④结论 胆囊结石患者胆汁中存在纳米细菌感染.纳米细菌体积微小,生长缓慢,能在生理条件下于其菌体表面产生矿化外壳.纳米细菌单克隆抗体联合透射电镜可鉴定纳米细菌,钙染色对纳米细菌的鉴定有着重要的参考价值.     

前列腺结石患者结石中纳米细菌的培养和形态学鉴定

目的 分离、培养、鉴定纳米细菌(nanobacteria, NB),探索其在前列腺结石中的分布情况,分析其在前列腺结石发病中的作用.方法 手术中无菌收集前列腺结石患者的结石标本,经过稀释、过滤、离心处理后,用细胞培养的方法进行细菌培养,观察其生长情况.运用透射电镜、钙染色和革兰染色等手段观察其形态特征,采用单克隆抗体间接免疫荧光染色进行细菌鉴定.结果 ①培养3～4周后,对前列腺结石标本进行观察,发现部分培养管底部出现紧贴管壁生长的白色沉淀物.②钙染色和革兰染色观察可发现NB成簇分布.③单克隆抗体间接免疫荧光染色鉴定发现26例标本中存在着NB,阳性率为65.0%.④免疫荧光阳性标本透射电镜下观察,NB呈球状或球杆状,大小100～500 nm.结论 前列腺结石患者的结石中存在着NB的感染,表明NB与前列腺结石发病的关系密切.     

胆汁细菌培养与药敏分析

目的：了解胆汁中病原菌菌群分布情况,分析胆汁中细菌药物敏感性。方法：应用BACTEK9120培养系统和VITEK32全自动细菌鉴定及药敏分析系统对81例胆汁标本进行细菌鉴定和药敏分析。结果：胆汁细菌培养阳性率为88．9％,主要菌种有大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肠球菌,肠球菌比率较高;需氧茵中革兰氏阴性菌对亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、头孢他啶的敏感性较好．肠球菌只对左氧氟沙星、氨苄西林敏感性较好。结论：胆汁细菌培养阳性率很高,有一定的临床价值。     

涂片直接观察在微生物检验中的作用

目的 阐述涂片直接观察在微生物检验中的作用。方法 用涂片直接观察结合革兰氏染色与培养结果进行综合分析。结果 171份标本中，细菌培养的总阳性率为21.6％(37／171)，革兰氏染色找到细菌的阳性率为27．5％(47／171)，有较多活动微粒和白细胞的阳性率为75．4％(19／171)；在129份观察到有较多活动微粒和白细胞的标本中，革兰氏染色找到细菌的阳性率为36．4％(47／129)，细菌培养阳性率为29．5％(37／129)；在革兰氏染色未找到细菌的82份标本中，细菌培养的阳性率为1．2％(1／82)。结论 涂片直接观察结合革兰氏染色检查，可以对标本的性质(是细菌性的还是．非细菌性的)作出快速的初步判断；涂片直接观察可以对粘附力差的标本的革兰氏染色是否成功作出判断；直接涂片观察还有利于发现异型细胞、活动的原虫、寄生虫等。     

类风湿关节炎患者血清中纳米细菌检测及鉴定

目的探讨类风湿关节炎患者和正常人群血清标本中纳米细菌分布情况。方法对30例正常人群和30例类风湿关节炎患者血清进行纳米细菌培养,用钙染色技术对培养物进行纳米细菌检测,采用间接免疫荧光法进行纳米细菌鉴定。结果30例正常人和30例类风湿关节炎患者血清纳米细菌的检出率分别为6．7％（2株）、30．0％（9株）,两者间差异有统计学意义（x2=2．919,P=0．02〈0．05）。结论类风湿关节炎患者血清中存在纳米细菌。提示纳米细菌感染与类风湿关节炎发病可能有关。     

UF-100流式尿沉渣分析仪在筛选老年糖尿病尿路感染中的应用

目的：探讨UF-100流式尿沉渣分析仪在筛选老年糖尿病患者尿路感染中的可靠性。方法：收取合格中段尿128份，取10μl做细菌培养及菌落计数，剩余标本用UF-100流式尿沉渣分析仪主要检测细菌计量、白细胞计数。结果：细菌培养有43份培养出有意义细菌（菌落计数≥10^4 CFU／ml～10^5CFu／ml），阳性率为33．6％。UF-100分析仪检出38份阳性标本，其中有6例细菌培养阴性，假阳性率为7．1％，11例细菌培养阳性，UF-100分析为阴性，假阴性率为25、6％。UF-100分析仪的敏感性为74．4％，特异性为92、9％，阳性预示值为84．2％。两法检测差异无显著性（P〉0．05）。结论：UF-100分析仪可以作为老年糖尿病患者尿路感染的确诊方法，为老年糖尿病患者尿路感染的临床、诊断、治疗、预后提供更多、更准确的信息。     

急性乳腺炎患者乳腺脓汁细菌分布和耐药性分析

回顾性分析2010年1月至2012年10月诊治的急性乳腺炎173例患者的临床资料。对患者的脓液标本进行细菌培养鉴定,173份脓液标本细菌培养阳性98份,阳性率为56．7％;分离出98株细菌,革兰阳性菌91株（92．9％）,革兰阴性菌7株（7．1％）。金黄色葡萄球菌占83．7％,对青霉素和红霉素耐药率为90．2％和86．6％,对万古霉素和替考拉宁无耐药性。     

Bact/Alert120全自动血培养仪检测结果分析

目的 对血液细菌培养鉴定结果进行统计分析，了解近年来临床细菌菌种分布情况以指导临床治疗。方法 回顾性分析了Ｂａｃｔ／Ａｌｅｒｔ１２０全自动培养仪检测２２２３份标本，对细菌种类、阳性率等进行分析。结果 检出细菌种类６２种，培养阳性率为１５．３％；假阳性率３．８％，假阴性率０．６９％。凝固酶阴性葡萄球菌的比例高达５３．４％，而其中儿童患者占６４％。结论 条件致病菌明显增高，革兰阳性球菌的检出有上升趋势，表皮葡萄球菌是小儿血液培养检出的主要病原菌，其次为溶血葡萄球菌和金黄色葡萄球菌。     

157例儿童眼分泌物细菌培养菌种分布

本对157例儿童眼分泌物细菌培养菌种分布情况进行了分析研究。方法分泌物标本需氧培养和5％-10％CO2环境培养，采用Vit3全自动细菌鉴定仪鉴定。结果157例标本中分离到115株病原菌，阳性率为74．4％。大部分分离出的病原菌是单一致病菌，混合感染致病菌7例。革兰氏阳性球菌仍是主要病原菌，占细菌总数的54．1％。     

SD大鼠严重腹腔感染前后血、粪纳米细菌的检测

目的检测SD大鼠腹腔感染前后血、粪纳米细菌(nanobacteria,NB),探讨NB与严重腹腔感染的相关性.方法40只SD大鼠,通过盲肠结扎加穿孔法制作SD大鼠严重腹腔感染模型,分别于感染前后取血、粪标本进行电镜下观察;NB培养;NB 16S rRNA基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,pCR)扩增,电泳分析.结果电镜下观察NB,感染前、后血阳性率分别为17.5%和35.0%,P=0.118;感染前、后粪阳性率分别为40.0%和32.5%,P=0.250.经28 d培养,结果均未见有NB特异性白色沉淀物形成.PCR法检测NB 16SrRNA基因,感染前、后血阳性率分别为52.5%和90.0%,P=0.000;感染前、后粪阳性率均为95.0%.结论PCR法检测NB 16S rRNA基因,SD大鼠粪普遍阳性,腹腔感染前、后血阳性率差异有显著意义,其作用尚待进一步研究.     

Ⅲ型前列腺炎纳米细菌快速检测方法研究及临床评价

目的 通过对几种Ⅲ型前列腺炎纳米细菌感染检测方法评价比较,找出一种最快速、可靠的纳米细菌检测方法.方法 以培养后间接免疫荧光鉴定结果为基准对照,分别采用间接免疫荧光法、茜素红钙染色法及PCR法对西南医院泌尿外科门诊150例Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液标本进行纳米细菌检测,比较其阳性检出率、灵敏度和特异度差异.结果 评价阳性...     

Detection of nanobacteria in serum, bile and gallbladder mucosa of patients with cholecystolithiasis

In 1990, nanobacterium was found and named by Kajander. With distinct mineralizing ability, nanobacteria are thought to play a role in extraskeletal calcifying diseases. It have been found in many human tissues, but whether they exist in the bile or gallbladder mucosa remains unclear.     

试管法与戴安娜卡检测法在血型鉴定中的应用比较

目的:探讨试管法与戴安娜卡检测法在血型鉴定中的应用及检测效果。方法:将2010年6月~2010年9月送检的血标本,分别采用试管法与戴安娜卡检测法鉴定血型,比较两种方法鉴定的符合率及假阳性、假阴性结果发生情况。结果:404例待血型鉴定患者,试管法正定型符合率90.8%,假阳性和(或)假阴性率40.7%;反定型符合率88.9%,假阳性和(或)假阴性率49.6%;微柱凝胶法符合率97.0%,假阳性和(或)假阴性率13.2%。RH(D)定型结果两种方法符合率为100%。三种方法符合率经统计学分析,差异无统计学意义(P>0.05)。微柱凝胶法检测假阳性率和(或)假阴性率低于试管法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:戴安娜卡检测法操作方便,灵敏度及特异性好,大大降低了人为错误的发生率,标本易于保存,辅以试管法补充检测。     

成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离?培养及鉴定

目的:建立成年大鼠胰腺导管干细胞的体外分离、培养及鉴定的方法.方法:V型胶原酶溶液灌注消化成年大鼠胰腺组织,并经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,而后加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)继续培养,7天可形成单层细胞,用0.25%胰酶-EDTA消化并传代培养.取第2代细胞利用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测CK19、Pdx-1、Nestin、insulin及glucagon的表达.结果:经胶原酶灌注消化胰腺导管上皮,再经过Ficoll密度梯度离心去除胰岛组织,可使胰腺导管细胞得到较好的纯化.免疫荧光结果示:胰腺导管细胞CK19、Pdx-1和Nestin染色呈阳性,阳性细胞率分别为(88.6±6.2)%、(84.6±8.6)%和(79.3±10.5)%,而insulin及glucagon染色为阴性.RT-PCR结果显示该细胞表达CK19、Pdx-1和Nestin基因.结论:该方法可较好的分离出胰腺导管细胞.经鉴定该法培养所获细胞具有胰腺干细胞的特性.     

RPMI1640培养液在阴道滴虫培养中的应用

目的：评价１６４０培养液在阴道滴虫体外培养中的应用效果。方法；在ＲＰＭＩ１６４０培养液中加入其它在份，配制成新的阴道滴虫培养基。观察其对阴道滴虫的培养效果，并与ＣＰＬＭ培养基作比较。结果：滴虫在两种培养基中的增殖倍数有显著性差异。在临床标本中分离方面与ＣＰＬＭ培养基无明显差异，但在保种时间上比ＣＰＬＭ培养基较长。结论：ＲＰＭＩ１６４０培养液应用于阴道滴虫培养中效果良好。     

纳米SiO2粒子特性及其在无细胞体系中氧化能力的检测及意义

目的：检测纳米SiO₂粒子的特性及其在无细胞体系中的氧化能力,为医用纳米SiO₂粒子体内外毒性的预测提供依据。方法：用透射电镜观测2种纳米SiO₂粒子粒径、分散性、形状;用Zeta电位粒度分析仪检测纳米粒子在不同介质（纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液、含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液,超声30 s）溶液及不同时间（0、24、48和72 h）的粒径分布及团聚状态;用ＤDCFH-DA法Ｆ检测粒子在无细胞体系中自发产生自由基的能力。结果：电镜结果显示,2种纳米SiO₂粒子均呈球形,大小一致,分布均匀、分散性好,粒子平均粒径分别为（43.0±4.2）和（68.0±5.7）nm;在纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液及含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中,Si-43 nm及Si-68 nm 粒子粒径变化很大,其中在生理盐水中的粒径最接近电镜结果,为74.0和96.7 nm。超声30 s后0、24、48和72 h时,Si-43 nm及Si-68 nm粒子粒径在生理盐水中不发生团聚;在含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中发生团聚,形成相似大小的团聚体;在30~100 μg的质量范围内,2种粒子自发产生自由基的能力相似但很弱,相当于2.5 μmol•L^-1左右H₂O₂当量。结论：一定粒径的纳米SiO₂在细胞培养液中形成大粒径团聚体,粒子自身只有较弱的自发产生自由基的能力。     

小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定

目的建立一种小鼠腹腔巨噬细胞体外分离培养的简便方法。方法以无血清的RPMI1640培养液灌洗小鼠腹腔,分离获取小鼠腹腔巨噬细胞,在含有10%小牛血清的RPMI1640培养液中培养。通过细胞形态学观察,台盼蓝染色计数细胞活力,瑞氏染色计算纯度,细胞吞噬墨汁颗粒测定其吞噬率,鉴定这些细胞是巨噬细胞。结果本实验获得高纯度的巨噬细胞,具备巨噬细胞的形态特征。结论该方法是一种简便的巨噬细胞体外分离培养方法。