炒紫苏子醇提物对肥大细胞脱颗粒及组胺释放的影响

目的肥大细胞脱颗粒及组胺释放是过敏性疾病发生机制中的重要环节之一,研究炒紫苏子醇提取物对其的作用,为研制和开发新的抗过敏中药提供实验依据。方法制备致敏大鼠腹腔肥大细胞悬液,体外和不同浓度药物作用,观察脱颗粒百分率和组胺释放水平,判断药物的抗过敏作用。除正常组(非致敏组)外,设空白对照组、炒紫苏子醇提取物320、640、1280μg/mL各剂量组、色甘酸钠阳性对照组、木犀草素组共7组。并对实验各个因素进行优化。结果经过最佳实验条件的优化,选择药物与肥大细胞作用时间为20min,OVA的触发浓度为20μg/mL。炒紫苏子醇提取物320、640、1280μg/mL各剂量组和木犀草素组均能明显降低IgE所致的I型过敏反应肥大细胞脱颗粒百分率(P<0.01),也明显降低其组胺释放(分别为P>0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),并表现明显的剂量依赖关系。结论炒紫苏子醇提取物具有明显的肥大细胞脱颗粒及组胺释放等抗过敏作用。     

穴位敷贴对过敏性鼻炎小鼠腹腔肥大细胞脱颗粒影响的实验研究

目的研究不同处理卵白蛋白(OVA)过敏性鼻炎小鼠模型腹腔肥大细胞脱颗粒的影响。方法分离不同处理组别小鼠腹腔肥大细胞,中性红染色后计算腹腔肥大细胞脱颗粒率。结果正常空白对照组、OVA过敏性鼻炎组、穴位敷贴治疗组、激素阳性对照组、PBS阴性对照组小鼠腹腔肥大细胞脱颗粒率分别为(15±6)%、(53±11)%、(37±13)%、(31±15)%、(47±14)%。结论OVA过敏性鼻炎小鼠的腹腔肥大细胞有明显的脱颗粒现象;与OVA过敏性鼻炎小鼠相比,穴位敷贴治疗组及激素阳性对照组小鼠的腹腔肥大细胞脱颗粒现象显著减轻;PBS阴性对照组小鼠的腹腔肥大细胞脱颗粒现象没有明显变化。推测穴位敷贴抗过敏机制为稳定肥大细胞膜,抑制肥大细胞脱颗粒,减少致炎介质产生。     

Effects of point application on celiac mast cell degranulation in mice with allergic rhinitis: An experimental study

目的：研究不同处理方法对卵白蛋白（Ovum Albumin,OVA）变应性鼻炎小鼠模型腹腔肥大细胞脱颗粒的影响。方法：将60只雌性小鼠随机分为5组,每组12只,分别按不同方法处理后分离各组小鼠的腹腔肥大细胞,中性红染色后计算腹腔肥大细胞脱颗粒率。结果：正常对照组、OVA变应性鼻炎组、穴位敷贴组、激素对照组、磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Saline,PBS）阴性对照组小鼠腹腔肥大细胞脱颗粒率分别为（15±6）％、（53±11）％、（37±13）％、（31±15）％、（47±14）％。OVA变应性鼻炎小鼠的腹腔肥大细胞有明显的脱颗粒现象：与OVA变应性鼻炎小鼠相比,穴位敷贴组及激素对照组小鼠的腹腔肥大细胞脱颗粒现象显著减轻;PBS对照组小鼠的腹腔肥大细胞脱颗粒现象没有明显变化。结论：推测穴位敷贴抗过敏机制为稳定肥大细胞膜,抑制肥大细胞脱颗粒,减少致炎介质产生。     

鼻炎口服液抗过敏作用的实验研究

目的:研究鼻炎口服液的抗过敏作用。方法:采用抗血清致大鼠同种被动皮肤过敏、大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒、卵蛋白(OA)引起豚鼠鼻黏膜过敏反应、磷酸组胺致豚鼠过敏反应与2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱发的DTH小鼠迟发性超敏反应模型,观察鼻炎口服液的抗过敏作用。结果:与空白对照组比较,鼻炎口服液能显著抑制大鼠同种被动皮肤过敏和豚鼠鼻黏膜过敏反应,阻止大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒、提高豚鼠对磷酸组胺的致敏阈并缩短过敏反应的持续时间,抵制DTH小鼠迟发性超敏反应。结论:鼻炎口服液具有一定的抗过敏作用。     

防风醇提物对肥大细胞PAR-2及相关细胞因子的影响

目的:观察防风醇提物对肥大细胞过氧化物酶体增殖因子活化受体-2(PAR-2)及相关细胞因子的影响,探索防风抗过敏的新机制。方法:用胰蛋白酶刺激P815细胞的方法建立肥大细胞脱颗粒模型,设空白组,模型组,防风高、低剂量组(0.02,0.01 g·m L~(-1)),药物作用6 h后,采用ELISA检测细胞上清液中组胺,白细胞介素-4(IL-4),IL~(-1)3水平,Western blot,RTPCR检测PAR-2蛋白及其mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组组胺,IL-4,IL~(-1)3含量及PAR-2蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,防风醇提物在体外抑制肥大细胞组胺,IL-4,IL~(-1)3含量及PAR-2蛋白及mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:防风醇提物可能通过抑制PAR-2表达,阻断肥大细胞脱颗粒,且选择性减少相关细胞因子分泌,继而抑制肥大细胞"瀑布效应",达到抗过敏作用。     

CGA-BSA致豚鼠过敏反应及其机制的研究

目的:对人工合成绿原酸全抗原(CGA-BSA)的过敏作用及其机制进行研究.方法:采用隔日致敏法建立CGA-BSA致豚鼠过敏休克模型并制备抗血清和备检组织样品;HE染色观察致敏豚鼠肺、气管和肝组织的病理改变;采用被动肥大细胞脱颗粒试验观察CGA-BSA的免疫原性,并进一步采用酶联免疫法检测过敏豚鼠血清中组胺和IgE的含量.结果:成功制作CGA-BSA致豚鼠过敏休克模型,并观察到敛敏豚鼠组织的炎性病变;肥大细胞脱颗粒试验中CGA-BSA组致敏豚鼠血清发生阳性反应,脱颗粒率为(63.58±10.23)%;CGA-BSA组豚鼠激发后血清中IgE和组胺显著升高.结论:人工合成的CGA-BSA具有致豚鼠过敏作用,其过敏机制属于I型变态反应.     

仙蓟化斑胶囊对肥大细胞脱颗粒及组胺释放影响的研究

[目的]研究仙蓟化斑胶囊抗变态反应的作用机制,为后期实验及其临床治疗过敏性紫癜提供依据。[方法]制备致敏的大鼠及抗卵蛋白血清,给予不同浓度药物,采用大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,测定大鼠皮肤蓝斑直径,同时采用大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验、大鼠肥大细胞释放组胺实验,测定脱颗粒百分率和组胺释放水平。[结果]仙蓟化斑胶囊可使蓝斑直径变小、可降低肥大细胞脱颗粒百分率、降低其组胺释放,并呈明显的剂量依赖关系。[结论]仙蓟化斑胶囊有抗变态反应的作用,明显抑制PCA、肥大细胞脱颗粒及组胺的释放。     

地参祛风合剂抗过敏反应的实验研究

目的:观察地参祛风合剂抗过敏反应的药理作用。方法:采用小鼠耳异种被动皮肤过敏(PCA)试验、大鼠组胺诱发的大鼠足跖肿造型试验、大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒试验观察其抗过敏反应的作用。结果:地参祛风合剂大小剂量对小鼠耳异种被动性皮肤过敏有明显的抑制作用,且作用与异丙肾上腺素相似。中药大剂量能抑制由组胺诱发的大鼠足跖肿,但作用比异丙嗪弱。中药大、小剂量,异丙肾上腺素均能抑制由抗原攻击所致的肥大细胞脱颗粒,但作用弱于异丙肾上腺素;中药大、小剂量组之间无明显差异,(P>0.05)。结论:地参祛风合剂可抑制抗原与特异性IgE的结合,具有抗组胺及抑制肥大细胞脱颗粒作用,具有抗过敏作用。     

参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用

目的:探讨参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞释放活性物质的干预作用。方法:提取原代大鼠腹腔肥大细胞,纯化后以5×106个/mL浓度接种于培养板中,加参莲提取物预处理2 h后,用C48/80刺激肥大细胞脱颗粒,ELISA法检测细胞上清液以及细胞裂解液中组胺(histamine),类胰蛋白酶(tryptase),以及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量,计算活性物质释放率。结果:模型组较对照组组胺释放率由32.36%升至61.71%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,组胺释放率分别降至16.24%,26.25%,27.81%,31.50%(P<0.01);模型组较对照组类胰蛋白酶释放率由13.19%升至21.72%(P<0.01),参莲提取物各剂量(100,50,25,12.5 mg.L-1)作用后,类胰蛋白酶释放率分别降至8.60%,15.78%,8.80%,12.15%(100,25,12.5 mg.L-1组P<0.01,50 mg.L-1组P<0.05);模型组较对照组5-HT释放率没有明显变化,但参莲提取物100,50,25 mg.L-1组显著增加5-HT释放率(P<0.01,P<0.05)。结论:参莲提取物对大鼠腹腔肥大细胞有一定的稳定作用。     

花粉提取物（撒尼汀GBX和T60）对过敏反应的影响

在体内和体外实验中，花粉提取物ＧＢＸ和Ｔ６０具有抗过敏作用，均能抑制肥大细胞的脱颗粒和组胺的释放。结果提示撒尼汀的抗过敏作用可能依赖于其与肥大细胞的相互作用。     

检测原代肥大细胞组胺释放分析中药注射剂致类过敏性

目的: 通过检测组胺释放考察19种临床常用中药注射剂致大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒情况,为评价中药注射剂致类过敏性提供参考。 方法: 应用荧光法检测组胺,并进行条件优化以适用于中药注射剂所致肥大细胞释放组胺的检测。分离大鼠腹腔肥大细胞,分别将19种中药注射剂、阳性药C48/80和肥大细胞混合孵育1h,采用优化的荧光法检测组胺,再计算组胺释放率并进行统计学分析。 结果: 荧光法检测组胺最佳缩合反应时间为3 min,终止反应后7.5~30 min缩合物稳定性好;采用间接检测组胺释放率与直接检测组胺释放率两方法结果间无显著差异。痰热清、清开灵、参麦、丹参、血塞通、参附、双黄连、生脉、香丹、热毒宁、复方当归等11种中药注射剂致肥大细胞释放组胺作用明显。脉络宁、黄芪、艾迪、醒脑静、黄芪多糖、红花、盐酸川芎嗪、参芪等8种注射剂未见明显致肥大细胞释放组胺作用。 结论: 中药注射剂引发的过敏样反应可能大多为类过敏,检测组胺释放分析原代肥大细胞脱颗粒试验可以为评价中药注射剂的致类过敏性提供参考。     

痛泻要方抑制致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的研究

目的观察痛泻要方对化合物48/80(C48/80)诱导的大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒的影响,探讨痛泻要方对肠易激综合征的作用机制。方法应用钙离子荧光指示剂Fluo-3,通过光学显微镜和激光共聚焦荧光显微镜,观察痛泻要方对致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒百分数及肥大细胞内游离钙浓度和组胺释放的影响。结果实验组(痛泻要方组)致敏大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒百分数为13%,对照组为41%,2组有显著性差异(P<0.05);对照组和实验组致敏大鼠腹腔肥大细胞内游离钙浓度分别为(436.16±12.30)nmol/L和(78.31±3.28)nmol/L,2组相比有显著性差异(P<0.05);对照组和实验组大鼠腹腔肥大细胞上清液组胺浓度分别为(98.41±7.23)nmol/L和(33.23±21.50)nmol/L,2组相比有显著性差异(P<0.05)。结论痛泻要方对C48/80诱导的大鼠腹腔肥大细胞的脱颗粒过程有明显的抑制作用,表明痛泻要方是通过抑制肠道肥大细胞活化,从而减少其释放组胺等递质实现治疗作用的。     

在体皮肤微透析分析制川乌-白芍配伍对芍药苷局部药代动力学的影响

目的:考察制川乌对白芍中芍药苷经皮转运的影响,从经皮转运角度研究制川乌-白芍配伍协同增效作用机制。方法:以昆明种清洁级小鼠为实验对象,分别经皮给予白芍凝胶、制川乌-白芍凝胶和白芍-氮酮凝胶,采用皮肤微透析取样技术,建立HPLC测定透析液中芍药苷的浓度,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86),检测波长230 nm;利用DAS 2.0软件计算局部药动学参数,采用扫描电镜考察药物对小鼠皮肤角质层的影响。结果:白芍凝胶组的药时曲线下面积(AUC_(0-t)),平均滞留时间(MRT_(0-t)),半衰期(t_(1/2)),达峰时间(T_(max))和药峰浓度(C_(max))分别为(3.28±1.01)mg·L~(-1)·h,(3.95±0.32)h,(0.92±0.44)h,(2.00±0)h和(0.72±0.24)mg·L~(-1);白芍-制川乌凝胶组MRT_(0-t),AUC_(0-t),t_(1/2),T_(max)和C_(max)分别为(3.35±0.08)h,(10.64±1.24)mg·L~(-1)·h,(1.32±0.67)h,(1.00±0)h和(3.06±0.38)mg·L~(-1),白芍-氮酮凝胶组AUC_(0-t),MRT_(0-t),t_(1/2),T_(max),C_(max)分别为(59.82±13.51)mg·L~(-1)·h,(3.67±0.08)h,(0.89±0.16)h,(2.67±0.29)h和(13.24±4.14)mg·L~(-1)。与白芍凝胶组比较,制川乌-白芍凝胶组AUC_(0-t)和C_(max)均显著增大,T_(max)明显缩短。扫描电镜观察结果表明制川乌作用皮肤后,角质层细胞间隙明显增加,且与氮酮对皮肤的作用类似。结论:制川乌-白芍配伍能显著提高芍药苷的透皮吸收,达到配伍"增效"的目的,这可能与制川乌降低角质层的屏障作用有关。     

苦参碱凝胶剂的制备及体外释药特性考察

目的：优选苦参碱凝胶剂的处方工艺并考察其体外释药特性。方法：采用HPLC测定苦参碱含量,流动相乙腈-0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（6：94）,检测波长210 nm。利用动态透析法测定苦参碱凝胶剂体外释放率,以1,5,10 h累计释放率的综合评分为指标,通过正交试验考察卡波姆-940用量、苦参碱用量、氮酮用量及凝胶pH对处方工艺的影响。结果：优选的处方工艺为卡波姆-940、苦参碱和氮酮用量分别为1.0,2.0,0.5 g,pH调节至6.8;苦参碱凝胶剂在1,5,10 h内的体外累计释放率分别为（10.17±0.35）%,（74.90±0.70）%,（94.53±0.74）%。结论：优选的处方工艺稳定可行,制备的苦参碱凝胶剂具有缓释特性。     

木蹄复方体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:筛选木蹄复方抗肿瘤活性提取物,初步分析其化学成分并观察其体外抗肿瘤效应.方法:常规水提和醇提的方法提取复方中水溶和醇溶性组分.MTT法测定木蹄复方水提取物(distilled water extract of compound Fomes fomentarius,WECF)和木蹄复方乙醇提取物(ethanol extract of compound F.fomentarius,EECF)对体外培养肿瘤细胞A549,Hela,QGY生长的抑制效应.系统预试法分析WECF化学组成.流式细胞术检测WECF对A549细胞凋亡的影响.结果:WECF对A549,Hela,QGY 3种细胞的IC50分别为(0.28±0.02),(0.40 ±0.06),(0.28±0.05) g·L-1;EECF对3种细胞的IC50分别为(0.50±0.04),(0.50±0.03),(0.60 ±0.06)g·L-1,WECF对肿瘤细胞的生长具有较强的抑制作用.WECF含有有机酸,氨基酸、多肽和蛋白质,糖、多糖和苷类,皂苷,内酯、香豆素及其苷类,植物甾醇、三萜成分以及挥发油和油脂,多糖含量为(16.1±0.5)％.WECF对A549,Hela,QGY,DU145,MDA-MB-435S,SGC-79016种细胞的IC50分别为0.29,0.45,0.32,0.32,0.83,0.23g·L-1; WECF 1 g·L-1作用于A549 24 h后,细胞凋亡率为22.0％.结论:WECF具有较强的体外抗肿瘤效果,对多种肿瘤细胞的生长具有非常明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

Nettle extract (Urtica dioica) affects key receptors and enzymes associated with allergic rhinitis

A nettle (Urtica dioica) extract shows in vitro inhibition of several key inflammatory events that cause the symptoms of seasonal allergies. These include the antagonist and negative agonist activity against the Histamine‐1 (H₁) receptor and the inhibition of mast cell tryptase preventing degranulation and release of a host of pro‐inflammatory mediators that cause the symptoms of hay fevers. The nettle extract also inhibits prostaglandin formation through inhibition of Cyclooxygenase‐1 (COX‐1), Cyclooxygenase‐2 (COX‐2), and Hematopoietic Prostaglandin D₂ synthase (HPGDS), central enzymes in pro‐inflammatory pathways. The IC₅₀ value for histamine receptor antagonist activity was 251 (±13) µg mL^?1 and for the histamine receptor negative agonist activity was 193 (±71) µg mL^?1. The IC₅₀ values for inhibition of mast cell tryptase was 172 (±28) µg mL^?1, for COX‐1 was 160 (±47) µg mL^?1, for COX‐2 was 275 (±9) µg mL^?1, and for HPGDS was 295 (±51) µg mL^?1. Through the use of DART TOF‐MS, which yields exact masses and relative abundances of compounds present in complex mixtures, bioactives have been identified in nettle that contribute to the inhibition of pro‐inflammatory pathways related to allergic rhinitis. These results provide for the first time, a mechanistic understanding of the role of nettle extracts in reducing allergic and other inflammatory responses in vitro. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

仙慈丹有效部位对人肺癌细胞A549增殖的抑制作用

目的:探讨仙慈丹(XCD)有效部位对肺癌细胞A549增殖抑制作用及其作用机制.方法:XCD有效部位为XCD水提滤液通过AB-8型大孔树脂柱收集80％乙醇洗脱液所得,得率为0.90％.体外培养A549细胞至对数期,分别以质量浓度为5,10,15,25,50,100,200 mg·L-1的仙慈丹有效部位作用,应用MTT法测定其对A549细胞的抑制率,进而求出半数抑制浓度(IC50).运用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术及PI单染流式细胞术测定XCD有效部位对A549细胞凋亡及周期的影响.结果:通过MTT实验,经过统计计算得出XCD有效部位在对A549作用24,48,72 h后的IC50分别为136.550,56.671,55.322 mg·L-1;通过流式细胞仪测定XCD作用下A549在24,48,72 h的凋亡率分别为(17.98 ±0.11)％,(23.34 ±0.23)％,(29.54±0.78)％;XCD作用A549细胞24 h后,细胞周期被阻滞在S期,在48 h后细胞周期被阻滞在G0/G1期.结论:XCD有效部位对A549细胞增殖抑制作用明显,通过诱导肿瘤细胞凋亡,同时调节细胞周期抑制A549细胞生长.