实时荧光PCR检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤中的表达

目的检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤（Kaposi’s Sarcoma,KS）中的表达并分析其-9KS发生发展的关系。方法应用SYBRGreenI作为荧光染料,以GAPDH作内参照,建立检测EGFRmRNA表达的实时荧光PCR反应体系,对经病理活检证实的7例KS肿瘤组织和瘤旁正常组织中EGFRmRNA的表达水平进行检测。结果KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织（t=-3．865,P〈0．05）,并且结果有统计学意义。KS肿瘤组织中EGFR的相对表达量为0．34±0．31,瘤旁组织中为1．24±0．78（P=0．008）。结论所建立的SYBRGreenI实时定量PCR方法可以成功地检测EGFR基因的表达量。KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织,差异有统计学意义。     

雌激素受体β1和β2在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织中雌激素受体(ER)β1、ERβ2基因和蛋白的表达及其临床意义。方法应用Western印迹法检测乳腺癌组织、癌旁组织及正常组织中ERβ1和ERβ2蛋白的表达情况,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测ERβ1、ERβ2mRNA的表达情况。结果乳腺癌组织和癌旁组织中的ERβ1mRNA、ERβ2mRNA检出率与蛋白检出率相同。乳腺癌组织中的ERβ1蛋白检出率显著低于癌旁组织(P=0.029)和正常组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1蛋白表达量为47.06±8.94,显著低于癌旁组织中的55.33±9.59及正常组织中的54.47±9.65(P=0.009及0.019)。乳腺癌组织中的ERβ1mRNA检出率显著低于癌旁组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1mRNA表达量为0.026±0.014,显著低于癌旁组织中的0.041±0.020(P=0.015)。乳腺癌组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.635(P=0.008),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.714(P=0.004);癌旁组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.506(P=0.012),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.926(P=0.000),ERβ1mRNA、ERβ2mRNA与蛋白水平之间存在相关性。结论全长野生型ERβ1可能是避免乳腺癌发生的保护性因子,ERβ1有助对乳腺癌预后的预测。     

水通道蛋白4在大肠癌组织中的表达

目的:观察水通道蛋白4在人大肠癌组织中的表达并分析其临床意义.方法:分别采用逆转录PCR、免疫印迹方法检测水通道蛋白4在人大肠癌组织和癌旁正常组织中的表达,收集临床资料,分析其与临床病理资料关系.结果:正常组织中水通道蛋白4(蛋白质、基因水平)低表达或不表达,而肿瘤组织较癌旁组织表达明显增加,半定量显示癌组织中水通道蛋白4在蛋白、基因表达水平分别是癌旁组织的(4.09±1.49)倍和(4.54±2.46)倍(P＜0.05);水通道蛋白4在肿瘤组织中表达与肿瘤病理分级、淋巴结转移相关(P＜0.05),而与肿瘤病理类型无关.结论:水通道蛋白4在正常组织中低表达,而在肿瘤组织中表达增加:水通道蛋白4可能与人大肠癌肿瘤细胞浸润、转移有关.     

MACC1在肝细胞癌中的表达与临床意义

目的 探讨肝细胞癌组织结肠癌转移相关基因1 (metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化测定108例病理确诊肝细胞癌患者的肝癌组织和癌旁无瘤肝组织中的MACC1蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测30例肝癌组织、癌旁组织以及20例正常肝组织中MACC1 mRNA的表达,分析肝癌组织中MACC1的表达水平与临床病理因素及预后的关系.结果 免疫组化结果显示,肝癌组织中MACC1蛋白表达的阳性率为49.1％(53/108),高于癌旁肝组织34.2％(37/108,P=0.011);实时荧光定量PCR结果显示,MACC1 mRNA在肝癌组织中的表达高于癌旁肝组织及正常肝组织(P＜0.001).单因素方差分析表明肝癌组织中MACC1的表达与肿瘤大小、有无包膜及病理分型密切相关(P＜0.05).生存分析表明MACC1阳性患者的1年、3年和5年总体生存率分别为0.650、0.492和0.280,而MACC1阴性患者1年、3年和5年总体生存率分别0.799、0.684和0.566,差异有统计学意义(P=0.006).结论 肝癌组织中MACC1的表达与肝癌的恶性演变及患者的临床预后密切相关,MACC1有望成为判断肝癌患者临床预后的重要分子,且有可能成为肝癌分子靶向治疗的新靶点.     

β-catenin和表达cyclin—D1在散发性甲状旁腺瘤的

目的研究β-一连环蛋白（β-catenin）及细胞周期蛋白D1（cyclin-D1）在散发性甲状旁腺瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化、荧光定量PCR（RT—PCR）检测20例散发性甲状旁腺瘤、10例甲状旁腺增生、8例正常甲状旁腺组织中β-catenin、cyclin—D1的表达。结果免疫组化显示：β-catenin在正常甲状旁腺组织、甲状旁腺增生及散发性甲状旁腺瘤胞膜中的表达强度呈下降趋势,而在胞质和细胞核内逐渐增强;cyclin-D1在腺瘤组和增生组的表达明显高于正常组（P〈0．05）,而腺瘤组与增生组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;β-catenin异常表达与cyclin-D1的高表达在散发性甲状旁腺瘤中存在显著相关性（P〈0．05）。荧光定量PCR分析显示：cyclin—D1mRNA在腺瘤组织和正常甲状旁腺组织中的表达分别为2．36±1．12和1．50±1．03（P〈0．05）,β-cateninmRNA在腺瘤组织和正常甲状旁腺组织中的表达分别为1．02±0．45和0．88±0．56（P〉0．05）。结论β—catenin的异常表达激活cyclin—D1引起细胞增殖和分化失控,可能是散发性甲状旁腺瘤发生机制之一。     

胃肠道间质瘤中p27和细胞周期素D1蛋白的表达及临床意义

目的研究p27和细胞周期素D1蛋白在胃肠道间质瘤中的表达及其与间质瘤临床病理特征的关系。方法收集48例手术切除的胃肠道间质瘤标本,同时取距瘤灶>5cm的正常组织,应用免疫组织化学SP法检测肿瘤组织及正常组织中p27和细胞周期素D1蛋白的表达。结果48例胃肠道间质瘤中p27和细胞周期素D1蛋白阳性表达率分别为54.16%和58.33%。p27蛋白的低表达与间质瘤的分化程度呈负相关(P<0.01),与间质瘤复发呈负相关(P<0.01)。p27和细胞周期素D1蛋白在胃肠道间质瘤的表达呈正相关(r=0.573,P<0.01)。结论p27和细胞周期素D1蛋白与胃肠道间质瘤的发生、发展有关,检测p27和细胞周期素D1蛋白可作为评估恶性程度和判断预后的重要指标。     

胃肠道间质瘤中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达及其DNA甲基化

目的 检测胃肠道间质瘤(GIST)组织及瘤旁组织中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)的表达,并研究整体DNA甲基化。方法 选取包头医学院第二附属医院2017年1月至2020年1月内镜下切除的GIST组织30例及瘤旁组织30例,应用免疫组化和qRT-PCR方法检测GIST组织和瘤旁组织中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白和mRNA的表达情况;应用亚硫酸氢盐限制性酶切分析技术(COBRA)分析重复序列LINE-1的甲基化水平。结果 GIST中DNMT1 mRNA的表达与瘤旁组织比较,差异无统计学意义(P0.05);GIST中的DNMT3a mRNA表达高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001);GIST中的DNMT3b mRNA表达高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001)。DNMT1蛋白在GIST及瘤旁组织中的阳性率比较,差异无统计学意义(P=1.000);DNMT3a蛋白在GIST中的阳性率高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.045);DNMT3b蛋白在GIST中的阳性率高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.017)。GIST中LINE-1序列的甲基化水平低于瘤旁组织,差异有统计学意义(P0.001);GIST中LINE-1序列的非甲基化水平高于瘤旁组织,差异有统计学意义(P=0.001)。结论 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的异常表达与GIST的发生发展有密切关系,具体机制可能与降低整体甲基化水平有关。     

G蛋白偶联受体56在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨G蛋白偶联受体56(GPR56)表达与人结肠癌临床病理资料的关系。方法:75例人结肠癌及癌旁组织的组织芯片,应用免疫组化SP法检测GPR56蛋白表达情况;应用Western-blot检测20例人结肠癌组织及癌旁组织中GPR56的表达。结果:免疫组化显示结肠癌组织中GPR56蛋白表达明显高于其在癌旁组织中的表达(MOD值0.052±0.030比0.045±0.026,t=4.529,P<0.05);结合临床病理参数进行相关分析,结果75例不同分化程度的结肠癌组织中GPR56蛋白表达上调与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有无及远处转移有无、浸润程度、pTNM分期有关(P<0.05);而与年龄、性别无关(P>0.05),GPR56蛋白表达与结肠癌患者生存期也无明显关系(t=0.841,P>0.05)。Western-blot分析结果显示GPR56蛋白在结肠癌组织(0.927±0.063)中的表达水平高于癌旁组织(0.797±0.050,P<0.05)。结论:GPR56表达升高与结肠癌发生、发展有关,可能是结肠癌恶性生物学行为的指标。     

结直肠癌组织APRIL表达检测方法的比较

目的 观察结直肠癌组织中增殖诱导配体(APRIL)表达检测方法,实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法的相关性.方法 实时荧光定量PCR法检测29例结直肠癌患者肿瘤组织及自身癌旁组织;免疫组化染色法检测相同29例结直肠癌患者组织及正常结直肠组织12例的APRIL蛋白表达.结果 29例结直肠癌组织中实时荧光定量PCR法检测APRIL阳性率为93.1%(27/29);免疫组化染色法检测APRIL阳性率为89.6%(26/29);两方法比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法检测APRIL的表达方法,能为临床提供有诊断参考价值的信息.     

PANDA基因表达与乳腺癌发生的相关性研究

DNa损伤活化p21相关非编码RNa(p21-associated ncRNa DNa damage activated,PaNDa)在一些肿瘤组织中,可检测到PaNDa基因表达。通过提取20对乳腺癌肿瘤组织及癌旁正常组织的总RNa、逆转录、进行PaNDa的实时荧光定量PCR检测,以研究其在乳腺肿瘤组织中的表达情况。结果进行统计学处理和分析:乳腺癌组织中PaNDa表达量(10.01±2.97)显著高于癌旁正常组织(8.20±2.10)中,P=0.04;说明PaNDa表达变化可能与乳腺癌的形成有关,结果与国内外学者的报道类似。     

纺锤体检测点蛋白BUB1B在胃癌组织中的表达及意义

目的 检测胃癌组织中纺锤体检测点蛋白BUB1B的表达,探究BUB1B在胃癌发生中的重要意义.方法 采用荧光实时定量PCR检测30例胃癌组织及17例癌旁正常组织中BUB1B mRNA水平表达;免疫组织化学检测BUB1B在胃癌组织及癌旁组织中BUB1B蛋白的表达情况.结果 在mRNA水平,BUB1B在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,近(8.875±1.08)倍;免疫组织化学结果显示,胃癌组织中BUB1B的表达明显高于癌旁正常组织.按照评分标准统计显示,癌旁组织BUB1B表达均值为(92.12±12.99),胃癌组织表达均值为(133.39±8.49),两者之间存在明显差异(P＜0.05).且BUB1B表达与TNM分期相关,但与淋巴结转移,年龄,肿瘤大小及有无家族史无明显相关.结论 BUB1B的过表达在胃癌发生发展中起重要作用,为探索肿瘤发生机制及寻找更为有效的治疗提供新的思路.     

组织因子途径抑制物2在胃间质瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨组织因子途径抑制物2（tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2）在胃间质瘤组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化、RT-PCR、Western blot检测TFPI-2在72例胃间质瘤患者的肿瘤中心处组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达。结果 TFPI-2在正常组织中的表达水平明显高于肿瘤旁组织,在瘤旁组织中表达水平明显高于瘤中心处组织（P〈0.01）。胃间质瘤中心组织TFPI-2的表达水平随着NIH分级升高而下调（P〈0.01）,TFPI-2的低表达与肿瘤侵袭转移关系密切（P〈0.05）。结论正常胃组织中TFPI-2的表达水平明显高于间质瘤组织,TFPI-2的表达下降可能与间质瘤的侵袭与转移有关。     

TRIM59在结直肠癌中的表达及意义

目的：检测TRIM59在结直肠癌及癌旁正常组织中的表达,分析其表达变化与结直肠癌临床病理特征及预后的相关性,探讨其在结直肠癌中的作用。方法：采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测8份结直肠癌组织及其癌旁组织中TRIM59 mRNA和蛋白的表达情况。通过免疫组织化学法检测30例结直肠癌组织及16例癌旁组织中TRIM59蛋白的表达情况,比较两种组织中TRIM59蛋白的表达差异。收集NCBI的基因表达汇编(GEO)中的编码基因表达谱数据集,对结直肠癌肿瘤样本表达谱资料及其对应的生物学信息进行相关性和预后分析。结果：结直肠癌组织中TRIM59 mRNA相对表达量为0.095 6±0.011 1,高于癌旁组织的0.023 9±0.016 2,差异有统计学意义(t=9.31,P=0.011)。免疫印迹结果表明TRIM59在癌组织中的表达高于癌旁组织。免疫组化结果表明,TRIM59在结直肠癌组织的阳性表达率为86.7%(26/30),高于癌旁正常组织的25%(4/16),差异有统计学意义(U=67,P<0.001)。在结直肠癌中,高表达TRIM59的样本与Dukes分期相关(H=13.067,...     

miR-21及其靶蛋白RASA1在寻常型银屑病患者皮肤组织中的表达及意义

目的 探讨miR-21在寻常型银屑病患者皮损组织、皮损旁组织以及正常健康人群皮肤组织中的表达水平,同时研究其下游靶蛋白RASA1在寻常型银屑病患者皮损组织和正常人群皮肤组织中的表达水平及意义。 方法 采用实时荧光定量PCR法检测miR-21在12例寻常型银屑病患者皮损组织、皮损旁组织以及15例正常人群皮肤组织中的表达水平,差别倍数用2-ΔΔCt值表示。利用免疫组织化学Envision法检测45例寻常型银屑病患者与20例正常人群皮肤组织中RASA1蛋白的表达情况,RASA1阳性显色主要为细胞质显示棕黄色或棕褐色颗粒。 结果 经过实时荧光定量PCR检测后分析显示:寻常型银屑病患者皮损组织中miR-21的表达水平显著高于正常皮肤组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果表明:RASA1蛋白在正常皮肤组织中的阳性表达率为60.00%,显著高于寻常型银屑病患者皮损中的阳性表达率(10.00%),差异具有统计学意义(χ2=14.009,P<0.001)。 结论 miR-21在寻常型银屑病皮损组织中的表达高于正常组织,其靶蛋白RASA1在寻常型银屑病患者皮肤组织中的阳性表达显著低于正常皮肤组织;可能是由于miR-21的差异表达调控RASA1基因,导致RASA1蛋白表达受到抑制,从而参与指向寻常型银屑病的发病过程。      

胃癌组织中靶向Abl相互作用蛋白-1的microRNA筛选

目的检测3种Abl相互作用蛋-1(ABI-1)相关的microRNA(miRNA)在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达模式,筛选出与胃癌组织相关的靶向ABI-1的miRNA。方法收集59例胃癌术后蜡块标本,包含胃癌组织和癌旁正常组织,抽提石蜡组织中的总RNA。在基因网选择ABI-1相关的miRNA(即miR-181c、miR-148b、miR-9),采用逆转录实时荧光定量PCR法对胃癌组织及癌旁正常组织中的3种miRNA进行检测,计算胃癌组织相对癌旁正常组织中miRNA的相对表达量(2-ΔΔCt)。结果 miR-181c、miR-148b、miR-9在胃癌组织中的相对表达量分别为(2.32±1.04)(P=0.000)、(0.82±0.67)(P=0.321)、(1.07±0.95)(P=0.774),其中miR-181c在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达差异有显著性(P=0.000)。结论 miR-181c在胃癌组织中相对高表达,提示其可能作为靶向ABI-1的miRNA调节ABI-1蛋白的表达,为进步研究靶向ABI-1miRNA在胃癌发生发展中的作用奠定基础。     

结直肠癌中巨噬细胞加帽蛋白的表达及其临床病理学意义

目的:检测巨噬细胞加帽蛋白(CapG)在结直肠癌及癌旁正常组织中的表达,探讨其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法:采用实时定量逆转录PCR法检测30例结直肠癌及癌旁正常组织中CapG mRNA的表达水平的差异,分析结直肠癌组织中CapG mRNA表达水平与临床病理特征之间的关系。结果:结直肠癌组织CapG mRNA的表达量(0.240±0.029)高于对应癌旁正常组织(0.130±0.011),但差异无统计学意义(t=1.616,P=0.241)。CapG mRNA在结直肠癌中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移等因素无关联性(t=0.591,0.841,-1.420,0.425,-1.366;P=0.559,0.408,0.167,0.674,0.183);而与肿瘤部位、分化、分期相关(F=3.642,t=2.412,t=-2.479;P=0.040,0.023,0.019),其中CapG mRNA在左半结肠癌(0.560±0.002)、右半结肠癌(0.250±0.009)及直肠癌(0.150±0.004)中表达水平存在依次减少差异,而以左半结肠中表达最高,差异具有统计学意义(F=3.642,P<0.05)。结论:结直肠癌中CapG差异表达可作为判断肿瘤恶性程度的指标。     

细胞周期蛋白E1基因表达上调与胃癌发生的关系

目的在基因和蛋白水平检测胃癌组织中细胞周期蛋白E1(CCNE1)的表达,研究其与临床病理参数的相关性,探讨其与胃癌发生发展之间的关系。方法通过Oncomine(肿瘤微阵列数据库)分析CCNE1在胃癌中的表达。采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术检测34例配对样本中CCNE1的mRNA的表达水平。采用组织芯片/组织微阵列技术结合免疫组化方法检测CCNE1在34例配对样本中的蛋白表达情况。结果胃癌原发灶CCNE1 mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.001),在胃癌组织中CCNE1 mRNA表达水平在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期均呈现显著上调(P=0.042,P=0.016)。在胃癌原发组织中CCNE1蛋白阳性表达率[41.2%(14/34)]显著高于癌旁正常组织[0(0/34)]及胃炎组织[0(0/34)],P0.01。CCNE1蛋白表达水平在不同分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移肿瘤的表达不同,差异有统计学意义(P0.05)。结论 CCNE1表达上调可能与胃癌的发生、发展密切相关,提示CCNE1的检测可能为胃癌的诊断和预后提供参考。     

食管鳞癌组织中EphrinB2、半胱氨酸蛋白酶8蛋白和mRNA的表达

目的:探讨人食管鳞癌组织中EphrinB2与半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)的表达.方法:运用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测96例食管鳞癌患者的癌组织和癌旁正常组织中EphrinB2与Caspase-8的表达,采用Cox回归进行食管癌患者生存分析.结果:癌组织中Caspase-8 mRNA(△Ct)与蛋白的表达水平分别为(7.38±2.47)和(2.51±2.38)%,低于配对正常组织的(5.46±1.87)和(8.85±7.88)%(t=1.375和-22.761,P均＜0.001);癌组织中EphrinB2蛋白的表达水平为(11.67±2.48)%,高于配对正常组织中的(1.71±0.60)%(t=-38.322,P＜0.001).癌组织中EphrinB2与Caspase-8蛋白的表达水平相关(r=-0.340,P＜0.001).COX回归分析:有家族史和Caspase-8 mRNA低表达是影响食管癌患者生存的危险因素(95%CI分别为1.990-8.547和0.152-0.788,P均＜0.05).结论:人食管鳞癌组织中EphrinB2的高表达和Caspase-8的低表达可作为食管癌发生发展的评估指标.     

肝癌组织中CD146、微血管密度与临床病理关系的研究

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中CD146(MCAM)和微血管密度(microvessel desity,MVD)与临床病理及血管生成的关系.方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应(Real time PCR)技术和免疫组化法检测60例HCC癌组织及癌旁肝组织中CD146mRNA及其蛋白的表达情况,用CD34标记免疫组化法检测MVD.结果:CD146mRNA在HCC组织中的表达水平(0.0406±0.0135)明显高于癌旁肝组织中的表达水平(0.035 6±0.012 7)(P＜0.05);CD146蛋白在HCC组织中的阳性率为66.67%,而在癌旁组织中的阳性率为30%,两者差异有统计学意义(P＜0.05).癌组织的MVD为54.92±8.55/200倍视野,癌旁组织的MVD为21.36±6.63/200倍视野,两者差异有统计学意义(P＜0.01).CD146蛋白在HCC组织中的表达与临床分期、门静脉癌栓及肝外转移明显相关,MVD在HCC组织的水平与肝外转移、肿瘤直径、肿瘤个数相关.CD146表达阴性的HCC组织MVD(51.18±7.32/200倍视野)明显低于阳性组织MVD(56.28±8.88/200倍视野)(P＜0.05).结论:CD146高表达可能与HCC的发生、发展及术后复发有关;与HCC血管形成有关.     

胃肠道间质瘤中TGF-β1、uPA的表达及其意义

目的:探讨胃肠道间质瘤中TGF-β1、uPA的表达及其在胃肠道间质瘤(GIST)发生及发展中的作用.方法:应用RT-PCR和Western-blot方法检测93例GIST标本中TGF-β1、uPA mRNA和蛋白水平表达.结果:TGF-β1、uPA mRNA及蛋白在GIST组织中呈现高表达,TGF-β1、uPA mRN...