间隙连接蛋白43在HSV-tk-GCV系统旁观者效应中的作用

目的：研究细胞间间隙连接蛋白（connexin43,Cx43）与基因治疗中旁观效应的关系。方法：将不同Cx43表达水平的中国仓鼠卵巢细胞（CHO）转染tk基因,tk^ /tk^-细胞按不同比例混合,经更昔洛韦（GCV）作用后,用细胞计数和流式细胞仪检测混合细胞体系生长抑制率。将上述混合细胞接种于裸鼠皮下,腹腔给GCV 15mg/kg,每日2次,3周后处死,观察皮下CHO细胞结节的大小。结果：体外实验证实tk^ /tk^-混合细胞经GCV作用后生长受抑制的程度与Cx43表达水平有关,Cx43表达水平高的混合细胞在含有5%,tk^ 细胞时就表现出旁观效应,而Cx43表达水平低的混合细胞在含20%tk^ 细胞时才表现出明显的旁观效应。实验发现Cx43表达水平高的混合细胞动物皮下种植后经过GCV作用,细胞结节的体积明显小于Cx43表达水平低的混合细胞结节体积。结论：在HSV-tk-GCV系统基因治疗过程中旁观效应的效率和间隙连接蛋白的表达水平有关。     

旁观者效应在肝癌基因治疗中的作用

目的：观察HSV－tk/ACV(Herpes Simplex Virus thymidine kinase gene/Acyclovir）系统基因治疗恶性肿瘤过程中旁观者效应的作用。方法：HSV－tk基因重组逆转录病毒载体转染PA317细胞为PA317－tk细胞。培养PA317－tk细胞即可获得有感染力的携带HSV－tk基因的病毒颗粒,然后转染肝癌细胞株SMMC－7721细胞为SMMC－tk细胞。SMMC－TK细胞与SMMC－7721细胞以不同百分比混合,用ACV（100ug/ml）培养基培养,MTT法检测ACV对各组细胞抑制率（Inhibit Rate,IR),根据各组IR与该组SMMC－tk细胞数的百分比值（IR／SMMC－tk%,IR/St）的大小判断旁观者效应作用的有无和强弱。结果：旁观效应试验表明,含SMMC-tk细胞10％,20％,30％,40％,50％,60％,70％,80％,90％,100％各组IR／St比值分别为2．15,1．91,1．83,1．47,1．30,1．11,1．02,0．93,0．84,0．76。10％－70％各组IR／St比值均大于1,存在明显旁观者效应,以10％,20％,30％,40％组最强,80％－100％三组IR／St比值小于1,旁观者效应不明显。结论：研究结果证实用HSV－tk/ACV系统基因治疗恶性肿瘤,适宜比例TK^ 细胞时,存在明显的旁观者效应,TK／细胞为10％时旁观者效应最强,这对于HSV－TK／ACV系统基因治疗恶性肿瘤具有重要意义。     

间隙连接蛋白43与妇科疾病

间隙连接蛋白的正常和异常表达,可直接影响细胞及组织、器官的功能状态,其中间隙连接蛋白43是最重要的间隙连接蛋白。在子宫组织中,间隙连接蛋白43水平的升高,为子宫肌细胞间收缩控制提供了低电阻通道,使离子很容易通过间隙连接的通道,保证了子宫肌细胞群在代谢及行为上的协调性。其异常表达,与子宫肌瘤、子宫内膜异位症、宫颈癌等多种妇科疾病的发生、发展有着密切的联系。     

细胞间隙连接蛋白43在骨质疏松领域研究进展

骨质疏松症是骨代谢紊乱、骨微结构被破坏、骨骼脆性增加,致使容易造成骨折的代谢性骨病综合征.越来越多的证据表明,连接蛋白介导的细胞间隙间通道促进了骨骼生物学的许多方面,包括骨骼发育、骨骼稳态的维持及骨骼细胞对多种细胞外信号的反应性.细胞间隙连接蛋白43(Cx43)是骨骼中存在含量最丰富的间隙连接蛋白,已被证明是骨骼动态平...     

细胞间隙连接蛋白43在耐药性卵巢癌中的表达

目的探讨细胞间隙连接蛋白43(CX43)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系.方法从1999年1月至2003年6月间临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮性卵巢癌和6例正常卵巢作为研究对象.根据临床诊断将其分为3组:①化疗耐药组30例,②化疗敏感组30例,③正常卵巢组6例.全部病例术前均未接受过放疗,入院后均行全子宫和双附件切除 盆腔淋巴结清扫 阑尾切除 大网膜切除术,66例患者均有随访结果.用流式细胞仪定量分析66例标本组织中CX43蛋白的表达量.结果CX43蛋白的表达为化疗耐药组＜化疗敏感组＜正常卵巢组织,单向方差分析两两比较结果差异有显著意义.结论CX43蛋白表达量的下降与上皮性卵巢癌的化疗耐药显著相关.     

间隙连接蛋白43在胶质瘤中的研究进展

间隙连接蛋白 (Connexin,Cx)是一个构成间隙连接(Gap junction,GJ)的蛋白家族 ,大约有 2 0个成员。相邻细胞间通过间隙连接所介导的间隙连接通讯 (Gap junctionintercellular communication,GJIC)进行细胞间信息和能量交换 ,对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化起着重要的调控作用 [1 ] 。几乎所有正常组织细胞都表达间隙连接蛋白。研究表明 ,多种恶性肿瘤的发生及其恶性程度与间隙连接蛋白表达下调或缺失密切相关 [2 ]。其中间隙连接蛋白 4 3与恶性脑胶质瘤关系的研究较为深入。现就 Cx4 3的生物学特征、在恶性脑胶质瘤中的表达…     

间隙连接蛋白Cx43在妇产科领域的研究进展

间隙连接(gap junction,GJ)是细胞间连接方式的一种,由间隙连接蛋白(connexin,Cx)所构成.相邻细胞间通过间隙连接所介导的细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular conmunication,GJIC)进行着信息和能量物质的交换,参与细胞间物质交换的代谢偶联和电信号传递的电耦联,对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用.     

间隙连接蛋白Cx43在卵巢肿瘤中的初步研究

目的 探讨间隙连接蛋白Cx43（Connexin43）在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义。方法 应用SP免疫组织化学法检测Cx43在10例正常卵巢组织及38例卵巢浆液性肿瘤（其中浆液性囊肿腺瘤8例，交界性浆液性囊腺瘤6例，不同分化程度的浆液性囊腺部24例）中的表达，并采用计算机图像分析系统对Cx43的表达进行定量分析。结果 在卵巢表面上皮细胞中及肿瘤细胞中，Cx43蛋白定位于细胞膜及胞质中，与正常卵巢上皮相比，浆液性囊腺瘤中的Cx43无明显改变（P＞0.05）；交界性浆液性囊腺瘤中Cx43有明显下降（P＜0.05）；浆液性囊腺癌中Cx43表达显著降低（P＜0.01），而且随囊腺癌分化程度的下降，Cx43表达也显著降低（P＜0.01）。结论 卵巢良性肿瘤发生与Cx43无关，Cx43表达下降可能是卵巢癌发生发展的重要环节。     

间隙连接蛋白43在前列腺癌中的表达和临床意义

目的探讨间隙连接蛋白43（Cx-43）在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌的发生、发展、转移和预后的关系。方法应用免疫组织化学方法检测76例前列腺癌标本、20例前列腺增生标本中Cx-43的表达情况,用统计学方法分析其与Gleason分级、年龄、临床分期、转移和复发的相关性。结果 Cx-43阳性染色主要定位在细胞膜和细胞质上,Cx-43在前列腺癌中的阳性表达率明显低于前列腺增生（P〈0.01）,在不同年龄的前列腺癌中,其阳性表达率比较结果无统计学意义（P〉0.05）,随着Gleason分级和临床分期的增高,Cx-43阳性率明显降低（P〈0.05）,并且在2年内发生转移患者和进入雄激素非依赖期患者中Cx-43阳性率极低。结论 Cx-43表达下调与前列腺癌的发生、发展和预后密切相关,其对前列腺癌的发生和转移有抑制作用,可作为反应前列腺癌生物学行为和判定前列腺癌预后的生物学标记。     

旁观者效应在HSV1—TK／GCV杀灭肺癌细胞A549中的作用

目的 研究旁观者效应在ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭肿瘤细胞中的作用。方法 转ＴＫ基因肺癌细胞Ａ５４９－ＴＫ与亲代细胞Ａ５４９分别以不同比例、高低密度混合培养,加５０μｍｏｌ／Ｌ ＧＣＶ作用５ｄ,ＭＴＴ法测活。结果 当细胞以高密度接种（１０＾４／孔）,ＴＫ＾＋细胞占２０％就能观察到较对照细胞出现明显的生长抑制（Ｐ〈０．０５）,而细胞以低密度接种（１０＾３／孔）,ＴＫ＾＋细胞占５０％出现较对照细胞明显地生长抑制（Ｐ〈０．０５）。结论 旁观者效应在ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭瘤中起重要作用,且这一效应与细胞间密切接触有关。     

Cx43蛋白在宫颈癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

探讨细胞间隙连接蛋白Ｃｘ４３在人子宫吕细胞系ＨｅＬａ中表达,及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法应用流式细胞仪以及ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ划痕记荧光舆技术,研究维甲酸作用对ＨｅＬａ细胞Ｃｘ４３蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用。     

P-Cx43在人胶质瘤细胞中的表达及其与肿瘤细胞增殖相关性研究

目的：探讨磷酸化缝隙连接蛋白43（P‐Cx43）在人脑胶质瘤细胞中的表达水平及其与肿瘤细胞增殖的相关性。方法该科2013年6月至2014年6月手术切除内减压正常脑组织10例作为对照组,同时间段切除人脑胶质瘤标本63例为试验组。应用HE染色、免疫组化法确定胶质瘤性质等级,通过Ki‐67的染色反映肿瘤细胞增殖情况。采用蛋白质印迹法（Westernblot）技术检测P‐Cx43的表达。结果研究发现,在正常脑组织中,P‐Cx43的表达较WHOⅠ级胶质瘤中表达略低,但二者差异无统计学意义（P＝0．140）,其余各组间表达差异有统计学意义（P＜0．05）。在各组之间P‐Cx43表达差异有统计学意义（P＜0．01）,呈现逐渐增加的趋势。结论P‐Cx43与肿瘤细胞活性和胶质瘤恶性进展密切相关。     

Relationship between the expression of connexin43 and bystander effect of suicide gene therapy in ovarian cancer

heHSV TKbystandereffecthasbeendefinedtodescribetheGCV mediateddeathofHSV TKex pressingcellsandadjacentHSV TKnegativecells .Thiseffectisconsideredaprerequisiteforthethera peuticefficacyofHSV TK /GCVtherapyowingtothecurrentlowefficiencyofdeliveryvectorstota…     

间隙连接蛋白connexin43基因在真核细胞中的表达

目的：构建携带间隙连接蛋白connexin43 cDNA的真核表达载体,建立connexin43蛋白高表达细胞株。方法：connexin43 cDNA在大肠杆菌中扩增后连入真核表达载体pEN4,转染中国仓鼠卵巢（CHO）细胞,用甲氨喋呤（MTX）筛选得到connexin43基因高表达细胞。结果：酶切电泳结果显示载体pED4-Cx43按设计构建。经MTX筛选得到不同抗性的CHO细胞,免疫组织化学方法显示有connexin43蛋白的表达,但表达量有限。细胞间染料传递实验证实不同MTX抗性的CHO细胞间传递小相对分子质量物质的能力有差异。结论：利用载体pED4可以使connexin43基因在真核细胞内表达。     

间隙连接基因Cx32在肝细胞癌中的表达意义

目的：探讨肝细胞癌（HCC）、癌旁组织及正常肝组织中细胞间隙连接Cx32mRNA与Cx32蛋白的表达及其在HCC发生中的意义和机制。方法：应用Western blot和RT-PCR分别检测Cx32蛋白和Cx32mRNA在26例HCC组织、22例癌旁组织和9例正常肝组织中的表达。结果：Cx32蛋白在HCC中的表达明显低于正常肝组织和癌旁肝组织（P〈0.01）;Cx32mRNA在HCC、癌旁肝组织和正常肝组织均有一定水平,但三者之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：Cx32蛋白在肝癌中的表达下调可能是肝癌发生的重要环节,Cx32蛋白的减少与该基因在翻译或蛋白质的加工修饰过程中调控异常有关。     

不稳定逼尿肌Cx43基因表达及其与逼尿肌细胞间缝隙连接通讯功能的关系研究

目的研究连接蛋白Cx43基因在体外培养不稳定逼尿肌细胞中的表达及不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯(gap junction intercelluar communication,GJIC)功能的变化,初步探讨二者与逼尿肌不稳定(destrusor instability,DI)的关系.方法健康雌性Wistar大鼠40只,分为DI组和正常组.RT-PCR及Western blot法检测各组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白表达变化,划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)检测各组逼尿肌细胞间GJIC功能变化.结果RT-PCR及Western blot检测结果显示DI组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白含量明显高于正常组(P＜0.01),SLDT结果表明DI组逼尿肌细胞间GJIC明显强于正常组(P＜0.01).结论体外培养不稳定逼尿肌细胞中Cx43基因表达增加,细胞间GJIC增强,二者可能与DI的发生有密切关系.     

CON43蛋白及mRNA在子宫内膜异位症中表达及意义

目的:探讨间隙连接蛋白CON43mRNA及蛋白在子宫内膜异位症中的表达及意义.方法:对20例子宫内膜异位症内膜用免疫组化法检测CON43蛋白的表达,用RT-PCR检测其mRNA表达,并与21例其他良性疾病子宫的内膜进行比较.结果:CON43蛋白主要在内膜腺上皮细胞浆中表达,内异症组中CON43蛋白表达较对照组显著降低;且内异症组中CON43mRNA较对照组显著降低.结论:子宫内膜异位症中间隙连接蛋白CON43在mRNA水平和蛋白水平较对照组显著降低,可能是导致内膜上皮细胞间的物质和信号传递减低或缺失,内膜细胞在它处游走、粘附的重要原因.     

全反式维甲酸对肝癌细胞连接蛋白基因表达及细胞间隙连接通讯功能的影响

目的 观察肝癌细胞株SMMC-7721和BEL-7404经全反式维甲酸(ATRA)诱导前后CX26、CX32、CX43基因在转录水平的改变以及对细胞间隙连接功能的影响。方法 分别用常规培养基和含ATRA浓度为10～mol／L的培养基培养SMMC-7721和BEL-7404两种肝癌细胞株细胞,于药物诱导细胞24、48、72h时,收集各组细胞并提取总mRNA,RT-PCR法检测CX26、CX32、CX43基因表达的情况。通过染料传输实验,观察细胞间隙连接通讯功能的变化。结果 SMMC-7721细胞和BEL-7404细胞在ATRA处理前没有CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达,但均有CX43 mRNA的表达。经ATRA处理后出现CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达。经ATRA处理后SMMC-7721细胞间隙连接通讯功能增强,而且随ATRA作用时间延长,细胞间隙连接通讯功能增强越明显。BEL-7404细胞经ATRA处理24、48、72h后细胞间隙连接通讯功能没有明显的改变。结论 全反式维甲酸能够在转录水平上调CX26、CX32基因在肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404中的表达。肝癌细胞SMMC-7721在CX26、CX32基因转录水平上调的同时伴有细胞间隙连接通讯功能的增强。肝癌细胞BEL-7404在CX26、CX32基因转录水平上调的同时不伴有细胞间隙连接通讯功能的增强。这说明两种细胞的间隙连接通讯功能调节机制不同。     

神经胶质瘤基因治疗中旁观者效应的动物试验

目的：探讨单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）Ｉ型胸苷激酶（ＴＫ）基因逆转录病毒载体生长细胞（ｐＬＴＫｃＳＮ／ＶＰＣ）和更昔洛韦（ＧＣＶ）系统杀伤大鼠脑内神经胶质瘤细胞的旁观者效应。方法：用Ｃ６，Ｃ６ＸＳＮ，Ｃ６ＴＫ及不同比例的ＴＫ（＋）和ＴＫ（－）混合细胞接种于大鼠右侧额叶脑内，５ｄ后动物腹腔内注射ＧＣＶ溶液，剂量为１５ｍｇ／ｋｇ，每日２次，共１０ｄ。细胞接种后３周，所有动物处死，测量肿瘤大小，计算各组动物的