CVB—IgM抗体测定在诊断儿童病毒性心肌炎中的价值

以柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）感染的组织细胞为抗原，用间接免疫酶标法测定１０５例病毒怀心肌炎（ＶＭＣ）患儿血清ＣＶＢ的ＩｇＭ抗体，与５９例其他病患儿（ＣＯＤ）和６７名健康儿童（ＨＣ）的结果比较，发现：ＶＭＣ组ＩｇＭ的几何平均滴度（ＧＭＴ），女性高于男性，（Ｐ〈０．０５）；且男女高于ＨＣ组（Ｐ〈０．０１）。与ＣＯＤ相比，女性高于ＣＯＤ组，而男性无统计学意义，男女合并，如以滴度１：１０ｇＭ诊断儿童ＶＭＣ的     

柯萨奇B组病毒3型VP1基因疫苗免疫效果的研究

目的 为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。 方法 以带有ＣＶＢ３Ｐ１、Ｐ２区核酸序列的ｐＧＥＭ质粒为模板，用ＰＣＲ方法克隆ＣＶＢ３ＶＰ１基因ｃＤＮＡ，插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中的ＨｉｎｄⅢ和ＸｂａＩ位点之间，构建成重组质粒。经大量扩增纯化后，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３次，用ＣＶＢ３毒株攻击小鼠，取血及脾细胞检测其免疫效果。 结果 小鼠经３次免疫后，虽未测出明显免疫应答指标，但诱导了Ｔ     

小儿CVB呼吸道感染时心肌酶学特征

柯萨奇Ｂ组病毒（ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ,ＣＶＢ）在病毒性心肌炎、心肌病中较受重视,近年来ＣＶＢ引起呼吸道感染国内外报道逐渐增多［１］。本研究系统地观察ＣＶＢ呼吸道感染时心肌酶学的特征,进一步探讨ＣＶＢ呼吸道感染与心肌损害的内在联系,为临床防治病毒性心肌炎提供依据。１　材料和方法１．１　临床资料　连续检测１９９５年８月至１９９７年５月呼吸道感染１２７例患儿的血清ＣＶＢ,结果ＣＶＢ抗原（ＣＶＢＡｇ）和（或）ＣＶＢＩｇＭ阳性９４例。根据ＣＶＢＡｇ和ＣＶＢＩｇＭ的阳性与否分成４组：Ａ组,…     

新生鼠呼吸道感染CVB3致气道炎症的病理学观察

目的：观察病毒感染对气道炎症、肺炎形态学的影响以及持续的气道反应性增高,探讨病毒感染与呼喘的关系。方法：建立新生儿大鼠病毒感染模型,出生5d新生鼠超声雾化吸入柯萨奇病毒B3（CVB3）,接种后10d取血查CVB3－IgM;接种后10d,30d分别观察湿肺质量与鼠体质量比值（LW／BW）、气道肺病理学改变。结果：病毒组新生鼠血清中CVB3－IgM的D值均在对照组-/x 2s以上接种后10dLW/BW比值病毒组明显高于对照组（P＜0．01）。病理学检查：急性期炎症改变显;接种后30d仍有持续的形态学及细胞学改变。结论：新生鼠吸入CVB3模型成立,并有持续的气道炎症及肺形态学改变。     

柯萨奇B组病毒3型VPI基因疫苗免疫效果的研究

目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板,用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA,插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,构建成重组质粒。经大量扩增纯化后,肌肉注射免疫BALB／c小鼠3次,用CVB3毒株攻击小鼠,取血及脾细胞检测其免疫效果。结果小鼠经3次免疫后,虽未测出明显免疫应答指标,但诱导了T、B细胞的免疫记忆反应,免疫组鼠在CVB3毒株攻击后,迅速诱导产生了强烈的二次免疫应答。结论CVB3VP1基因疫苗对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。     

CVB3感染对Hela细胞凋亡的影响

目的:观察CVB3感染对Hela细胞形态及凋亡变化的影响。方法:以CVB3感染Hela细胞建立病毒性感染细胞模型,观察细胞形态学变化,并以FITC-Annexin V联合PI双染色定量检测凋亡细胞。结果:CVB3感染Hela细胞后,可引起细胞病变效应;CVB3感染Hela细胞后,在一定时间段内凋亡程度随时间延长而增高。病毒组各时间点Hela细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论:CVB3感染Hela细胞后可使Hela细胞发生凋亡,并随着病毒感染时间的延长,细胞凋亡增多。     

小儿呼吸道疾病CVB、CMV和EBV感染状态的研究

目的：探讨柯萨奇病毒B组（CVB）、巨细胞病毒（CMV）、EB病毒（EBV）在小儿呼吸道感染性疾病中的感染状态及其检测的临床意义。方法：290例患儿,男158例,女132例,年龄6个月－12岁。以ELISA法检测CVB抗原（CVB－Ag) IgM抗体（CVB－IgM),CMV-IgM,EBV-IgM。结果（1）病毒感染率,上呼吸道感染（上感）、支气管炎、肺炎CVB感染率均明显高于同期住院的非感染组（P＜0．01）;肺炎组CMV阳性率高于上感和非感染组（P＜0．05）。各组CVB感染明显高于CMV和EBV的感染率（P＜0．01）。（2）3种病毒交叉感染率;上感、支气管炎和肺炎存在交叉病毒阳性情况,以CVB合并其他病毒感染多见。肺炎患儿交叉病毒感染率高于上感（P＜0．05）。（3）肺炎病毒感染状态与临床病程的关系。单纯CVB感染性肺炎的病程较全部志物阴性的肺炎患儿长（P＜0．01）,但较合并多种标志物阳性的肺炎短（P＜0．01）。多种病毒阳性的肺炎,其年龄相对较小,发热时间和病程均较单纯CXVB感染的肺炎长,结论：CVB感染在小儿呼吸道感染性疾病中最常见。要注意多种病毒阳性的肺炎。     

病毒性心肌炎细胞感染模型的建立

目的 建立病毒性心肌炎细胞感染模型。方法 以柯萨奇Ｂ３ｍ病毒感染新生ＳＤ大鼠的培养心肌细胞,观察感染后细胞病变、搏动情况及超微结构的变化,检测培养液中心肌酶的改变,测定ＤＮＡ含量。结果 培养的ＳＤ大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇Ｂ３ｍ病毒后,逐步出现细胞病变,细胞停止搏动,电镜下可国胞线粒体肿胀,肌原纤维紊乱,Ｚ线模糊,髓质体增多,细胞周期分析显示细胞受阻于Ｇ１期。结论 该模型可作为体外研究病毒性心肌炎     

LacZ基因在体内外骨骼肌中的表达

采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导基因转移技术，将含有大肠杆菌β－半乳糖苷酶的结构基因（ＬａｃＺ基因）及Ｒｏｕｓ肉瘤病毒启动子的质粒（ｐＲＳＶ－ＬａｃＺ）导入体外培养的大鼠原代骨骼肌内；另外，分别将具有ＲＳＶ启动子和巨细胞病毒ＣＭＶ启动子的ＬａｃＺ基因直接注射到活体小鼠肌肉组织内。经转染的体外培养骨胳肌细胞和取自活体的肌肉组织切片行Ｘ－ｇａｌ组织化学检测以判断ＬａｃＺ基因的表达情况。实验结果证明，用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的骨胳肌基因转染率约为１０％～２０％。直接肌肉注射含有不同启动子的ＬａｃＺ基因后，肌细胞内均有该基因表达。结果表明，无论在体内或体外，骨骼肌细胞均能被外源性基因所转染并能表达该报告基因。因此，有望使用经遗传工程改造的骨胳肌细胞作为体细胞基因治疗的有效运载细胞。     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导抗体的产生

乙型肝炎病毒(HBV) 基因疫苗可打破人群对HBV 表面抗原(HBsAg) 疫苗免疫无应答或低应答而产生保护性抗体,并有可能成为治疗HBV 持续性感染的特异性基因治疗剂。我们用构建的MS2 - preS表达质粒pMIP、IL- 2 - preS原核表达质粒pIIP、IL- 2- preS真核表达质粒pCWIIP分别经小鼠尾部皮下接种。实验结果显示3 种质粒均能诱导小鼠产生抗- preS抗体,且pIIP与pCWIIP产生抗体量高于pMIP(SAS统计分析,P< 0 .01) ,这说明IL- 2 - preS基因疫苗在体内可能有多种生物学功能,同时产生协同作用。pCWIIP产生抗体量略高于pIIP(SAS统计分析,p > 0.05)     

人骨髓间充质干细胞向骨骼肌定向分化的研究

目的 研究人骨髓间充质干细胞在裸鼠损伤腿部向骨骼肌定向分化。方法 在裸鼠腿部注入无水酒精造成肌肉损伤，取培养人骨髓间充质干细胞用荧光染料Dil标记后注入损伤处，术后6d及12d取损伤部肌肉进行形态观察和免疫荧光标记。结果 在术后6d可见Dil标记细胞向骨骼肌分化，Myoglobin阳性表达。术后12d后可见新生骨骼肌出现典型横纹，细胞核MyoD1阳性表达。结论 在裸鼠损伤肌肉的微环境中，人骨髓间充质干细胞可向骨骼肌定向分化，并伴有Myoglobin及MyoD1阳性表达。     

用精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

目的：探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性。方法：构建乙肝病毒X基因表达载体pcDNA3-X;应用微量注射针将脂质体包裹的pcDNA3-X表达载体直接注入C57BL／6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内，于第一次注射后6周，与雌鼠交配，用PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源DNA和肝组织中表达的pX蛋白。结果：测序结果与文献报道一致，并且X基因在Hela细胞中表达；共产仔鼠16只，其中1只为阳性仔鼠，阳性率为6．25％。结论：初步证明用精原干细胞介导法制备X基因转基因小鼠是可行的。     

乙肝病毒X基因对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X基因(hepatitis B virus,HBX)对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响.方法 采用脂质体转染法将HBX真核表达载体pcDNA3.1-X转人人肝癌细胞HepG2中,建立表达HBX的HepG2/HBX细胞模型;以转染空载体pcDNA3.1的HepG2/pcDNA3.1细胞为对照,于转染后24、48、72、96 h收集细胞标本,行流式细胞术分析肝细胞凋亡率变化情况,RT-PCR、Western blot分别检测肝癌细胞内HBX和凋亡相关基因Fas、FasL表达以及JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平情况.结果 转染24 h后HepG2/HBX细胞中即检测出HBX表达,且其表达量随时间延长而逐渐增高(P＜0.05);对照组细胞中各时间点均无HBX的表达.转染后各时间点,HepG2/HBX细胞与对照组细胞相比,细胞凋亡率均升高(P＜0.05),Fas、FasL表达量和JNK、c-Jan蛋白磷酸化水平亦均增高(P＜0.05);且HBX mRNA表达量与细胞凋亡率、Fas和FasL表达量以及JNK、c-Jun的磷酸化水平均呈正相关(P＜0.05).结论 HBx可通过上调JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平而促进FasL蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡.     

一株引起无菌性脑膜脑炎柯萨奇B组3型病毒的分离和VP1基因分析

目的对一株从无菌性脑膜脑炎患者中分离到的柯萨奇B组3型病毒(coxsackie virus B3,CVB3)分离株KMA103-09进行VP1区的基因特征分析。方法采用Hep-2、RD细胞对患者粪便标本进行病毒分离,肠道病毒组合血清进行鉴别,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒目的片段,测序后进行VP1基因分析,用Mega4.1等软件分析处理。结果肠道病毒组合血清鉴别为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),从病毒性脑膜脑炎患者粪便标本中,分离到CVB3,其VP1区的核苷酸长度为849bp,未发现核苷酸插入与丢失。与山东04433/SD/CHN/2004/CB3株、山东05280/SD/CHN/2005/CB3株及山东YZ127/SD/CHN/2005/CB3株氨基酸同源,与其余国内分离株同源性高于为99.29%,与国外毒株的同源性为95.41%~96.47%。在进化树上与AM06HZ/SD/CHN/2006/CB3株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组3型(Cox.B3),分离株(KMA103-09)VP1区变异较小。     

一株柯萨奇病毒B组5 型(Cox.B5) 病毒的分离及VP1基因分析

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Mega 4.0等软件分析处理。结果从无菌性脑膜炎患者粪便标本中,分离到CVB5,其VP1区的核苷酸长度均为831bp,未发现核苷酸插入与丢失。与浙江COXB5/ZHEJIANG/12/02(CFS)株、山东02336/SD/CHN/2002/CB5株及浙江COXB5/ZHEJIANG/13/02株氨基酸同源性最高为98.19%,与国外毒株的同源性为95.67%～97.83%。在进化树上与YZ081/SD/CHN/2005/CB5株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组5型(CVB5),分离株(KMA193-09)VP1区变异较小。     

血清类型对大鼠骨骼肌干细胞增殖的影响

目的：探讨不同血清类型对成年大鼠骨骼肌干细胞增殖的影响。方法：在体外干细胞培养中，A组加入10％胎牛血清，B组加入10％小牛血清，C组加入10％马血清。48h后进行免疫组化染色和MTT微量比色法检测。结果：A组细胞增殖迅速，B组细胞增殖较慢，C组细胞增殖最差。结论：血清类型的差异对骨骼肌干细胞的增殖有很大影响。     

B7-1基因转染对小鼠前胃癌细胞增殖活性的影响

目的 观察B7—1基因转染对小鼠前胃癌细胞(MFC)增殖活性的影响。方法 通过脂质体介导将B7—1基因转染MFC细胞，G418筛选阳性克隆后，用MTT法和流式细胞仪(FCM)分别测定转染然细胞增殖活性的变化，并以空载体pcDNA3转染MFC细胞作为对照。结果 转染B7—1基因的MFC细胞增殖活性受到抑制。结论 转染B7—1基因的MFC细胞增殖活性受到抑制，提示B7—1基因对MFC有免疫调节作用。     

水飞蓟宾对培养心肌细胞感染CoxSackie B5病毒的保护作用

本文介绍用微孔培养板取代培养瓶培养新生大鼠心肌细胞,并用400 TCI_(50) 0.05 ml/孔CoxsackieB_5病毒感染心肌细胞.在感染后1,6、24及36h分别加入水飞蓟宾,观察到用水飞蓟宾后培养液中LDH、GOT均低于病毒对照组,感染后DNA合成率明显高于病毒对照组,以及96 h受感染细胞培养液中病毒滴度(Lg 3.95 TCID_(50))明显低于病毒对照组(Lg 6.95 TCID_(50)).本实验结果提示水飞蓟宾对Coxsackie B_5病毒感染培养的心肌细胞有明显保护作用,尤其是在感染后1～6 h给药,效果更好。