肺癌组织p53和K—ras基因突变及其表达产物检测的意义

目的：研究肺癌组织中ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变、蛋白表达,以及二者的关系．方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣ客免疫组织化学方法分别检测肺癌组织中的ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变和蛋白表达．结果：肺癌组织中检测到ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因的空变分别为５３％和１％,肺癌组织中检测到ｐ５３蛋白和ｐ＾ｒａｓ２１蛋白的积聚分别为５８％和１９％．结论：ｐ５３和Ｋ－ｒａｓ基因突变与肺癌发生关系密切,其基因突变与蛋白的积聚之间存在     

肺癌MDM2蛋白表达与p53基因突变的关系

目的：研究肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与ｐ５３突变之间的关系。方法：用免疫组化检测１２５例肺癌ｐ５３和ＭＤＭ２蛋白表达，以聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）方法检测ｐ５３基因第５～８外显子的突变。结果：ＰＣＲＳＳＣＰ检测阳性的５２例肺癌ＭＤＭ２阳性率为１９．２％；而阴性的７３例肺癌ＭＤＭ２蛋白阳性率为３５．６％。统计学检验显示肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与ｐ５３突变之间呈负相关（χ２＝３．９８，Ｐ＜０．０５）；ＭＤＭ２蛋白阳性与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、临床分期和ｐ５３蛋白表达无显著相关性。结论：ＭＤＭ２过度表达可能在ｐ５３基因没有突变肺癌的发生过程中起重要作用     

用PCR—SSCP方法探讨ras基因,p53基因突变与喉癌的关系

目的：研究ｒａｓ基因、ｐ５３基因突变与喉鳞状细胞癌发病的关系。方法：应用多聚酶链反应－单链构像多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析４０例喉鳞状细胞癌Ｈ－ｒａｓ,Ｋ－ｒａｓ,和Ｎ－ｒａｓ基因的第１２密码子,ｐ５３基因第５,７外显子中点突变的情况。结果：Ｈ－ｒａｓ基因突变９例,突变率为２２．５％（９／４０）;Ｋ－ｒａｓ基因突变８例,突变率为２０％（８／４０）,Ｎ－ｒａｓ基因突变５例,突变率为１２．５     

85例非小细胞肺癌中p53基因异常的预后价值

目的：探讨ｐ５３蛋白表达和基因突变在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的预后价值。方法：利用免疫组化方法检测８５例ＮＳＣＬＣ的ｐ５３蛋白表达，聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测３１例肺腺癌ｐ５３基因５、６、７、８外显子突变，研究结果进行单因素生存分析。结果：本组ＮＳＣＬＣ病人的平均年龄为５５．６±８．４岁（中位数５５岁），随访时间的中位数为４７个月，３年、５年总体生存率分别为６６％和６１％。ｐ５３蛋白表达与预后无关（χ２＝１．００，Ｐ＝０．８），而ｐ５３基因突变组病人的生存率显著低于无ｐ５３基因突变组（χ２＝４．８１，Ｐ＝０．０３）。同时，ｐ５３蛋白表达与ＰＣＲ－ＳＣＰ检测的ｐ５３基因突变的一致率仅为５２％。结论：在ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达和基因突变可能有不同的预后意义，ｐ５３基因突变可作为肺腺癌的辅助预后指标。     

Ha—ras,p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因，ｐ５３基因变异，并结合临床分期，病理分级等参数进行了综合分析，结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因，ｐ５３基因变异率分别为３６％，３０．８％两者均显著高于正常对照组（Ｐ〈０．０５），且与分级分期呈正相关，复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变，提示Ｈａ－ｒａ     

胃粘膜肠化生组织中p53、APC、K-ras基因突变的研究

目的：探讨ｐ５３,ＡＰＣ及Ｋ－ｒａｓ基因突变在不同类型肠化生癌变中的作用。方法;用ＰＣＲ－ＳＳＣ冢ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术检测了４７例肠化生组织中ｐ５３基因５－８外显子及ＡＰＣ基因１５－６外显子,Ｋ－ｒａｓ基因第１２位点估变。结果：４７例肠化生组织中ｐ５３突变１４例,占２９．８％,ＡＰＣ及Ｋ－ｒａｓ基因突变各３例,分别占６．８％。肠化生中Ⅰ,Ⅱ型肠化３３例,Ⅲ型肠化１４例,Ⅲ型肠化中ｐ５３突变率为５７     

Ha-ras、p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异，并结合临床分期、病理分级等参数进行了综合分析。结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异率分别为３６％、３０．８％，两者均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；且与分级分期呈正相关。复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变。提示Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异及相互作用在很大程度上参与了膀胱癌的发生及演变，并与其生物学行为密切相关，有望成为判断肿瘤恶性程度、自然病程及预后的评估指标     

单链构象多态性分析K—ras和p16基因突变

目的：研究大鼠癌组织－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变情况。方法;运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术分析肺癌组织Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变。结果：未发现正常大鼠组织中Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变,在肿瘤组织中Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６均２例突变发生。结论：Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变与肺癌发生存在一定的相关性。     

非小细胞肺癌ras—p21蛋白表达与细胞DNA倍体的关系

目的：分析非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达与细胞ＤＮＡ含量和增殖活性的关系。方法：用ＡＢＣ免疫组织化学方法研究ｒａｓ－ｐ２１蛋白在３０例ＮＳＣＬＣ中的表达，以超过２０％的癌细胞着色为阳性。用流式细胞术检测细胞ＤＮＡ含量并计算增殖指数。结果：２３例异倍体和７例二倍体ＮＳＣＬＣｒａｓ－ｐ２１蛋白表达的阳性率无明显差别（６５．２％对８５．７％，Ｐ＝０．３０）。２１例ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达阳性和９例阴性的ＮＳＣＬＣ，其增殖指数无明显差别，［（２４．５５±５．８７）％对（２３．３２±４．６８）％，Ｐ＝０．５９］。结论：ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达与ＮＳＣＬＣ细胞ＤＮＡ含量和增殖活性无关，而与细胞的终末分化有关。     

46例髓母细胞瘤的免疫组化研究

目的：了解髓母细胞瘤发生、分化及其病理生物学行为,方法：４６ 例手术切除髓母细胞瘤组织用免疫组织化学方法对胶质酸性蛋白（ Ｇ Ｆ Ａ Ｐ）、中间丝结蛋白（ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ）、神经纤维（ Ｎ Ｆ）、增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ）、抑癌基因ｐ５３ 及 Ｓ１００ 蛋白进行检测。结果： Ｇ Ｆ Ａ Ｐ、ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ、 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ、 Ｓ１００ 蛋白阳性率分别为 ７１．１１％ 、４３．４４％ 、９２．００％ 、５２．１７％ ,阳性指数分别为４６．２５‰、１７．００‰、８７５．４０‰、８．４２‰。 Ｎ Ｆ表达极弱,而ｐ５３ 几乎不表达。结论：髓母细胞瘤的发生可能与 ｐ５３ 抑癌基因突变无明显相关;髓母细胞瘤的多数肿瘤细胞向胶质细胞方向分化;髓母细胞生长迅速以及其高度恶性与 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 检测超常表达相一致。     

p185~(neu)和p21~(ras)在肺癌组织中表达及相互关系

目的　检测 c- erb B- 2基因产物 p185 neu和 ras基因产物 p2 1ras在肺癌组织的表达情况 ,以揭示 c- erb B- 2和 ras基因在肺癌形成中的作用及其相互关系 .方法　运用免疫组织化学 SABC法检测 5 5例原发性肺癌组织中 2种基因产物 .结果　 10例小细胞肺癌组织均无 p185 neu和 p2 1ras的阳性表达 .2 8例肺鳞癌中 p185 neu和 p2 1ras阳性表达率分别是 46 %(13/ 2 8)和 5 4% (15 / 2 8) .16例肺腺癌中 p185 neu阳性表达率为 5 6 % (9/ 16 ) ,p2 1ras阳性表达率为 6 2 % (10 / 16 ) .肺鳞癌和肺腺癌中 2种蛋白的阳性表达率均无显著性差异 (P>0 .0 5 ) .p185 neu阳性表达与淋巴结转移具有明显相关性 (r=0 .36 ,P<0 .0 5 ) ,与其他临床病理因素无关 ;p2 1ras阳性表达与淋巴结转移、肿瘤大小等临床病理因素无关 .p185 neu和 p2 1ras在肺癌组织中的表达水平呈正相关 (r=0 .5 2 ,P <0 .0 1) .结论　c- erb B- 2和 ras基因的改变与非小细胞肺癌 (NSCL C)的发生有关 ,这 2种基因在 NSCL C的形成和发展中具有协同作用 .同时 ,检测 p185 neu和 p2 1ras还有助于评估肺癌患者的预后     

Detection of K-ras and p53 mutations in bronchoscopically obtained malignant and non-malignant tissue from patients with non-small cell lung cancer

Molecular screening may increase the likelihood to identify early malignant lesions in non-small cell lung cancer. However the presence of gene mutations in non-malignant bronchial tissue has remained controversial. The present study was carried out to investigate systematically the presence of mutations of the K-ras and p53 gene in bronchial biopsies taken during routine bronchoscopy of normal as well as tumour tissues from a series of 40 patients with histologically verified non-small cell lung cancer (NSCLC). K-ras mutations were analysed with specific detection oligonucleotides, p53 mutations were examined by SSCP analysis. In all biopsies the wildtype of both K-ras and p53 could be detected. The overall frequency of mutations was 14 (35%) with 2 K-ras mutations (5%) and 12 mutations of the p53 gene (30%). In 3 cases (1 ras mutation, 2 p53 mutations) the same mutation could be shown in the tumour biopsy and in the distant normal control. In another case only the normal appearing tissue had a mutation of the p53 gene. All other mutations could be detected in the tumour tissue only. Our data confirm that K-ras mutations and p53 can be detected not only in malignant but also in non-malignant bioptic samples from patients with NSCLC. The use of molecular screening for the early detection of lung cancer may be a promising new approach.     

p53基因在肺癌患者中的突变

目的　探讨肺癌组织中p5 3基因蛋白表达和肺癌患者血白细胞p5 3基因突变及其相互关系。方法　应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3基因蛋白表达及聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测其中肺癌患者血白细胞p5 3基因突变。结果　p5 3基因蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率为 5 9% ,其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者 ( 77% )显著高于无淋巴结转移者 ( 4 5 % ,P <0 0 5 ) ,p5 3蛋白在肺癌癌旁正常肺组织及白细胞中均为阴性 ;5 1例肺癌患者中 2 8例血白细胞DNA均未见p5 3基因突变。结论　p5 3基因在肺癌患者血白细胞DNA未见突变 ,p5 3基因蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移     

检测胰液和粪便中K-ras和p53基因突变对胰腺癌早期诊断的价值

目的 通过检测胰液、粪便癌基因K－ras和抑癌基因p53的突变,探索早期诊断胰腺癌的手段。方法 1994年至2000年5月住院和门诊患者共201例,正常对照60例,通过聚合酶链反应－限制片段长度多态性（PCR－RFLP）方法检测胰液、粪便K－ras突变,PCR－SSCP方法检测p53突变。结果 胰腺癌患者胰液K－ras突变率为87．8％（36／41）,胰腺良性病变为23．5％（4／17）。粪便K－ras扩增成功率为90．0％（235／261）。胰腺癌患者粪便K－ras突变率为88．0％（66／75）,胰腺良性病变为51．1％（24／47）,正常人粪便K－ras突变率为19．6％（9／46）。胰腺癌胰液细胞p53突变率47．4％（18／38）,胰腺良性疾病为12．5％（2／16）。胰腺癌粪便p53突变率为37．1％（23／62）,慢性胰腺炎为19．1％（4／21）。结论 胰腺癌患者胰液K－ras突变的敏感性、特异性高,可以作为胰腺癌诊断的辅助手段。粪便K－ras结合p53检测可以提高敏感性,在胰腺癌筛选中有潜在的价值,联合血清CA19－9等肿瘤标记物检测有助于提高胰腺癌早期诊断率。     

应用PCR-SSCP银染法检测肺癌p53基因的突变

目的：探索并建立一套适用于临床检测的ｐ５３基因突变的分析方法，探讨肺癌发生发展与ｐ５３基因突变的关系，为临床诊断和治疗提供分子依据。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对２２例肺癌患者ｐ５３基因的第６、第７外显子进行分析。结果：全部患者组织标本经ＰＣＲ扩增，均获得特异的ｐ５３基因扩增产物，进一步对第６第７外显子应用ＳＳＣＰ进行突变分析，不同组织类型肺癌的ｐ５３基因突变率各不相同，第７外显子的突变率（２７．３％）高于第６外显子（９．１％）。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法是适于肺癌患者ｐ５３基因突变分析的简捷、快速而可靠的检测方法，通过进一步研究，将为肺癌的早期诊断、鉴别诊断和预后判断提供有价值的分子指标。     

脱落细胞癌基因检测在肺癌诊断中的意义

目的用分子生物学检测手段寻求敏感的肺癌诊断新方法.方法应用多聚合酶链反应(PCR)及聚合酶链式反应-单链构型多态(PCR-SSCP)银染技术,检测56例肺癌和36例肺部良性疾病患者肺泡灌洗液和(或)胸水细胞的p53、p16及K-ras基因的突变情况,将检测结果与组织学、脱落细胞形态学诊断结果进行对比分析.结果肺癌患者肺泡灌洗液和(或)胸水脱落细胞形态学检测敏感性为57%,阴性预计值(NPV)为60%;p53阳性表达的敏感性为68%,NPV为61%;p16阳性表达的敏感性为46%,NPV为52%;K-ras阳性表达的敏感性为36%,NPV为83%;p53、p16及K-ras阳性表达的敏感性为82%,NPV为74%;p53、p16及K-ras分子生物学和脱落细胞形态学联合检测敏感性提高至93%(P<0.05),NPV为87%(P<0.05).24例脱落细胞形态学假阴性标本中经分子生物学检测阳性16例(67%).在56例肺癌中,其中有22例同时收取肺泡灌洗液细胞和胸水细胞,结果为细胞病理学检测敏感性由57%提高到68%,细胞病理学检测加分子生物学检测敏感性由93%提高到95%.结论脱落细胞癌基因的分子生物学检测可增加脱落细胞形态学检测的敏感性,提高脱落细胞形态学的诊断价值.     

P53、P2lras蛋白和P—糖蛋白在胃癌中过表达的意义

目的研究胃癌组织p53、p21ras蛋白和P-耐药糖蛋白(P-gp)在胃癌中的表达及临床意义.方法采用免疫组化SABC法检测7例正常胃粘膜、12例慢性萎缩性胃炎、8例粘膜慢性胃炎伴肠型不典型增生和93例胃腺癌组织中p53、p21ras蛋白和P-gp的表达.结果p53、p21ras蛋白和P-gp在正常胃粘膜组、癌前病变组和胃腺癌组中的阳性率分别为0,14.3%,0;20.0%,25.0%,5.0%;55.9%,51.6%,44.1%.p53蛋白、P-gp表达均与淋巴结转移有关(P＜0.05);p21ras蛋白表达与肿瘤的浸润程度有关(P＜0.05);P-gP表达与p53和p21ras表达有显著的协同性(P＜0.05).结论p53和p21ras蛋白常并存于胃癌组织中.p53突变蛋白和P-gp过表达在胃癌淋巴结转移中起重要作用,因此早期进行p53蛋白和P-gp检测有重要的临床意义.     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细     

联合检测胃粘膜组织P53、P16、K—ras对胃癌的诊断价值

目的 :探讨胃癌组织P53、P1 6 、K ras基因的协同突变情况 ,揭示P53、P1 6 、K ras基因突变与胃癌发生的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)与单链构象多态性分析法 (SSCP)对 6 0例经病理切片诊断为胃癌组织和 2 0例正常胃粘膜组织进行P53、P1 6 、K ras基因突变分析。结果 :6 0例胃癌粘膜组织中 ,P53基因发生突变 5 3例 ,占 88 3% ;P1 6 基因发生突变 49例 ,占 81 7% ;K ras基因发生突变 5 6例 ,占 93 3% ;男女间突变率比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而 2 0例正常胃粘膜组织无P53、P1 6 、K ras基因突变发生。结论 :P53、P1 6 、K ras基因突变是胃癌中常见的分子事件 ,用PCR—SSCP法联合检测胃粘膜组织P53、P1 6 、K ras基因的突变情况将有助于诊断胃癌 ,为临床提供更为可靠的检验资料