安徽省广德县山区易感动物无形体检测结果分析

目的了解安徽省广德县鼠、狗、羊中自然感染埃立克体及无形体的状况。方法用巢式PCR扩增鼠、狗、羊血块中埃立克体属及无形体属16SrRNA5’末端片段,用嗜吞噬细胞无形体与嗜单核细胞埃立克体种特异引物扩增阳性产物做测序分析。结果在安徽省广德县捕捉的5只鼠、11只狗、10只羊,用标本血块做核酸检测,其中鼠阳性0份,狗阳性0份,羊阳性4份,阳性率40％,将属特异性引物扩增产物做测序分析。于Genbank上做比对分析,4份均与牛株无形体相同基因区最为接近,属无形体科,无形体属。结论安徽省广德县存在无形体病原,羊可能为无形体宿主,其他宿主需进一步调查研究。     

浙江省在鼠中检测到埃立克体及无形体DNA片段并测序分析

目的:了解鼠中自然感染埃立克体及无形体的状况。方法:用巢式PCR扩增鼠中埃立克体属及嗜粒细胞无形体属16S rDNA的5′末端片段,对阳性产物克隆后测序。结果:在浙江省金华市金东区捕到鼠128只。在黄毛鼠中检到阳性4份,阳性率为3.125%,并对其进行克隆后测序。与Genbank上比对分析,三份与牛埃立克体相同基因区最为接近,属无形体科,无形体属。一份与反刍动物埃立克体相同基因区最为接近,属无形体科,埃立克体属。均为国内首次报道。结论:初步认为浙江省存在埃立克体及无形体病原。黄毛鼠可能为埃立克体及无形体宿主,尚需进一步调查。     

红山嘴口岸鼠类无形体和埃立克体检测及序列分析

目的 调查阿勒泰红山嘴口岸地区鼠类携带无形体和埃立克体的情况。方法 2019年在新疆阿勒泰红山嘴口岸捕获鼠类,用巢式PCR扩增无形体和埃立克体16S rRNA基因,阳性扩增产物测序后进行序列比对分析。结果 在红山嘴口岸地区共捕获鼠类2科6属7种211只,其中长尾黄鼠181只。无形体和埃立克体的阳性率为2.84%,长尾黄鼠的阳性率为3.31%,其他鼠种未检出。经测序比对分析发现3份样本（ALT-18、ALT-58、ALT-110）与埃立克体序列相似性为100.00%,3份（ALT-136、ALT-195、ALT-272）与嗜吞噬细胞无形体序列相似性为99.64%。结论 红山嘴口岸鼠类尤其是长尾黄鼠携带埃立克体和嗜吞噬细胞无形体,提示该地区可能存在无形体和埃立克体的自然疫源地。     

金东区鼠类检出埃立克体及无形体DNA片段

目的 了解金华市金东区某地鼠类自然感染埃立克体及无形体的状况。方法 对当地监测捕获的多种鼠类取肝、脾脏器标本，用巢式PCR扩增无形体科16S rDNA的5’端片段。结果 在184只鼠中，检出阳性6只，总阳性率为3．26％；其中黄毛鼠阳性率为4．12％（4／97），社鼠阳性率为4．17％（1／24），黑线姬鼠阳性率为4．35％（1／23）。经序列比对分析，4份与牛埃立克体相应片段最为接近，属无形体科，无形体属；1份与反刍动物埃立克体相应片段区最为接近，属无形体科，埃立克体属；1份与无形科新成员Ehrlichiasp．‘Ratusswain＇最为接近。结论 在当地鼠类检出埃立克体及无形体DNA片段，提示可能存在埃立克体病自然瘦源地。     

绥芬河口岸媒介蜱携带埃立克体及无形体感染的调查

目的 调查黑龙江绥芬河口岸地区蜱携带埃立克体及无形体感染的情况。方法 采集2019年4-6月343只活蜱（全沟硬蜱251只、嗜群血蜱84只和日本血蜱8只）样本,通过巢式PCR扩增无形体属和埃立克体属16SrRNA片段并与GenBank中相应基因序列进行比对分析。结果 在全沟硬蜱中扩增到4例无形体和1例埃立克体16SrRNA片段,而在其它三种蜱类（嗜群血蜱和日本血蜱）未扩增到目的片段,扩增片段经测序、比对后确定为Anaplasma phagocytophilum和Ehrlichia chaffeensis。在251只全沟硬蜱中,无形体检出率为1.59%(4/251),埃立克体为0.40%(1/251)。结论 绥芬河口岸地区中存在无形体和埃立克体病原,全沟硬蜱可能是该地区这两种病原的主要传播媒介蜱。     

安徽地区家畜嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因检测和序列分析

目的了解安徽农村地区散养家畜自然感染嗜吞噬细胞无形体状况和基因特征。方法应用巢式PCR对怀远、明光和广德县采集的148份家畜全血样本进行嗜吞噬无形体16S rRNA基因检测,并对扩增产物测序,应用生物软件MEGA4.0进行序列分析。结果 148份家畜全血样本中检测出山羊、牛和犬嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因阳性率分别22.1%、25.0%和40.0%。26份PCR阳性扩增产物测序成功,序列分析结果表明：检出序列可归为4群,I群优势株占分析序列的66.7%,与北京、浙江和湖北等地检测序列同属一个分支。目的基因测定序列与参考序列同源性达97.0~99.0%。结论安徽调查地区农村家畜动物存在嗜吞噬细胞无形体感染,山羊是该地区嗜吞噬细胞无形体的重要宿主动物之一。     

福建部分地区动物携带埃立克体调查及16S rRNA基因序列分析

目的调查福建省部分地区动物携带埃立克体(Ehrlichia)的状况,分析16SrRNA基因特征。方法收集永春县和上杭县牛、羊和狗的全血样本,用巢式PCR扩增埃立克体16SrRNA片段,纯化测序并进行序列分析。结果永春县牛、羊和狗全血标本中埃立克体感染率分别为56.9%、38.8%和10.7%,上杭县羊全血样本中埃立克体感染率为65.3%。福建省部分地区牛、羊、狗的埃立克体16SrRNA基因序列,与相应的参考序列同源性均达98%~100%。结论福建省部分地区的动物存在埃立克体感染。     

辽吉两省东部山区野鼠中蜱媒病原立克次体感染的调查研究

目的了解东北地区辽吉两省东部山区啮齿动物的几种重要蜱媒病原体感染及分布情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光(IFA)对从辽宁省宽甸和吉林省集安林区捕获的野鼠进行病原体DNA检测和血清抗体调查。结果捕获鼠132只,黑线姬鼠为该地区优势鼠种。PCR检测鼠脾标本132份,无形体、埃立克体及新埃立克体阳性率分别为6.06%、14.39%和3.79%,埃立克体阳性率明显高于无形体和新埃立克体(χ~2=11.083 1,P=0.003 9)。IFA检测鼠血清75份,无形体及埃立克体阳性率分别为8.00%和13.33%,差异无统计学意义(χ~2=0.629 2,P=0.427 5)。鼠中存在几种蜱媒病原体的复合感染(1.52%～5.33%)。结论我国东北地区东部山区啮齿动物中3种立克次体感染普遍,埃立克体感染较严重,提示可能存在多种立克次体病的自然疫源地。     

一组长角血蜱中检出莱姆病螺旋体和斑点热群立克次体复合感染

目的 了解浙江省山区野生动物和蜱中莱姆病、斑点热、埃立克体病(无形体病)的感染情况.方法 采用巢式PCR对采集的鼠、蜱标本进行莱姆病伯氏疏螺旋体、斑点热群立克次体、埃立克体(无形体)特异性核酸片段检测分析.结果 从121份鼠标本和105组蜱标本中检出阳性结果 14份.鼠标本中检出伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段1份和埃立克体(无形体)16SrDNA 5'端片段2份.蜱标本中检出阳性11份,包括伯氏疏螺旋体5S～23S rDNA间隔区片段3份和斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因5'端片段8份.其中1组长角血蜱成虫标本为伯氏疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染,5S～23S rRNA基因间隔区和ompA基因片段均阳性,分别与伯氏疏螺旋体法雷氏基因型和马赛立克次体株等关系较近.结论 在同一组长角血蜱成虫中同时检出莱姆病疏螺旋体和斑点热群立克次体复合感染.     

福建省武夷山林区人群人粒细胞无形体血清流行病学调查

人粒细胞无形体引起的人粒细胞无形体病(humangranulocytic anaplasmosis)是发现于20世纪90年代的一种新发传染病.按最新的分类标准[1],无形体属立克次体目,无形体科,变形菌纲,α亚群,人粒细胞无形体与以前命名的马埃立克体和嗜吞噬埃立克体同属无形体科(Anaplasmataceae)无形体属(Anaplasma)中的一个种,即嗜粒细胞无形体(Anaplasma phagocytophila),其主要寄生在人粒细胞的胞质空泡内.     

北京市农村人群及家畜嗜吞噬无形体和查菲埃立克体感染状况调查

目的调查北京市农村人群及家畜新发查菲埃立克体和嗜吞噬无形体感染状况。方法按地理位置选择北京市西北(延庆)、东北(密云)及东南(通州)地区3个植被率较高的旅游县(区)。按在册户籍随机以家庭为单位,调查并采集562人及90只山羊、71头牛和2只家犬血液标本,按WHO推荐间接免疫荧光方法(mlFA)检测血清lgG抗体。动物血球提取DNA扩增无形体16SrRNA基因并测序分析。结果人群查菲埃立克体和嗜吞噬无形体抗体阳性率分别为16．5％和14．O％;山羊和牛嗜吞噬无形体抗体阳性率分别为2．3％和O;2只家犬未检测到相应抗体。山羊、牛无形16SrRNA扩增阳性率分别为48．9％和23．9％16SrRNA序列(228bp)分析显示,3类优势流行株无明显地理分布特征。结论北京市农村人群存在查菲埃立克体和嗜吞噬无形体感染．调查地区家畜存在无形体感染。     

安徽省不同地区人群和家畜蜱源立克次体病血清流行病学调查

目的了解安徽省农村地区人群和家畜蜱源立克次体病感染状况和分布特点,为科学防治蜱源立克次体病提供依据。方法 2009年4～5月在安徽省广德县、明光市和怀远县采集农村人群血清613份,家畜血清150份,使用试剂盒,采用间接免疫荧光法（IFA）检测斑点热（SGF）、人单核细胞埃立克体病（HME）和人粒细胞无形体病（HGA）抗体,并进行不同地区、年龄、性别比较。结果 613份人血清中,SGF阳性血清250份,阳性率40.78%;HME阳性血清98份,阳性率15.99%;HGA阳性血清17份,阳性率2.77%。SGF血清抗体存在年龄、性别和地区差异,HME血清抗体存在地区差异;150份家畜血清中,SGF阳性血清91份,阳性率60.67%,HME阳性血清33份,阳性率22%;HGA阳性血清4份,阳性率2.67%;家狗血清HGA阳性率显著高于羊和牛,家畜SGF和HME血清抗体存在地区差异。结论安徽省农村地区存在蜱源立克次体病自然疫源地。     

CR用于诊断人类埃立克体病方法的建立

「目的」建立一个快速、简便的检测埃立克体感染的实验方法,用于人类埃立克体病的临床诊断及分子流行病学调查。「方法」用查菲埃立克体分离株（９１ＨＥ１７）感染犬巨噬细胞（ＤＨ８２细胞）,感染４０天后收集ＤＨ８２细胞。根据查菲埃立克体１６ＳｒＲＮＡ基因序列设计引物,特生扩增查菲埃立克体ＤＮＡ。运用限制性片段长度多态性分析对ＰＣＲ扩增产物进行鉴定。「结果」扩增产物经过１．５％琼脂糖凝胶电泳和５％聚丙烯酰胺凝     

南平市啮齿动物蜱传病原体检测及复合感染研究

目的 了解南平市啮齿动物监测点中蜱传病原体的种类及复合感染情况,为蜱传疾病防制提供依据。方法 用笼夜法于2015—2020年对南平市7个监测点进行捕鼠。用PCR方法对鼠标本进行伯氏疏螺旋体、巴尔通体、新埃立克体、巴贝虫和无形体相关基因片段检测。结果 捕获331只鼠,病原体感染率：巴尔通体13.6%(45/331)、无形体4.2%(14/331)、新埃立克体3.9%(13/331)、巴贝虫2.4%(8/331)、伯氏疏螺旋体1.5%(5/331),复合感染率4.5%(15/331)。结论 南平市啮齿动物中存在巴尔通体、无形体、新埃立克体、巴贝虫和伯氏疏螺旋体感染及复合感染,该调查可为南平市蜱媒传染病的防控提供参考。     

湖北省随州市蜱携带埃立克体的核酸检测

埃立克体是一类严格细胞内寄生的革兰阴性菌,属无形体科(richettsiaceae),埃立克体属[1].主要寄生在单核细胞、巨噬细胞内,引起人或动物感染埃立克体病[2],蜱是其传播媒介[1].     

浙江省鼠形动物蜱源立克次体感染状况调查

目的了解浙江省不同类型地理环境中鼠形动物蜱源立克次体的感染状况。方法 2009—2011年在安吉县、金东区和天台县用夹夜法捕获鼠形动物,进行分类鉴定、无菌采集肝脾标本,并采用巢式PCR方法检测无形体属与埃立克体属16SrRNA以及立克次体属（包括斑疹伤寒群和斑点热群）与东方体属热休克蛋白基因groEL。结果 3个调查点共捕获鼠形动物14种851头,社鼠（30.32%）、黑线姬鼠（18.80%）和青毛鼠（11.75%）为主要优势种,其中金东区、安吉县和天台县的优势鼠种分别为社鼠（39.20%）、青毛鼠（32.05%）和黑线姬鼠（59.57%）。562份肝脾标本中检出立克次体48份,阳性检出率为8.54%;其中无形体属占3.38%,斑疹伤寒群占1.78%,恙虫病东方体属占1.78%,埃立克体属占1.07%,斑点热群占0.53%。金东区和安吉县无形体属检出率较高为4.76%和4.27%,斑点热群仅在天台县检出。社鼠的立克次体阳性检出率最高为14.97%。同一鼠形动物可存在多种立克次体混合感染。结论浙江省不同类型地理环境鼠形动物中广泛存在立克次体感染,不同地理位罝和不同鼠形动物的蜱源立克次体检出率不同。     

暂定新埃立克体属研究进展

暂定新埃立克体属(candidatus neoehrlichia)是新发现的一类蜱媒病原体,隶属立克次体目无形体科,目前主要包括新埃立克体(candidatus neoehrlichia mikurensis,CNM),浣熊新埃立克体(candidatus neoehrlichia lotoris,CNL)等。近年来研究发现,该类病原体分布广泛,潜在威胁性大。随着CNM相关报道,新埃立克体属的研究也越来越被重视。本研究主要从CNM,CNL的发现历程、病原特征、传播媒介、动物宿主、临床病例等方面对近年来的研究进行简要综述,同时对下一步的研究方向提出展望。     

中国西南横断山区小型兽类嗜吞噬细胞无形体基因的检测及序列测定

目的 了解中国西南横断山区小型兽类自然感染嗜吞噬细胞无形体的情况.方法 采集位于滇西北横断山区的高黎贡山山脉、香格里拉雪山等山地(海拔1000～4500m)林区的小型兽类脏器标本以低温保存和运输,所获标本在实验室应用聚合酶链反应(PCR)方法对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因和Msp4基因片段进行扩增测序,并将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行相似性比较.结果 共检测小型兽类5目18属35种共436只,从6属11种小型兽类中发现阳性标本32份,总阳性率为7.34%.其中,高黎贡山林区检测小型兽类标本25种301只,阳性26份,阳性率为8.64%(26/301);香格里拉雪山等林区检测小型兽类标本19种135只,阳性6份,阳性率为4.44%(6/135);阳性标本绝大部分发现于小型兽类中的啮齿类动物.序列比较分析表明:不同小型兽类间的16S rRNA基因序列相似性为99%～100%,且与吉林野鼠中检测的无形体相对应片段(GenBank:DQ449948)最相近,相似性达99%～100%.对其Msp4基因核苷酸序列进一步分析发现与GenBank中相应片段相似性为95%～97%,提示中国西南横断山区小型兽类所感染无形体株变异较大.结论 首次证实和发现中国西南横断山区6属11种小型兽类自然感染嗜吞噬细胞无形体,其中啮齿类动物可能是这一地区嗜吞噬细胞无形体的主要宿主.     

埃立克体和埃立克体病

埃立克体属(Ehrlichia)细菌属于α-变形菌纲(α-Proteobacteria)立克次体目(Rickettsiales)的无形体科(Anaplasmataceae).埃立克体在自然界中借助节肢动物媒介和脊椎动物宿主而存在,能引起人或动物埃立克体病.1925年世界首次发现引起牛羊等反刍动物水胸病(heartwater disease)的病原体为立克次体类病原体,并命名为反刍动物立克次体(Rickettsia ruminantium)^[1].1991年首次报道埃立克体能对人致病^[2].在过去的30多年中,随着PCR检测方法的完善与测序技术的发展,新的埃立克体在世界各地不断被发现,更多的国家与地区证实了埃立克体及埃立克体病的存在.随着社会生态环境的改变,人类与节肢动物及野生动物的接触增加,由新埃立克体引起的新发传染病时有报道^[3].为此本文对近年来国内外在埃立克体病原学、流行病学、致病性方面的研究进展综述如下.     

粒细胞埃立克体444-Epank基因的检测与序列分析

目的 进一步证实中国大陆粒细胞埃立克体感染的病原学证据。方法 从粒细胞埃立克体结构蛋白基因序列高变区构建特异引物，对蜱标本，动物标本，人血标本进行聚合酶链反应（PCR）检测；收集全沟硬蜱特异PCR产物，进行克隆和序列测定，与GenBank中注册的序列进行同源性比较。结果 从黑龙江省采集的全沟硬蜱（62组，310只）2组中扩增出444bp的特异DNA片段，而从内蒙古的动物脏器标本（8份）没有扩增出该片段，从内蒙古林业局人员血标本（129份）中扩增出1份该片段。对该片段的克隆和序列测定结果显示其DNA序列与美国人粒细胞埃立克体分离株（AF047897）对应位置相差23个核苷酸，同源性为94．9％，推测的氨基酸同源性为88．44％。结论 通过粒细胞埃立克林444－Epank基因的检测与分析进一步证实中国大陆存在粒细胞埃立克体的感染。