人工蛹虫草核苷类成分的超声提取工艺优化研究

目的:探讨超声提取法在人工蛹虫草核苷类物质提取中应用的可行性。方法:利用正交设计法对人工蛹虫草核苷化合物的超声提取工艺进行了优化,用高效液相色谱法测定了主要活性成分虫草素的含量。结果:人工蛹虫草核苷类成分的最佳超声提取条件为:1.0 g干燥样品中加入20 m l,室温下超声30 m in,该过程重复提取两次,合并提取液。测得虫草素的含量为0.0197%。结论:该方法具有提取时间短、成本低、不破坏活性成分等优点,具有很好的应用前景。     

冬虫夏草及人工虫草核苷类成分的TLCS研究

目的：以腺苷、尿苷、鸟苷为指标测定天然虫草与人工虫草菌丝体中核苷类有效成分的含量，并对不同虫草样品进行薄层色谱指纹图谱对比研究，探求虫草中核苷类化合物鉴别的专属性。方法：采用高效薄层色谱扫描法进行含量测定，同时建立了不同虫草样品的荧光淬灭薄层色谱指纹图谱。结果：虫草菌丝体中测得腺苷、尿苛鸟苷成分高于天然虫草。结论：该法快速简便，重现性好，能有效鉴别出虫草中核苷类成分以及评价不同电菌样品的质量。     

产自耐盐真菌Alternaria sp．M6的一个新苝醌类化合物

目的：研究耐盐真菌Alternaria sp．M6的代谢产物。方法：运用多种色谱分离手段对耐盐真菌Alternariasp．M6的发酵液及菌丝体部分进行分离纯化。并借助各种波谱学方法鉴定结构。结果：从耐盐真菌Alternariasp．M6的发酵液及菌丝体中分离得到9个代谢产物,分别鉴定为即-chloro-3,6aa,7β,9β,10-pentahydroxy-9,8,7,6a—tetrahydroperylen-4（6aH）-one（1）,alterperylenol（2）,dihydroalterperylenol（3）,腺嘌呤（4）,腺嘌呤核苷（5）,腺嘌呤脱氧核苷（6）,鸟嘌呤核苷（7）,色氨酸（8）,棕榈酸（9）。结论：化合物1为新的菲醌类化合物。     

冬虫夏草菌丝体中腺苷的提取

<正> 天然虫草和人工培养菌丝在化学成分上基本一致,除含有甾醇类、糖醇类、有机酸及氨基酸化合物以外,还含有丰富的核苷类化合物。Cunningham等早期用Dowex-1-Cl树脂从蛹虫草[Cordyceps militaris (L.) Link.]中提得虫草素。我们采用虫草菌蝙蝠     

高效液相色谱法测定人工虫草菌丝中腺苷和虫草素的含量

为定量测定蛹虫草菌丝体中腺苷和虫草素的含量，用ＹＷＧＣ_１８不锈钢柱，磷酸二氢钠氢氧化钠缓冲液（ｐＨ６.８，加１％四氢呋喃）为流动相，高效液相色谱法同时分离和测定了人工蛹虫草菌丝中腺苷和虫草素，并考察了提取方法。二组分的线性关系良好，回收率满意。     

江西虫草菌丝体化学成分研究

目的:研究江西虫草菌丝体的化学成分。方法:以深层发酵的方法制备江西虫草菌丝体;运用硅胶柱、凝胶柱、制备薄层层析等多种色谱方法进行分离纯化;利用常规理化分析以及1H-NMR、13C-NMR和MS等波谱技术鉴定其化学结构。结果:从江西虫草菌丝体的甲醇提取物中石油醚和乙酸乙酯两个萃取部位,分离得到9个化合物,分别鉴定为:尿嘧啶(Ⅰ)、腺嘌呤(Ⅱ)、腺嘌呤核糖核苷(Ⅲ)、尿嘧啶核苷(Ⅳ)、3′-甲氧基尿嘧啶核苷(Ⅴ)、丁二酸(Ⅵ)、烟酸(Ⅶ)、十八烷酸-α-单甘油酯(Ⅷ)、二十四烷酸(Ⅸ)。结论:首次对江西虫草菌丝体进行了较系统的分离纯化,从中获得9个化合物,其中化合物Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为首次从虫草属真菌中分离得到。     

人工冬虫夏草抗疲劳、降血脂作用实验研究

目的：比较冬虫夏草和人工冬虫夏草子实体、人工虫草菌丝体的抗疲劳、降血脂作用。方法：以冬虫夏草和人工虫草子实体、人工虫草菌丝体灌胃动物，测定对小鼠转棒时间、爬绳时间和负重游泳时间，观察其对小鼠抗疲劳作用；对蛋黄致高脂小鼠的降血脂作用。结果：人工虫草菌丝体2g／kg组转棒时间显著高于空白对照组（P〈0．01）及冬虫夏草组（P〈0．05），冬虫夏草和人工虫草子实体、人工虫草菌丝体4g/kg小鼠转棒时间以及各给药组小鼠爬绳时间、负重游泳时间与空白对照组比较无显著性差异。人工虫草子实体4g／kg组血清总胆固醇（TC）显著低于模型对照组（P〈0．05）。结论：人工虫草菌丝体2g/kg具有抗疲劳、协调运动的功能；4g／kg人工虫草子实体有明显降低蛋黄致高脂血清胆固醇作用。     

人工蛹虫草子实体化学成分研究

目的：研究人工蛹虫草子实体的化学成分。方法：大孔吸附树脂和硅胶色谱柱分离纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定结构。结果：分离鉴定了9个化合物，分别为:麦角甾-4，6，8(14)-四烯-3-酮(1)，柠檬甾二烯醇(2)，二十四烷酸单甘油酯(3)，麦角甾醇(4)，麦角甾醇过氧化物(5)，麦角甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇(6)，虫草素(7)，腺苷(8)，N-(2-羟乙基)腺苷(9)。结论：化合物1～3，6，9均为首次从该种真菌子实体中分离得到。     

高效液相色谱定量分析比较4种虫草药材的核苷类成分

为比较4种常见虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中核苷类成分的差异,该研究以0.5%磷酸溶液提取样本,色谱柱为Zorbax SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为0.04 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(A)和乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.8 m L·min-1,检测波长260 nm,柱温30℃,对4类药材产品进行分析。已知核苷以外标一点法进行计算,未知成分以腺苷为对照进行计算,并对测定结果进行聚类分析,同时利用指纹图谱相似度软件对不同样本进行了比较。结果显示,冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体、蝉花4种药材中的核苷类成分差异较大,聚类分析和指纹图谱分析均可有效区分冬虫夏草和其他3种虫草药材。该研究建立的核苷测定方法准确可靠,可用于虫草类产品的品质评价。     

光叶番荔枝种子的化学成分

目的：研究光叶番荔枝种子的化学成分。方法：利用色谱技术分离纯化，根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构．结果：从光叶番荔枝种子的提取物中分得4个化合物，分别为expoxyrolin B（1）、neodesacetyluvaricin（2）、annonareticin（3）、murisolin（4）。结论：4个化合物均为番荔枝内酯类化合物，都是首次从光叶番荔枝种子中分离得到。     

Effects of Cordyceps sinensis, Cordyceps militaris and their isolated compounds on ion transport in Calu-3 human airway epithelial cells

AIM OF THE STUDY: The traditional Chinese medicine Cordyceps sinensis (CS) (Clavicipitaceae) improves pulmonary function and is used to treat respiratory disease. Here, we compare the efficacy and mechanisms of action of Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris (CM) (Clavicipitaceae) in Calu-3 human airway epithelial monolayer model. MATERIAL AND METHODS: The extracts of Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris, as well as their isolated compounds, cordycepin and adenosine, stimulated ion transport in a dose-dependent manner in Calu-3 monolayers. In subsequent experiments, transport inhibitor bumetanide and carbonic anhydrase inhibitor acetazolamide were added after Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris extracts to determine their effects on Cl- and HCO3- movement. RESULTS: The results suggested that Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris extracts may affect the anion movement from the basolateral to apical compartments in the airway epithelia. CONCLUSIONS: Basolateral Na+-K+-2Cl- cotransporter and apical cAMP-dependent cystic fibrosis transmembrane conductance regulator Cl- channel are involved in the process. The results provide the first evidence for the pharmacological mechanism of Cordyceps sinensis and Cordyceps militaris on respiratory tract.     

10-membered macrolides from the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris BCC 2816

Three new 10-membered macrolides (1-3) have been isolated from the entomopathogenic fungus Cordyceps militaris BCC 2816, together with six known compounds, cepharosporolides C (4), E (5), and F (6), 2-carboxymethyl-4-(3'-hydroxybutyl)furan (7), cordycepin (8), and pyridine-2,6-dicarboxylic acid. The structures were determined by analysis of NMR data, and an X-ray analysis was performed to confirm the structure of 1. The antimalarial activity of 1-4 and 8 against Plasmodium falciparum K1 was evaluated.     

三种虫草抗氧化活性的化学发光法研究

为研究冬虫夏草、蛹虫草、蒙山虫草3种虫草的抗氧化活性，考察实验条件对结果的影响，采用化学发光法测定3种虫草清除超氧阴离子自由基的活性。结果显示，3种虫草的水提液中蛹虫草样品的抗氧化活性较高，蒙山虫草和冬虫夏草的抗氧化活性比较接近。提示：蛹虫草和蒙山虫草有着良好的应用前景，有望替代冬虫夏草应用于临床。     

Anti-inflammatory and related pharmacological activities of cultured mycelia and fruiting bodies of Cordyceps militaris

This study aimed to elucidate pharmacological activities of Cordyceps militaris. The 70% ethanolic extracts of cultured mycelia (CME) and fruiting bodies (FBE) of Cordyceps militaris were prepared. CME was able to directly scavenge the stable free radical diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), indicating its antioxidant activity. Both CME and FBE showed topical anti-inflammatory activity in the croton oil-induced ear edema in mice. CME was found to contain acute anti-inflammatory activity, which was evaluated using the carrageenin-induced edema, and also strong antinociceptive activity in writhing test. CME and FBE contain potent inhibitory activity on the chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) angiogenesis in a dose-dependent manner. Cordycepin, a metabolite of Cordyceps militaris, appeared to be at least partly responsible for its anti-inflammatory and anti-angiogenic activities. CME concentration-dependently inhibited the NO production and iNOS expression upon stimulation by lipoposaccharide in RAW 264.7, a murine macrophage cell line. In brief, we demontrate that Cordyceps militaris possesses anti-inflammatory and antinociceptive activites, and related antioxidant, anti-angiogenic, and NO production-inhibitory activities.     

工业化培育北虫草生物活性成分含量变化的研究

目的:明确工业化培育北虫草的主要生物活性成分在不同生长时期含量变化的规律.方法:采用HPLC和苯酚硫酸法,分别对不同生长时期的工业化培育的北虫草的虫草素、腺苷和虫草多糖含量的变化进行了跟踪.结果:培养周期内虫草素含量随生长期增长而不断增高,而腺苷和虫草多糖含量均在第40d达到最高值.结论:本研究结果对工业化生产,合理有...     

UPLC-Q-TOF-MS结合代谢组学分析冬虫夏草不同部位的差异性

目的:利用高分辨质谱结合代谢组学方法研究冬虫夏草不同部位化学成分差异及其与品质间的关联。方法:建立虫草类中药材化学成分数据库,采用UPLC-Q-TOF-MS对虫草子座、头及虫体3个部位及全虫样品进行数据采集,将结果导入Peak View软件,结合软件的Formula Finder,Mass Calculators,Fragment Matching功能及二级碎片裂解规律进行定性分析;将定性结果建立已知成分筛查表,并逐个提取分段样品离子强度,代入SIMCA-P软件中,进行可视化处理,构建PCA及PLS-DA数学模型。结果:冬虫夏草醇提样品中共找到了六类23个化合物,从子座、头及虫体中鉴定出11个差异性化合物,以脂肪酸及其衍生物居多,其中8个化合物为首次在冬虫夏草中发现;运用SIMCA-P11.5软件构建PCA及PLS-DA数学模型,分析结果显示子座所含成分与头及虫体有明显差异,按照对分类起作用强弱,依次为氨基酸、脂肪酸、维生素、生物碱、核苷及糖苷类。结论:该方法的建立为冬虫夏草药效学物质基础阐明及冬虫夏草品质形成机制提供了科学参考,并为冬虫夏草药材的快速鉴定、质量控制与深入地开发利用奠定了基础。     

虫草属EST-SSR标记系统的建立研究

目的:通过球孢虫草、蛹虫草EST设计EST-SSR引物,建立虫草属EST-SSR标记系统.方法:从NCBI公共数据库下载获得虫草EST,利用Sequece Seiners 1.2软件去除冗余序列并设计引物,进行PAGE电泳.结果:通过去除EST总序列中低质量的和冗余的序列后,得到全长为2 953 173 bp的4 556条无冗余球孢虫草EST.从中发掘出718个EST-SSR,分布于616条EST中,出现频率是15.8％.平均分布频率是每4 096 bp出现1个,三核苷酸重复序列有419个,是出现最多的重复类型.蛹虫草EST去冗余后得到1 363条无冗余EST,共含有1 117个EST-SSR,出现频率为81.95％,出现最多的重复类型是A核苷酸重复.根据球孢虫草EST-SSR序列,设计合成50对引物,有扩增产物的引物为34对,占总设计引物数的68％.根据蛹虫草EST-SSR,设计合成40对引物,有扩增产物的引物为39对,占总设计引物数的97.5％.基于SSR标记进行聚类分析,7种虫草无性型均能分开,且分为4支.结论:虫草属EST-SSR出现频率较高、类型较丰富、多态性潜能较高,具有较高的利用价值.球孢虫草和蛹虫草EST开发的SSR标记在虫草属有较好的转移性与通用性,可以很好的应用于虫草种间遗传关系的研究.应用虫草物种EST建立分子标记是一条简便而又有效的途径.     

活体柞蚕蛹复壮北虫草菌种初探

目的：对北虫草菌株进行复壮处理以提高菌种活力。方法：用一株人工培育的北虫草菌株P感染刚化蛹的活体柞蚕蛹,蛹体近头部长出子实体后,待子实体近成熟期时采集孢子进行有性繁殖对原菌株进行复壮。结果：复壮后菌株10-2的子实体产量和生物转化率分别是原来菌株P的1.2倍和1.5倍。结论：在表面消毒过的活体柞蚕蛹上接种液体菌株活化复壮菌种的方法是可行的。     

人工培育北虫草培养基的筛选及优化

目的：为工厂化培育北虫草提供优质液体发酵菌种,保证并提高人工培育北虫草的质量。方法：以生物转化率、虫草素和腺苷含量为指标,从碳源、氮源、C/N比、微量元素硒的影响等因素,通过正交实验确定优化培养基的组成成分。结果：优化培养基的组成成分为：土豆汁20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、蚕蛹粉0.5%、KH2P04 0.1%、MgS04·7H2O 0.05%、FeSO4·7H2O 0.002%、VB18mg·L-1,发酵初始pH7.0。结论：采用优化后的培养基,提高了北虫草子实体培育的生物转化率和子实体中的有效成分含量。