检测白血病细胞凋亡的二苯胺法

现有细胞凋亡的定量方法操作复杂且需贵重试剂或仪器。定性方法又难以精细研究细胞凋亡这一现象。我们参照 Mangan等 [1]的方法 ,建立一种以二苯胺 (DPA)法测定 DNA片段率来分析细胞凋亡的简单方法 ,并以此方法分析白血病细胞株 HL- 60受抗癌药物鬼臼乙叉甙 (Etoposide)诱导时的凋亡情况。材料和方法一、细胞HL- 60细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规RPMI 1 640培养基 (Gbico产品 )培养 ,隔天换液 ,实验选用对数生长期的细胞 ,将细胞浓度调整至 1 0 6/ml,加入以二甲基亚砜 (DMSO)溶解的鬼臼乙叉甙(Sigma产品 ) ,最终浓度分别为 …     

紫苏醇单用及与格列卫(STI571)联用对K562细胞增殖与凋亡的影响

格列卫 (STI5 71)是分子靶向治疗药物 ,其治疗慢性粒细胞白血病 (慢粒 )具有明显的疗效 ,但对慢粒急变患者疗效较差[1 ] 。紫苏醇 (perillylalcohol,POH)是一种具有癌症治疗及预防作用的单萜类物质 ,有广谱、高效、低毒的抗癌作用特点 ,研究表明POH在肿瘤中起法基尼转移酶抑制剂的作用 ,而且它可以选择性诱导bcr abl恶性转化的髓系细胞系细胞周期阻滞和凋亡 ,而对非bcr abl恶性转化的髓系细胞无此作用[2 5] 。我们将新型抗癌药物POH单用及与STI5 71联用 ,在体外研究其对K5 6 2细胞系的增殖与诱导凋亡作用 ,为bcr abl阳性慢粒急变期…     

化疗药物对体外培养OS-732人成骨肉瘤细胞凋亡及细胞周期的影响

许多报道证实,抗癌药物可诱导敏感细胞凋亡[1]。这为肿瘤包括骨肉瘤治疗的研究提供了新的靶点[2]。迄今为止,有关化学激发剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究报道,主要局限在上皮系统及激素依赖性肿瘤方面[3],而对骨肉瘤的研究未见报道。由于诱导凋亡对靶细胞具有选择性,因此,首要的问题是阐明化疗药物能否诱导骨肉瘤细胞凋亡。1　材料与方法11　主要试剂与药品Rnase,ThiazollBlue(MTT),AcridineOrange(AO),PropridiumIodide(PI)为美国sigma公司产品。阿霉素(DOX)由日本meiji公司生产,氨甲喋呤(MTX)为美国sigma公司产品。鬼臼乙叉甙(VP16)为…     

重型再生障碍性贫血患者血清诱导CD34+细胞凋亡及PML蛋白表达

近年的研究证实 ,早幼粒细胞白血病 (promyelocyticleukemia,PML)基因不仅在早幼粒细胞白血病的发病中起重要作用 ,而且与人体其它恶性肿瘤 (如肝癌 )的发病密切相关[1,2 ] ,是多种细胞凋亡途径的核心基因[3 ] 。再生障碍性贫血 (再障 )的重要发病机制之一是造血细胞凋亡增加 ,但有关再障患者细胞凋亡增加的机制尚不完全清楚。在过去的研究中 ,我们证实了再障患者血清可诱导CD3 4 + 细胞凋亡[4,5] 。本研究中我们进一步测定再障患者血清对正常人CD3 4 + 细胞凋亡及PML蛋白表达的影响 ,并同时观察半胱天冬酶 (cas pase) 3,8抑制剂对这种…     

蛋白酶体抑制剂对正常骨髓单个核细胞的影响

泛素 蛋白酶体通路是降解真核细胞内细胞因子等短寿蛋白的主要机制。蛋白酶体抑制剂可诱导人多种肿瘤细胞凋亡 ,被认为可发展为很有前途的抗肿瘤药物[1 ] ,但其对正常骨髓造血功能有无影响尚未见报道。我们首次研究蛋白酶体抑制剂Ｚ ＬＬＬ ＣＨＯ对正常骨髓单个核细胞 (ＭＮＣ)的影响 ,发现与白血病细胞的巨大差异 ,并初步探讨了其可能的分子机制。材料和方法1　药物及试剂　Ｚ ＬＬＬ ＣＨＯ由美国底特律医学中心Ｂｅｎ博士提供 ,二甲基亚砜配成 10 0ｍｍｏｌ Ｌ的贮存液 ,- 2 0℃保存 ,用时稀释。鼠抗人ｂｃｌ 2单抗 (ＳＣ 5 0 9)购于Ｓ…     

硫化砷诱导NB4细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

硫化砷(ａｒｓｅｎｉｃｓｕｌｆｉｄｅ,ＡＳ)包括三硫化二砷(Ａｓ2Ｓ3)及四硫化四砷(Ａｓ4Ｓ4)。Ａｓ2Ｓ3是雌黄的主要成分,Ａｓ4Ｓ4是雄黄的主要成分。我所近年应用硫化砷治疗急性早幼粒细胞白血病(ＡＰＬ),取得满意效果[1]。为研究ＡＳ治疗ＡＰＬ的机制,我们以ＮＢ4细胞为体外模型,探讨了ＡＳ对ＡＰＬ的作用,发现ＡＳ能够在体外诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,而二巯基丙醇能够部分抵消ＡＳ对细胞凋亡及细胞周期阻滞的诱导作用。提示ＡＳ是治疗ＡＰＬ的有效药物。材料和方法1　试剂　Ａｓ2Ｓ3购自美国Ａｃｒｏｓ公司,纯度99.99%,溶于ＲＰＭＩ…     

一种分离提取非实体瘤凋亡细胞的方法

分离提取凋亡细胞对许多研究有重要意义 ,我们参考Ｍａｒｔｉｎ等[1] 的方法 ,建立了一种简便易行的非实体瘤凋亡细胞分离提取方法。1　材料和方法1 1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规ＲＰＭＩ 16 40培养基 (Ｇｂｉｃｏ产品 )培养 ,隔天换液 ,所有用于实验的细胞均处于对数生长期。1 2　凋亡细胞诱导　调整细胞浓度至 10 6/ｍｌ,加入以二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)溶解的抗癌药物ＶＰ 16 (Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ,Ｓｉｇｍａ产品 )至所需浓度 (0、5、10、2 0、40 μｇ/ｍｌ)作用 3 5ｈ ,ＰＢＳ(ｐＨ 7 2 ,不含Ｃａ+ 、Ｍｇ2…     

P物质对白血病细胞系HL-60及L615细胞生长的抑制作用

近年已发现多种神经肽参与正常和异常细胞的增殖调节,神经多肽Ｐ物质(ＳＰ)即是其中一种,它主要分布在人的神经系统,已发现ＳＰ对小细胞肺癌、类癌瘤有促生长作用[1]。但ＳＰ对肿瘤生长的影响研究尚属起始阶段,其对肿瘤细胞生长是否有直接影响,作用方式和特点又是如何则所知甚少。为此,我们以人粒细胞白血病ＨＬ60细胞和小鼠Ｔ淋巴细胞白血病Ｌ615细胞为模型,探讨了ＳＰ对其生长的影响及其调节机制。材料和方法1　细胞系、实验动物及有关试剂　ＨＬ60、Ｌ615细胞由本所实验病理研究室提供,ＢＡＬＢｃ裸鼠购自中国医学科学院肿瘤医院,615近交…     

新型免疫抑制剂FTY720诱导HL-60和K562细胞凋亡的作用机制

FTY72 0是一种新合成的免疫抑制剂 ,在多种动物同种异体移植模型中试用 ,效果良好。最近研究证实 ,FTY72 0可诱导正常淋巴细胞[1 ] 、Jurkat细胞[2 ] 、急性白血病细胞系HL 6 0细胞凋亡 ;但是 ,对FTY72 0诱导细胞凋亡时所参与的信号传导通路的研究较少。因此 ,我们选择HL 6 0细胞和K5 6 2细胞作为观察对象 ,对在细胞外调节蛋白激酶 (ERK)通路中FTY72 0诱导白血病细胞凋亡的作用进行了探讨。材料和方法1　细胞培养　HL 6 0细胞和K5 6 2细胞系引自中国典型培养物保藏中心。采用含 10 %胎牛血清和青、链霉素的RPMI16 4 0培养基 ,在…     

STAT3磷酸化介导白血病细胞对多柔比星耐药的机制研究

白血病是常见的造血系统恶性肿瘤之一[1],白血病细胞对化疗药物产生多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是临床上导致白血病治疗失败和白血病复发的主要原因[2]。研究表明,STAT3磷酸化能通过多种途径介导肿瘤耐药[3-7]。我们此前的研究结果显示,耐药白血病细细胞(K562/AO2)STAT3磷酸化水平明显升高[8],抑制STAT3磷酸化可以降低耐药白血病细胞P-gp蛋白的表达[9]。本研究中,我们通过转染K562细胞建立耐药白血病细胞株K562/STAT3,阐明STAT3磷酸化介导白血病细胞发生耐药的可能机制。     

检测白血病细胞凋亡的二苯胺法

现有细胞凋亡的定量方法操作复杂且需贵重试剂或仪器。定性方法又难以精细研究细胞凋亡这一现象。我们参照Mangan等［1］的方法，建立一种以二苯胺(DPA)法测定DNA片段率来分析细胞凋亡的简单方法，并以此方法分析白血病细胞株HL-60受抗癌药物鬼臼乙叉甙(Etoposide)诱导时的凋亡情况。 材料和方法 一、细胞 HL-60细胞株(本院血液病研究室提供)，常规RPMI 1640培养基(Gbico产品)培养，隔天换液，实验选用对数生长期的细胞，将细胞浓度调整至106/ml，加入以二甲基亚砜(DMSO)溶解的鬼臼乙叉甙(Sigma产品)，最终浓度分别为0、5、10、20、40 μg/ml，作用3.5 h，用PBS(pH 7.2，不含Ca2＋、Mg2＋，下同)洗涤收获细胞。     

细胞色素C诱导白血病细胞株HL-60凋亡效应的分析

凋亡是具有独特的细胞形态变化并有重要生物学意义的细胞死亡方式 ,它可使有害细胞或多余细胞从生物体中被清除。目前已证实 ,在哺乳动物细胞凋亡过程中 ,位于线粒体膜内侧的细胞色素Ｃ移位到细胞质 ,从而激活某些蛋白酶 ,导致凋亡的发生[1 ] 。国内已有关于在非细胞体系中研究细胞色素Ｃ诱导细胞凋亡的报道[2 ] ,我们利用细胞色素Ｃ直接作用于髓系白血病细胞株ＨＬ 6 0 ,证实了不同浓度细胞色素Ｃ可诱发ＨＬ 6 0细胞出现增殖、凋亡、坏死三种不同效应。同时还发现细胞色素Ｃ诱导ＨＬ 6 0细胞凋亡伴有细胞浆钙离子浓度的升高。材料和方法1　…     

化疗药物诱导白血病细胞凋亡对Fas/FasL途径依赖性的研究

化疗药物除通过同各自的靶点直接作用外 ,也可以通过诱导细胞凋亡而杀伤肿瘤细胞。文献报道化疗药物诱导白血病细胞凋亡与Ｆａｓ/ＦａｓＬ途径有关[1 3 ] ,我们对此进行了研究 ,并探讨化疗药物与ＦａｓＬ联用的疗效及其机制 ,期望为白血病的治疗提供新的线索。材料和方法1　主要试剂　柔红霉素 (ＤＮＲ)、阿糖胞苷 (Ａｒａ Ｃ)、碘化丙锭(ＰＩ)购自Ｓｉｇｍａ公司 ;原位末端标记 (ＴＵＮＥＬ)试剂盒购自博士德公司 ;可溶性Ｆａｓ配体 (ｓＦａｓＬ) ,小鼠抗人Ｆａｓ单抗 (ＩｇＧ1) ,白血病细胞系ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2、Ｕ937由华中科技大学同济…     

维生素K3诱导MR2细胞凋亡及其与三氧化二砷联合作用的体外研究

近年来 ,已有研究发现 ,维生素K3(VK3)对某些实体肿瘤和白血病细胞有诱导凋亡作用[1 ] ,然而其作用机制不十分清楚。我们在证实VK3对MR2细胞具有诱导凋亡作用的同时 ,观察其与三氧化二砷 (As2 O3)的联合作用 ,并进一步探讨VK3可能的作用机制。材料和方法1　主要试剂　VK3(亚硫酸氢钠甲萘醌 )注射剂购于无锡市第七制药厂。As2 O3购于美国Sigma公司。MDA试剂盒、谷胱甘肽 (GSH)试剂盒及超氧化物歧化酶 (SOD)检测试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。VK3使用时以RPMI 16 4 0溶解稀释 ,配制成所需浓度。 1.0mol LAs2 O3经NaOH溶…     

ABT-737在消化系统肿瘤中的研究现状

WHO数据显示,在世界范围内每年死于肿瘤患者高达69HD万人,给人类生命健康带来严重威胁[1].凋亡抑制在肿瘤的发生发展中具有重要作用[2],而.ABT-737能够抑制抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2)及Bcl-XL(B-cell lymphoma-extra large)的功能,恢复凋亡通路[3],并且现有研究表明ABT-737联合其他化疗药物对多种消化系统肿瘤有协同治疗作用.     

六亚甲基二乙酰胺对人多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导分化作用

六亚甲基二乙酰胺 (ＨＭＢＡ)是一种杂合极性化合物类强效分化诱导剂 ,对小鼠及人红白血病ＭＥＬ细胞、Ｋ5 6 2细胞有很强的分化诱导作用[1 ,2 ] ,亦可诱导其它白血病 (肿瘤 )细胞成熟分化和凋亡[3 ,4] ,在大剂量时对Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ ,Ｐ170 )阳性的多药耐药 (ＭＤＲ)肿瘤细胞和Ｐ ｇｐ阴性的肿瘤细胞的增殖均有抑制作用[5] 。Ｋ5 6 2 ＡＤＭ细胞是经阿霉素诱导的ｍｄｒ1基因超表达的白血病多药耐药细胞[6] 。我们选用ＨＭＢＡ作为分化诱导剂 ,通过观察其对Ｋ5 6 2 ＡＤＭ细胞增殖活性、形态学、细胞功能、细胞周期和Ｐ ｇｐ表达的作用…     

Survivin与白血病

Survivin是新近发现的一种凋亡抑制蛋白(inhibitor apoptosis protein,IAP),含有一杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列(baculovirus IAP repeat,BIR),通过抑制半胱天冬蛋白酶(caspase)活性发挥抗凋亡作用。在白血病细胞中survivin高表达,且与预后有关。转染survivin天然反义基因、效应细胞蛋白酶受体-1(effector cell protease receptor-1,EPR-1)基因,可降低survivin在白血病细胞中的表达,以达到治疗白血病之目的。     

鸦胆子油乳诱导白血病U937细胞凋亡的实验研究

鸦胆子油乳是临床上广泛应用的抗肿瘤中药,为探讨其在白血病中的作用,我们观察了鸦胆子油乳对人白血病U937细胞的生长抑制和诱导细胞凋亡作用及相关基因的改变。材料和方法1　试剂　鸦胆子油乳,沈阳药科大学制药厂产品,每支10ml,含量为10 %。2　细胞培养　U937细胞为人单核细胞白血病细胞株,引自中国医学科学院血液学研究所,常规传代培养。实验时均用对数生长期细胞。3　MTT法检测鸦胆子油乳对U937细胞增殖的影响　实验方法根据文献[1]略加改进,设药物处理组、细胞对照组和空白对照组。每组设3个复孔,在终止培养前4h加入MTT(5mg/ml) ,置…     

淫羊藿甙诱导白血病细胞凋亡及其对癌基因表达的影响

淫羊藿甙 (ｉｃａｒｒｉｎ ,ＩＣＡ)是从朝鲜淫羊藿中提取的主要单体成分 ,具有多种生物学效应 ,能抑制多种肿瘤细胞株的增殖 ,能诱导白血病细胞ＨＬ 6 0沿粒系方向分化[1] 。我们对ＩＣＡ诱导白血病细胞凋亡进行了观察 ,并检测ＩＣＡ作用后白血病细胞癌基因ｍＲＮＡ和蛋白表达水平的改变。材料和方法1　材料　ＩＣＡ ,淡黄色结晶 ,纯度在 96 %以上 ,购于沈阳药科大学。以乙醇助溶 ,ＲＰＭＩ 16 4 0配制。ＨＬ 6 0细胞系 ,由中国医学科学院血液学研究所提供 ,培养于含体积分数为 10 %的小牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0培养基中。ＩＣＡ对ＨＬ 6 0…     

富铁对HL-60细胞增殖及化疗药物诱导其凋亡的影响

铁是细胞生长所必需的元素之一 ,是细胞代谢酶的必需成分 ,同时 ,铁还可激活催化ＤＮＡ合成的核糖核酸还原酶。动物实验表明富铁饲料可促进肿瘤的生长[1,2 ] ,肝癌细胞在富铁的培养基中生长更快 ,细胞团更大[3 ] 。因而 ,研究富铁对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响 ,对防止医源性铁过多和肿瘤治疗有重要的意义。新近我们探讨了富铁对白血病细胞株ＨＬ 6 0的增殖及对化疗药物诱导凋亡作用的影响 ,现报道如下。材料和方法1　细胞株　白血病细胞株ＨＬ 6 0引自华西医科大学细胞分子生物学实验室。2　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞培养于含体积分数为 10 %灭…