丝裂霉素C影响增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景:丝裂霉素C已逐渐开始应用于治疗增生性瘢痕领域中,但针对丝裂霉素C通过细胞凋亡作用于增生性瘢痕分子机制报道很少.目的:探讨丝裂霉素C对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响.方法:应用2.5,12.5,50,100和200 mg/L 丝裂霉素C作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期分布和凋亡情况;通过Western blot法检测细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平.结果与讨论:丝裂霉素C可使增生性瘢痕成纤维细胞的生长阻滞于G0/G1期,并且能够诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生凋亡,有着明显的浓度依赖性.经2.5~200 mg/L丝裂霉素C作用24 h后,增生性瘢痕成纤维细胞中Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.05).说明丝裂霉素C可能通过增加增生性瘢痕成纤维细胞Bax表达,降低Bcl-2表达,促进成纤维细胞凋亡的增加.     

芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的量效影响

目的：观察天然药物芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法：实验于2001—06／2004—12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医院整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织，瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3—8代细胞。用剂量为40mg／L的芦荟大黄素分别处理对数生长期成纤维细胞[0（为对照组），24，48，72h]，以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；观察加入不同浓度（0，20，40，60，80mg／L）芦荟大黄素后24h对成纤维细胞凋亡的影响，采用特异性荧光染色和原位末端标记技术分别检测凋亡指数。结果：①芦荟大黄素作用不同时间对成纤维细胞周期和凋亡的影响：流式细胞术检测发现，用药24h出现“亚二倍体峰”即凋亡峰，凋亡指数为（10．81&;#177;1．43）％，到48和72h凋亡指数为（16．02&;#177;1．30）％和（21．58&;#177;1．56）％。随着作用时间的延长，DNA合成前期细胞百分数增多，DNA合成期的细胞含量逐渐减少，亚二倍体峰百分数增多（F=122．514，225．552，105．346，P〈0．05）。②芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的量效影响：荧光染色和原位末端标记法检测凋亡指数，均呈剂量依赖性增高[荧光染色：0mg／L为（4．52&;#177;1．22）％，20mg／L为（25．56&;#177;1．12）％，40mg/L为（56．20&;#177;2．20）％，80mg／L为（80．05&;#177;2．12）％，F=1350．737；原位末端标记法：0mg／L为（3．85&;#177;1．15）％，20mg／L为（11．66&;#177;1．20）％，40mg／L为（23．12&;#177;1．06）％．80mg／L为（40．31&;#177;1．43）％．F=511．487，P〈0．011。结论：芦荟大黄素以时间依赖性的方式调节细胞周期并诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡，还可呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。     

瘢痕成纤维细胞的分化与凋亡

目的：研究正常皮肤、增生性瘢痕（ＡＴＳ）及瘢痕疙瘩成纤维细胞（ＦＢ）向肌成纤维细胞（ＭＦＢ）的分化、ＦＢ凋亡，以及它们与瘢痕的关系。方法：正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩各取１０例培养ＦＢ，利用流式细胞仪测定ＭＦＢ比例以及ＦＢ凋亡率。结果正常皮肤、ＨＴＳ、瘢痕疙瘩培养ＦＢ的ＭＦＢ分化比例无差异；正常皮肤与ＨＴＳＦＢ凋亡率无差异，瘢痕疙瘩培养ＦＢ凋亡率较正常皮肤及ＨＴＳ低。结论：ＨＴＳ、瘢痕疙瘩ＦＢ向ＭＦ     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异，以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其的影响。方法：测定细胞生长曲线；应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。结果：增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢；胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。bFGF对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用，对增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用。结论：增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞，它具有自己特殊的生物学特性。bFGF可以使增生性瘢痕成纤维细胞的生物学特性趋于正常皮肤成纤维细胞。     

芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的量效影响

目的:观察天然药物芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-06/2004-12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医院整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织,瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3～8代细胞。用剂量为40mg/L的芦荟大黄素分别处理对数生长期成纤维细胞[0(为对照组),24,48,72h],以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;观察加入不同浓度(0,20,40,60,80mg/L)芦荟大黄素后24h对成纤维细胞凋亡的影响,采用特异性荧光染色和原位末端标记技术分别检测凋亡指数。结果:①芦荟大黄素作用不同时间对成纤维细胞周期和凋亡的影响:流式细胞术检测发现,用药24h出现“亚二倍体峰”即凋亡峰,凋亡指数为(10.81±1.43)%,到48和72h凋亡指数为(16.02±1.30)%和(21.58±1.56)%。随着作用时间的延长,DNA合成前期细胞百分数增多,DNA合成期的细胞含量逐渐减少,亚二倍体峰百分数增多(F=122.514,225.552,105.346,P<0.05)。②芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的量效影响:荧光染色和原位末端标记法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高[荧光染色:0mg/L为(4.52±1.22)%,20mg/L为(25.56±1.12)%,40mg/L为(56.20±2.20)%,80mg/L为(80.05±2.12)%,F=1350.737;原位末端标记法:0mg/L为(3.85±1.15)%,20mg/L为(11.66±1.20)%,40mg/L为(23.12±1.06)%,80mg/L为(40.31±1.43)%,F=511.487,P<0.01]。结论:芦荟大黄素以时间依赖性的方式调节细胞周期并诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,还可呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast，FB)作用的机制。方法：实验于2000-01／2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响，采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecell nuclear antigen，PCNA)的表达，采用流式细胞仪对异硫氰荧光素一连接素V／碘化丙啶双染情况(FITC-Armexin V／PI)检测细胞凋亡率。结果：苦参碱在O．10-10g／L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用；增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱；FTTC-Armexin V／P1示苦参碱组的凋亡率为40．7，对照组为1．6(P＜O．01)。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast,FB)作用的机制。方法:实验于2000-01/2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecellnuclearantigen,PCNA)的表达,采用流式细胞仪对异硫氰荧光素-连接素V/碘化丙啶双染情况(FITC-AnnexinⅤ/PI)检测细胞凋亡率。结果:苦参碱在0.10～10g/L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用;增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱;FITC-AnnexinⅤ/PI示苦参碱组的凋亡率为40.7,对照组为1.6(P<0.01)。结论:苦参碱在体外能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

氦氖激光诱导培养瘢痕成纤维细胞的凋亡

目的：氦氖激光重复照射能诱导瘢痕成纤维细胞凋亡，进一步探讨氦氖激光功率密度与培养瘢痕成纤维细胞凋亡之间的关系。方法：实验于1999—02／10在创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。以不同功率密度氦氖激光(10，50，100和150mw／cm^2)照射培养人瘢痕成纤维细胞，照射时间分别为10，30min，1次／d，连续照射3d后24h，采用TUNEL技术、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡，锥虫蓝染色法检测细胞坏死。结果：10，50mW／cm^2照射细胞10min或30min，无凋亡细胞出现；100mW／cm^2照射细胞10，30min时凋亡率分别为(7．20&;#177;0．43)％，(12．73&;#177;0．75)％；150mW／cm^2照射细胞10，30min时凋亡率为(14．47&;#177;0．68)％，(16．27&;#177;0．96)％，分别大于同期100mW／cm^2照射(t=0．36，P&;lt;0．01，t=0．24，P&;lt;0．001)；DNA裂解片段分析示100，150mW／cm^2照射30min时可见特征性梯带存在；所有功率密度照射培养细胞10min或30min，都无坏死细胞出现。结论：以100mW／cm^2或150mW／cm^2功率密度氦氖激光重复照射能诱导培养瘢痕成纤维细胞凋亡。就诱导细胞凋亡而言，激光的功率密度比能量密度更重要。     

丝裂霉素C治疗增生性瘢痕的研究现状

瘢痕是伤口愈合的必然结果,成纤维细胞增生和胶原纤维产生能够有效地闭合切口,病理性瘢痕增生或者瘢痕疙瘩形成都对切口功能和外观造成不好的影响.瘢痕形成的机制目前还没有完全明确,但病理性瘢痕的增生与成纤维细胞和胶原纤维有着密切的关系.临床治疗瘢痕的方法很多,外用药也不少,各种治疗方法都有其优缺点.本文旨在对外用丝裂霉素C (mitomycin,MMC)治疗病理性瘢痕的现状进行探讨.     

A型肉毒毒素引起人增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景：A型肉毒毒素临床上可以治疗增生性瘢痕,体外细胞培养研究发现可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。目的：观察A型肉毒毒素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,以及对人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法：通过消化法分离培养出人增生性瘢痕成纤维细胞,分别用不同浓度的A型肉毒毒素对细胞的生长增殖过程进行干预,通过MTT染色,于酶联免疫检测仪570nm测定吸光度来研究细胞生长增殖情况,计算抑制率。通过Hoechst33342及PI染色检测人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡隋况,并计算凋亡率。结果与结论：人增生性瘢痕成纤维细胞生长过程中呈梭形,细胞生长旺盛,细胞融合成单层,细胞排列成高度一致性。经A型肉毒毒素处理后,细胞增殖速度明显减慢,细胞数量减少,细胞排列方向散乱。MTT染色后吸光度减弱,随A型肉毒毒素浓度增加,吸光度明显减弱,与对照细胞比较,差异有显著性意义（P〈0．05）,半数抑制率出现在0．4IU/L。在荧光显微镜下,人增生性瘢痕成纤维细胞经Hoechst33342和PI染色后细胞核呈现蓝色,细胞核为光滑的圆形或椭圆形外观。A型肉毒毒素干预后细胞核致密浓缩,染色不均匀,折光性增强,核膜皱缩,部分细胞核碎裂,出现碎块,有凋亡小体出现。随着A型肉毒毒素浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高,与对照细胞比较差异有显著性意义（P〈0．05）,半数凋亡率在0．4IU／L。说明A型肉毒毒素可以抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,其主要通过引起细胞凋亡的途径来抑制成纤维细胞的增殖。     

汉防己甲素对增生性瘢痕中成纤维细胞增殖和活力的影响

目的 :观察汉防己甲素对成纤维细胞的生物学作用。方法 :通过对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,继续培养后观察成纤维细胞增殖和活力的变化。结果 :当汉防已甲素的浓度达到100mg/L时 ,抑制率达到了89.4 % ,细胞的活力也下降到对照组的38.5%。结论 :汉防己甲素可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用     

不同浓度富硒温泉水对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

背景:临床研究证实,富硒温泉水对增生性瘢痕有明显的抑制作用。目的:观察富硒温泉水对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:组织块法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取第3~5代细胞,用含10%,20%,30%富硒温泉水及自来水和蒸馏水的培养基培养48h,测细胞增殖情况。结果与结论:富硒温泉水培养的人增生性瘢痕成纤维细胞数量减少,突起不同程度的变短或者缺失,细胞质及胞核浓缩。不同浓度的富硒温泉水、自来水、蒸馏水均对成纤维细胞的增殖有抑制作用,以富硒温泉水培养基的抑制作用最明显(P<0.05),且随浓度的升高,抑制率增大。说明富硒温泉水可以剂量依赖性地抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。     

不同浓度富硒温泉水对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

背景：临床研究证实,富硒温泉水对增生性瘢痕有明显的抑制作用。目的：观察富硒温泉水对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：组织块法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取第3~5代细胞,用含10%,20%,30%富硒温泉水及自来水和蒸馏水的培养基培养48h,测细胞增殖情况。结果与结论：富硒温泉水培养的人增生性瘢痕成纤维细胞数量减少,突起不同程度的变短或者缺失,细胞质及胞核浓缩。不同浓度的富硒温泉水、自来水、蒸馏水均对成纤维细胞的增殖有抑制作用,以富硒温泉水培养基的抑制作用最明显（P〈0.05）,且随浓度的升高,抑制率增大。说明富硒温泉水可以剂量依赖性地抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。     

人增生性瘢痕成纤维细胞的改良培养和鉴定

目的:探讨并建立一种简便易行、培养周期短的成纤维细胞改良培养方法.方法:采用组织块贴壁结合胰蛋白酶消化法体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞.倒置相差显微镜下观察培养的成纤维细胞形态,进行细胞鉴定,作生长曲线观察细胞增殖能力.结果:采用组织块贴壁结合胰蛋白酶消化法体外分离人增生性瘢痕成纤维细胞,细胞培养周期短.分离培养的成纤维细胞波形蛋白呈阳性表达.传代培养的成纤维细胞增殖能力强.结论:采用组织块贴壁结合胰蛋白酶消化法体外分离培养法可以较快、较好地获得稳定培养的增生性瘢痕成纤维细胞,为其形成机制及防治研究提供实验基础.     

汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用

目的观察汉防己甲素对瘢痕成纤维细胞生长的作用.方法取第6～11代体外培养增生性瘢痕的成纤维细胞,经不同浓度的汉防己甲素作用后,用MTT法测定对瘢痕成纤维细胞增殖能力的影响,用LDH法测定药物对细胞的毒性作用.结果经汉防己甲素作用后,细胞的增殖活力下降,而且随药物浓度的增高,细胞活力逐渐下降,药物浓度在80mg/L的情况下,对细胞没有毒性作用.结论汉防己甲素可以抑制成纤维细胞的增殖,可能对增生性瘢痕有预防和治疗的作用.     

细胞松弛素B对瘢痕增生的影响

目的研究微丝功能对正常皮肤及增生性疤痕成纤维细胞胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1mRNA表达水平的影响。方法采用细胞培养,Northernblot分析等方法,以α-     

氦-氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制

目的探讨氦-氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制。方法将培养瘢痕成纤维细胞随机分为转染组、转染对照组和非转染组,转染组细胞与绿色荧光蛋白(GFP)质粒cDNA、含目的基因片段的表达载体质粒pcDNA3-FADD-DNcDNA共转染,转染对照组细胞与GFP质粒cDNA、空载体质粒pcDNA3共转染,非转染组细胞没有进行转染,转染后24h分别对各组细胞进行氦-氖激光照射(100mW/cm2照射30min),1次/d,连续照射3d,然后采用TUNEL技术检测细胞凋亡。结果转染组、转染对照组与非转染组细胞凋亡率分别为9.27%、15.73%和12.87%,转染组细胞凋亡率明显小于转染对照组(q=4.55,P<0.01)和非转染组(q=4.14,P<0.05)。结论FADD-DN基因转染能减少氦-氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡,Fas相关死亡域蛋白(FADD)可能是氦-氖激光激活死亡信号途径的基本元件之一。     

不同功率密度氦氖激光照射对培养瘢痕成纤维细胞生长的影响

目的探讨氦氖激光功率密度与培养瘢痕成纤维细胞生长的关系。方法以 632.8nm波长氦氖激光, 50、 100和 150 mW/cm2功率密度,分别照射培养的人增生性瘢痕成纤维细胞 1、 3和 5次, 1次 /d,每次照射 10min,然后进行细胞计数和细胞周期分析。结果 50mW/cm2照射 1次后细胞总数大于对照组（ P< 0.01）, 100mW/cm2照射 5次和 150mW/cm2照射 3、 5次,细胞总数都明显少于同期对照组（ P< 0.05）;细胞周期分析结果与细胞计数结果相一致。结论氦氖激光对细胞生长的双重效应与功率密度密切相关。