microRNA-21对乳腺癌MCF-7/ADR细胞株多柔比星耐药性影响的研究

目的:探讨microRNA-21(miR-21)基因表达改变对乳腺癌细胞多柔比星化疗耐药的影响.方法:人工合成miR-21模拟序列或干扰序列,以脂质体为载体,转染乳腺癌细胞MCF-7及其多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADR;应用荧光定量RT-PCR检测miR-21的表达;应用MTT法检测细胞转染前后对多柔比星的耐药性;应用流式细胞仪检测细胞凋亡;应用蛋白质印迹法检测PTEN、BAX及Bcl-2蛋白的表达.结果:MTT检测结果示,MCF-7及其耐药株MCF-7/ADR细胞多柔比星半数抑制浓度(IC50)分别为(0.28±0.03)和(17.5±0.12) μmol/L.miR-21表达上调,MCF-7细胞对多柔比星的IC50明显增高为(3.65±0.12) μmol/L;miR-21表达下调,MCF-7/ADR细胞对多柔比星的IC50明显降低为(7.53±0.11) μmol/L.流式细胞分析显示,miR-21下调后MCF-7/ADR细胞凋亡率明显增加.同时,细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低.结论:miR-21在乳腺癌化疗耐药中具有重要作用,抑制miR-21的表达可以逆转乳腺癌多柔比星耐药细胞株对多柔比星的耐药性.     

miR-130a靶向调节PTEN基因对人乳腺癌细胞多柔比星敏感性影响的观察

目的:探讨miR-130a对PTEN基因表达的调控,及其与乳腺癌MCF-7细胞株多柔比星耐药的关系。方法:利用miRNA芯片结合RT-qPCR的方法筛选到miR-130a在亲代敏感MCF-7/S细胞与多柔比星耐药细胞(MCF-7/Adr)中表达差异;通过靶基因预测软件预测PTEN与miR-130a基因的关系;通过miR-130a模拟物和抑制物转染实验结合四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、RT-qPCR和蛋白质印迹法观察miR-130a的表达变化对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其与PTEN基因表达间的关系。结果:与MCF-7/S相比,miR-130a在MCF-7/Adr中的表达水平明显增高(116 834.70±4 728.32)倍,t=19.035,P=0.000;但在多西紫杉醇耐药株MCF-7/Doc中的表达差异无统计学意义,t=0.703,P=0.521。MCF-7/S细胞转染miR-130amimics后,与阴性对照组相比,其miR-130a表达水平明显增高(17.686±1.057)倍,t=8.360,P=0.001;MCF-7/S空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(0.240±0.099)、(0.181±0.060)和(0.606±0.164)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130amimics后细胞的IC50显著增高,t=5.200,P=0.007。同时PTEN mRNA和蛋白表达水平明显下调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(0.362±0.076)倍,t=2.927,P=0.043;蛋白表达水平是阴性对照组的(0.386±0.020)倍,t=20.713,P=0.000 3;而MCF-7/Adr转染miR-130ainhibi-tors后,其miR-130a表达水平是阴性对照组的(0.169±0.035)倍,t=12.036,P=0.000 2;MCF-7/Adr空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(50.793±3.970)、(46.206±1.963)和(23.366±1.304)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130ainhibitors后细胞的IC50显著降低,t=16.784,P=0.000 7;同时PTEN mRNA和蛋白表达水平均明显上调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(3.564±0.336)倍,t=4.122,P=0.015;蛋白表达水平是阴性对照组的(2.019±0.268)倍,t=8.999,P=0.000 8。结论:miR130a可能通过靶定PTEN基因来增强乳腺癌细胞对多柔比星的耐药性。     

miRNA-27a在人乳腺癌MCF-7/ADR细胞株中的表达及其对细胞耐药的影响

目的 探讨miRNA-27a对人乳腺癌多柔比星耐药细胞株MCF-7/Adriamycin(MCF-7/ADR)的影响及其可能的作用机制.方法 采用real-time PCR(RT-PCR)检测miRNA-27a和P-glycoprotein(P-gp)在乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/ADR中mRNA表达.将miR...     

人乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化RB蛋白的关系

目的 :研究乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化RB蛋白的关系。方法 :以乳腺癌细胞株MCF 7/S(化疗敏感细胞株 )和MCF 7/ADR(耐多柔比星细胞株 )为研究对象 ,用MTT比色法检测乳腺癌细胞的化疗敏感性 ;采用免疫细胞化学法检测多柔比星 (ADR)作用前后RB蛋白的表达状态 ;应用流式细胞术检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡程度。结果 :ADR能抑制敏感细胞MCF 7/S增殖 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 0 .12 8μg/ml,而对应的耐药细胞MCF 7/ADRIC50值为 10 .89μg/ml,MCF 7/S细胞较MCF 7/ADR细胞对ADR敏感 86倍。加ADR前两种细胞胞核中的磷酸化RB蛋白均为阳性 ,去磷酸化RB蛋白均为阴性。经不同浓度ADR处理后 ,随着ADR浓度的增加 ,MCF 7/S细胞去磷酸化RB蛋白表达量逐渐增高 ,而MCF 7/ADR细胞去磷酸化RB蛋白表达量无明显增高。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期 ,结果表明ADR诱导MCF 7/S细胞凋亡作用比MCF 7/ADR强 (P <0 .0 1)。结论 :乳腺癌MCF 7/S细胞凋亡与去磷酸化RB蛋白表达呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,而MCF 7/ADR细胞凋亡与去磷酸化RB无明显相关 (P >0 .0 5 )。     

葡萄糖神经酰胺合成酶基因在人耐多柔比星乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表达及意义

背景与目的:多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因,近年来神经酰胺的糖基化水平增高与多药耐药的关系引起了广泛关注.本研究旨在探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因在人乳腺癌细胞株MCF-7和人耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中的表达及意义.方法:采用四氮唑盐(MTT)法检测多柔比星对MCF-7/ADR和MCF-7的抑制率和IC50,用浓度为5、10、20μmol/L的GCS抑制剂D,L-threo-1-phenyl-2-decanoyl-amino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)预处理MCF-7/ADR 24、48 h后检测抑制率和IC50;应用实时荧光定量PCR(real time PCR)检测MCF-7、MCF-7/ADR以及PDMP预处理后MCF-7/ADR中GCS mRNA的表达.结果:MCF-7/ADR 对MCF-7的耐药倍数为22.69倍,PDMP作用后多柔比星对MCF-7/ADR的抑制率升高,IC50从(19.0±0.5)μg/ml 下降到(5.6±0.6)μg/ml.MCF-7/ADR中GCS mRNA的表达高于MCF-7(P<0.01),PDMP使MCF-7/ADR中GCS mRNA的表达水平GCSN(48±17)下降到(21±4).结论:GCS可能参与乳腺癌的发生过程,并在MCF-7/ADR多药耐药中起重要作用.     

三唑类抗真菌药联合多柔比星逆转白血病细胞株耐药性研究

目的探讨三唑类抗真菌药伊曲康唑、氟康唑联合多柔比星逆转白血病细胞株耐药的作用。方法伊曲康唑、氟康唑或PSC833（阳性对照）分别联合多柔比星与人类慢性粒细胞白血病红白血病耐多柔比星细胞株K562／ADR共同培养,采用CCK-8法检测K562／ADR细胞增殖,流式细胞术检测K562／ADR细胞内多柔比星平均荧光强度,蛋白印迹法检测K562／ADR细胞7H2AX的表达。结果1μg／ml伊曲康唑及0．5μg／mlPSC833可将K562／ADR对多柔比星的J岛从38．30μg／ml降至8．59μg／ml和24．64μg／ml,且呈剂量依赖性。1Ng／ml伊曲康唑或0．5μg／mlPSC833联合多柔比星作用K562／ADR细胞3h和6h后,细胞内多柔比星平均荧光强度相对单加多柔比星组增加了1．54倍（3h）、1．50倍（6h）或5．97倍（3h）、5．83倍（6h）。伊曲康唑或PSC833联合多柔比星可显著增加K562／ADR细胞7H2AX的表达。结论伊曲康唑通过提高细胞内多柔比星浓度及协同增强细胞DNA的损伤,恢复K562／ADR对多柔比星的敏感性,而氟康唑则无作用。     

miR-103与胃癌多药耐药作用机制探讨

目的 既往研究肿瘤耐药均集中在DNA水平,而DNA又影响mRNA及蛋白质表达.但是mRNA与编码蛋白质的表达并不成比例,而非编码RNA恰好能解释两者之间的不平衡.非编码RNA即微小RNA(microRNA,miRNA),是一类内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,长度约18~25个核糖核苷酸,是转录后基因表达调节的关键分子,参与胃癌的发生发展.本研究旨在探讨miR-103在胃癌多药耐药中作用及其分子机制.方法 miRNA芯片筛选SGC7901/ADR及SGC7901细胞差异表达miRNA,应用qRT-PCR验证miR-103表达;将miR-103的拟似物及抑制物分别转染SGC7901/ADR及SGC7901细胞,MTT法检测转染前后对多柔比星敏感性变化;蛋白质印迹法检测miR-103对caveolin-1表达的影响.结果 miR-103在SGC7901/ADR细胞中表达(0.32±0.04)显著低于SGC7901细胞.miR-103拟似物转染SGC7901/ADR细胞后对多柔比星的敏感性较对照组显著提高,IC50由(18.83±0.32) μg/mL下降到(4.54±0.29) μg/mL,t=1.04,P<0.05;而miR-103抑制物转染SGC7901细胞后对多柔比星的敏感性显著降低,IC50由(1.65±0.03) μg/mL上升到(15.27±0.26) μg/mL,t=1.25,P<0.05.miR-103靶向作用于caveolin-1的3'-UTR,并在转录后水平负向调控caveolin-1表达.结论 miR-103通过靶向负调控caveolin-1表达,增加SGC7901/ADR细胞对多柔比星敏感性,从而逆转胃癌多药耐药.     

沉默HuR的表达增加人乳腺癌耐药MCF-7/Adr细胞对多柔比星的敏感性

目的：研究RNA干扰人抗原R（human antigen R,HuR）基因的表达对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr对多柔比星（doxorubicin）敏感性的影响。 方法： 构建靶向 HuR基因 的shRNA表达质粒（pGenesil-siHuR）,稳定转染至MCF-7/Adr细胞,real-time PCR检测细胞中 MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测MCF-7/Adr细胞中由 MDR1 基因编码的P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的表达,MTT法检测pGenesil-siHuR 转染后MCF-7/Adr细胞在多柔比星作用后的存活率和IC50,流式细胞术检测MCF-7/Adr细胞的凋亡率。 结果： 与未转染的MCF-7/Adr细胞比较,pGenesil-siHuR质粒转染MCF-7/Adr细胞中 MDR1 mRNA的表达水平明显减低\[（0184±0.029） vs （1.203±0.026）,P<0.01\],P-gp表达水平明显降低。pGenesil-siHuR质粒转染MCF-7/Adr细胞后,MCF-7/Adr细胞对多柔比星的IC50从未转染的(148.2±2.3）nmol/L降至(42.9±0.4）nmol/L;经多柔比星处理后,pGenesil-siHuR质粒转染组MCF-7/Adr细胞的凋亡率明显上升\[（34.6±1.1）% vs （1.1±0.2）%,P<001\]。 结论： RNA干扰HuR的表达能抑制 MDR1基因 的表达,增加耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞对多柔比星的敏感性。     

Snail促进乳腺癌MCF-7细胞移植瘤对多柔比星的耐药及其机制

目的:探讨Snail在乳腺癌MCF-7细胞移植瘤对多柔比星耐药中的作用及其可能的机制。方法:构建Snail基因真核表达载体pcDNA3.1-Snail,转染至MCF-7细胞,筛选稳定表达Snail的MCF-7/Snail细胞,以转染空质粒pcDNA3.1的MCF-7细胞(MCF-7/pcDNA)为对照。构建小鼠MCF-7/Snail及MCF-7/pcDNA细胞移植瘤模型,注射多柔比星,观测移植瘤生长,计算抑瘤率。免疫组织化学方法检测移植瘤组织中Snail、多药耐药基因-1(multidrug resistance-1,MDR-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达。结果:成功构建pcDNA3.1-Snail表达载体,转染MCF-7细胞后获得MCF-7/Snail和MCF-7/pcDNA细胞,并制备小鼠移植瘤。多柔比星治疗后,MCF-7/Snail细胞移植瘤的瘤重明显高于MCF-7/pcDNA细胞移植瘤[(1.413±0.674)g vs(1.257±0.576)g,P<0.05],多柔比星对MCF-7/Snail移植瘤抑瘤率明显低于MCF-7/pcDNA移植瘤(18.42%vs30.18%,P<0.05),MCF-7/Snail细胞移植瘤的组织中Snail、MDR-1、MMP-9的表达均显著高于MCF-7/pcDNA移植瘤(408.08±20.39vs67.67±16.56,363.50±26.56vs55.08±12.23,396.25±16.03vs56.92±7.35;均P<0.01),且Snail与MDR-1和MMP-9的表达均呈正相关(r1=0.89,P<0.01;r2=0.81,P<0.01)。结论:Snail促进乳腺癌MCF-7细胞移植瘤对多柔比星的耐药,其机制与增强MDR-1和MM9-9表达有关。     

乳腺癌耐药细胞中c-fos抗凋亡作用的研究

背景与目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,且患者死亡率居高不下,其中乳腺癌耐药是导致临床化疗失败的主要原因。该课题组采用已建立的乳腺癌耐药细胞模型MCF-7/ADR及其敏感株MCF-7,旨在探讨c-fos在乳腺癌耐药细胞中的详细作用机制。方法：MTT检测上述细胞对多柔比星的敏感性,并通过实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测上述细胞中mdr-1及c-fos的mRNA表达情况;3 μmol多柔比星分别处理MCF-7细胞12、24、36 h后采用RT-PCR检测细胞中c-fos mRNA的表达,以监测化疗药物处理过程中乳腺癌细胞c-fos的表达变化过程;构建相应载体得到了c-fos稳定干扰细胞株及其对照细胞株：MCF-7/ADR/si-fos-8B、MCF-7/ADR/si-fos-3D和MCF-7/ADR/siNC,采用MTT检测干扰c-fos后对5-FU及顺铂的敏感性变化;流式细胞术检测上述药物及γ射线照射处理后细胞凋亡的情况;罗丹明123检测乳腺癌耐药细胞的外排能力;RT-PCR及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测c-fos干扰后,凋亡相关基因bax、bcl-2、puma、p53及mdr-1等的表达。结果：与敏感细胞MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞中c-fos及mdr-1的表达显著升高,且对多柔比星的耐药倍数为敏感株的近40倍;在3 μmol多柔比星处理MCF-7之后c-fos的表达逐渐升高,结果显示,c-fos在乳腺癌的耐药表型形成早期即开始发挥作用;干扰c-fos后,细胞对药物(5-FU、顺铂)的敏感性增高,且经药物处理及γ射线照射后稳定干扰细胞株的凋亡率显著升高,说明干扰c-fos后乳腺癌耐药细胞在受到外界刺激后,更易于发生凋亡;RT-PCR及Western blot检测结果显示,干扰c-fos后,bax、puma、p53的表达明显升高,而bcl-2及mdr-1的表达显著降低。结论：在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中发现,c-fos呈异常高表达,其可能通过调节乳腺癌细胞凋亡信号通路蛋白的变化抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进了乳腺癌耐药表型的形成。由此,c-fos可作为克服乳腺癌耐药治疗的一个潜在靶点用于今后的药物开发。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

微小RNA-152对乳腺癌细胞增殖及阿霉素敏感性影响的实验研究

目的 探讨微小RNA-152（miR-152）对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响及其作用机制。方法 采用实时定量PCR（QPCR）检测人乳腺上皮细胞株HBL-100、人乳腺癌MCF-7细胞及阿霉素耐药株MCF-7／ADR细胞中的miR-152水平,分别向MCF-7细胞和MCF-7／ADR细胞转染miR-152模拟物 mimics（过表达组）和阴性对照NC（阴性对照组）,以未行转染为空白对照组。采用QPCR检测转染后MCF-7细胞和MCF-7／ADR细胞中miR-152的表达情况,采用MTT法检测不同浓度阿霉素（10、50、100、200和500 ng/ml）处理后各组的增殖情况,流式细胞术检测转染后各组的凋亡率,Western blotting检测磷脂酰肌醇激酶-3催化亚基α基因（PIK3CA）的蛋白水平,双荧光素酶报告实验评价miR-152对PIK3CA的靶向调控作用。结果 QPCR实验结果 表明MCF-7细胞和MCF-7／ADR细胞中的miR-152水平均低于HBL-100细胞,且MCF-7／ADR细胞的miR-152水平均低于MCF-7细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）;过表达组转染后的miR-152水平均高于阴性对照组和空白对照组（P＜0.05）。与其余两组比较,过表达组的存活率降低而凋亡率升高,且PIK3CA蛋白水平也降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。miR-152可抑制野生型PIK3CA 3’ UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型PIK3CA 3’UTR的荧光素酶活性无影响。结论 miR-152表达在乳腺癌细胞中降低,且与阿霉素耐药有关,参与乳腺癌细胞的增殖和凋亡过程,在逆转乳腺癌耐药中发挥重要作用,具有一定价值。     

多药耐药相关蛋白1在三种乳腺癌细胞系中表达差异的研究

 目的　比较多药耐药相关蛋白1（MRP1）在人类乳腺癌敏感细胞（MCF-7／S）和耐药细胞（MCF-7／TAM、MCF-7／ADR）中的表达差异。初步探索乳腺癌细胞对三苯氧胺（TAM）和多柔比星（ADR）的耐药性的发生机制。方法　分别采用实时荧光定量PCR、Western blot技术检测MRP1基因和MRP1蛋白在3种乳腺癌细胞中的表达差异。结果　MRP1 mRNA在MCF-7／TAM和MCF-7／ADR细胞中表达量分别是MCF-7／S细胞的（2.63±0.18）倍和（8.38±0.76）倍,差异均有统计学意义（P＝0.004,P＝0.003）。MRP1蛋白在MCF-7／TAM细胞和MCF-7／ADR细胞中表达均高于MCF-7／S细胞,与MRP1 mRNA的趋势相一致。结论　MRP1的高表达可能是乳腺癌细胞对TAM和ADR产生耐药的共同发生机制。     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

β-榄香烯对MCF-7／ADM细胞株中乳腺癌干细胞作用的初步研究

目的探讨乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7／ADM与阿霉素敏感细胞株MCF-7／S中乳腺癌干细胞（BCSCs）含量及乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和P-糖蛋白（P-gp）表达的差异,观察中药β-榄香烯（β-ELE）对BCSCs及BCRP和P-gp表达的影响。方法 应用无血清细胞培养法培养MCF-7／ADM和MCF-7／S细胞株,形态学观察不同细胞株无血清细胞球培养的成球率,RT PCR检测两种细胞株中BCRP和P-gp的mRNA水平,流式细胞仪检测BCRP和P-gp的阳性表达率及CD44+CD24^-／low细胞比例。应用15μg/ml β-ELE作用MCF-7/ADM细胞株48h后,检测细胞成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白表达的变化。结果 与MCF-7／S细胞比较,MCF-7／ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp mRNA水平较高。MCF-7／ADM细胞中BCRP和P-gp蛋白的阳性表达率分别为（77.78±9.55）％和（32.33±5.12）％,CD44+CD24-／low细胞比例为（64.79±11.78）％,均高于MCF-7／S细胞的（3.97±1.51）％、（14.26±2.51）％和（18.79±3.28）％,差异均有统计学意义（P＜0.01）。β-ELE能明显抑制MCF-7／ADM细胞的成球率及BCRP、P-gp基因与蛋白的表达（P＜0.01）。结论 MCF-7／ADM是BCSCs相对富集的一种耐药细胞株且高表达BCRP和P gp,β-ELE能够抑制MCF-7／ADM细胞中BCSCs比例及其成球率,并降低耐药蛋白的表达。     

miR-126对细胞周期的调控及其与肺癌患者预后的关系

目的研究miR-126在肺癌中的表达变化及其与癌细胞周期调控的关系,并分析miR-126表达对肺癌患者术后生存期的影响。方法对肺癌细胞株A549和49例临床肺癌手术标本进行实时定量RT-PCR检测miR-126的表达;A549细胞转染miR-126表达载体,MTT和流式细胞术检测miR-126表达对癌细胞增殖和细胞周期的影响;Kaplan-Meier曲线和log-rank分析方法比较miR-126高、低表达组之间无瘤生存期和总生存期的差别。结果A549肺癌细胞miR-126低表达（2.10±0.67）,转染miR-126表达载体后,miR-126表达升高（12.33±1.67）;转染miR-126后96小时,A549细胞存活率为（68.33±6.67）%,明显低于亲本A549细胞（105.33±8.58）%,差异有统计学意义（P〈0.001）;与亲本A549细胞比较（G0/G1期：37.48±3.28;S期：62.03±5.23）,转染miR-126的A549细胞G0/G1期细胞比例上升（53.67±6.06）,S期下降（43.21±3.75）,差异有统计学意义（P〈0.001）;肺癌组织miR-126表达水平（12.41±4.34）明显低于癌旁肺组织（23.29±6.28）,差异有统计学意义（P〈0.001）;miR-126高表达组无瘤生存期和总生存期均明显高于低表达组（P〈0.01,P〈0.001）。结论 miR-126在肺癌的发生、发展中有重要作用,可能成为肺癌治疗的可选靶点之一。     

乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系

目的研究乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系,探讨p38MAPK信号转导途径在其中的作用。方法 以p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADM,采用流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响;MTT检测MCF-7／ADM细胞对阿霉素的半数药物抑制浓度（IC50）;Western blot检测SB203580处理MCF-7／ADM和MCF-7两株细胞后p38MAPK蛋白表达水平;RT—PCR检测细胞内MDR-1 mRNA水平。结果SB203580（10μmol／L）干预24h后MCF-7／ADM细胞的凋亡率为（26．73±4．90）％,与未干预组和对照组凋亡率相比差异有显著统计学意义（F=143．80,P〈0．001）;MCF-7／ADM细胞对阿霉素的敏感性明显提高（F=148927．10,P〈0．001）,相对逆转率达68．45％;与对照组和未干预组相比,干预组的MDR1 mRNA（F=9139．24,P〈0．001）及p38MAPK（F=685．42,P〈0．001）蛋白表达水平明显降低。结论p38MAPK信号转导途径与乳腺癌耐药密切相关,其可能机制为p38MAPK保护人乳腺癌耐药细胞（MCF-7／ADM）逃避凋亡,阻断该通路可增强乳腺癌耐药细胞发生凋亡。     

ATP1B1协同阿霉素抑制乳腺癌细胞MCF-7生长及逆转耐药的作用

背景与目的：Na^＋-K^＋ATP酶（Na^＋-K^＋泵）是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低。本实验研究ATP1B1协同阿霉素（ADM）在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7／ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响。方法：将重组质粒PEGFP—ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7／ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基因沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT—PCR和real-timePCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P—gP蛋白的表达。结果：转染PEGFP-ATP1B1的MCF-7和MCF-7／ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM—C3组（pEGFP—C3空载体转染）和空白对照ADM—RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM—ATP1B1组与ADM—RPMI-1640组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM—shATP1B1和空白对照ADM—RPMI-1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高。荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7／ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组。流式细胞术显示,ADM—ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高（P〈0．05）,ADM—ATPlBl组MCF-7／ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组（P〈0．05）。MCF-7和MCF-7／ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM—RPMI-1640组（P〈0．05）．而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR和real-time PCR检测结果显示,MCF-7／ADM细胞ADM—ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ATP1B1对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7／ADM对ADM的耐药效应,其机理与MDR1基因无明显的相关性,?