M2-Gi1α融合蛋白在Sf9 细胞中的表达及M2AChR 特异性药物的鉴别

 目的通过杆状病毒-Sf9 细胞系统表达M₂-G_i1α融合蛋白,并利用M₂-G_i1α融合蛋白为工具筛选毒蕈碱性乙酰胆碱受体亚
型2（M₂AChR）特异性配体,探讨M₂-G_i1α融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法通过两步PCR反应建立M₂AChR与G_i1α融
合cDNAs,并在Sf9 昆虫细胞中表达M₂-G_i1α融合蛋白。通过［3H］羟苯二乙酸奎宁酯（［3H］QNB）配体饱和结合实验及［35S］
GTPγS 竞争性替代结合实验,检测M₂-G_i1α融合蛋白表达水平,并筛选M₂AChR 的特异性配体。结果M₂-G_i1α融合蛋白的表达水
平为（8.44±0.39）nmol·g^-1膜蛋白。不同配体使M₂-G_i1α融合蛋白中Gi1α与GDP 的亲和力发生变化,乙酰胆碱、氧化震颤素、槟榔
碱、阿托品、fangchinoline、levitimide 的IC50值分别为：21.35,23.86,11.91,0.13,1.05,1.75 μmol·L^-1,无配体存在时为2.50 μmol·
L^-1。结论杆状病毒-Sf9 细胞表达系统表达的M₂-G_i1α融合蛋白具备M受体与配体结合的特性和组分间的耦联功能,通过检测
GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2受体亚型特异性药物     

细菌伴侣蛋白Skp对C5a受体的作用位点

目的 Skp（Seventeen-Kilodalton protein）已被证明是C5a受体的两个内源性的化学配体：C5a和S19核糖体蛋白二聚体（RPS19 dimer）之外的第3个配体，通过C5a受体引起白细胞的趋化运动.该研究目的：阐明Skp如何与受体结合及与受体结合的位点.方法 使用S19核糖体蛋白（RPS19）和C5a的合成模拟肽链，进行的受体拮抗试验.使用Skp的合成模拟肽链进行趋化运动分析试验.结果 证明Skp与RPS19和C5a一样，结合于C5a受体的相同结合区域，且也通过两步结合机制使受体活化.并初步推测了Skp分子结构中可能的受体结合位点.结论 C5a受体可以通过识别革兰氏阴性细菌蛋白，在先天性免疫方面起到重要的作用.     

组胺H3受体对垂体瘤AtT-20细胞分泌ACTH的调节作用

目的　观察组胺受体激动剂对AtT-20细胞分泌ACTH的影响,并探讨G蛋 白在组胺H3 受体信号转导机制中的作用. 方法　选用文献报道的高表达组胺H3受体 的垂体细胞瘤AtT-20 作为观察系统,用放免分析法测定给予组胺受体激动剂后各时间点细胞上清液中ACTH分泌量 的变化,并观察药物对细胞增殖的影响. 结果　组胺H3受体激动剂R- (α)- MeHA（0.1 μmol*L-1）作用8 h能明显促进ACTH的释放,释放量为1920 μg * L-1,与同时间对照组（780 μg*L-1）相比,明显增高（P<0.01）;H 1和H2激动剂则无此作用. 且R-(α)-MeHA引起ACTH分泌 的效应能被H3受体特异性拮抗剂thioperamide所拮抗,而H1受体和H2受体拮抗剂均不 影响 R-(α)-MeHA的效应. R-(α)-MeHA作用8和24h,对细胞增殖无明显影响. 用G蛋白失活 剂NEM 预先处理细胞后,取消了R-(α)-MeHA增强AtT-20细胞ACTH分泌的效应. 结论 　特异性激动组胺H3受体后能引起兴奋-分泌耦联过程,其信号转导过程中有G蛋白的参与.     

蛇毒cystatin在Bac to Bac杆状病毒表达系统的表达与鉴定

目的探讨蛇毒cystatin在Bac to Bac杆状病毒表达系统中的表达。方法PCR扩增蛇毒cystatin基因,将其克隆到pFastBacHTc中,通过转化E.coliDH10Bac筛选克隆,抽提重组Bacmid/cystatin,后者经Cell-fectin介导转染Sf9细胞,获取重组病毒,扩增病毒并感染Sf9细胞进行表达,SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定表达蛋白66。结果获得重组cystatin的杆状病毒,Sf9细胞能表达出与蛇毒cystatin单抗、5×His单抗结合的蛋白,相对分子质量约15 kD。结论蛇毒cystatin在Bac to Bac杆状病毒表达系统中成功表达。     

听源性惊厥大鼠惊厥后NMDA受体NR1亚基蛋白表达和功能研究

目的 :探讨惊厥后大脑皮质N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体亚基NR1蛋白表达及其功能改变与癫痫发病机制的关系。方法 :P77PMC大鼠按惊厥后不同时间随机分为 6组 ,免疫组化每组 6个样本 ,配基结合实验每组 5个样本 ,制备大脑冰冻切片和大脑皮质突触膜。利用免疫组化技术 ,观察听源性癫痫易感大鼠P77PMC惊厥后不同时间NR1亚基蛋白的表达 ,应用配基结合实验观察听源性惊厥大鼠P77PMC惊厥后大脑皮质突触膜对3H MK80 1的结合改变 ,以及NMDA受体激动剂对其结合的影响。结果 :大脑皮质在惊厥后 4hNR1蛋白表达即开始增加 ,2 4～48h达高峰。反应体系中无任何NMDA受体激动剂时 ,惊厥后大脑皮质突触膜对 3H MK80 1的结合有增加趋势 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;当反应液中加入NMDA受体激动剂时 ,惊厥后大脑皮质突触膜对 3H MK80 1的结合明显增加 ,除惊厥后 4h与正常对照组比较差异无显著性外 ,其他惊厥后各时间点与正常对照组比较差异均有显著性(P <0 0 1)。结论 :听源性惊厥大鼠P77PMC惊厥后 ,大脑皮质NMDA受体NR1亚基蛋白表达增加 ,NMDA受体对其激动剂的敏感性增加 ,提示NR1亚基参与了P77PMC大鼠惊厥的发生与发展 ;受体兴奋性的改变可能与神经网络兴奋性增高及癫痫易感性的保持有关     

HCV核心和截短的包膜蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达及其抗原性

目的:构建含HCV全长核心基因和截短的包膜蛋白E2基因的重组杆状病毒表达载体,研究其表达和抗原性.方法:以含HCV全长cDNA克隆的pGEM-HCJ4质粒为模板,PCR扩增全长的HCV核心抗原基因和截短的E2基因片段,插入转座载体pFastBacHTa构建重组转座质粒pFB-CE2t,转化DH10Bac大肠杆菌,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-CE2t,以之转染昆虫Sf 9细胞进行外源基因的表达,并对其抗原性进行ELISA检测.结果:SDS-PAGE和Western blot分析表明Bacmid-CE2t在Sf 9细胞表达了HCV C-E2蛋白,并能利用细胞内蛋白酶将其裂解为单独的C蛋白和截短的E2蛋白.纯化后的蛋白能分别与HCV C蛋白、E2蛋白单抗以及慢性丙型肝炎患者血清反应.结论:HCV核心蛋白和截短的E2蛋白在昆虫细胞中成功表达并具有抗原性.     

HIV Tat蛋白与单核细胞表达辅助受体CCR5和感染HIV病毒相互关系的研究

目的:研究HIV Tat蛋白对单核细胞表达HIV辅助受体CCR5的影响,并观察Tat蛋白对单核细胞感染嗜单核细胞HIVBa-L病毒的影响.方法:以流式细胞仪方法测定单核细胞表面表达的CCR5,单核细胞表达分泌的HIV gag p24蛋白由ELISA方法检测.结果:HIV Tat蛋白能增加单核细胞表达CCR5,此作用能被多克隆Tat蛋白抗体所抑制;同时HIV Tat蛋白能明显增加嗜单核细胞HIV病毒(HIVBa-L)感染单核细胞,表现为HIV gag p24蛋白表达明显增加.结论:HIV Tat蛋白增加单核细胞表面CCR5受体的表达,并增加HIVBa-L感染单核细胞,表明HIV Tat蛋白在HIV感染和发病中起着十分重要的作用.     

hTRIP 15对甲状腺激素受体功能的影响

目的确立人甲状腺激素受体相互作用蛋白15(hTRIP 15) 对甲状腺激素受体(TR) 功能的影响.方法应用融合蛋白、蛋白体外翻译及谷胱苷肽S转移酶"拉下"(GST pulldown)试验研究蛋白-蛋白的相互作用,凝胶阻滞(gel-shift)试验检测蛋白-DNA的结合活性.结果经大肠杆菌表达hTRIP 15融合蛋白或体外翻译TRα所显示的分子量与预测大小相吻合.hTRIP 15及hTRIP 15-N末端均可与TRα相互作用; hTRIP 15抑制TR与TR反应元件(TRE)结合,且增加hTRIP 15剂量时更明显.结论提示hTRIP 15作为共抑制因子调节TR对靶基因的转录,hTRIP 15-N端是TR结合功能域,而C端可能为调节功能域.     

芳香烃受体及其核转运蛋白融合表达载体的构建与序列鉴定

目的:为用基因工程的方法人工表达芳香烃受体(AhR)及芳香烃受体核转运蛋白(ARNT),构建了融合蛋白的表达载体。方法:抽提C57BL/6J小鼠肝脏总RNA后采用RT-PCR的方法扩增得到芳香烃受体及其核转运蛋白的全长序列。在DNA测序确定其正确性之后,连入表达载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄青霉素筛选阳性克隆,提取质粒进行酶切分析。结果:成功构建了芳香烃受体及其核转运蛋白的重组表达载体。结论:载体构建成功是基因工程制备芳香烃受体及其核转运蛋白的前提,并为进行二恶英毒性机制及生物学检测方法的研究奠定了基础。     

双向电泳分析CCR5对二氢叶酸还原酶表达的抑制作用

目的:采用双向电泳为基础的蛋白质组学的研究手段,发现趋化因子受体5被配体激活后的功能相关蛋白质.方法:构建稳定表达CCR5的HEK-293细胞株.用RANTES刺激12 h后,用双向电泳方法进行分析.在以PDQuest图像分析软件进行分析后,对表达有差异的蛋白质进行MOLDI-TOF MS/MS质谱鉴定,并对鉴定的蛋白作RT-PCR初步分析.结果:流式细胞仪检测结果表明HEK-293细胞稳定表达CCR5,在受RANTES刺激后作双向电泳分析并经质谱鉴定后,发现二氢叶酸还原酶表达降低,与RT-PCR检测结果相一致.结论:经蛋白质学组方法分析,发现CCR5被其配体RANTES激活后抑制了二氢叶酸还原酶的表达.     

G蛋白β、γ亚基对M2受体的磷酸化的影响

目的：探讨G蛋白β、γ亚基在调节G蛋白偶联受体激酶活性的重要作用和G蛋白β、γ亚基影响M2受体磷酸化新的作用机制。方法：利用四个柱层析分离G蛋白α亚基与G蛋白β、γ亚基;将纯化的G蛋白β、γ亚基、GRK-2,[γ-P^32]标记的ATP与mAChR2,共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果：G蛋白β、γ亚基在没有激动剂存在的情况下明显增强M2受体的磷酸化。氨甲酰胆碱明显增强M2受体的磷酸化,阿托品或肝素（GRK2抑制剂）完全阻断M2受体的磷酸化。M2受体的磷酸化是依赖激活剂如氨甲酰胆碱作用发生的,这种依赖关系呈明显的剂量关系。结论：G蛋白β、γ亚基是通过上调GRK2活性增强M2受体的磷酸化的。说明Gβγ同Gα一样均可引起效应蛋白的激活,在细胞信号转导中起同样重要作用,共同介导一系列的生物学效应。     

鞘内注射代谢性谷氨酸受体亚型5拮抗剂对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓水平星形胶质细胞活化的影响

目的 探讨代谢性谷氨酸受体亚型5(mGluR5)拈抗剂MTEP的抗癌痛作用及其机制.方法 C3H/HeNCrlVr雄性小鼠60只,随机分为:(1)正常组:正常饲养21d;(2)MTEP+Tumor组:癌痛组从第14d开始鞘内注射MTEP150nmol,1次/d,共7次;(3)生理盐水+Tumor组:以等体积的生理盐水代替MTEP;(4)MTEP+Sham组:用等剂量MTEP给予假手术组;(5)生理盐水+Sham组:用等体积的生理盐水给予假手术组.每组12只小鼠.用热辐射刺激仪测定缩足潜伏期(PWTL).各组小鼠均在第21d行为学测试后取脊髓标本,分别应用Real-time PCR和western blot检测胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA及蛋白的表达.结果 各组小鼠基础PWTL差异无统计学意义(P＞0.05).在术后14d,与正常组相比,假手术组PWTL差异无统计学意义(P＞0.05),而癌痛组PWTL明显降低(P＜0.05).在术后21 d,和正常组相比,MTEP+Sham组、生理盐水+ShaT组PWTL、脊髓GFAP表达差异均无统计学意义(P＞0.05);生理盐水+Tumor组PWTL[(6.18±1.29)s]明显低于正常组[(15.91±1.65)s]、生理盐水+Sham组[(16.57±1.86)s]和MTEP+Sham组[(17.05±2.43)s](P＜0.05),脊髓水平GFAP表达则高于上述3组;MTEP+Tumor组PWTL[(9.39±1.94)s]高于生理盐水+Tumor组,脊髓水平GFAP表达则低于生理盐水+Tumor组(P＜0.05).结论 鞘内注射MTEP具有抗癌痛作用,抑制脊髓水平星形胶质细胞活化可能是其机制之一.

Abstract：

Objective To investigate effects of metabotropic glutamate receptor subtype 5 (mGluR5) antagonist MTEP on the nociceptive behavior and the expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) in spinal cord associated with bone cancer pain. Methods C3H/HeNCrlVr 60 male mice were randomly divided into 5 groups: ( 1 ) normal control group: the mice were given food and water ad libitum; ( 2 ) MTEP + Tumor group: the mice were treated by intrathecal gdministration ( once daily on the days 14 ～20 after inoculation of tumor cells)with MTEP (150 nmol); (3) physiological saline + Tumor group:the tumor mice were treated with the same volume of physiological saline; (4) MTEP + Sham group: the sham mice were treated with the same dose of MTEP;(5) physiological saline + Sham group: the sham mice were treated with the same volume of physiological saline.the mice pain behaviors were assessed with the paw withdrawal thermal latency (PWTL) at the corresponding time points, then the mice were killed and the samples of spinal cord were used to real-time PCR and western blot detection of GFAP mRNA and protein expression. Results The basic values of PWTL had no significant differences among all groups (P＜0.05). At day 14 after operation,no significant difference was found in the PWTL value between normal control group and the sham operation group. But in tumor group, the PWTL value was significantly lower than in the normal control group (P＜ 0.05 ). At day 21 after operation,the PWTL and the level of GFAP expression in the spinal cord had no significant differences among normal control group, MTEP + Sham group and physiological saline + Sham group (P ＞ 0.05 ); the PWTL ( (6. 18 ± 1.29 ) s) in physiological saline + Tumor group was significantly lower than in normal control group ( ( 15.91 ± 1.65 )s), physiological saline + Sham group ( ( 16.57 ± 1.86) s) and MTEP + Sham group ( ( 17.05 ± 2.43 ) s) (P ＜ 0.05 ), but the level of GFAP expression was higher than in the above three groups. In MTEP +Tumor group ,the PWTL (9.39 ± 1.94s) was higher than in physiological saline + Tumor group, and the level of GFAP expression was lower than in physiological saline +Tumor group (P ＜ 0.05 ). Conclusion Inhibiting spinal activation of astrocytes may be one of the MTEP anticancer pain mechanisms.     

p16、Rb和rasp21蛋白在子宫内膜癌组织中的表达

①目的 研究p16、Rb和rasp21蛋白在子宫内膜癌中的表达及与雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）表达的关系,探讨子宫内膜癌发生、发展过程中存在着的多因素、多步骤、多阶段的癌变机制。②方法 应用免疫组化SABC法检测21例正常子宫内膜、19例子宫内膜上皮内瘤样病变（EIN）及45例子宫内膜癌组织中p16、Rb和rasp21蛋白表达,同时检测子宫内膜癌组织中ER和PR的表达情况。③结果 子宫内膜癌中p16和Rb蛋白的阳性表达率低于正常子宫内膜（χ^2=9．03、4．37,P〈0．01、0．05）,正常子宫内膜中rasp21蛋白阳性表达率低于子宫内膜癌和EIN（χ^2=10．99、3．87．P〈0．01、0．05）,其表达与子宫内膜癌的临床分期、肌层浸润及组织分级有关（P=0．015,χ^2=7．29、6．65,P〈0．01）。子宫内膜癌组织中,p16与Rb蛋白的表达呈正相关（r=0．42,P〈0．01）,rasp21蛋白与ER、PR的表达呈负相关（r=0．46、-0．42,P〈0．01）。④结论 p16、Rb和rasp21基因均参与子宫内膜癌的发生,rasp21基因的异常表达是子宫内膜癌发生的早期事件,并与ER和PR有协同作用,为子宫内膜癌恶性进展和预后的不利因素。     

瘦素抑制冈田酸诱导的SH-SY5Y细胞Cdk5的表达

目的探讨瘦素（1eptin）与阿尔茨海默病的联系。方法将人神经纤维母细胞瘤细胞系（SH—SY5Y）分为3组：对照组、冈田酸（okadaic acid,OA）损伤模型组（40nmol／LOA诱导12h）和Leptin处理组。用OA诱导SH—SY5Y,建立阿尔茨海默病细胞模型。Leptin处理组是在模型组基础上,给予外源性leptin（0．4仙g／m1）处理6h,用WesternBlot检测细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）和β-actin蛋白表达水平。瘦素受体（ObR）和Cdk5的共定位情况用双重免疫荧光染色检测。结果模型诱导成功后,Westel33 Blot显示Cdk5表达明显升高（p〈0．01）;给予leptin后,Cdk5蛋白表达显著降低（p〈0．01）。双染法免疫荧光实验表明,SH—SY5Y细胞中ObR和Cdk5蛋白均主要在细胞质中表达,并且红色和绿色标记重叠为橙色荧光,可认为两种蛋白共定位,提示ObR和Cdk5之间可能存在相互作用。结论Leptin能够在体外降低阿尔茨海默病相关的Cdk5表达,为其治疗提供了新靶点。     

人淋巴组织中ACTH-R及5-HT受体1A亚型表达

①目的　了解人淋巴组织中促肾上腺皮质激素受体 (ACTH R)及 5 羟色胺受体 1A亚型 (5 HT1A R)的表达情况 ,寻求神经免疫、内分泌网络之间功能双向调节的形态学依据。②方法　应用免疫组织化学SP及Pic TureTM法 ,检测ACTH R、5 HT1A R在 80例人体淋巴结、脾脏及肠道淋巴组织中的表达。③结果　ACTH R、5 HT1A R在淋巴组织中表达的总阳性率为 82 .5 %和 86 .3% ,二者在淋巴结、脾脏及肠道淋巴组织中表达差异无显著性 (χ2 =0 .5 80～ 1 .790 ,P >0 .0 5 )。④结论　ACTH R、5 HT1A R为神经免疫、内分泌网络共有的生物学语言媒介 ,内分泌源性的ACTH、神经源性的 5 HT与免疫源性的ACTH、5 HT都可以通过免疫细胞膜上的ACTH R、5 HT1A R发挥对免疫系统的调节作用。     

胃癌p53蛋白表达与临床病理因素及雌孕激素受体表达的关系

应用免疫组织化学S－P法检测63例胃癌组织中抑癌基因p53蛋白表达，分析其与雌孕激素受体表达及临床病理因素间的关系．结果显示，胃癌中p53蛋白阳性率为36．5％（23／63），其中呈明显阳性（＋＋～＋＋＋）者为19．1％（12／63）。在各组织学类型癌中，高分化腺癌（包括乳头状腺癌）阳性率最低，为24％（6／25），印戒细胞癌阳性率最高达75％（6／8）。p53蛋白表达与胃癌浸润深度及淋巴结转移状态呈正相关，但与病人性别、年龄、肿瘤部位、大小及大体类型等因素无关。p53蛋白表达阳性者，雌激素受体及孕激素受体阳性率较低．呈负相关趋势，但无统计学意义。     

靶向趋化因子受体5短肽的筛选及活性初步分析

目的筛选人趋化因子受体5(CCR5)的亲和短肽。方法采用噬菌体十二肽库对稳定表达CCR5的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(CHO/CCR5)进行筛选,得到30个阳性克隆,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)分析,发现其中17个克隆含有AFDWTFVPSLIL基序。结果含有该序列的噬菌体和合成肽AFDWTFVPSLIL能阻止单克隆抗体2D7与CHO/CCR5细胞的结合;并能竞争性地抑制RANTES对CHO/CCR5细胞的结合。结论小分子肽AFDWTFVPSLIL能特异性地结合CCR5,并有可能成为CCR5的拮抗剂。     

孤束核神经元α肾上腺素能受体与5-羟色胺能受体的关系

在30个大鼠脑薄片上,共观察了5-HT与NE对57个孤束核神经元单位放电的作用。其中47个对5-HT与NE均有反应,而其中的8个用低钙高镁阻断突触传递后再给5-HT与NE仍有5例有该反应。另外5例对5-HT与NE单独起反应或均无反应的神经元用上述方法阻断突触传递后,有3例对5-HT与NE均有反应,提示在孤束核神经元上自身同时存在着5-HT与α肾上腺素受体。并有少数受其他神经元的抑制。在另外的5个NE与5-HT均兴奋的神经元,同时给NE与5-HT。其中3个转变为抑制;3个对单独用NE与5-HT抑制的神经元合用后,2个变为兴奋。提示在某些孤束核神经元上这两种受体可能存在相互抑制作用。     

IGF2BP2/m6A/ITGA5信号轴调控肾透明细胞增殖和迁移

目的 探讨N6-甲基腺嘌呤(m6A)“识别蛋白”胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的潜在作用。方法 通过分析癌症基因数据库(TCGA)、采用qRT-PCR法和Western blotting法检测IGF2BP2在肾癌中的表达水平,甲基化RNA免疫沉淀qPCR结合生物信息学鉴定整合素α5(ITGA5)mRNA的m6A修饰。采用基因敲低/过表达技术,采用qRT-PCR和Western blotting法检测IGF2BP2对ITGA5表达调控的作用。通过功能性获得和缺失实验确定IGF2BP2和ITGA5对肾癌细胞增殖和迁移的调控。结果 TCGA肾癌数据库显示,IGF2BP2在肾癌组织中高表达。同时高表达的IGF2BP2不利于患者的整体生存期(HR=1.6,P=0.005)和无病生存期(HR=1.9,P=0.014)。qRT-PCR法以及Western blotting法检测结果显示,IGF2BP2在肾癌组织中高表达。Western blotting检测结果显示,正常肾上皮细胞中IGF2BP2的表达低于其他几种肾癌细胞系。基因集合富集分析(G...     

不同复性方法制备的rhBMP-2m诱导异位成骨活性比较

目的:用三种不同方法复性重组人骨形成蛋白2成熟肽(rhBMP-2m),比较其异位诱骨活性.方法:将工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,裂菌收集包涵体后经离子交换色谱分离纯化.纯化后的rhBMP-2m用三种不同方法复性:①对pH 4.8复性液透析复性;②对pH 9.0复性液稀释复性;③对pH 6.5复性液透析复性.不加任何载体,1 mg复性后rhBMP-2m直接植入小鼠肌肉观察诱骨生成.结果:得到纯度为98%的rhBMP-2m.①pH 4.8透析复性后蛋白可溶.经过滤除菌,可溶性rhBMP-2m没有损失.冻干后植入肌袋,2 wk后诱导生成软骨,4 wk诱导生成骨小梁.②pH 9.0稀释复性后虽然肉眼观察蛋白似为可溶,但经除菌膜过滤rhBMP-2m损失90%以上.冻干后植入肌袋,1 wk诱导生成软骨,2 wk诱导软骨内成骨,3 wk出现骨小梁.③pH 6.5透析复性后蛋白不可溶,植入肌袋,2 wk诱导生成骨小梁,4 wk后出现骨髓样细胞.结论:相比酸性和碱性条件,中性条件下复性的rhBMP-2m的诱骨活性最好,但酸性条件下复性的rhBMP-2m溶解度好.