健脾益肾方对5／6肾切除大鼠肾组织Lox-1mRNA表达的影响

目的：探讨健脾益肾方治疗CRF及其抗肾纤维化的作用机制，为临床应用提供实验依据。方法：将Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组（N组）、模型组（M组）、低剂量治疗组（L组）、高剂量治疗组（H组），除N组外均行5／6肾切除手术制作CRF动物模型。于造模后一周开始干预，干预8周后取血清及肾组织标本，全自动生化分析仪检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）；RT-PCR法检测肾组织血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（Lox-1）mRNA的表达。结果：各组大鼠肾脏均有Lox-1 mRNA表达，N组有较弱表达，M组、L组及H组大鼠肾组织表达较N组均明显增加（M组及L组-N组：P〈0．01，H组-N组：P〈0．05）；L组及H组表达较M组明显减少（P〈0．01）；H组表达较L组均明显减少（P〈0．05）。结论：健脾益肾方可以降低CRF大鼠血清BUN和Cr，抑制肾脏组织Lox-1 mRNA的表达，表明健脾益肾方是治疗CRF的有效方剂，其机理可能与抑制大鼠肾组织内Lox-1等细胞因子的表达，从而抑制参与肾纤维化的细胞增殖和转分化，延缓肾纤维化的进展，达到治疗和延缓CRF进展的目的。     

基于TGF-β/Smads信号通路研究益肾降浊方对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的影响

目的通过观察益肾降浊方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠TGF-β/Smads信号通路的影响,探究本方治疗CRF的疗效机理。方法将SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、尿毒清组、益肾降浊方组。采用5/6肾切除方法制造CRF大鼠模型,假手术组12只行双肾被膜剥离。造模后4周开始给药干预,给药8周后取血清及残余肾组织,检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);光镜观察残余肾组织病理改变;用免疫组化法检测肾组织中Smad3、Smad7、TGF-β1的表达。结果与正常组相比,假手术组TGF-β1、Smad3、Smad7的表达无明显差异(P0.05),模型组、尿毒清组、益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显升高,Smad7的表达明显降低(P0.05);与模型组相比,尿毒清组、益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显降低,Smad7的表达明显升高(P0.05);与尿毒清组相比,益肾降浊方组TGF-β1、Smad3的表达明显降低,Smad7的表达明显升高(P0.05);光镜示经益肾降浊方治疗后的肾组织纤维化明显减轻。结论益肾降浊方能够降低CRF大鼠血清Scr和BUN水平,延缓肾间质纤维化进展,其作用机制可能与抑制TGF-β1、Smad3的表达,提高Smad7的表达有关。     

益肾降浊方防治慢性肾衰肾组织纤维化的机理研究

目的:观察益肾降浊方对5/6肾切除慢性肾衰(CRF)大鼠肾组织TGF-β_1、BMP-7及体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞(MC)和肾间质成纤维细胞(FC)增殖情况,探讨益肾降浊方治疗慢性肾功能衰竭的机理。方法:采用动物模型和细胞培养的方法。清洁级7周龄雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、假手术组、CRF模型组、CRF对照组、CRF治疗组。分别进行手术造模并予不同药物治疗后,免疫组化法观察肾组织TGF-β_1、BMP-7;体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞(GMC)、肾间质成纤维细胞(RIF),制备各组含药血清,细胞给药后MTT法测定细胞增殖情况。结果:益肾降浊方可降低CRF大鼠血清BUN、SCr(P0.05),降低残余肾组织中TGF-β_1而提高BMP-7(P0.05);肾组织HE染色结果示肾组织纤维化减轻;益肾降浊方含药血清能抑制体外培养SD大鼠GMC和RIF的增殖(P0.05)。结论:益肾降浊方能够有效地减缓慢性肾衰肾组织纤维化发展,是防治慢性肾衰的有效方药。     

健脾益肾方对慢性肾功能衰竭大鼠脂调素及其基因表达的影响

目的:本文研究健脾益肾方对慢性肾功能衰竭大鼠血清Leptin水平和ob基因表达的影响,从mRNA水平探讨健脾益肾方改善慢性肾功能衰竭营养不良的作用机理.方法:采用ELISA法测定血清Leptin水平,采用Northern blot检测大鼠腹部脂肪ob mRNA表达.结果:慢性肾功能衰竭大鼠血清Leptin水平明显高于正常大鼠(P＜0.01);ob mRNA表达均较正常组减弱(P＜0.01),健脾益肾方各剂量组均能明显降低慢性肾功能衰竭大鼠血清Leptin水平和ob mRNA表达,与模型组比较有显著差异(P＜0.01);健脾益肾方高、低剂量之间无差异(P＞0.05).结论:健脾益肾方能明显降低慢性肾功能衰竭大鼠血清Leptin水平和ob mRNA表达,可能为其改善慢性肾功能衰竭营养不良的作用机制之一.     

益肾降浊汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的：研究益肾降浊汤对慢性肾功能衰竭（CRF）肾间质纤维化的疗效与机理。方法：将66只雌雄各半的SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、病理模型组、依那普利对照组、大黄对照组和益肾降浊汤治疗组。采用5/6肾切除大鼠CRF模型进行造模,并给予不同的药物治疗。观察各组大鼠的血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿渗透压（Urine osmolality）,观察残余肾组织常规病理,并用免疫组化法检测骨形成蛋白-7（BMP-7）及转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果：依那普利对照组、大黄对照组和益肾降浊汤治疗组肾间质纤维化程度显著轻于病理模型组,而其中益肾降浊汤治疗组病变较依那普利对照组和大黄对照组轻,依那普利对照组和大黄对照组相比无明显差异。Urine os-molality减少的程度、Scr、BUN的结果同肾间质纤维化变化的程度一致（P〈0.01及P〈0.05）。BMP-7在正常组和假手术组中的表达最多,在各治疗组中又以益肾降浊汤治疗组表达最多。TGF-β1在病理模型组表达最多,正常组中表达很少,在各治疗组中益肾降浊汤治疗组表达最少。结论：益肾降浊汤可以延缓CRF大鼠病变的进展,其作用强于单味大黄及依那普利。推测益肾降浊汤具有延缓CRF大鼠肾间质纤维化,降低残余肾脏受损程度的作用。     

益肾降浊方对慢性肾衰竭大鼠肾组织超微结构影响的实验研究

目的:探讨益肾降浊方治疗慢性肾衰竭(CRF)模型大鼠的疗效机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、尿毒清颗粒对照组、益肾降浊方观察组,每组各12只。模型组、尿毒清颗粒对照组、益肾降浊方观察组施行5/6肾切除手术建立CRF大鼠模型。造模成功4周后予药物干预8周。检测各组大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,血清β2微球蛋白(β2-MG)、尿β2-MG、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖甘酶(NAG)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的含量;光镜观察肾组织病理改变,电镜观察肾组织超微结构形态变化。结果:空白组与假手术组相比,各项指标差异均无统计学意义(P0.05);与空白组相比,模型组血清SOD明显减少,其他指标明显升高(P0.01);与模型组比较,益肾降浊方观察组能明显降低血Scr、BUN水平,血及尿β2-MG、尿RBP、血MDA、TNF-a含量,升高SOD水平,且效果优于尿毒清颗粒对照组(P0.01)。光镜下益肾降浊方观察组及尿毒清颗粒对照组较模型组肾组织肾间质纤维化明显减轻。结论:益肾降浊方能明显改善CRF大鼠肾功能,改善肾间质纤维化,其机制可能与升高血清SOD含量,降低血清MDA、TNF-a的水平有关。     

扶正活血方对5/6肾切除大鼠肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨扶正活血方对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织纤维连接蛋白(Fn)和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA表达的影响.方法:采用5/6肾切除制作大鼠CRF模型.模型制作成功后随机将模型大鼠分为模型组、扶正活血方组、黄芪组、丹参组、依那普利组,并与正常组对照.治疗2个月后,观察各组CRF大鼠肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达情况.结果:模型组血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量(24hpro)明显高于正常组,肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达明显强于正常组.经过扶正活血方治疗后,肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达明显减弱,蛋白尿水平明显降低.结论:扶正活血方可改善CRF大鼠肾功能,延缓CRF进展,其机制可能与降低CRF大鼠肾组织Fn和TGF-β1 mRNA表达有关.     

益肾化瘀方对肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶1及其抑制剂表达的影响

目的探讨益肾化瘀方治疗肾间质纤维化的可能作用机制。方法将126只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组及益肾化瘀方高、中、低剂量组,每组21只。除假手术组外各组采用单侧输尿管结扎法制备肾间质纤维化模型,于造模后次日假手术组、模型组予生理盐水20 ml/(kg·d),益肾化瘀方高、中、低各剂量组分别予益肾化瘀方浓缩液32、16、8 g/(kg·d),缬沙坦组予缬沙坦胶囊溶液13.3 mg/(kg·d),每天灌胃1次,共给药28天。分别于术后第7、14、28天(每个时间点取材7只)光镜下观察肾间质病理改变并进行肾间质纤维化评分,检测大鼠肾组织中基质金属蛋白酶1(MMP-1)mRNA、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)mRNA的表达。结果光镜下HE和Masson染色显示,模型组大鼠造模7天后各组大鼠即出现肾间质水肿,间质内炎症细胞呈灶性浸润,至28天大量肾小管萎缩或消失,纤维化程度呈进展性加重。各治疗组肾间质炎细胞浸润数量减少,纤维化程度较模型组均有不同程度的减轻,益肾化瘀方高剂量组与缬沙坦组的病理改变相当。与假手术组同时间点比较,其余各组大鼠在第14、28天时肾间质纤维化评分及肾组织中MMP-1mRNA、TIMP-1mRNA表达均明显升高(P0.05或P0.01);与模型组同时间点比较,益肾化瘀方高、中、低剂量组和缬沙坦组大鼠在第14、28天时肾间质纤维化评分明显降低,益肾化瘀方高剂量组在第28天时MMP-1mRNA表达继续增加,而在第7、14、28天时TIMP-1mRNA表达明显降低(P0.05或P0.01)。结论益肾化瘀方可能通过抑制肾组织TIMP-1的表达,纠正MMP-1/TIMP-1失衡,从而显示出拮抗肾间质纤维化的作用。     

益肾活血汤抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用及机制的研究

目的 探讨益肾活血汤对大鼠肾间质纤维化的拮抗作用及机制.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾活血汤治疗组、贝那普利治疗组.制备单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型,在术后第21日处死大鼠留取梗阻侧肾组织观察肾间质病理变化,并用免疫组化法测定肾组织中纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）、转化生长因子-β（TGF-β）及结缔组织生长因子（CTGF）的表达,处死前留取24 h尿测定尿蛋白,心腔穿刺取血测定血清尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）.结果 益肾活血汤组24h尿蛋白、BUN、Scr水平、肾间质纤维化程度及PAI-1、TGF-β、CTGF的表达量均明显低于模型组（P＜0.05）,但与贝那普利组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 益肾活血汤对肾间质纤维化具有拮抗作用,其机制可能为通过减少PAI-1、TGF-β、CTGF等致纤维化因子在肾组织中的过度表达来抑制肾间质纤维化.     

壮肾排毒方抗肾纤维化的机制研究

目的：探讨壮肾排毒方抗肾纤维化的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法：48只雄性wistar大鼠随机分为正常组、模型组、壮肾排毒方组、福辛普利组各12R。除正常组外其余各组均行5／6肾切除手术制作慢性肾衰竭（CRF）动物模型。于造模第2次手术后1周开始干预,干预12周后取血清及肾组织标本,全自动生化分析仪检测血清尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）。免疫组织化学方法检测肾组织血肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达。结果：模型组、壮肾排毒方组、福辛普利组大鼠血清BUN、Scr肾脏组织TNF-α、TGF-β1与正常组比较有显著性差异（P〈0．01）;模型组血清BUN、Scr及肾脏组织TNF-α、TGF-β1与壮肾排毒方组、福辛普利组比较有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：壮肾排毒方是治疗CKF的有效方剂,其机理可能与抑制大鼠肾组织内TNF-α及TGF-β1的表达有关,可抑制参与肾纤维化的细胞增殖和转分化,延缓肾纤维化的进展,从而达到治疗CRF的目的。