钼酸氨对人肝癌和结肠癌细胞增殖和周期的影响

目的 观察钼酸氨对体外培养人肝癌和结肠癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 采用不同浓度钼酸氨（0.101、0.202、0.404 mmol·L-1）分别对人肝癌细胞株HepG2和结肠癌细胞株HCT-116作用 24、48、72 h后,利用显微镜观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 随着钼酸氨浓度的增加和作用时间的延长,其对HepG2细胞和HCT-116细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用愈加明显,存在着显著的量-效和时-效关系,且低浓度（0.101 mmol·L-1）HepG2细胞受抑制显著于HCT-116细胞,高浓度（0.404 mmol·L-1）则相反,差异有统计学意义(P<0.05);钼酸氨不仅阻止HCT-116细胞由G1/G0期向S期移行,而且阻止HCT-116细胞由G2/M期向G1/G0期移行,将细胞阻滞在G1/G0期和G2/M期,而对HepG2细胞仅将细胞特异性地阻滞在G1/G0期。钼酸氨可促进HepG2细胞和HCT-116细胞凋亡,并且细胞调亡和坏死率随钼酸氨浓度增加和作用时间延长而逐渐升高。结论 钼酸氨对结肠癌和肝癌细胞均有增殖抑制、诱导凋亡和改变细胞周期作用,且高浓度钼酸氨对结肠癌细胞作用强于肝癌细胞,钼酸盐具有抗癌活性。     

染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响.方法:采用MTT比色法测定染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测染料木黄酮对HT-29细胞周期及凋亡的影响.结果:染料木黄酮能够显著抑制HT-29细胞的增殖,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为23μmol/L;染料木黄酮能够引起HT-29细胞发生G0/G1期阻滞,并能够诱导HT-29细胞发生凋亡;western结果显示染料木黄酮作用后Bax表达增强,而Bcl-2表达减弱.结论:染料木黄酮能够诱导人结肠癌HT-29细胞发生周期阻滞和凋亡,从而导致HT-29细胞增殖能力下降.     

DNA甲基转移酶抑制剂对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的体外研究

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂SGI-1027对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 取对数生长期LoVo细胞,实验组加入终浓度分别为0.1、1、5、10 μmol／L SGI-1027的培养液,对照组用含10％胎牛血清的RPMI 1640 培养基同步培养。MTT法检测SGI-1027作用于LoVo细胞24、48、72 h的增殖抑制率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;SGI-1027处理后每个浓度收集细胞1×106个,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）／碘化丙啶（PI）双染或PI单染流式细胞术分别检测SGI-1027处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况;Western blotting检测SGI-1027对PI3K／Akt通路的影响。 结果 倒置相差显微镜观察显示,随SGI-1027浓度和作用时间的增加,LoVo细胞的凋亡形态学改变更为显著。除0.1 μmol／L SGI-1027处理24 h后的LoVo细胞增殖抑制率与对照组无差异外,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,SGI-1027对LoVo细胞的增殖抑制作用不断增强。与对照组比较,SGI-1027（0.1～10 μmol／L）处理LoVo细胞24、48 h的凋亡率均升高,且各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,1～10 μmol／L SGI-1027处理后G0／G1期细胞比例及PTEN水平均高于对照组,S期和G2／M期细胞比例及Akt水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 SGI-1027可抑制LoVo细胞的增殖并诱导细胞凋亡及G0／G1期阻滞,可能与其抑制PI3K／Akt通路激活有关,且SGI-1027作用的时间和浓度均对LoVo 细胞恶性行为有影响。     

DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。     

丹皮酚对人结肠癌 LoVo细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨丹皮酚对人结肠癌LoVo细胞生长及凋亡的作用。方法用丹皮酚作用于体外培养的人结肠癌LoVo细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法,分析其对LoVo细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,光镜下观察细胞形态。结果丹皮酚在(7.81～250)mg/L质量浓度范围内呈时间、剂量依赖方式抑制结肠癌LoVo细胞生长(P<0.05或P<0.01),丹皮酚在(15.63～250)mg/L质量浓度范围内作用48h后,光镜下可见LoVo细胞呈典型的凋亡形态学改变;流式细胞仪检测出现凋亡峰,其测得的细胞凋亡率与对照组比较,有非常显著性差异(P<0.01)。结论丹皮酚对人结肠癌LoVo细胞生长具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

siRNA沉默雄激素受体对人结肠癌HCT-8细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:利用小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌HCT-8细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达,观察AR敲除对癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,初步探讨AR在结肠癌中的功能.方法:利用qRT-PCR和Western blot检测HCT-8细胞及正常人肠上皮细胞中AR的表达;siRNA转染HCT-8细胞沉默AR表达,利用qRT-PCR和Western blot检测转染效率;流式细胞术检测沉默AR后对HCT-8细胞周期的影响;CCK-8法检测沉默AR后对HCT-8细胞增殖的影响;Transwell实验检测沉默AR后对HCT-8细胞迁移及侵袭的影响.结果:AR在人结肠癌HCT-8细胞中高表达;siRNA能有效沉默HCT-8细胞中AR的mRNA及蛋白的表达.与对照组相比,沉默AR表达能够明显抑制HCT-8细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结论:AR在人结肠癌HCT-8中高表达并能够促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.     

TMIGD1在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测TMIGD1在结肠癌及其相应的癌旁正常结肠上皮组织中的表达情况及过表达TMIGD1对结肠癌细胞生物学行为的影响,并探讨潜在分子机制.方法 通过生物信息学数据库和免疫组织化学染色检测TMIGD1在结肠癌与癌旁正常组织中的表达情况,并分析其与不同临床病理因素之间的关系.对结肠癌细胞系SW480通过慢病毒包装系统使...     

鬼臼乙叉苷对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：检测鬼臼乙叉苷（ＶＰ－１６）对人结肠癌（ＨＩＣ／Ｓ）细胞增殖和增亡的影响,并探讨其可能作用机理。方法：应用ＭＴＴ比色法检测ＶＰ－１６对体外培养ＨＩＣ／Ｓ细胞增殖增殖的抑制作用,同时用ＤＮＡ断片法观测ＶＰ－１６对ＨＩＣ／Ｓ细胞凋亡的影响。应用Ｓ－Ｐ免疫组化技术对已报道的ＨＩＣ／Ｓ细胞的Ｒｂ蛋白被证实,并采用Ｗｃｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法对ＨＩＣ／Ｓ细胞的Ｒｂ蛋白作半定量分析。结果 ＶＰ－１６（０．     

抑制EGFR、IGFR-1β活性对结肠癌细胞周期和凋亡的影响

目的:采用EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼与IGFR-1酪氨酸激酶抑制剂AG1024单独或联合作用于结肠癌细胞,探讨抑制EGFR、IGFR-1β活性对细胞周期和凋亡的影响.方法:以流式细胞术检测结肠癌细胞的细胞周期和凋亡,以AnnexinⅤ-FITC/PI双标检测细胞凋亡率.结果:与对照组比较,Lovo细胞G1期阻滞在吉非替尼组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);AG1024组与对照组比较无差异(P＞0.05).HT29细胞G1期阻滞在联合用药组较显著(P＜0.05),吉非替尼组和AG1024组均不显著(P＞0.05).HCT116细胞G1期阻滞在AG1024组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);吉非替尼组与对照组比较无差异(P＞0.05).Lovo细胞凋亡率增加在吉非替尼组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);AG1024组的凋亡率无明显增加.HT29细胞凋亡率增加在联合用药组较显著(P＜0.05),吉非替尼组和AG1024组均不明显.HCT116细胞凋亡率增加在AG1024组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);吉非替尼组的凋亡率无明显增加.结论:抑制Lovo细胞的EGFR活性以及抑制HCT116细胞的IGFR-1β活性可分别引起细胞G1期阻滞及诱导凋亡增加,在HT29细胞中产生这种抑制效应则需要同时抑制EGFR、IGFR-1β的活性.     

过表达Numb基因对人膀胱癌5637细胞周期和增殖的影响

目的：：探讨 Numb 基因对人膀胱癌细胞周期和增殖能力的影响及相关机制。方法：选取人膀胱癌细胞5637为研究对象,采用 Numb-ORF 表达质粒转染细胞为实验组,设置阴性对照和空白对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹技术检测各组中 Numb 基因和细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）的表达;采用流式细胞技术检测各组的细胞周期;采用酶标仪检测细胞在490nm 的吸光度值,评价各组细胞的增殖活力。结果：实验组 Numb的△CT 值为1.58±0.41,阴性对照组为5.66±0.53,空白对照组为5.81±0.47,差异有统计学意义（F ＝77.39, P ＝0.00）;实验组 Cyclin D1的△CT 值为4.92±0.73,阴性对照组为2.59±0.33,空白对照组为2.45±0.26,差异有统计学意义（F ＝11.70,P ＝0.01）。实验组中 G0／G1期细胞的比例（％）为49.76±7.07,明显高于阴性对照组的36.52±3.32和空白对照组的38.21±2.06,差异有统计学意义（F ＝7.17,P ＝0.03）。增殖实验中,实验组24 h 的吸光度值为0.35±0.08,明显低于阴性对照组0.52±0.06和空白对照组0.55±0.04（F ＝9.03,P ＝0.02）。结论：Numb 基因可以提高 G0／G1期细胞比例,抑制膀胱癌细胞增殖,其机制可能是通过抑制 Cyclin D1表达实现。     

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞周期的阻滞作用

[目的]探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞周期的阻滞作用及其分子机制.[方法]应用MTF法及细胞计数法测量HT-29细胞生长抑制,流式细胞术检测细胞时相分布,免疫细胞法测定p21、C-myc、Cyclin E表达.[结果]MTT法显示,不同浓度DADS作用HT-29细胞12、24、48h后,细胞生长抑制率及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加.流式细胞仪分析,30、60pmol/LL DADS阻滞HT29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而90、120μmol/L DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期.免疫细胞化学分析表明在细胞周期阻滞的同时有p21wafl蛋白表达上调,Cyclin E、C-myc蛋白表达下降.[结论]DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与细胞周期阻滞有关,DADS对HT-29细胞周期阻滞的分子机制可能与调节p21wafl、Cyclin E、C-myc表达相关.     

西达本胺对结肠癌LoVo细胞增殖抑制的体外研究

[目的]研究去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor,HDACi）西达本胺（Chi-damide,实验室编号：CS055）对结肠癌细胞株LoVo体外生物学特性的影响、诱导细胞凋亡的分子机制。[方法]MTT法观察CS055（2、4、8、16、32、64μmol/L）对LoVo增殖抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期阻滞,Westernblot检测p21、CDK4、caspase-3蛋白表达情况。[结果]CS055体外能明显抑制LoVo细胞的增殖,呈剂量、时间依赖性（P〈0.05）。CS055（16μmol/L、48h）诱导后,流式细胞仪检测示细胞被阻滞于G0/G1期,并且出现典型的亚二倍体（sub-G1）峰。CS055可明显提高p21、caspase-3蛋白的表达水平,下调CDK4蛋白的表达水平。[结论]CS055可通过诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡而发挥体外抗结肠癌LoVo细胞增殖作用,其作用机制可能涉及对p21、CDK4、caspase-3蛋白表达的调控。     

Survivin短发夹状RNA对结肠癌SW480细胞增殖和细胞周期的影响

[目的]构建survivin基因的短发夹状RNA（shRNA）表达质粒．检测它对结肠癌细胞增殖的影响。[方法]选用载体介导的RNAi技术，Westem blot检测SW480细胞转染后survivin水平的变化，流式细胞仪及MTT法检测细胞周期和细胞增殖的变化。[结果]Survivin短发夹状RNA可下调SW480细胞中survivin的表达，抑制率为60．68％，细胞周期分析显示将该细胞阻断在G2／M期，细胞增殖抑制：[结论]靶向survivin的shRNA可以降低survivin蛋白的表达，抑制结肠癌细胞的增殖。     

Survivin短发夹状RNA对结肠癌SW480细胞增殖和细胞周期的影响

[目的]构建survivin基因的短发夹状RNA（shRNA）表达质粒．检测它对结肠癌细胞增殖的影响。[方法]选用载体介导的RNAi技术，Westem blot检测SW480细胞转染后survivin水平的变化，流式细胞仪及MTT法检测细胞周期和细胞增殖的变化。[结果]Survivin短发夹状RNA可下调SW480细胞中survivin的表达，抑制率为60．68％，细胞周期分析显示将该细胞阻断在G2／M期，细胞增殖抑制：[结论]靶向survivin的shRNA可以降低survivin蛋白的表达，抑制结肠癌细胞的增殖。     

Effect of 5-Fluorouracil on Cell Cycle Regulatory Proteins in Human Colon Cancer Cell Line

We investigated the effects of 5-fluorouracil (5-FU) on cell cycle-regulating proteins in RPMI 4788 cells. 5-FU inhibited cell growth dose-dependently and this growth inhibition was accompanied with cell cycle accumulation in early S phase and increased expression of cyclin A. When cells were released from short-term treatment (3 or 24 h) with 5-FU, the cell cycle started to progress again and cyclin A protein levels decreased. Cyclin A-associated kinase activity assay showed that cyclin A-cyclin-dependent kinase (Cdk) 2 kinase activity was altered by 5-FU treatment concomitantly with the changes in cell cycle state seen in flow cytometric analysis. Furthermore, the elevation of cyclin A protein level by 5-FU treatment was observed in three other human cancer cell lines, DLD-1, H226Br and T.Tn. These results suggest that cyclin A protein levels in cancer cells are increased by 5-FU, and the cyclin A function and degradation mechanism remain normal.     

基因靶向抑制反义生存素对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

0引言生存素(survivin)基因在肿瘤特异性表达基因中,表达特异性列前4位[1]。其在膀胱癌诊断、治疗及判定预后等方面的研究日益深入[2]。我们应用survivin反义寡核苷酸和脂质体形成有效的复合物,观察其诱导膀胱癌细胞系T24凋亡的机制。     

Id1对结肠癌HT-29细胞VEGF表达及增殖的影响

目的探讨分化抑制因子１(inhibitor of differentiation-1,Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响及Id1在结肠癌细胞增殖中的作用。方法HT-29转染Id1表达质粒及Id-1干扰序列后,采用RT-PCR方法和Western blot法检测VEGF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.01),促进细胞的生长(P<0.01);Id1抑制后能显著下调VEGFmRNA和蛋白表达(P<0.01),减缓细胞的生长(P<0.01)。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1可通过正性调控VEGF影响结肠癌细胞增殖。     

长春新碱对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响

[目的]探讨长春新碱(VCR)对鼻咽癌CNE鄄2Z细胞增殖和周期的影响。[方法]MTT法检测增殖抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期。[结果]不同浓度的VCR分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(2.01±0.26)、(1.59±0.23)、(0.92±0.11)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mlVCR分别处理细胞6h、12h、24h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P<0.01)。[结论]VCR对CNE鄄2Z细胞具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,此阻滞作用具有时间依赖性;一定剂量的VCR可能通过阻滞CNE鄄2Z于G2/M期而抑制其增殖。