阿德福韦酯耐药株感染者乙型肝炎病毒基因型和多聚酶区基因变异分析

目的了解阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型、多聚酶区基因变异位点和变异类型,并分析HBV基因型和多聚酶区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测73例阿德福韦酯耐药患者HBV基因型、多聚酶基因区变异位点、病毒载量。结果 73例阿德福韦酯耐药株感染者中,HBV B基因型占35.6%,C型占64.4%;HBV多聚酶基因区基因突变位点主要以rtA181V/T(39.8%)、rtN236T(31.5%)为多见,rtA181V/T+rtN236T(20.5%),其他(8.2%);其中rtA181V/T位点变异中B型占10.3%,C型占89.7%;rtN236T位点变异中B型占78.3%,C型占21.7%。rtA181V/T+rtN236T位点变异B型占26.7%,C型占73.3%;基因型B和C的病毒载量分别为(6.38±1.24)lg和(6.27±1.10)lg拷贝/毫升。结论阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型主要为B型和C型;HBV多聚酶区基因突变位点主要为rtA181V/T和rtN236T,基因型与多聚酶区基因突变位点之间有一定相关性。C基因型易发生rtA181V/T变异,B基因型多出现rtN236T变异。C基因型比B基因型更易出现rtA181V/T+rtN236T双突变,可能与C基因型容易导致的严重的肝脏疾病有关,基因型与病毒载量之间无相关性。     

HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

目的 建立一种简便，准确，实用的乙型肝炎病毒（HBV）耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法。方法 根据已公布的HBVDNA序列，在HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物，其中一只为错配引物；应用巢式错配聚合酶链反应特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段，扩增产物用限制性内切酶（NdeⅠ）酶切，琼脂糖凝胶电泳，观察酶切后的目的片段限制性片段长度多态性（RFLP）图谱，部分标本进行DNA测序，结果 （1）所建立的巢式错配PCR-RFLP方法操作简便，快速，从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要11小时；灵敏度高，可以检测到10^3copies/ml的HBVDNA；特异性强，结果准确，经DNA测序证实，（2）应用该方法对20例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清进行了检测，发现YMDD变异者（45%）9例，YMDD野毒株者（55%）11例，表明该方法可有效地鉴别HBVYMDD野毒株与变异株，结论 本实验所建立的巢式错配PCR-RFLP方法简单，敏感，特异，适合于一般实验室应用及大规模的人群调查。     

拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者HBV P基因区突变序列分析

目的 探讨拉米夫定耐药慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV P基因逆转录酶区(RT区)序列突变特点.方法 收集115例接受拉米夫定治疗的CHB患者的临床资料,采用PCR产物直接测序法检测HBV P基因RT区序列耐药变异.结果 人选的115例患者中103例检测到拉米夫定基因型耐药变异,最主要的耐药变异模式为rtL180M rtM204V和rtM204I,分别占58.3％和22.3％,其他耐药位点包括rtL80V/I、rtT184S和rtA200V,并在5例患者中检测到RT区3个位点的联合变异.结论 对拉米夫定治疗患者的耐药检测除了HBV P基因区常见的rtL180和rtM204位点变异外,还应考虑其他位点的联合耐药变异.     

HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

目的建立一种简便、准确、实用的乙型肝炎病毒(HBV)耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法.方法根据已公布的HBV DNA序列,在HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物,其中一只为错配引物;应用巢式错配聚合酶链反应特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段,扩增产物用限制性内切酶(Nde Ⅰ)酶切,琼脂糖凝胶电泳,观察酶切后的目的片段限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.部分标本进行DNA测序.结果 (1)所建立的巢式错配PCR-RFLP方法操作简便,快速,从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要11小时;灵敏度高,可以检测到103copies/ml的HBV DNA;特异性强,结果准确,经DNA测序证实.(2)应用该方法对20例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清进行了检测,发现YMDD变异者(45%)9例,YMDD野毒株者(55%)11例,表明该方法可有效地鉴别HBV YMDD野毒株与变异株.结论本实验所建立的巢式错配PCR-RFLP方法简单、敏感、特异,适合于一般实验室应用及大规模的人群调查.     

乙肝病毒拉米夫定耐药基因变异情况分析

目的了解本地区乙肝病毒拉米夫定耐药基因变异情况。方法对我院临床怀疑服用拉米夫定耐药的乙肝患者进行耐药基因检测,并将检测到的126例耐药基因各变异株进行统计分析。结果 126例样品中,YVDD变异株55例,占43.65%;YIDD变异株57例,占45.24%;YVDD、YIDD共生株14例,占11.11%。结论服用拉米夫定发生YVDD和YIDD的变异频率相似,二种变异共生株也存在11.11%的比例。     

乙型肝炎病毒基因型与拉米夫定疗效关系研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型与拉米夫定治疗疗效的关系及其机理。方法 收集拉米夫定治疗的51例慢性乙型肝炎患者的临床资料，分析HBV基因型与拉米夫定治疗疗效的关系。结果 HBV基因型B型对拉米夫定的应答率为45．4％（10／22），C基因型的应答率为20．7％（6／29），两组应答率差异有显著性（P〈0．05）；B基因型的HBeAg的血清转换率为31.8％（7／22），C基因型为13．8％（4／29），经统计学处理差异有显著性（P〈0．05）。结论 拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者，B基因型疗效较C基因型好，HBV基因型可能是预测拉米夫定治疗效果的因素之一。     

治疗基线乙型肝炎病毒BCP区和PC区变异对拉米夫定耐药预测的探讨

目的探讨慢性乙型肝炎患者治疗基线乙型肝炎病毒(HBV)BCP区和PC区基因变异对拉米夫定耐药的影响。方法收集接受拉米夫定(100mg/片)初治2年内耐药的26例(耐药组)和2年内无耐药的16例(对照组)慢性乙型肝炎患者治疗基线的血清标本,采用型特异性多引物对巢式PCR法检测HBV基因型,用PCR产物直接测序技术检测治疗基线HBV的BCP区、PC区和P区变异位点,对发生频率较高的两组位点变异进行统计学分析。结果两组病人无1例发生P区rt204/180变异;在HBV BCP/PC区突变中,耐药组与对照组在点突变A1762T(38.48%vs 68.75%,P>0.05)、G1764A(26.92%vs50.00%,P>0.05)和G1896A(19.23%vs 18.75%,P>0.05)差异无统计学意义;对照组在点突变C1799G(43.75%vs 0,P<0.05)、T1802C(18.75%vs 0,P<0.05)、G1838A(25.00%vs 0,P<0.05)、A1846C(37.50%vs 0,P<0.05)、C1856T(31.25%vs 0,P<0.05)、G1888A(25.00%vs 0,P<0.05)明显高于耐药组。结论治疗基线HBV BCP区的A1762T/G1764A变异和PC区的G1896A变异对拉米夫定的2年疗效影响不大;治疗基线HBV BCP区的C1799G、T1802C、G1838A、A1846C的变异和PC区的C1856T、G1888A的变异可能是接受拉米夫定初始治疗获得长期维持应答的预测因素之一。     

拉米夫定对乙型肝炎病毒P基因多聚酶变异的影响

目的：监测拉米夫定临床治疗过程中耐药株的产生，更好地指导临床用药。方法：采用短处段引物PCR－ELISA液相杂交法，对60例拉米夫定治疗（100mg/d）6个月以上的血清病毒核酸阳性的慢性乙型肝炎患者，检测其血清中乙型肝炎（HBV）多聚酶（YMDD）变异情况，同时观察其HBV－DNA定量和丙氨氨酸转氨酶（ALT）水平的变化。结果：8例患者在服用拉米夫定6－9个月时出现HBV－YMDD变异株，经测定证实YMDD变异存在，其中4例为ATG变为GTG，1例变ATT，3例变为ATC。结论：表明拉米夫定期治疗（≥6个月），会出现耐药现象，该变异的检测将有于其疗效的监测。     

拉米夫定耐药HBV毒株伴随变异与YMDD变异的关系

目的研究拉米夫定耐药（LAMr）HBV毒株伴随变异及其与YMDD变异的关系。方法PCR方法扩增LAMr病人血清的HBVRT区基因，直接测序PCR产物。对测序发现含有LAMr变异的105例病人血清检测变异时HBVDNA载量，分为第1组含rtV173L／M或rtV207M／L／I变异、第2组含rtS213T变异、第3组不含此3种变异，共3组进行分析。结果①拉米夫定（LAM）治疗B、C基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染的慢性乙型肝炎（CHB）病人耐药主要变异位点为YMDD变异，可以伴随rtL180M、rtV173L／M、rtV207M／L／I、rtS213T等变异，LAMr变异形式构成与基因型无关（P=0．2620）。②rtM204I、rtM204V、rtM204V／I变异分别有38．8％、89．2％、73.3％伴随其它位点变异（P〈0．0001）。③3组测序发现变异时HBVDNA载量分别为（7．43±0．16）log10拷贝／mL、（5．01±0．90）log10拷贝／mL、（5.75±0．34）log10拷贝／mL（F=4．48，P=0．0240）。结论LAM治疗B、C基因型HBV感染的CHB病人耐药变异形式构成无显著差异，rtM204V变异较rtM204I变异更易伴随其它位点变异，伴随变异rtV173L／M、rtV207M／L／I可以增强YMDD变异HBV毒株的复制能力。     

乙型肝炎病毒基因型与干扰素及拉米夫定抗病毒治疗相关性的探讨

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)基因型的特点,不同的基因型与干扰素及拉米夫定抗病毒治疗的反应关系。方法:通过乙型肝炎病毒基因分型荧光PCR对90例HBV DNA阳性(>5×102copies/ml)、HBeAg阳性、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)异常的乙型肝炎病毒感染者进行HBV基因分型;对乙型肝炎病毒感染者服用干扰素或拉米夫定治疗6个月后的HBV DNA、HBeAg、ALT的变化进行分析。结果:90例HBV DNA阳性、HBeAg阳性及ALT异常患者,基因型分别检出:B型有33例(占36.6%)、C型有48例(占53.3%)、BC混合型有8例(占8.9%)和非B非C型1例(占1.1%)。33例B基因型23例服用干扰素治疗6个月后HBV感染者HBV DNA阴转率为73.9%、HBeAg血清转换率为78.3%和ALT复常率为73.7%,其余10例服用拉米夫定治疗6个月后HBV感染者HBV DNA阴转率为30.0%、HBeAg血清转换率为40.0%和ALT复常率为70.0%;48例C基因型10例服用干扰素6个月后HBV DNA阴转率为30.0%、HBeAg转换率为40.0%、ALT复常率为50.0%,其余38例服用拉米夫定6个月后HBV DNA阴转率为89.5%、HBeAg转换率为84.2%、ALT复常率为92.1%。结论:90例乙型肝炎病毒感染者基因型以B型和C型为主,C基因型为优势基因型;干扰素治疗慢性乙型肝炎患者B基因型优于C基因型。拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者C基因型优于B基因型。     

乙型肝炎病毒基因型别及X基因变异的研究进展

乙型肝炎病毒是一个以RNA为中间体的反转录复制病毒,由于RNA聚合酶缺乏校正功能,这使其突变率明显高于一般的DNA病毒,随着分子生物学研究技术的进展,不断有新的HBV基因型和亚型被发现。对和疾病进程、治疗相关的HBV基因型和X基因变异进行研究,有助于对疾病的控制和治疗提供更好的理论依据,在控制HBV感染上具有重要的意义。     

拉米夫定治疗乙型肝炎病毒感染128例的疗效评价

目的　观察拉米夫定 (Lamivudine)对乙型肝炎病毒 (HBV)感染者的疗效及安全性。方法　 2 37例HBV感染者随机分为两组 ,治疗组 12 8例用拉米夫定每日 15 0mg治疗 4 8w ,对照组 10 9例常规保肝治疗。治疗第 8、16、2 4、4 8w分别检测HBVM、HBVDNA半定量、ALT等。结果　治疗组第 8、16、2 4、4 8wHBVDNA阴转率分别为5 2 3%、82 0 %、96 1%、89 1% ,均高于对照组 (P <0 0 5 ) ;治疗组HBeAg阴转率分别为 7 0 %、2 8 9%、71 9%、6 6 4 % ,后 3者高于对照组 (P <0 0 5 ) ;ALT复常率在第 8、16、4 8w分别为 89 1%、97 7%、98 4 % ,后者高于对照组(P <0 0 5 )。治疗组未发现明显拉米夫定相关性严重不良反应。结论　拉米夫定可有效降低患者血清HBVDNA水平 ,明显提高HBeAg阴转率 ,使ALT恢复正常 ,副反应轻而安全。     

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与基因型和肝硬化的关系

目的 研究HBV C基因启动子(CP)和前C基因变异与HBV基因型和病情的关系。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测44例慢性乙型肝炎(CH)，29例肝硬化(LC)患者的血清HBV S基因序列以确定其基因型，测定HBVCP和前C区序列以确定其变异状况。结果 (1)CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)的发生率肝硬化组为75．9％，慢性乙型肝炎组为45.5%，两组间差别有显著性意义(P＜0.05)。(2)LC患者的C基因型检出率为69．0%，CH患者的C基因型检出率为43.2％，二者间差别有显著性意义(P＜0.05)。(3)C基因型HBV感染者CP双变异发生率为69.2％，B基因型HBV感染者CP双变异发生率为44．1％，二者间差别有显著性意义(P＜0.05)。结论 CP双变异与C基因型密切相关，并且导致病情向肝硬化发展。     

乙型肝炎病毒感染者YMDD自然变异研究

目的了解未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBVP基因YMDD变异情况，并观察YMDD自然变异组与非变异组临床病情轻重的关系。方法采用PCR和荧光探针杂交检测技术，检测60例慢性乙型肝炎患者血清HBV YMDD自然变异情况。结果在60例患者中，YMDD变异阳性5例(8．33％)，阴性55例，5例变异中2例为YIDD阳性，3例为YVDD阳性。结论未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者存在YMDD自然变异株；YMDD自然变异的患者没有临床病情加重的趋势。     

慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒C基因启动子变导异的初步研究

为建立快速特异检测乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA的聚合酶链式反应（PCR）方法,产初步分析患者体内乙型肝炎病毒C基因启动子（HBV.CP）变异的情况,对PCR法扩增的HBV DNA直接测序,并应用计算机进行DNA同源性分析。结果显示：应用PCR法扩增20份慢性乙肝患者血清阳性率为95%（19/20）;选择中度、重度乙肝患者血清和pGEM.7Z-HBV质粒扩增的HBV.CP各1份分别测序,与报告基因的同源性分别为72.0%、66.5%、90.0%。研究表明,PCR法可用于HBV.CP区变异的检测,慢性乙型肝炎患者存在该区变异。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎临床疗效分析

目的:观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床疗效.方法:将142例慢性乙型肝炎患者随机分为治疗组及对照组,两组均使用保肝及对症综合治疗,治疗组同时给予拉米夫定片剂,100mg/d,疗程12个月.结果:治疗12个月后,治疗组中症状复发率为2.67%(2/75),显著低于对照组的29.88%(20/67),P＜0.01.治疗组ALT复常率为86.67%(65/75),显著高于对照组的67.16%(45/67),P＜0.01.HbeAg阴转率、HBeAg/抗HBeAg阳转率分别为28%(21/75)、24%(18/75),显著高于对照组的10.45%(7/67)、5.95%(4/67),P＜0.01.治疗3个月、12个月后,治疗组HBV-DNA阴转率分别为77.33%(58/75)、85.33%(64/75),显著高于对照组的8.96%(6/67)、16.42%(11/67),P＜0.01.治疗组及对照组不良反应发生率分别为4%(3/75)、5.9%(4/67),P＞0.05,无显著性差异.结论:拉米夫定可以明显改善慢性乙型肝炎患者的症状、ALT及乙肝病毒病原学指标.     

乙型肝炎病毒及幽门螺杆菌感染对慢性乙型肝炎患者胃粘膜病变的影响

目的：探讨乙型肝炎病毒及幽门螺杆菌感染对慢性乙型肝炎患者胃粘膜病情变化的影响。方法：对60例感染慢性乙型肝炎病毒的感染者用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原和乙型肝炎病毒核心抗原及幽门螺旋杆菌抗原;免疫组织化学法（ Envision ）检测胃粘膜组织中三者抗原,同时联合快速尿素酶。分为慢性乙型肝炎组和肝硬化组两组,每组30例,肝硬化组再分为食管静脉曲张组和无食管静脉曲张组,每组15例。同时选择30例无肝病的胃炎患者为对照组。结果：29例经胃镜检测发现乙型肝炎病毒,且其中20例患者胃粘膜组织有异常病变,病变主要以中、重度为主,占患者总数的68．97％。31例患者的胃部粘膜组织中组织异常,其炎性病变以轻、中度为主,占70．97％。差别具有统计学意义（ P＜0．05）。慢性乙型肝炎病毒感染者胃粘膜组织中乙肝病毒表面抗原和乙肝病毒核心抗原均为阳性的胃粘膜病变的程度较重。胃粘膜有炎症表达的幽门螺旋杆菌的感染率在慢性乙型肝炎组和肝硬化组分别为77．78％和79．31％,无肝病的胃炎组的感染率为56．70％,各组间无显著性的差别,且差别无统计学意义（ P＞0．05）。结论：乙型肝炎病毒是感染者胃粘膜病变的主要诱因之一,且与胃粘膜病变程度有关;幽门螺旋杆菌感染和慢性乙型肝炎患者胃粘膜病变程度之间无显著关联性。     

拉米夫定治疗CHB患者YMDD基因型耐药检测

目的:检测拉米夫定(LVD)抗HBV治疗过程中YMDD变异出现的时间和频率.方法:35例慢性乙型肝炎患者入选,接受LVD治疗,100 mg/d,疗程52周.分别在治疗前及治疗后12周 ,20周,24周,36周和52周检测YMDD变异、HBV DNA、ALT和HBV M.结果:20周有1例出现YMDD变异,24周有2例YMDD变异,36周有4例YMDD变异,52周有5例YMDD变异;52周后,HBV DNA转阴率为74.3%(26/35),ALT复常率为71.4%(25/35),HBeAg转阴率为42.9%(15/35).结论:LVD治疗20周前,换用或联合另一种有效的核苷(酸)类似物,可有效预防YMDD耐药的出现.     

拉米夫定联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎25例临床分析

目的:观察拉米夫定联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎的效果.方法:将50例慢性乙型肝炎病人,随机分为治疗组25例,给予拉米夫定100mg,qd疗程12月;胸腺肽160mg,每周2次,疗程6月.对照组25例,给予拉米夫定100mg,qd疗程12月.结果:治疗组总有效率88.0%;对照组总有效率56.0%,两组总有效率相比有显著差异性(x2=6.39,P＜0.05).结论:拉米夫定联合胸腺肽治疗慢性乙型肝炎疗效肯定,可作为一种有效的治疗方法.