姜黄素抑制HepG2细胞HDAC1活性及促进P21WAF1/CIP1表达的研究

目的：研究姜黄素(curcumin,Cur)对HepG2细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC1的作用及细胞周期依赖激酶抑制剂P21^WAF1/CIP1表达的影响,探讨Cur抗肿瘤的作用机制。方法：培养人肝癌细胞株HepG2,用Cur在不同浓度(6.25,12.5,25,50,100 μmol·L^-1)和不同时间(4,8,16,24,48 h)点处理细胞,提取细胞总蛋白和mRNA,Western blot蛋白质印迹技术检测HDAC1和P21^WAF1/CIP1蛋白表达,RT-PCR技术检测P21WAF1/CIP1 mRNA的表达水平。结果：Cur对HepG2细胞的半数抑制率(IC50)为25 μmol·L^-1。IC50浓度作用4 h,HDAC1表达开始降低,降低作用呈时间依赖性；12.5 μmol·L^-1,24 h可引起HDAC1水平降低,但在50～100 μmol·L^-1时HDAC1的降低未见明显差别。Cur作用8 h时可见到P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA均增加；作用效应呈明显时间和剂量依赖性。结论：Cur明显抑制HDAC1活性和表达,促进P21^WAF1/CIP1蛋白和mRNA水平升高。抑制HDAC1活性和促进P21^WAF1/CIP1增加可能是Cur抗肿瘤的机制之一。     

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素对胃癌MGC-803细胞周期的影响

目的:研究N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)对胃癌MGC-803细胞周期的作用机制。方法:采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;采用流式细胞术检测MVC对MGC-803细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测MVC对MGC-803细胞周期相关基因蛋白p21WAF1/CIP1,Cdc 2和Cyclin B1表达的影响。结果:20μmol.L-1 MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,可明显诱导MGC-803细胞S,G/M期阻滞。20μmol.L-1MCV作用MGC-803细胞24 h,p21WAF1/CIP1蛋白表达增高,Cdc 2蛋白表达减少。结论:MVC可通过增加细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1蛋白的表达和下调Cdc 2蛋白表达,使MGC-803细胞的周期阻断在S,G2/M期,从而抑制MGC-803细胞的生长。     

抗纤灵药物血清对人肝癌细胞（HepG2）的体外生长抑制作用

目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机制.方法运用血清药理学及免疫组织化学等方法,观察抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用及对P21WAF1/CIP1蛋白表达的影响.结果含抗纤灵血清18,9,3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率(%)分别为63.63±5.08,55.09士4.09,48.08士4.08,细胞毒活性(%)分别为48.06士4.08,38.09士5.01,25.00±4.13,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清组比较,差异有显著性或无显著性.含抗纤灵血清18,9,3 g/kg各组HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组(P＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机制与该方提高HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转染HepG2细胞,沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组(野生型HepG2细胞)、干扰对照组(HepG2细胞转染NC-shRNA)、干扰组(HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl_2)加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境,采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,采用CCK-8检测5 mg/L TanⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响,采用Western Blot检测TanⅡA处理对各组细胞内p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达的影响。结果 (1)HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高,低氧培养各组细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)TanⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞增殖明显活性下降(P0.01,P0.05)。(3)低氧培养各组细胞24 h,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可增强TanⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白水平上调有关。     

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的:观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法:设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21(p21)和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1(FBI-1)mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L-1)在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01),并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(100,150,200μmol·L-1)能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01),下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。     

冬凌草甲素对HepG2细胞内质网应激蛋白IRE-1、PERK和CHOP的作用研究

目的 研究内质网应激对冬凌草甲素处理的肝癌细胞HepG2的作用.方法 采用特异性小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞72 h抑制内质网应激蛋白RNA激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、抑制物阻抗性酯酶1(IRE-1)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达后,MTT法观察40 μmol· L-1冬凌草甲素处理12h的转染细胞的细胞存活率.结果 PERK和IRE-1 siRNA转染抑制相应蛋白表达后增加冬凌草甲素诱导的HepG2细胞死亡(P＜0.05);而抑制CHOP表达对冬凌草甲素处理的HepG2细胞存活率没有影响(P＞0.05).结论 冬凌草甲素诱导的内质网应激对HepG2细胞具有保护作用.     

蛇葡萄素钠诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和对CyclinD1表达的影响

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)对人肝癌HepG2细胞株的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:应用MTT法测定AMP-Na对HepG2细胞的抑制作用,并计算IC50值;流式细胞术检测AMP-Na的诱导凋亡作用和对细胞周期的影响;实时荧光定量PCR检测AMP-Na对HepG2细胞CyclinD1基因mRNA的表达影响。结果:MTT检测结果表明,AMP-Na显著抑制HepG2细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应,药物作用24h、48h、72h IC50值分别为226μg/ml、67μg/ml和34μg/ml。流式细胞仪检测表明100μg/ml AMP-Na作用于细胞48 h、72 h凋亡率分别为31.9%、34.0%;可使G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,有明显的G1期阻滞作用;实时荧光定量PCR检测AMP-Na 100μg/ml作用HepG2细胞48 h、72 h后,用药组CyclinD1 mRNA表达分别是对照组的0.551和0.524倍,二者均有显著性差异(P0.05)。结论:AMP-Na对肝癌HepG2细胞有抗肿瘤效果,其机理可能通过降低细胞周期调节关键的CyclinD1的表达,使细胞停滞于G1期,诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞VEGF表达的影响

目的探讨常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将肝癌Hep1细胞用不同浓度的姜黄素(终浓度分别为0,5,10,15,20 μmol/L)处理,置于常氧环境中培养24h.RT - PCR检测Hep1细胞中VEGF mRNA表达水平的变化,Western - blot检测Hep1细胞VEGF蛋白表达的变化.结果 姜黄素10,15,20 μmol/L组VEGF mRNA的表达与空白对照组相比均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,且呈浓度依赖性.姜黄素0,5μmol/L组VEGFmRNA的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05);姜黄素5,10,15,20 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组相比均明显升高(P＜0.01),且呈浓度依赖性.姜黄素0 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性方式上调肝癌Hep1细胞VEGF的表达.     

黄连素对神经胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究黄连素对神经胶质瘤U251细胞增殖、细胞周期的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:MTT法检测不同浓度黄连素作用U251细胞24 h对其的增殖的影响;流式细胞术检测黄连素对U251的细胞周期阻滞情况;RT-PCR检测黄连素对p21WAF1/CIP1、Cyclin D1的影响。Western blot检测黄连素对p21WAF1/CIP1、Cyclin D1、组蛋白H3/H4的影响。结果:MTT表明黄连素对U251细胞生长的抑制作用呈现剂量依赖性,在1.172、2.344、4.688、9.375、18.750μg/mL的浓度下,抑制率分别为9.211%、19.737%、28.947%、51.974%、84.211%;流式细胞术结果显示,黄连素阻滞U251细胞周期于G2/M期;RT-PCR检测表明其能显著上调U251细胞的p21WAF1/CIP1的表达。Western blot结果表明,黄连素能上调p21WAF1/CIP1表达,而下调Cyclin D1、组蛋白H3/H4表达。结论:黄连素可抑制U251细胞的增殖,并阻滞细胞周期于G2/M期。其抗肿瘤的机制可能与上调p21WAF1/CIP1、下调Cyclin D1表达相关。     

盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨盐酸千金藤碱(CH)对乙型肝炎病毒的体外抑制作用.方法 MTT法检测CH对HepG2.2.15的细胞毒性;酶联免疫吸咐(ELISA)法检测不同浓度CH对细胞上清液中HBsAg和HBeAg的影响;荧光定量聚合酶链反应(FQ- PCR)法检测CH在用药后第9天对细胞内外HBV DNA拷贝数的影响.结果 CH对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为10.24 μmol/L;对HBsAg和HBeAg分泌的半数抑制浓度(IC50)分别为7.01,6.64 μmol·L-1,治疗指数(TI)分别为1.46,1.54;对细胞上清液中HBV DNA拷贝数的IC50为3.49 μmol·L-1,对细胞内HBV DNA拷贝数的IC50为4.25 μmol·L-1,TI值分别为2.93,2.41.结论 CH在体外对HBsAg和HBeAg的分泌和对细胞内外HBV DNA的复制均有明显的抑制作用.     

八棱丝瓜蛋白1的体外抗HIV-1活性

目的：研究八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。方法：通过实验株HIV-1ⅢB诱导合胞体形成抑制实验、HIV-1ⅢB和临床分离株HIV-1KM018急性感染细胞以及HIV-1ⅢB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。结果：八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为0．025μmol·L^-1，治疗指数为76。八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB感染C8166和HIV-1KM018感染PBMC的p24抗原表达的EC50分别为0．033和0．207μmol·L^-1。八棱丝瓜蛋白1不抑制HIV-1ⅢB在慢性感染H9细胞中的复制。结论：首次发现八棱丝瓜蛋白1是一种具有抗HIV-1活性的核糖体失活蛋白。     

有机阴离子转运多肽1B1的研究进展

 目的介绍有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)的研究进展。方法查阅国外有关文献,并对其进行分析、归纳和总结。结果OATP1B1存在遗传多态性,且不同等位基因所表达的OATP1B1的转运能力具有显著性差异,进而会对多种药物的药动学及药效学产生影响;OATP1B1还与药物不良反应及药物相互作用有关。结论基于OATP1B1对药物体内过程的重要作用,关注OATP1B1遗传多态性对药动学、药效学的影响,及其与不良反应及药物相互作用的关系具有一定临床意义。     

桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的探讨桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞(ESF-1)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响及其对光老化ESF-1细胞的保护作用。方法以不同浓度桃叶珊瑚苷处理用20 J/cm2的UVA照射建立的光老化ESF-1细胞。MTT法检测细胞活力,分别检测细胞中SOD活性、GSH-Px活性和MDA水平。RT-PCR法检测细胞中ERK1、ERK2、MMP-1及TIMP-1 mRNA的表达水平。酶联免疫法检测细胞上清液中MMP-1和TIMP-1的水平。结果 UVA照射ESF-1细胞后,其细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低、MDA水平升高,ERK1、ERK2、MMP-1 mRNA的表达水平升高,TIMP-1 mRNA的表达水平降低、MMP-1水平升高、TIMP-1水平降低(P<0.01);1×10-5mol/L和1×10-6mol/L桃叶珊瑚苷能够显著改善ESF-1细胞的光损伤(P<0.05或P<0.01)。结论桃叶珊瑚苷能调节光老化ESF-1细胞MMP-1和TIMP-1的表达,减轻UVA对ESF-1细胞的损伤。     

甲型H1N1流感的应对措施

目的：探讨甲型H1N1流感的应对措施。方法：对符合诊断标准的57例甲型H1N1流感患者分别从医院、病区、患者3个角度给予制定岗位责任制、成立发热门诊、成立隔离病区、合理公布病区、医务人员自身防护、病区消毒处理、健康宣教、饮食指导等应对措施。结果：57例患者经治疗全部痊愈,痊愈率达100.00%。住院天数最短为5天,最长为11天,平均6.8天;病毒转阴天数最短为3天,最长7天,平均5.3天。结论：从医院、病区、患者3个角度给予甲型H1N1流感有针对性的应对措施有助于患者康复。     

1-羟基茚-2-甲酸的合成△

目的：Knoevenagel反应合成1-羟基茚-2-甲酸。方法：以邻苯二甲醛和丙二酸为原料，以三乙胺或哌啶为催化剂，进行合成反应。结果：合成反应产物经1H—NMR和13C-NMR波谱测定，确定其化学结构为1-羟基茚-2-甲酸。结论：以邻苯二甲醛和丙二酸为原料，以三乙胺或哌啶为催化剂，反应产物是1-羟基茚-2-甲酸。     

除湿化瘀方对高尿酸血症内皮素-1及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的:通过临床观察除湿化瘀方对高尿酸血症患者血尿酸、内皮素-1(ET-1)及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响,探讨除湿化瘀方的作用机制。方法:本研究选择60例高尿酸血症患者,采用随机对照的原则分为中药治疗组和西药对照组,分别予除湿化瘀方和别嘌呤醇片,8周为1个疗程。观察治疗前后血尿酸(sUA)、内皮素-1(ET-1)及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)。结果:两组sUA、ET-1及PAI-1较治疗前明显降低(P<0.01),且治疗后两组sUA、ET-1及PAI-1水平无明显差异(P>0.05)。结论:除湿化瘀方可降低sUA、ET-1及PAI-1水平。     

HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R_1和人参皂苷Rg_1、Rb_1的含量

目的:采用HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1的含量。方法:色谱柱DiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水,梯度洗脱0～5min,乙腈20%～25%;5～20min,乙腈25%～45%;流速:1.0mL.min-1;柱温:25℃;漂移管温度:70℃;载气流速2.0L.min-1。结果:三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1进样量分别在0.3～1.5μg(r=0.9997),1.5～7.5μg(r=0.9998)和1.5～7.5μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为101.8%、102.1%、103.6%;RSD分别为1.6%、2.1%、1.8%。结论:HPLC-ELSO法结果准确,便于操作,可用于通迪胶囊的质量控制。     

新疆克孜勒苏自治州甲型H1N1流感中医药防治特色浅谈

新疆克孜勒苏自治州地处中国最西部,是一个偏远落后地区。2009年全球暴发甲型H1N1流感,本州也有421例报告病例。甲型H1N1流感在本州暴发过程中,结合本地特点应用中医药防治,取得了良好效果。     

Pharmacokinetic study of ginsenosides Rb1 and Rg1 in rat by ELISA using anti-ginsenosides Rb1 and Rg1 monoclonal antibodies

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) systems using anti-ginsenoside Rb1 (G-Rb1) and Rg1 (G-Rg1) monoclonal antibodies (MAbs) were established for pharmacokinetic investigations of G-Rb1 and G-Rg1 in rat serum. The systems not only allowed sensitive detection of G-Rb1 at the level as low as 20 ng/ml and of G-Rg1 at 300 ng/ml, but showed strong capacity for detecting the two agents in a broad concentration range (20 to 400 ng/ml for G-Rb1 and 0.3 to 10 microg/ml for G-Rg1, respectively). In this respect, these assay systems are superior to other methods using thin-layer chromatography (TLC) or high-performance liquid chromatography (HPLC). In addition, another advantage of these immunoassays is the comparably low quantities of specimen required; as little as 5 microl of serum suffices the need for determination of ginsenosides. We report in this article the application of this immunoassay in pharmacokinetic study of G-Rb1.     

三七超微粉与细粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量比较研究

目的测定三七超微粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量,为三七超微粉质量评价提供依据。方法采用高效液相法,Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱;流速:1 mL.min-1;检测波长:203 nm;柱温:25℃。结果三七超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均含量均高于三七细粉,两者间的含量有显著性差异。结论超微粉质量优于细粉。本实验的含量测定方法简便、准确,可为三七超微粉的质量控制提供一定的参考依据。