葛根素对大鼠主动脉球囊损伤后血小板活化及凝血酶受体表达的影响

目的研究球囊损伤后血管内膜增生的过程、血小板活化水平、凝血酶受体mRNA的变化及葛根素的影响。方法将72只雄性W istar大鼠随机分为对照组、手术组和葛根素治疗组,分别在术后3、7、14和28 d通过组织学检查、放射免疫法和逆转录聚合酶链反应技术检测内膜增生的情况、血小板表面GMP-140的数目、凝血酶受体mRNA的水平及葛根素〔50 mg/(kg.d)〕腹腔注射对它们的影响。结果①凝血酶受体mRNA在正常血管组织表达极弱,球囊损伤术后3 d已显著增加,术后14 d达峰值,术后28 d开始下降。②GMP-140于术后3 d明显升高,术后7 d开始下降。③术后3 d已有增殖的血管平滑肌细胞移行至内膜层;术后7 d内膜开始增生;术后14 d血管平滑肌细胞的增殖及内膜增生更为明显;术后28 d血管平滑肌细胞的增殖明显减弱,细胞外基质增加,内膜继续增生。④使用葛根素后血小板表面GMP-140的数目减少,血管平滑肌细胞的增殖减弱,但凝血酶受体mRNA表达及内膜增生程度未见明显变化。结论血管内皮损伤后内膜增生的过程中血小板活化、凝血酶受体mRNA表达增加,葛根素抑制血小板的活化及血管平滑肌细胞的增殖,但对凝血酶受体mRNA的表达及内膜增生的程度无明显影响。     

葛根素对球囊损伤血管内皮后血小板活化及血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA变化的影响

目的　研究球囊损伤后血管内膜增生的过程、血小板活化水平、血管紧张素II 1型受体(AngⅡAT1受体 )mRNA的变化及中药葛根素对它们的影响。方法　球囊剥脱大鼠主动脉内皮 ,并随机分为对照组、手术组和葛根素治疗组。分别在术后 3、7、14和 2 8d ,取主动脉 ,通过组织学检查、放射免疫法和逆转录聚合酶链反应技术检测内膜增生的情况、血小板表面GMP 14 0的数目、血管AT1受体mRNA的水平及葛根素 (5 0mg·kg-1·d-1)腹腔注射对它们的影响。结果　 (1)AT1受体mRNA于术后 3d已明显增高 ,并持续至术后 14d。 (2 )GMP 14 0于术后 3d明显升高 ,术后 7d开始下降。 (3)内皮损伤后 3d已有血管平滑肌细胞 (VSMC)的移行、增殖 ,7d内膜开始增生 ,2 8dVSMC的增殖减弱 ,但细胞外基质增加 ,内膜继续增生。 (4)使用葛根素后血小板表面GMP 14 0的数目和VSMC的移行减弱 ,但AT1受体mRNA及内膜增生程度无明显改变。结论　血管内皮损伤后内膜增生的过程中AT1受体mRNA的表达增加 ,葛根素能抑制血小板的活化及VSMC的移行 ,但对AT1受体mRNA的表达及内膜增生的程度无明显影响。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响

为了研究凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响 ,探讨凝血酶刺激血管平滑肌细胞增殖的机制 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,用斑点杂交检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体mRNA的表达。结果发现培养的血管平滑肌细胞在基础状态下可表达血小板源生长因子α受体和 β受体mRNA ,凝血酶在作用于血管平滑肌细胞 2～ 12h抑制了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达 ,2 4～ 48h后血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达恢复到基础状态。提示凝血酶对血管平滑肌细胞具有较强的促增殖作用 ;凝血酶显著降低了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达     

全反式维甲酸对球囊损伤大鼠胸主动脉内皮后P16及增殖细胞核抗原表达的影响

为研究全反式维甲酸对球囊损伤大鼠胸主动脉内皮后内膜增生过程、P16及增殖细胞核抗原表达的影响，球囊剥脱大鼠胸主动脉内皮，并随机将大鼠分为手术组、全反式维甲酸治疗组及对照组，各组均于术前4天灌胃至实验结束，除对照组于术后14天处死大鼠外，全反式维甲酸治疗组和手术组分别在术后2天、7天、14天和28天处死大鼠并摘除大鼠胸主动脉，通过组织学检查和免疫组织化学技术检测术后14天和28天的内膜增生情况及术后2天、7天、14天和28天P16和增殖细胞核抗原的表达及全反式维甲酸(每天30mg／kg)灌胃对它们的影响。结果发现，对照组及内皮损伤后2天均无血管内膜增厚，7天内膜开始增生，28天血管平滑肌细胞增殖减弱，但细胞外基质增加。在手术组各时间点P16的表达变化不显著，增殖细胞核抗原于球囊损伤后2天在中膜明显表达，术后7天表达达到高峰，且主要在内膜表达，14天后逐渐下降。使用全反式维甲酸治疗后，内膜增生程度及增殖细胞核抗原的表达明显降低，而P16的表达在术后2天开始升高，14天达高峰。以上结果提示，全反式维甲酸可有效抑制血管内皮损伤后内膜的增生，其机制可能与促进P16表达和抑制增殖细胞核抗原表达，从而抑制血管平滑肌细胞的增殖有关。     

球囊损伤大鼠主动脉内皮后血管紧张素Ⅱ2型受体的表达及瑞舒伐他汀的干预作用

目的 通过观察血管内皮损伤后血管紧张素Ⅱ2型受体表达的变化及瑞舒伐他汀对其表达的影响,探讨血管紧张素Ⅱ2型受体在再狭窄中的作用.方法 建立球囊损伤大鼠主动脉内皮模型,并将大鼠随机分为对照组、手术组和瑞舒伐他汀组,每组分别于术后14天、28天取主动脉组织,并行HE染色观察血管内皮厚度的变化,用逆转录聚合酶链反应检测主动脉组织血管紧张素Ⅱ2型受体 mRNA的表达,免疫组织化学法检测主动脉组织血管紧张素Ⅱ2型受体蛋白的表达.结果 大鼠主动脉球囊损伤术后14天及28天血管内皮较对照组显著增厚(P<0.01),瑞舒伐他汀治疗14天及28天大鼠主动脉内膜增生较手术组明显减轻.术后14天及28天,手术组血管紧张素Ⅱ2型受体 mRNA和蛋白表达较对照组显著升高(P<0.05),瑞舒伐他汀组血管紧张素Ⅱ2型受体 mRNA和蛋白表达较手术组增加(P<0.05).结论 瑞舒伐他汀可抑制大鼠主动脉内皮损伤后的血管增生,并上调血管内皮血管紧张素Ⅱ2型受体的表达.     

全反式维甲酸对球囊剥脱大鼠胸主动脉内皮后平滑肌细胞增殖和P21表达的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对球囊损伤大鼠胸主动脉后管腔狭窄、血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及细胞周期依赖性激酶抑制蛋白P21表达规律的影响。方法：54只SD大鼠随机分为三组。对照组不进行球囊损伤，术后28天处死；手术组和ATRA治疗组行球囊剥脱胸主动脉内皮术，分别于术后2d、7d、14d、28d处死。取胸主动脉应用HE染色、免疫组化和计算机图像分析法进行形态学、PCNA和P21表达水平检测。结果：①正常动脉壁不表达PCNA及P21。②手术组中膜VSMC术后2d PCNA表达达高峰，后迅速下降；而新生内膜在术后7d现并高表达PCNA，14d、28d内膜迅速增厚，其中PCNA表达逐渐下降。P21在术后14d新生内膜中可见少量表达，28d表达增多。③ATRA治疗组术后7d新生内膜中已有P21表达，14d、28d大量表达，而PCNA的表达明显低于手术组，显著抑制VSMC的迁移和增殖、内膜增生和管腔狭窄（P〈0．01）。④P21表达与PCNA表达呈负相关（P〈0．001）。结论：ATRA可通过诱导P21蛋白表达，抑制VSMC迁移和增殖，从而抑制球囊剥脱大鼠胸主动脉内皮后新生内膜过度增生和管腔狭窄。     

雌激素对卵巢切除雌兔血管内膜损伤后血小板聚集与血管平滑 …

探讨不同剂量雌激素对切除卵巢的雌兔血管内膜损伤血小板聚集与血管平滑肌增殖的影响。方法 切除卵巢的成年雌性大白兔５０只，行主动脉球囊扩张术，造成血管内膜损伤实验模型，采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷掺入测定雌激素对血管平滑肌细胞增生的影响，采用图像分析仪测定新生内膜增生面积及Ｂｏｒｎ比地测定雌激素对血小板聚集的影响。     

反义凝血酶受体基因序列对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

为了研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增埴中的作用 ,探讨反义凝血酶受体基因序列对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ;用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ;用Western blot检测反义凝血酶受体基因序列抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 ;用3 H 肌醇掺入率检测反义凝血酶受体序列抑制血管平滑肌细胞磷酸肌醇代谢的影响。结果发现 ,反义凝血酶受体基因序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 .0 5 ) ;明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 ;明显抑制了血管平滑肌细胞磷酸肌醇代谢。提示反义凝血酶受体基因序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ;凝血酶受体反义序列明显抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 (特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达 ) ,抑制细胞内信号传递来完成     

大鼠胸主动脉内皮损伤后内膜增生及PDGF-BB、PCNA、P16表达的变化

目的研究大鼠血管内皮损伤后内膜增生情况及血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、增殖细胞核抗原(PCNA)和抑癌基因P16的表达变化过程。方法选用雄性SD大鼠24只,球囊剥脱大鼠胸主动脉内皮,并随机将大鼠分为术后2 d、7 d、14 d、28 d处死4个组,每组6只。摘除胸主动脉,通过组织学检查和免疫组化技术检测内膜增生情况、PDGF-BB、PCNA、P16表达的变化。结果内皮损伤后2 d无血管内膜增厚,7 d内膜开始增生,28 d血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖减弱,但细胞外基质增加,内膜继续增生;PDGF-BB、PCNA的表达均于术后2 d开始升高,PCNA的表达在术后7 d达高峰,而PDGF-BB在术后14 d达到高峰,P16在术后各时间点的表达变化不显著。结论 PDGF-BB、PCNA和P16的表达变化规律为寻找有效控制再狭窄的药物提供了理论依据。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞血小板源性生长因子基因表达的影响

为了研究凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源性生长因子基因表达的影响 ,探讨凝血酶刺激血管平滑肌细胞增殖的机制 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价凝血酶促血管平滑肌细胞增殖的指标 ;用反转录聚合酶链反应检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源性生长因子A链mRNA表达的影响 ;用Dotblot检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源性生长因子B链mRNA表达的影响。结果表明 ,凝血酶促血管平滑肌细胞增殖呈浓度依赖性和时间依赖性 ,血管平滑肌细胞在基础状态下可检测到血小板源性生长因子A和B链mRNA表达 ,凝血酶刺激血管平滑肌细胞后 2h血小板源性生长因子A链mRNA表达开始增加 ,4～ 6h达高峰 ,持续 12h ,2 4～ 48h恢复正常。提示凝血酶对血管平滑肌细胞具有较强的促增殖作用 ,凝血酶促血管平滑肌细胞的增殖作用部分可能是通过诱导血管平滑肌细胞血小板源性生长因子A链mRNA的表达来实现的。     

泛素及大鼠蛋白酶体第三亚基在大鼠颈总动脉球囊损伤后的表达

目的 研究泛素(ubiquitin)、大鼠蛋白酶体第三亚基(rat component 3 of proteasome,Re3)在大鼠颈总动脉球囊损伤后的动态表达及在内膜增生中的作用.方法 雄性SD大鼠56只,随机分为假手术组(8只)、单纯球囊损伤组(48只,包括1、4、7、14、21、28 d组),建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型,苏木素-伊红(HE)染色光镜下观察血管内膜增生情况;应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)观察泛紊、RC3 mRNA表达情况,免疫组化方法 观察泛素蛋白表达情况.结果 球囊损伤后血管内膜增生明显,第28天内膜与中膜(Intima/Media,I/M)厚度比值最高[(2.31 ±0.43)比对照组(0.02±0.005),P＜0.01];泛素、RC3 mRNA表达升高,泛紊第7天达高峰[(1.33±0.26)比对照组(0.21±0.04),P＜0.01],RC3第14天达高峰[(1.35±0.26)比对照组0.31 ±0.06,P＜0.01];球囊损伤后泛素蛋白表达升高,第14天达高峰[(21.53±4.09)比对照组(4.21±0.78),P＜0.01].相关分析显示泛素蛋白表达与血管内膜增生呈正相关(r=0.827,P＜0.05).结论 大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生明显,泛素、RC3 mRNA及泛素蛋白表达增高,球囊损伤后泛素蛋白表达与血管内膜增生呈正相关.     

银杏叶提取物抗增生作用的实验研究

用大鼠胸主动脉内皮损伤的模型研究了血小板活化因子（PAF）在血管内皮损伤后内膜增生中的作用及PAF受体桔抗刘银杏叶提取物（GBE）的抗增生作用。50只雄性Wistar大鼠分成5组：假手术组（S），对照组（C），大剂量GBE组（GH），小剂量GBE组（GL）及GBE中途治疗组（GM）。所有动物在术前及术后6、48小时1及2周时采血测PAF、GMP－140和D－Dimer。2周末胸主动脉切片测新生内膜面积及内膜／中膜面积比。结果表明，动脉内皮损伤后血浆PAF、GMP－140和D－Dimer均显著升高。GBE术前开始用药者（GH，GL组）可使GMP－140及D－Dimer明显下降，且作用与剂量大小有关。术后开始用药（GM）对PAF、GMP－140及D－Dimer均无影响。2周时病理切片显示，动脉内皮损伤可引起内膜的显著增生，而GBE可减轻内膜增生的程度，作用亦与剂量大小有关。术后1周开始用药者虽不能抑制PAF、GMP－140及D－Dimer水平的升高，但亦能减轻内膜增生。     

Arterial injury-induced smooth muscle cell proliferation in rats is accompanied by increase in polyamine synthesis and level

Proliferation of smooth muscle cells (SMC), enhancement of polyamine biosynthesis and increase in polyamine level in response to deendothelialization in the rat aorta were studied. [3H]Thymidine incorporation into SMC in aortas denuded with a balloon catheter began 25 h after injury, and maximal incorporation occurred 33-37 h after injury. Afterwards, [3H]thymidine incorporation declined, approaching the baseline level, but was slightly higher than that of sham-operated controls until 14 days after injury. Intimal thickening started 7 days after injury, and peaked at 21 days. Prior to these proliferative changes in aortic SMC, a rapid and transient increase in ornithine decarboxylase (ODC) activity was observed within 8 h after injury. There was no significant difference in ODC activity between injured and intact aortas after 4 days. The levels of polyamines, putrescine, spermidine, and spermine increased and were maximal at 48 h after injury, 8.1, 3.4 and 1.4 times the control levels, respectively. Increased levels of polyamines, in particular spermidine, continued until 7 days after injury. These results suggest that the enhancement of polyamine synthesis and the increased polyamine content of the aorta play important roles in the proliferation of SMC and in the development of intimal thickening, particularly in the initial proliferative response of medial SMC after deendothelialization.     

Photodynamic therapy for the prevention of intimal hyperplasia in balloon-injured rabbit arteries

This study was performed to demonstrate accumulation of the photosensitizer hematoporphyrin derivative (HPD) in atherosclerosis and to determine whether intimal hyperplasia, the main cause of restenosis after angioplasty, can be inhibited by photodynamic therapy (PDT). Forty Japanese White rabbits were subjected to balloon endothelial injury in the common iliac artery. Five groups of rabbits, ie, immediately after, or 3, 7, 14 or 28 days after the balloon injury, were injected with HPD. These rabbits were sacrificed 24h after HPD administration, and HPD fluorescence was investigated in the injured arteries by fluorescence microscopy. Other groups of rabbits were injected with HPD 24h before PDT, and they were then subjected to intravascular Hg-Xe flash-lamp irradiation immediately after (0D-PDT), or 3 days (3D-PDT), 7 days (7D-PDT), or 14 days (14D-PDT) after the balloon injury. All rabbits were sacrificed 28 days after the balloon injury, and histological sections of PDT-treated arteries were examined by light microscopy. Slight, uniform HPD accumulation was observed in the injured media immediately after the balloon injury, and throughout the entire media and the neointima on day 7. On day 14, HPD accumulation had diminished in the media and increased in the intima, and on day 28 no HPD remained in the media. In the 0D- or 3D-PDT groups, no inhibition of intimal hyperplasia was observed. In contrast, there was significant inhibition of intimal hyperplasia in the 7D- and 14D-PDT groups, and the most effective inhibition was in the 7D-PDT group. This study demonstrated that PDT with HPD inhibits smooth muscle cell growth and decreases the intimal hyperplasia response in rabbits.     

A role for urotensin II in restenosis following balloon angioplasty: use of a selective UT receptor blocker

Recent studies have postulated that the vasoactive peptide urotensin II (UII) plays a role in the control of vascular remodeling by inducing smooth muscle proliferation and fibroblast-mediated collagen deposition. The present study examined the expression of UII mRNA and immunoreactivity in rat carotid arteries before and after balloon angioplasty. In addition, the effect of UT receptor blockade was assessed in this model using a selective non-peptidic UT receptor antagonist, SB-611812. In carotid arteries of uninjured rats (na?ve group), there was weak expression of UII in endothelial cells and little to no expression in vascular smooth muscle cells. At day 7, there was intimal proliferation associated with pronounced expression of UII in myointimal cells. By day 14, there was extensive intimal thickening exhibiting strong expression of UII. The contralateral arteries of all groups exhibited similar UII expression to that of na?ve arteries. Animals treated with methylcellulose (vehicle) for 28 days showed a significant increase in intimal thickening compared to sham operated animals. Treatment with the SB-611812 resulted in a significant 60% reduction in intima-to-media area ratio when compared to vehicle treatment (P<0.005). These findings demonstrate upregulation of UII following balloon angioplasty, and a significant reduction in intimal lesion in response to UT receptor blockade. The present study suggests an important role for UII in the pathogenesis of restenosis following balloon angioplasty.     

C-sis反义寡脱氧核苷酸抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖的时效关系

为观察局部处理C-sis反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞增殖及新生内膜肥厚的抑制作用、球囊导管损伤60只新西兰白兔胸主动脉后。经导管局部处理每只兔1mg（2mL）C-sis反义或正义寡脱氧核苷酸或2mL生理盐水,于损伤后第3、7、14天和第28天，用免疫组织化学方法结合图象分析，评价损伤动脉内膜平滑肌细胞增殖及新生内膜改变。结果发现．C-sis反义寡脱氧核苷酸明显抑制内膜平滑肌细胞增殖，最高抑制作用出现于损伤后第3天；抑制百分率达69．8％，第7、14天和第28天的抑制率依次降低，分别为59％、51.9％和47.8％；而新生内膜面积的抑制百分率分别是48．9％、77．8％、72．6％和70．8％，与生理盐水处理组相比，平滑肌细胞数及新生内膜面积均有明显降低。研究结果表明，局部处理C-sis反义寡脱氧核苷酸，通过反义途径，可明显抑制球囊损伤主动脉内膜平滑肌细胞增殖，其抑制作用随时间而降低，同时，对新生内膜面积肥厚的最大抑制出现于第7天，随后降低，提示局部处理C-sis反义寡脱氧核苷醚，有可能降低再狭窄的发生。     

C-sis反义寡脱氧核苷酸抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖的时效关系

为观察局部处理Ｃ－ｓｉｓ反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞增殖及新生内膜肥厚的抑制作用，球囊导管损伤６０只新西兰白兔胸主动脉后，经导管局部处理每只兔１ｍｇ（２ｍＬ）Ｃ－ｓｉｓ反义或正义寡脱氧核苷酸或２ｍＬ生理盐水，于损伤后第３、７、１４天和第２８天，用免疫组织化学方法结合图象分析，评价损伤动脉内膜平滑肌细胞增殖及新生内膜改变。结果发现，Ｃ－ｓｉｓ反义寡脱氧核苷酸明显抑制内膜平滑肌细胞增殖，最高抑制作用出     

兔主动脉球囊损伤后MMP-2和TIMP-2 mRNA的动态变化

目的 :探讨基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )、基质金属蛋白酶组织抑制因子 2 (TIMP 2 )核糖核酸 (mR NA)在主动脉球囊损伤后的改变及可能作用。方法 :在兔腹主动脉球囊损伤的模型上 ,应用RT PCR的方法 ,观察MMP 2、TIMP 2mRNA在球囊损伤后不同时间的表达情况。结果 :MMP 2mRNA在球囊损伤后第 1天表达开始升高 ,第 7天达高峰。TIMP 2mRNA球囊损伤后第 1天表达开始逐渐升高 ,第 2 8天达高峰。结论 :MMP 2mRNA在球囊损伤后表达第 7天达高峰 ,在再狭窄早期平滑肌细胞的迁移与增殖中起重要作用 ;TIMP 2mRNA球囊损伤后表达第 2 8天达高峰 ,可能与再狭窄中、后期新生内膜形成及血管重塑有关。