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目的:建立四环素调控的小鼠LAIR-1/CD305转基因小鼠,为进一步研究mLAIR-1分子的体内功能奠定基础.方法:构建pBI-5-mLAIR-1载体,显微注入B6D1F1受精卵,PCR检测新生小鼠基因组DNA中LAIR-1与荧光素酶(Luciferase)基因.将mLAIR-1和荧光素酶双阳性小鼠耳成纤维细胞转染含rtTA的pUHD17.1质粒,用含盐酸强力霉素(Dox)的培养基进行培养,检测细胞裂解液中荧光素酶活性.将荧光素酶表达依赖Dox小鼠与C57BL/6交配,采用PCR对子代鼠进行检测.结果:共获得9只首建鼠,其目的基因表达高度依赖Dox,并得到其中5只首建鼠的F1代小鼠.结论:获得了四环素调控的小鼠LAIR-1转基因小鼠,可用于该分子体内功能的研究. 相似文献
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为研究小鼠PTA1分子在体内的功能,建立四环素调控的小鼠PTA1/CD226转基因小鼠,我们构建了pBI-5-mPTA1载体,显微注射入B6D1F1受精卵,使用PCR检测新生小鼠基因组DNA中的PTA1与荧光素酶(luciferase)基因。将mPTA1和荧光素酶双阳性小鼠耳成纤维细胞转染含rtTA的pUHD17.1质粒,用含有盐酸强力霉素(Dox)的培养基进行培养,检测细胞裂解液中荧光素酶的活性。将荧光素酶表达依赖Dox的小鼠与C57BL/6小鼠交配,采用PCR对子代鼠进行检测。最终共获得7只首建鼠,其目的基因表达高度依赖Dox,并得到了其中2只首建鼠的F1代小鼠。 相似文献
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目的制备ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠1,为严密型四环素调控系统的体内研究提供调控部分的转基因小鼠,以便与反应部分小鼠交配得到双转基因小鼠。方法重组构建含目的基因的质粒pApoE-rtTA-tTS,应用显微注射法将其注入母鼠的受精卵,再植入代母输卵管,出生小鼠经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA标本进一步鉴定。结果产生了2只整合ApoE-rtTA-tTS基因的首建鼠。结论成功制备了ApoE-rtTA-tTS转基因小鼠,为下一步建立严密型四环素调控系统的双转基因小鼠模型奠定了基础。 相似文献
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目的建立MagA转基因小鼠,为活体MRI成像系统提供重要的实验动物模型。方法采用显微注射法.将MagA基因导入小鼠受精卵,再培育成转基因小鼠并繁殖传代。利用PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。结果酶切和DNA测序分析证实MagA基因准确克隆表达载体设计位点,目的基因序列与GenBank中MagA序列完全一致。通过PCR分析,进行转基因整合检测。目前转基因小鼠已稳定传代至第5代。结论MagA基因在转基因小鼠中整合,成功建立了MagA转基因小鼠。MagA转基因小鼠将成为MRI影像系统的重要实验动物模型。 相似文献
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周常文 《中国优生与遗传杂志》2001,9(4):3-6,10
Alzheimer病 (Alzheimer’sdisease,AD)是一种进行性的精神衰退的疾病 ,又称早老性痴呆。在老年人中AD的发病率很高 ,而且 ,随着年龄的增长呈指数性增加。世界上 6 5岁以上人群中AD的发病率在 5 % - 10 % ,在 85岁以上的老年人中发病率约为 2 5 % ,其中 ,10 %的患者具有明显的AD家族史 ,在这些家族性AD患者中 ,5 % - 10 %的病例具有常染色体显性遗传的特点[1] 。AD临床表现为慢性进行性的病变过程 ,发病早期出现短期记忆力丧失 ,随后 ,发展为进行性痴呆 ,主要表现为记忆力丧失 ,定向障碍 ,判断和推理… 相似文献
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目的:建立视网膜血管瘤增殖(retinal angiomatous proliferation,RAP)基因小鼠模型,并对RAP的病理学特点进行分析。方法:应用化学诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)对C57BL/6J(B6)种系小鼠进行诱变和筛选,用间接眼底镜观察突变鼠眼底表现;超薄切片观察视网膜组织学变化;荧光染色后激光共聚焦显微镜下观察视网膜血管异常表现。结果:用ENU诱导RAP突变小鼠呈稳定的常染色体隐性遗传,出生后3周眼底可见黄白色病灶、视网膜血管瘤样增生和视网膜深层新生血管增殖等典型RAP病理学改变。结论:用ENU诱导可成功建立RAP基因小鼠模型,进一步完善该模型将推动RAP的深入研究。 相似文献
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BACKGROUND: Blood coagulation factor V gene mutation in non-traumatic femoral head necrosis has been shown to have an higher incidence than that in healthy and secondary non-traumatic femoral head necrosis, and the incidence of thrombosis is positively related. Inactivated blood coagulation factor V can accelerate the activation of prothrombin and the generation of thrombin. Mutations at arg-306, arg-506 and arg-679 will result in the blood clots and hypercoagulable state. Here, this study is designed to investigate the influence of R506Q/R679Q on osteonecrosis.
OBJECTIVE: To establish the mouse model of mutations of Gln506Arg and Gln679Arg in coagulation Factor V (Factor VR506Q/R679Q).
METHODS: Factor VR506Q/R679Q point mutation target vector was constructed by molecular cloning technology, the linearization vector was transfected into embryonic stem cells, and then G418-resistant cells were screened and used for microinjection. The target blastocysts were transplanted to the fallopian tube of estrus mice to obtain the Chimera mice carrying bilateral LoxP gene, followed by mated with CMV-cre transgenic mice, and then the mice with Factor VR506Q/R679Q point mutations were obtained. After genotype identification by PCR, hematoxylin-eosin staining results and percentage of empty lacunae were compared between the mutant and wild-type mice, and rat bone tissue and bone mass were analyzed.
RESULTS AND CONCLUSION: There were no obvious abnormalities in the embryonic and postnatal development, percentage of empty lacunae and bone mass of Factor VR506Q/R679Q point mutation mice when compared with the wild-type mice. These results suggest that the mouse model with Factor VR506Q/R679Q point mutation is established successfully, but there is no significant change in the bone tissue. The following research should focus on the effect of external stimulus on the incidence of osteonecrosis in a mutant mouse.
中国组织工程研究杂志出版内容重点:组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程 相似文献
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目的:构建时空调控 miR-195敲减转基因载体并验证其活性。方法通过分子克隆技术构建含有神经特异性启动子、四环素诱导表达系统、miR-195海绵、绿色荧光蛋白及绝缘子等调控元件的转基因载体并测序鉴定,利用细胞转染技术将该载体瞬时转染入 SH-SY 5 Y 细胞,经荧光显微镜观察其荧光表达,利用实时定量 PCR 技术及蛋白免疫印迹检测miR-195含量及 GFP 蛋白表达。结果通过将 Tet-on 四环素诱导系统中反义转录激活子 rt-TA 克隆到 NSE 启动子下游,以及 TRE-Tight 的多克隆位点内引入 miR-195海绵携带 IRES 介导的 EGFP ,获得双质粒 Tet-on 表达载体。以 pcDNA 3.1+质粒为骨架,3个不同区域的双拷贝 cHs 4绝缘子核心片段为间隔,将其调控元件( NSE-rtTA )和反应元件( TRE-miR-195 sponge-IRES-EGFP )串联成单一转基因载体。该载体经测序验证序列正确,瞬时转染入 SH-SY 5 Y 细胞,经强力霉素诱导36 h 后细胞内可见明显绿色荧光蛋白表达,且 miR-195表达水平明显降低。结论成功构建神经系统特异性 miR-195敲减转基因载体,并具有时空调控的特点,为进一步建立转基因动物模型奠定基础。 相似文献
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目的:建立能反应自身免疫特点的1型糖尿病动物模型,为进一步研究该病发病机理奠定基础。方法:将16只NOD.Scid小鼠随机分为两组,实验组小鼠腹腔注射发病NOD小鼠脾细胞,对照组注射未发病NOD小鼠脾细胞;每日测定血糖和体重;当出现重度糖尿病临床表现时处死,其余小鼠细胞过继后10周处死,经组织学观察和细胞因子ELISA测定。结果:实验组小鼠发病率为8/8,对照组为0/8;胰岛炎性积分分别为2.5±0.2,0;实验组IL-2、IL-10、IFN-γ水平分别为60.7pg/ml、15.5pg/ml、20.2ng/ml,对照组为2.4pg/ml、17.5pg/ml、3.2ng/ml。结论:在NOD.Scid小鼠体内一次性过继发病NOD小鼠脾细胞后5~10周可成功建立1型糖尿病的小鼠模型。 相似文献
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目的:建立稳定、可靠的静脉受压的动物模型,为进一步研究髂静脉压迫综合征及其它原因所致的静脉压迫性损伤的病理机制提供实验基础。方法:SD大鼠48只随机分为4组,用4.5#、5#、6#等型号注射针头放置于左髂总静脉旁,用相同的拉力将左髂总静脉和左髂总动脉与针头一同结扎,抽出针头,造成髂静脉不同程度的受压、狭窄。观测左髂总静脉腔内压力的变化和不同时间点的病理学改变(HE/Masson染色)以及左下肢的术后表现。结果:4.5#、5#针头组出现明显的髂静脉压力增高(P<0.05),4.5#针头组左下肢术后出现淤血、涨肿,术后3d逐渐恢复。病理改变随时间推移而愈发明显。假手术组、6#针头髂静脉压力则没有明显的变化。结论:用5#针头辅助作部分髂静脉结扎,是模拟人左髂总静脉受压的最佳选择;静脉受压后血流动力学的改变将导致管壁重塑。 相似文献
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目的 构建带有脊髓运动神经元特异性启动子HB9的人类TDP-43野生型和突变型的转基因小鼠模型,研究TDP-43突变导致肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)的机制.方法 构建pHB9 - hTDP -43Q331K,M337v - IRES- EGFP转基因的载体,通过受精卵原核注射的方法制备转基因小鼠.出生的后代利用PCR方法鉴定.免疫组织化学法观察转基因小鼠的脊髓运动神经元中TDP-43的定位及包涵体的形成.采用步态评估和悬挂实验观察转基因小鼠行为学的改变.结果 获得人TDP-43突变转基因小鼠,其运动神经元胞质中TDP-43染色阳性,未见TDP-43包涵体.小鼠行为学检测显示,转基因小鼠的步距与同龄正常小鼠相比明显下降(Q331K型小鼠同Ntg相比前后肢步距t值分别为6.05和5.15,M337V型小鼠同Ntg相比前后肢步距t值分别为10.71和9.91;P<0.01);步态宽度升高(Q331K型小鼠同Ntg相比前后肢步态宽度t值分别为-11.35和-2.73;M337V型小鼠同Ntg相比后肢步态宽度t=2.49;P<0.05);平衡抓握力明显下降(Q331K型小鼠同Ntg相比落地时间t=47.43;M337V型小鼠同Ntg相比落地时间t=26.35,P<0.01).结论 利用HB9启动子可以获得在脊髓运动神经元特异性表达人TDP-43突变的转基因小鼠,TDP-43突变转基因小鼠运动神经元发生退行性改变.转基因小鼠前后肢步距、步态宽度及平衡抓握能力发生改变,结果显示脊髓运动神经元中过表达人TDP-43突变对小鼠的运动能力产生影响. 相似文献
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目的 建立携带人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变(Swedish mutation of amyloid precursor protein,APPSWE)基因的转基因小鼠模型。方法 采用受精卵原核显微注射法,将人类APPSWE转基因导入C57及昆明种小鼠受精卵内,然后将注射后保持完整的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管内,然后应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、荧光原位杂交及逆转录PCR分析子代小鼠中外源基因的整合及表达情况。结果 注射后卵的存活率和幼子出现率分别为76.62%和10.38%;外源基因整合率为35.29%;共获得6只首建小鼠,已稳定传3代,PCR检测共55只阳性;提取阳性小鼠心、脑、肝、肾组织及骨骼肌以人类APPSWE基因外显子特异的引物进行逆转录PCR分析,结果发现其心、脑组织及骨骼肌中具有人类APPSWE基因的表达。结论 说明携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因的转基因小鼠模型已制备成功。 相似文献
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窦房结和房室结缺血再灌注动物模型的建立与确认 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:制作兔窦房结和房室结缺血/再灌注(I/R)动物模型并认定。方法:10只兔心血管乳胶灌注后观察右冠脉及其分支、走行;12只兔制备右冠脉急性I/R实验,记录并分析心电图,观察此双结光、电镜结构变化。结果:右冠脉第一分支距主动脉根部为(1.9±0.3)mm,8例呈右优势型;右冠脉结扎后有66.7%的兔发生窦性及房性心律失常,83.3%出现不同程度的房室传导阻滞,再灌注早期心律紊乱加重,后逐渐恢复正常;8例兔双结起搏细胞边界不清,胞核染色加深,胞浆嗜酸性增强,超微结构示线粒体模糊乃至消失。结论:此模型的建立关键是从胸骨正中开胸、右冠状动脉根部结扎,结合心电图加以确认,方法可靠,成功率高。 相似文献
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目的调查虎纹蛙自然感染裂头蚴的情况,取裂头蚴感染实验鼠和家犬,为实验教学提供依据。方法解剖虎纹蛙收集裂头蚴,将裂头蚴感染昆明鼠和BALB/c小鼠(6条/只)和SD大鼠(10条/只),对照组灌注生理盐水;60 d后解剖实验动物,收集小鼠体内裂头蚴,并取裂头蚴寄生部位组织包埋切片。将虎纹蛙和鼠体内收集的裂头蚴分别感染家犬6条/只,在感染46 d后取粪便检查,感染60 d后解剖家犬。结果野生虎纹蛙自然感染率为40.63%(403/992);解剖实验组昆明鼠、BALB/c小鼠和SD大鼠肉眼可见皮下肌肉组织有弥漫性瘀血斑点和包块形成,镜下观察见裂头蚴周围有囊壁包绕,纤维组织增生;家犬粪检查到曼氏迭宫绦虫卵,解剖家犬收集到曼氏迭宫绦虫成虫。结论广州市花都区野生虎纹蛙裂头蚴的感染率较高;昆明鼠、BALB/c小鼠和SD大鼠均可作为曼氏迭宫绦虫的转续宿主;家犬是该虫适宜的终末宿主。 相似文献