急性早幼粒细胞白血病PML—RARα融合基因的检测及其临床意义

目的 探讨PML－RARα融合基因检测对急性早幼粒细胞白血病（APL）诊断的意义。方法 RT－PCR检测PML－RARα融合基因表达。结果（1）APL患者32例中26例PML－RARα融合基因阳性,其中L型10例,S型10例,L型＋S型6例。（2）1例M3患者伴t(9;17)染色体易位,PML－RARα融合基因L型和S型均阳性,未见报道。结论 存在PML－RARα融合基因L型和S型均阳性的M3。PML－RARα融合基因联合染色体检测有助于M3的诊断及指导治疗。     

急性髓系白血病M2b型分子生物学特征的鉴定

目的 :研究急性髓系白血病 (AML) M2 b细胞遗传学和分子生物学特征 ,探讨 AML- M2 b与 t(8;2 1)白血病的关系。方法 :应用 G显带技术分析染色体核型 ,用 RT- PCR法检测 AML 1/ MTG8融合基因转录本并进行微量残留白血病检测 ,采用 Southern Blot技术检测 AML 1及 MTG8基因重排。结果 :86 .1% (31/ 36例 )的 AML -M2 b具有 t(8;2 1) ,13.9% (5 / 36例 )无 t(8;2 1)。在 AML- M2 b中 ,AML1/ MTG8融合基因转录本的检出率为10 0 % (44 / 44例 ) ,其中包括 5例无 t(8;2 1)的病例 ,AML1基因和 MTG8基因的重排检出率分别为 81.8%和71.0 %。 13例完全缓解 (CR)的 AML- M2 b中 12例可检出 AML1/ MTG8融合基因转录本。结论 :AML- M2 b与国际上的 t(8;2 1)白血病所指为同一疾病实体 ,AML 1/ ETO融合基因是这种疾病的基因标志 ,AML - M2 b可分为 t(8;2 1) ( ) AML 1/ ETO( ) AML - M2 b和 t(8;2 1) (- ) AML 1/ ETO( ) AML - M2 b。经化疗获 CR的 AML - M2 b仍可检出微量残留白血病细胞。     

实时定量荧光反转录-聚合酶链反应检测急性白血病AML1／ETO融合基因

  【摘要】　目的　建立实时定量荧光反转录-聚合酶链反应（RQ RT-PCR）的方法并用来检测AML-M2患者中AML1／ETO融合基因的拷贝数,观察患者体内融合基因阳性率、该融合基因转录水平的变化情况及AML1／ETO融合基因阳性患者对治疗的反应。方法　利用含AML1／ETO融合基因的Kasumi-1细胞株构建质粒标准品并制作标准曲线,检测25例AML-M2患者的骨髓及外周血标本45份,个别患者连续监测融合基因转录表达水平。25例患者均同时行流式细胞术免疫分型检测及骨髓细胞染色体检查,确诊后给予MA方案进行诱导缓解。结果　在28 %（7／25）的AML-M2初发确诊患者中检测到AML1／ETO阳性（AML1／ETO：ABL为0.01～19.2）,其中5例（20 %）有t(8;21)(q22;q22)。连续监测患者融合基因转录表达水平与临床缓解和复发的变化情况相吻合。7例AML1／ETO融合基因阳性患者均在MA治疗1个疗程后达完全缓解,AML1／ETO融合基因下降3个数量级。其余18例完全缓解11例。连续监测7例AML1／ETO融合基因阳性患者6个月均处于完全缓解状态。结论　实时定量荧光PCR技术成熟、操作简便,检测白血病融合基因结果准确稳定,对于临床明确诊断、具体分型、动态观测肿瘤负荷、选择治疗方案、评估治疗效果和预后都有较大价值。     

二例伴有i(17q-)的急性早幼粒细胞白血病的临床和实验研究

  目的 探讨伴有i(17q-)的急性早幼粒细胞白血病（APL）的临床和实验室特征。方法 骨髓细胞经24 h培养后按常规方法制备染色体,用R显带技术进行核型分析,并用PML／RARα和HER-2探针进行荧光原位杂交（FISH）检测。用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PML／RARα融合基因。结果 2例的临床和血液学改变符合AML-M3诊断。染色体核型分析揭示2例患者染色体均存在t(15;17)易位及i(17q-),并通过FISH检测加以证实。2例RT-PCR 均检测到了PML／RARα融合基因。结论 i(17q-)是APL中一种少见的染色体附加异常,其预后意义有待进一步讨论。     

长期生存的急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的变化及意义

目的:观察长期生存的急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因的变化,探讨其临床意义。方法:运用筑巢式反转录聚合酶链(RT蛳PCR)方法,观察生存5 a以上的28例APL 的PML/RARα融合基因变化。结果:(1)初诊时10例PML/RARα融合基因测定9例阳性,阳性率90.0%。(2) 完全缓解后在不同时期阳性率测定结果:6个月时64.3 %,12 个月时46.7 %,24个月时31.6 %,36个月时25.0 %,48 个月时17.8 %,60个月时17.8 %。>60个月21.4 %。(3)3例60 个月时血象、骨髓为完全缓解状态,但PML/RARα融合基因阳性,其中2例62 个月、78 个月时复发。1例坚持化疗至96 个月时方转阴性,现持续缓解116 个月。3例PML/RARα融合基因由阴性转为阳性后复发。其余病例PML/RARα融合基因持续阴性,血象、骨髓完全缓解。(4)缓解后中止治疗的3例中,1例PML/RARα融合基因持续阳性在62 个月时复发死亡。2例由阴性转为阳性病例中1例在119 个月时复发死亡。1例CR 99个月复发,经白血康治疗后CR2。CR2 6个月时仍阳性。现生存112 个月。结论:长期生存的APL患者PML/RARα融合基因持续阳性或由阴性转为阳性常与复发有关。持续阴性常伴随长期无病生存。完全缓解后的维持治疗尚为一艰巨而长期的过程。对持续阳性病例,坚持长期、足够强烈的继续治疗,维持持续的首     

急性髓系白血病Evil基因表达的研究

目的:探讨急性髓系白血病中Evil基因表达及意义.方法:应用RT-PCR方法检测了94例急性髓系白血病(AML,包括初治19例,复发23例,缓解22例)患者及10名正常对照Evil基因的表达.结果:10名正常人骨髓单个核细胞中无Evil mRNA的表达.AML患者Evil基因总的阳性表达率为18.1%(17/94),M5型未见表达,其中初治、复发、缓解组的Evil基因阳性率分别为26.5%、17.4%、0,初治和复发组差别无显著性(P=0.554).M3患者中Evil、PML/RARα双阳性组与PML/RARα单阳性组相比复发率高(P＜0.05),早期死亡率高.Evil阳性的AML患者多数生存期短.结论:Evil基因是一个原癌基因,在髓系白血病的发病中起重要作用,是髓系白血病预后不良的一个指标.     

PML/RAR α融合基因检测临床应用及变异易位的研究

目的 :优化PML RARα融合基因检测方法 ,观察变异易位及其临床意义。方法 :RT PCR查骨髓及部分外周血PML RARα融合基因 ,变异易位产物作测序分析。结果 :发病期的 8例APL患者 (初发 4例、复发 4例 )PML RARα融合基因均阳性 ;缓解期APL患者的 2 0人次检查中 6人次阳性 ,而其骨髓涂片早幼粒细胞比率均小于 5 % ;发现一种新的S型变异易位 ,并见L、S型同时存在于同一个体。外周血中的阳性率低于骨髓中。结论 :证实S型 2 0 6bp的变异产物是一种新的变异易位产物 ;同一个体L、S型可同时存在 ;提取骨髓单个核细胞用于RT PCR查PML RARα融合基因效果最佳     

急性髓系白血病Evi1基因表达的研究

目的 :探讨急性髓系白血病中 Evi1基因表达及意义。方法 :应用 RT- PCR方法检测了 94例急性髓系白血病 (AML ,包括初治 4 9例 ,复发 2 3例 ,缓解 2 2例 )患者及 1 0名正常对照 Evi1基因的表达。结果 :1 0名正常人骨髓单个核细胞中无 Evi1 m RNA的表达。AML 患者 Evi1基因总的阳性表达率为 1 8.1 % (1 7/94 ) ,M5型未见表达 ,其中初治、复发、缓解组的 Evi1基因阳性率分别为2 6 .5 %、1 7.4 %、0 ,初治和复发组差别无显著性 (P=0 .5 5 4 )。M3患者中 Evi1、PML /RARα双阳性组与 PML /RARα单阳性组相比复发率高 (P<0 .0 5 ) ,早期死亡率高。 Evi1阳性的 AML患者多数生存期短。结论 :Evi1基因是一个原癌基因 ,在髓系白血病的发病中起重要作用 ,是髓系白血病预后不良的一个指标。     

多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术在急性髓系白血病中的联合应用

背景与目的:细胞遗传学分析在白血病的诊断和预后判断中有重要价值,但常规显带不仅耗时,且难以获得良好的分裂相;而聚合酶链反应具有灵敏、快速的特点.本研究探讨联合应用多重巢式RT-PCR和染色体核型分析,对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中融合基因的表达及其在各亚型的分布和克隆性染色体异常的检出情况.方法:采用多重巢式RT-PCR技术对60例AML病例进行检测,其中37例同时进行染色体R或G显带.结果:60例AML患者中检出融合基因28例(46.7%),包括AML1/ETO、PML/RARα、CBFβ/MYH11、MLL基因异常(包括MLL/AF6、MLL/AF9、MLL/AF10、MLL/MLL)、DEK/CAN、TEL/PDGFR、AML1/MDS1(EVI-1).同时进行染色体R或G显带的37例病例中有30例可供分析,其中14例(46.7%)检出染色体结构和数目异常;联合多重RT-PCR可使AML克隆性染色体异常检出率增至59.5%(22/37).结论:联合多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术可以提高克隆性染色体异常的检出率.     

双色双融合荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因的临床意义

目的 检测bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CML）,急性淋巴细胞白血病（ALL）和真性红细胞增多症（PV）中的表达,以了解其临床意义。方法 采用双标记双融合bcr/abl探针进行荧光原位杂交（D-FISH）。检测了7例患者骨髓中期和（或）间期细胞。结果 38例CML患者中bcl/abl阳性为34例,占89.5%,其中1例患者发病时,细胞遗传学显示典型的t(9;22),应用干扰素治疗38个月后,bcr/abl基因转为阴性;1例异基因外周血造血干细胞移植术后60d的患者,细胞形态学及细胞遗传学均显示完全缓解,但FISH检测仍有3.0%的细胞为bcr/abl基因因阳性,24例ALL患者中,6例bcr/abl阳性,占25.0%,2例PV患者bcr/abl阴性,3例CML待排的患者bcr/abl均阴性,其中1例确诊为原发性血小板增多症;1例进一步检测ETO/AML1基因后诊断为M2a;1例仍未能明显诊断,3例bcr/abl阴性的CML中,难治性白血病2例;6例bcr/abl阳性的ALL中,难治性白血病5例,结论 用双色双融合bcr/abl探针进行FISH杂交,可准确地检测出bcr/abl融合基因,是临床诊断,判定预后及微小残留病的有效监测指标。     

急性髓系白血病伴新的t(8;21)变异易位——t(7;21)(p21;q22)易位

目的:探讨1例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)伴新的t(8; 21)变异易位即t(7; 21)(p21;q22)易位患者的临床与分子生物学特点.方法:将AML患者的骨髓细胞经短期培养后按常规方法制备染色体,R显带进行核型分析;利用AML1/ETO双色双融合探针进行荧光原位杂交检测;实时荧光定量PCR法检测AML1/ETO融合基因的转录本拷贝数.结果:患者的常规细胞遗传学分析结果显示为t(7; 21)(p21;q22)易位.86％的骨髓细胞为AML1/ETO融合基因阳性,融合基因转录本为51 440个拷贝/10 000个内参Ab1基因拷贝.结论:t(7;21)(p21; q22)是一种新的t(8; 21)(q22; q22)变异易位,与其他类型的t(8; 21)变异易位相似,预示有良好预后.     

治疗相关性急性早幼粒细胞白血病的临床及实验室特征（附1例报告）

目的：探讨治疗相关性早幼粒白血病（ t-APL）的发病机制、临床及实验室特征。方法：对1例前列腺癌伴发的t-APL行病历分析及血象、骨髓象、FISH等相关检查分析。结果：放疗为本例t-APL的发病原因。血象示三系轻度减少。骨髓象示异常早幼粒细胞克隆性增生。FISH检测证实存在PML/RAR 融合基因并伴发多倍体。结论：t-APL与APL临床及实验室特征相似,而对于骨髓象异常早幼粒细胞比例增高不明显的t-APL,FISH检测为确诊的重要方法。     

Acute Myelogenous Leukemia without Maturation with a Retinoic Alpha-Receptor Deletion: A Case Report

Acute promyelocytic leukemia (APL) is characterized by a t(15;17) which fuses the 17q retinoic acid alpha-receptor sequence to the 15q PML gene sequence. The resulting fusion product plays a role in the development and maintenance of APL, and is very rarely found in other acute myeloid leukemia (AML) subtypes. Rare complex APL genomic rearrangements have retinoic acid alpha-receptor sequence deletions. Here we report a retinoic acid alpha-receptor sequence deletion in a case of AML without differentiation. To our knowledge, this is the first example of a retinoic acid alpha-receptor sequence deletion in this AML subtype.Key words: Acute myelogenous leukemia without maturation, PML/RAR?, Deletion, t(15;17)(q22;q21), Acute promyelocytic leukemia, AML-M3, AML-M1     

Three way translocation in a new variant of t(8;21) acute myeloid leukemia involving Xp22

The t(8;21)(q22;q22) is one of the most frequent chromosomal abnormality associated with acute myeloid leukemia (AML) M2 sub type. The additional chromosomal abnormalities including structural and numerical are frequently reported with the translocation, t (8;21)(q22;q22). We report a case of AML-M2 with t(X;8;21)(p22;q22;q22) associated with loss of Y chromosome. Using a dual color fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis with ETO and AML1 probes, we demonstrated an ETO/AML1 fusion signal on the derivative chromosome 8 and one ETO signal on derivative Chromosome Xp22. The patient did not respond to therapy and follow-up of cytogenetics revealed same chromosome abnormality. Hence, this three way translocation involving X chromosome might be associated with poor prognosis.     

伴3'RARα亚显微缺失的急性早幼粒细胞白血病一例

 目的　报道1例伴RARα 3'-末端（3'RARα）亚显微缺失的M3r亚型急性早幼粒细胞白血病（APL）病例及其形态学、细胞遗传学、分子遗传学和分子生物学的研究结果。方法　骨髓细胞直接法和短期培养法制备染色体,应用反带技术进行核型分析;分别用CEP X／Y α-卫星DNA探针、LSI PML-RARα 双色双融合探针和LSI RARα 双色断裂点分离探针进行荧光原位杂交（FISH）分析;实时定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测PML-RARα 融合基因转录本;多重巢式RT-PCR技术检测急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,包括PML-RARα,PLZF-RARα和NPM-RARα融合基因转录本。结果　反带分析显示核型为45,X,-Y[6]／46,XY[8],CEP X／Y探针FISH进一步证实了Y染色体丢失;RARα双色断裂点分离探针FISH分析显示1个RARα等位基因的整个3'-末端缺失;通过细胞遗传学、FISH以及RT-PCR等方法检测,排除PML-RARα、PLZF-RARα、NPM-RARα、NuMA-RARα和STAT5b-RARα重排。结论　识别APL中一种新的RARα 基因重排类型（3'RARα 亚显微缺失而无X-RARα 融合）,RARα 双色断裂点分离探针FISH分析是明确该异常的有效手段,其分子学结果有待进一步阐明。     

T(1;21;8)(p34;q22;q22): a novel variant of t(8;21) in acute myeloblastic leukemia with maturation

The complex variants of t(8;21) involving chromosomes 8 and 21 as well as another chromosome account for approximately 3% of acute myeloid leukemia patients. We report here a 30-year-old male patient with AML-M2. Fluorescence in situ hybridization analysis using dual-color fluorescence ETO and AML1 probes located at 8q22 and 21q22 respectively showed an AML1/ETO fusion signal on the derivative chromosome 8. Whole chromosome painting probes were used for chromosome 1, 8 and 21 and revealed a three-way translocation (1;21;8)(p34 ~ p35;q22;q22). Involvement of chromosome region 1p34 has never been reported earlier, although region 1p35 as a variant in AML with t(8;21) has been reported with an AML1/ETO fusion signal on the 1p35 rather than der(8). In conclusion, combining conventional karyotype, FISH or RT-PCR analyses are a rational strategy for the identification of the complex variants of t(8;21) translocation which could be critical events responsible for leukemogenesis.