痰标本p16和MGMT基因甲基化对肺癌的诊断价值

目的：分析肺癌患者痰标本中p16和MGMT基因启动子区甲基化的改变情况,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标志物的价值。方法：运用甲基化特异性PCR技术,检测77例原发性肺癌患者痰标本和部分对应肿瘤组织(53例),以及30例正常对照者痰标本中p16和MGMT基因启动子区域的甲基化改变。结果：49例(63．6%)肺癌患者痰标本中检测到了pi6基因异常甲基化,34例(44．2%)检测到了MGMT基因异常甲基化,77例患者痰标本中2个基因中至少有1个基因出现甲基化为64例(83．1%),对肿瘤的检出灵敏度较高。长期吸烟史是影响肺鳞状细胞癌痰标本p16(P=0．001)基因启动子区甲基化的因素。随TNM分期增高,肺鳞状细胞癌患者痰标本中p16基因甲基化比例增高(P=0．021)；随TNM分期增高,肺腺癌患者痰标本MGMT基因甲基化比例增高(P=0．023)。对照组正常人痰液标本未发现p16和MGMT基因启动子区甲基化。结论：痰标本中p16和MGMT基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效生物标志物之一。     

血浆中检测FHIT、p16、MGMT和RASSF1A基因甲基化在肺癌诊断中的价值

目的:探讨血浆中脆性组氨酸三连体基因(fragile histidine triad,FHIT)、p16基因、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(O6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)及信号转导通路基因(rasassociation domain family1A,RASSF1A)等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specifi c PCR,MSP)法,检测53例肺癌组织和对应的血浆标本以及24例肺良性病变组织中FHIT、p16、MGMT和RASSF1A4种基因启动子区甲基化状态。结果:肺癌组织中FHIT、p16、MGMT和RASSF1A基因启动子区甲基化检出率分别为39.6%(21/53)、49.1%(26/53)、35.8%(19/53)和18.9%(10/53);其对应的血浆标本中这4个基因的甲基化检出率分别为35.8%(19/53)、49.1%(26/53)、28.3%(15/53)和17.0%(9/53),两组标本甲基化检出率存在着较好的一致性(P>0.05)。24例肺良性病变组织标本和血浆标本中分别有同1例(0.04%)出现p16基因甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4项指标联合检测可显著提高肺癌检测的敏感度(73.6%)和特异度(95.8%)。p16基因在血浆中甲基化检出率与患者吸烟指数有明显相关性(P<0.05)。结论:血浆中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标。     

胃癌组织中p16基因甲基化状态及临床意义

[目的]探讨胃癌患者癌组织、癌旁组织以及对照正常胃黏膜组织中p16基因的甲基化状态,及其与临床病理参数及预后的关系。[方法]应用甲基化特异性实时荧光聚合酶链反应技术检测92例胃癌患者癌组织及配对癌旁组织中p16基因启动子区5′-CpG岛甲基化状态,分析p16基因异常甲基化与患者临床病理特征以及预后之间的关系。[结果]胃腺癌患者癌组织中检测到p16基因甲基化79例(85.9%),癌旁组织11例(12.0%),胃炎患者组织10例(20.8%),健康人未检测到甲基化。p16基因甲基化与肿瘤大小、分化程度、是否淋巴管侵犯、T分期、有无淋巴结转移、有无远处转移、临床分期有关(P<0.05)。p16基因甲基化影响患者预后,但不是胃癌患者无病生存的独立预后因子。[结论]胃腺癌患者p16基因甲基化与肿瘤的生物学行为有关,提示肿瘤进展,恶性程度高,预后欠佳。     

肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化的检测

目的 分析肺癌患者外周血血浆中p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨血浆中p16基因异常改变作为肺癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性。方法 利用半巢式甲基化特异性PCR技术,检测了137例肺癌患者血浆和112例相对应肿瘤组织DNA p16基因的异常甲基化情况。结果 在血浆和肿瘤组织中的p16基因甲基化检出率分别为75．2％和80．4％;其中鳞癌、腺癌、腺鳞癌和小细胞肺癌患者血浆标本的阳性率分别为77．9％,65．1％,75．1％和91．7％。血浆DNAp16基因甲基化仅在肿瘤组织存在同样甲基化的病例中被检出。血浆和肿瘤组织中,p16基因的甲基化异常改变与肿瘤的分期、分型无明显相关性。结论 分析血浆DNA的p16基因异常甲基化有可能成为辅助肺癌诊断的有效方法之一。     

NSCLC患者血清中p16、DAP基因甲基化的研究

目的：探讨p16、死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase,DAP）基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌（NSCLC）患者诊断的基因标志物的可行性。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测30例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DAP基因的异常甲基化，结果：NCSLC肿瘤中60．0％（18／30）检测出至少一个基因启动子呈甲基化改变，在18例肿瘤组织检测到异常甲基化的患者中，50．0％的患者（9／18）在血清中检测到相应的改变。所有的癌旁组织、健康对照组的血清中及正常肺组织均未检测到p16、DAP的甲基化，结论：检测NSCLC患者血清中p16、DAP基因异常甲基化有可能成为肺癌诊断的分了标志物。     

肺癌患者组织样品中p16基因的异常甲基化

目的 分析肺癌患者组织样品中p16基因启动子区域异常甲基化的改变情况,评价该指标作为辅助临床诊断的分子标记物的价值。方法 运用甲基化特异性PCR技术,检测51例原发性肺癌患者的肿瘤组织、外周血血浆和痰标本中p16基因启动子区域的异常甲基化改变。结果 在43例肿瘤组织、36例血浆和39例痰标本中检测到了p16基因异常甲基化。凡在肿瘤组织检出p16基因甲基化阳性的病例,其血浆和(或)痰标本也为阳性;而肿瘤组织p16基因甲基化阴性的病例,其血浆和痰标本也为阴性。将血浆和痰标本的p16甲基化分析与痰细胞学检查相结合,可以发现92．2％的肺癌病例。结论 利用半巢式甲基化特异性PCR进行的血浆和痰标本p16基因甲基化分析,有可能成为辅助肺癌诊断的分子生物学指标。     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值.方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病.标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察.结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在.24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在.结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术.     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的：探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation—specific PCR，MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法：选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本，其中32例为肺癌．24例为良性肺部疾病。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果：32例肺癌组织标本中，14例(43．8％)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化，其中9例(643％)在相应的BALF中检测出甲基化存在。5例(35．8％)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在。24例良性肺部疾病，其中肺囊肿10例，肺结核14例。手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论：MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

97.非小细胞肺癌病人血浆p16基因异常甲基化的检测

肺癌高死亡率的根本原因在于早期诊断的困难。现代分子肿瘤学的研究进展揭示了在肺支气管上皮癌变过程中发生的多种分子水平异常,使得我们有可能将外周血等容易取得的微创性样品中的分子病理学改变作为肺癌早期诊断的辅助指标。通过以往的研究我们发现,一条等位基因缺失而另一条等位基因异常高甲基化是肺癌组织中抑癌基因p16失活的重要机制之一。在这项研究中,我们利用从非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）病人外周血血浆中提取的DNA分析了P16基因的甲基化状态。采用改进的甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）的方法,95例NSCLC病人的血浆DNA被检测,其中肺鳞癌59例,肺腺癌36例。作为对照,75例相应的肿瘤组织被同时分析。结果显示,p16基因启动子区高甲基化状态的检出率在血浆中为72．6%（69／95）,而在相应的肺癌组织中为74．7％（56／75）。值得注意的是,血浆DNA p16基因异常甲基化只是从那些肿瘤组织DNA表现p16基因高甲基化的病例中被检出——二者存在极好的符合率。我们还发现,在Ⅰ期病人中,血浆p16基因异常高甲基化在肺鳞癌(82.4%）比在肺腺癌（33.3％）中要高得多（P＜0.005）。从而提示,血浆p16基因异常甲基化有可能成为一项早期发现非小细胞肺癌（尤其是鳞癌）的、非常重要的分子病理学指标。而血浆DNA的MSP则是检测这一指标的敏感、可靠并且便于操作的技术之一,成为一种可以应用于人群筛查的方法。     

FHIT和p16基因甲基化与肺癌的发生

背景与目的:探讨FHIT和p16基因甲基化与肺癌发生之间的关系. 材料与方法:采用甲基化特异性PCR检测59例原发性肺癌组织,相对应的32例正常组织及11例支气管鳞状化生组织中FHIT基因、p16基因启动子区CpG岛甲基化状况.结果:肺癌组织和正常肺组织中的FHIT基因甲基化率分别为37.3%(22/59)、0.0%(0/32),两组间的差异有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织FHIT基因甲基化阳性率为18.1%(2/11).肺癌组织和正常肺组织中的p16基因甲基化率分别为50.8%(30/59)、0.0%(0/32),两组间的差异具有统计学意义(P<0.01);支气管鳞状化生组织p16基因甲基化阳性率为18.1%(2/11).肺癌患者吸烟组中FHIT、p16基因甲基化联合检测的阳性率为90.6%(29/32),与非吸烟组(33.3%.9/27)相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论: FHIT基因和p16基因启动子区甲基化可能与肺癌的发生有关.     

中国非小细胞肺癌患者血清DAPK基因、p16基因启动子甲基化的分析(英文)

目的分析65名中国南京军区南京总医院的非小细胞肺癌(NSCLC)住院患者血清中DAPK、p16启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测65例NSCLC患者血清DAPK、p16基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理资料的关系。结果 NSCLC患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％(20/65),p16基因甲基化检出率为43．1％(28/65),而正常对照组和良性肺部疾病组血清未检出DAPK基因、p16基因甲基化,DAPK基因、p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系。结论 DAPK基因、p16基因检出启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标志物之一。     

中国非小细胞肺癌患者血清DAPK基因、p16基因启动子甲基化的分析

Objective： To evaluate the clinical significance of the aberrant methylation of DAPK gene and p16 gene in sera from 65 NSCLC patients from Nanjing General Hospital of Nanjing Command, China. Methods： A methylation-specific PCR （MSP） was performed for the detection of promoter hypermethylation of DAPK gene and p16 gene in blood DNA from 65 cases of NSCLC, and to analyze the relation of the aberrant methylation of DAPK gene and p16 gene and the clinicopathological data. Results： 30.8% （20/65） of the sera from 65 cases of NSCLC showed hypermethylation for DAPK promoter and 43.1% （28/65） the same for p16 promoter, whereas no methylated DAPK gene promoter and p16 gene promoter were found in sera from the patients with lung benign diseases and normal controls. Methylated DAPK gene promoter and p16 gene promoter in sera were not closely correlated with the pathological classification, stage, metastasis and differentiation in NSCLC. Conclusion： Detection of the aberrant methylation of DAPK gene and p16 gene in blood DNA from NSCLC patients might offer an effective means for the earlier auxiliary diagnosis of the malignancy.     

原发性肝癌患者血清p16和DAPK基因启动子甲基化的研究

 目的研究原发性肝癌患者血清p16和DAPK基因启动子甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测64例PLC患者血清p16基因和DAPK基因启动子甲基化,并分析与临床病理资料的关系。结果PLC患者血清p16基因和DAPK基因甲基化检出率分别为76.6%(49/64)和40.6%(26/64),而正常对照组和良性肝部疾病组血清未检出p16基因和DAPK基因甲基化;p16基因和DAPK基因甲基化检出率与HBsAg、分期及转移状态无明显关系,而与AFP有关联。结论p16基因和DAPK基因启动子异常甲基化参与了PLC的发生发展过程,并可作为PLC早期辅助诊断的分子标志物之一。     

Hypermethylation of E-cadherin gene is frequent and independent of p16INK4A methylation in non-small cell lung cancer: potential prognostic implication

E-cadherin gene is often termed a 'metastasis suppressor' gene and inactivation of this gene through promoter methylation occurs in various epithelial cancer. This study assessed the methylation status of p16INK4a and E-cadherin genes, correlated with clinical characteristics in lung cancer patients. Forty-five patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) were evaluated for methylation status of p16INK4a and E-cadherin genes by using the methylation-specific PCR. E-cadherin expression in tumor samples was examined by immunohistochemistry. Overall duration of survival in different subsets of NSCLC with or without p16INK4a or E-cad methylation at diagnosis was compared by using the Kaplan-Meier method and log-rank test. We found the hypermethylation of p16INK4a gene in 38% (17/45) of our subjects. While the E-cadherin gene was hypermethylated in 62% (28/45) related with reduced E-cadherin expression, and methylation status of both p16INK4a and E-cadherin genes seemed to be independent. Seventy-six percent (34/45) of NSCLC patients had an abnormal methylation pattern in at least one gene. Although there was no difference in overall survival of patients between methylated p16INK4a and unmethylated p16INK4a, NSCLS patients with hypermethylation of both genes (concordant pattern) had a significantly good prognosis. In contrast, NSCLC patients with hypermethylated p16INK4a but un-methylated E-cadherin gene (discordant pattern) had a significantly poor prognosis. E-cadherin and p16INK4a are commonly methylated in NSCLC and the methylation pattern of p16INK4a and E-cadherin genes may have prognostic value for the outcome of NSCLC patients.     

PROMOTER HYPERMETHYLATION OF p16 GENE AND DAPK GENE IN SERA FROM HEPATOCELLULAR CARCINOMA （HCC） PATIENTS

Objective： To analyze the aberrant methylation of p16 gene and DAPK gene in sera from primary liver cancer patients ad to evaluate the clinical significance. Methods： A methylation-specific PCR was performed for the detection of promoter hypermethylation of p16 gene and DAPK gene in blood DNA from 64 cases of HCC patients, and to analyze the relation of the aberrant methylation of p16 gene and KAPK gene and the clinical pathological data. Results： 76.6%（49/64） of the sera from 64 cases of HCC patients showed hypermethylation for p16 promoter and 40.6% （26/64） for KAPK promoter, whereas no methylated p16 gene promoter and DAPK gene promoter were found in sera from benign liver diseases patients and normal control. Methylated p16 gene and KAPK gene promoters in sera did not strongly correlated with HBsAg, stage, metastasis and differentiation in HCC; but strongly correlated with AFP. Conclusion： Detection of the aberrant methylation of p16 gene and KAPK gene in blood DNA from HCC patients might offer an effective means for the earlier auxiliary diagnosis of the malignancy.     

RASSF1A和p16 转录本在非小细胞肺癌中的表达及启动子区甲基化

 目的 研究RASSF1A和p16基因在国人非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的转录及启动子区甲基化情况，探讨其转录失活的机制，为NSCLC的诊断和治疗寻找新的途径。方法 应用半定量RTPCR和甲基化特异性PCR法分析96例NSCLC及远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因mRNA的表达和启动子区甲基化情况。结果 （1）53．12％（51／96）的NSCLC中RASSF1A表达明显下调或缺失；36．46％（35／96）的p16表达下调或缺失，而远癌正常肺组织均表达良好。（2）96例NSCLC中RASSF1A甲基化率48．96％（47／96），该基因表达明显下调或缺失的51例中39例（76．5％）出现甲基化，表达正常的45例中8例（17．8％）出现甲基化，两组对比差异有统计学意义（P〈0．05）；96例NSCLC中33例（34．38％）检测到p16启动予区甲基化，p16基因表达明显下调的35例中20例（57．1％）出现该基因CPG岛的甲基化，而表达正常的61例中13例（21．3％）出现甲基化，两组比较差异显著（P〈0．05）。96例远癌正常肺组织均未检测到此两基因启动子有甲基化。结论 RASSF1A和p16基因mRNA在国人NSCLC中较高比例的表达下调或缺失；甲基化可能是两基因表达失活的主要原因。     

肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究

背景与目的：APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增（methylation—specific PCR,MSP）检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值。方法：将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI—H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚一氯仿法提取细胞DNA,并用MSP对APC基因甲基化进行验证,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中．得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析。结果：所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1．5×10^2-1．5×10^5拷贝／mL。用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1．5×10^2拷贝／mL。78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性．其中的19例（47．5％）肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1．67×10^2-6．78×10^3拷贝／mL,中位浓度为1．60×10^3拷贝／mL。38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性。结论：实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值。     

Quantitative p16 and ESR1 methylation in the peripheral blood of patients with non-small cell lung cancer

Inactivation of the p16 and ESR1 tumor suppressor genes by promoter lesion methylation has been reported in many tumor types, including lung cancer. We examined the blood of 95 non-small cell lung cancer patients (66 cases of adenocarcinoma, 23 of squamous cell carcinoma and 6 of large cell carcinoma) and 30 controls consisting of normal subjects and benign disease patients to determine the methylation ratios of p16 and ESR1 using real-time PCR. For both genes, there was a statistically significant difference in the methylation ratio between non-small cell lung cancer patients and controls (p16; p<0.01, ESR1; p<0.001). In addition, there was a strong correlation between the methylation ratio of each gene and old age (p16; p<0.01, ESR1; p<0.001 and p16 or ESR1; p<0.001), and between p16 or ESR1 methylation rate and smoking history (p<0.01). Moreover in Stage I cases, the methylation positive rate of each gene (p16, ESR1 and p16 or ESR1) was higher than the CEA positive rate (p<0.05, p<0.001, p<0.001). Evaluation of p16 and ESR1 promoter methylation in blood using real-time PCR appears to be very useful for lung cancer diagnosis and there is some possibility that these methylated genes might come to represent useful biomarkers for the early detection of lung cancer. Our study results also suggested that comparative evaluation of the methylation ratio before and after surgery might be a powerful tool to predict the prognosis of lung cancer patients.