柯萨奇病毒B3诱导大鼠心肌成纤维细胞骨桥蛋白及Ⅰ型胶原的表达情况

目的 检测柯萨奇病毒B3( CVB3)对大鼠心肌成纤维细胞骨桥蛋白(OPN)及Ⅰ型胶原表达的影响,探讨OPN在病毒性心肌炎的可能发病机制.方法 用重复感染率(MOI)为0.5 PFU/cell的CVB3感染体外培养的大鼠心肌成纤维细胞,细胞分对照组(12 h)、病毒组(感染后12 h、ld、2d及3 d).用RT-PCR及Western Blot、免疫组化检测OPN及Ⅰ型胶原表达,并将OPN表达与Ⅰ型胶原表达进行直线相关分析.结果 (1)RT-PCR测得对照组12h、病毒组12 h、1d、2d及3d5组OPN/β-actin吸光度比值分别为:0.38±0.06、0.56±0.06、0.72 ±0.05、0.98 ±0.06、0.86 ±0.02;Western Blot测得上述5组的OPN/β-actin灰度值分别为:0.26±0.03、0.36±0.03、0.52±0.04、0.76±0.05、0.62±0.02;感染后12 h,OPN表达即增高,于2d达到高峰,3d呈下降趋势,OPN/β-actin吸光度比值、灰度值比较差异均有统计学意义(F值分别为74.965、53.004,P均＜0.05);(2)RT-PCR测得心肌成纤维细胞对照组12 h、病毒组12h、1d、2d、3dⅠ型胶原/β-actin吸光度比值分别为:1.12±0.03、1.18±0.01、1.22±0.02、1.33±0.02、1.28±0.03,感染后12h Ⅰ型胶原表达即增高,于2d达到高峰,3d呈下降趋势,差异有统计学意义(F=38.241,P＜0.05);(3)OPN表达与Ⅰ型胶原有正相关关系(r=0.948,P＜0.001).结论 CVB3可诱导心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原及OPN表达,OPN表达与Ⅰ型胶原表达呈正相关,提示OPN可能促进心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原表达,参与病毒性心肌炎心肌纤维化的发病机制.     

白细胞介素-1β对小鼠气道成纤维细胞前列腺素E2表达的影响

目的研究白细胞介素-1β（IL-β）对小鼠气道成纤维细胞前列腺素E2（PGE2）表达的影响,以探讨其在吸入性损伤修复中的作用。方法分离雄性昆明种小鼠的气道成纤维细胞并进行体外培养,分别收集不同浓度的IL-1β作用后不同时间点IL-1β的培养上清液及细胞;采用酶联免疫吸附试验法和westem blot技术测定PGE2水平,环氧化酶-2（COX-2）、膜相关前列腺素E2合成酶1（mPGES1）蛋白表达。结果①经IL-1β1．0μg/L处理后不同时间点气道成纤维细胞培养上清液PGE2水平在8h[（148．2±28．3）ng／L]、16h[（267．6±45．4）μg／L]、24h[（210．5±38．6）ng／L]、48h[（198．7±36．5）ng／L]均高于各对照组[分别为（57．8±15．3）、（58．2±15．7）、（57．9±15．8）、（58．1±16．1）ng／L],差异均有统计学意义（P均〈0．01）,其中16h时间点水平最高;气道成纤维细胞COX-2表达在8h[（0．478±0．029）COX-2／β-actin、16h（0．672±0．047）cox-2／β-aetin、24h（0．617±0．036）cox-2／β-actin、48h（0．593±0．034）COX-2／β-actin]均高于对照组[（0．309±0．019）COX-2／β-actin、（0．311±0．019）COX-2／13-actin、（0．309±0．019）COX-2／β-actin、（0．310±0．018）cox-2／β-actin],差异有统计学意义（P均〈0．01）,其中16h时间点表达水平最高;气道成纤维细胞mPGESl的表达在8h（0．300±0．018）mPGES1／β-actin、16h（0．549±0．034）mPGES1／β-actin、24h（0．497±0．030）mPGES1/β-actin、48h（0．443±0．026）mPGES1／β-aetin均高于各对照组[（0．1994±0．012）、（0．201±0．013）、（0．200±0．013）和（0．200±0．012）mPGES1／β-actin],差异有统计学意义（P均〈0．01）,其中16h时间点表达水平最高。②不同浓度IL-1β处理气道成纤维细胞后,气道成纤维细胞培养上清液PGE：水平在IL-1β0．1μg／L组[（142．9±22．3）ng／L]、1．0μg／L组[（267．6±45．4）μg／L和10．0μg／L组[（587．3±106．9）μg／L]均高于对照组[（58．5±16．0）μg／L],差异有统计学意义（P均〈0．01）,并且这3组之间比较差异也有统计学意义（P均〈0．01）;气道成纤维细胞COX-2表达在IL-1β0．1μg／L组（0．525±0．031）ng／L、1．0μg/L组（0．672±0．047）ng／L和10.0μg/L组（1.012±0．064）ng／L均高于对照组（0．309±0．019）ng／L,差异有统计学意义（P均〈0．01）,并且这3组之间比较差异也有统计学意义（P均〈0．01）;气道成纤维细胞mPGES1表达在IL-1β0．1μg／L组（0．380±0．021）ng／L、1．0μg／L组（0．549±0．034）ng／L和10．0μg／L组（0．879±0．045）ng／L均高于对照组（0．199±0．012）ng／L,差异有统计学意义（P均〈0．01）,并且这3组之间比较差异也有统计学意义（P均〈0．01）。结论炎症递质IL-1β可上调气道成纤维细胞PGE2水平、COX-2和mPGES1表达,这表明IL-1β可能是通过COX-2和mPGES1的表达来影响PGE2合成,从而参与气道吸入性损伤修复过程。气道成纤维细胞可能是损伤修复过程中炎症递质的主要来源细胞之一。     

人血管内皮生长因子165基因联合间充质干细胞治疗对扩张型心肌病胶原重塑的影响

目的：探讨人血管内皮生长因子165基因（hVEGF165）联合间充质干细胞（mesenchyma1stemce11s,MSCs）治疗对扩张型心肌病胶原重塑的影响。方法：将40只扩张型心肌病（DCM）大鼠模型随机分为4组：PBS组、MSCs心肌移植联合基因治疗组（MSCs—GENE组）、MSCs心肌移植组（MSCs组）以及基因治疗组（GENE组）。心肌局部注射所构建MLC-2v／pIRES2-EG-FP-hVEGF165与MSCs,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测I型、Ⅲ型胶原和转化生长因子-β（TGF-β）基因表达,蛋白免疫印迹（Westrenb1ot）检测hVEGF165蛋白表达。结果：PBS组、MSCs＋GENE组、MSCs组以及GENE组的I型胶原PCR产物灰度比分别为（0．359±0．010）、（0．240±0．012）、（0．313±0．058）、（0．230±0．011）;而Ⅲ型胶原分别为（0．831±0．011）、（0．842±0．015）、（0．917±0．058）、（0．688±0．015）;TGF-β1分别为（0．548±0．067）、（0．370±0．012）、（0．561±0．014）、（0．369±0．098）;MSCs＋GENE组TGF-81与GENE组比较差异无统计学意义,但两者显著低于PBS组和MSCs组,提示TGF-β1表达下调;I型／III型胶原灰度比分别为（0．436±0．072）、（0．290±0．023）、（0．337±0．021）、（0．333±0．011）,其中MSCs组与GENE组比较差异无统计学意义;MSCs组与GENE组的I型／III型胶原灰度比减低,2组比较差异无统计学意义,但MSCs—GENE组进-步使I型／III型胶原灰度比减低;TGF-β1表达分析结果显示,hVEGF165基因治疗较MSCs移植使TGF-β1表达下调的作用更显著。结论：MSCs移植与hVEGF165基因治疗有可能通过下调TGF－β1表达,降低I型／III胶原比值,增加心肌顺应性,减轻心肌胶原网络重塑而改善心功能。     

缬沙坦对自发高血压大鼠左室肥厚心肌Kv4．2表达的影响

目的：探讨缬沙坦对自发高血压大鼠（SHR）左室肥厚心肌Kv4．2表达的影响。方法：将16只10周龄雄性SHR随机分成缬沙坦组和非缬沙坦组各8只;8只10周龄Wistar—Kyoto大鼠为对照组。喂药8周后分别测定各组大鼠动脉收缩压、左室质量指数（LVMI）、左室心肌Kv4．2的表达。结果：非缬沙坦组和缬沙坦组LVMI明显大于对照组（3．7±0．02mg／gand3．2±0．03mg／gVS2．5±0．03mg／g,P〈0．001）,非缬沙坦组LVMI明显大于缬沙坦组（3．7±0．02mg／gVS3．2±0．03mg／g,P〈0．001）：非缬沙坦组和缬沙坦组左心室心肌Kv4．2表达明显低于对照组（P〈0．01）,缬沙坦组左心室心肌Kv4．2的表达明显高于非缬沙坦组（P〈0．01）。结论：缬沙坦通过逆转SHR左室心肌肥厚提高左室心肌Kv4．2的表达。     

心肌梗死大鼠TGF-βl与工型胶原变化的研究

目的 研究大鼠心肌梗死后心肌转化生长因子βl（TGF-βl）与I型胶原表达，并测定大鼠血浆内TGF-βl的含量。方法 结扎冠状动脉建立大鼠心肌梗死模型，采用ELISA法测定心肌梗死不同时间内大鼠血浆内TGF-βl的含量；应用免疫荧光染色的方法，通过激光扫描共聚焦显微镜观察TCF-β与I型胶原表达的变化。结果 大鼠心梗后1 d、3 d、,5 d血浆内TGF-βl含量明显增加（P〈O．01），呈时间依赖性。心梗后24h心肌TGF-βl与I型胶原表达与假手术组相比明显增强。结论 心梗后心肌通过增加TGF-βl、I型胶原的表达参与心室重构。     

老龄大鼠脑缺血-再灌注微血管基底膜损伤变化及与纤溶酶原激活系的关系

目的研究老龄大鼠脑缺血一再灌注（I／R）不同时期微血管基底膜损伤与纤溶酶原激活系的关系。方法采用大脑中动脉阻塞（MCAO）线栓法制备大鼠局灶性脑I／R模型，将大鼠分为青年假手术组、老龄假手术组、青年模型组和老龄模型组，其中模型组又分为I3h，I／R6、12、24、72和144h各时间点组。采用免疫组化、酶谱与反向酶谱分析等方法测定各脑微血管结构、基底膜Ⅳ型胶原、层连蛋白（LN）和纤溶酶原激活系的变化。结果与青年假手术组比较，老龄假手术组Ⅳ型胶原、LN表达增强。随着I／R时间的延长，老龄与青年大鼠基底膜成分Ⅳ型胶原和LN表达递减；组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）、尿激酶型纤溶酶原激活剂（u-PA）、纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）表达水平呈先增强后降低的趋势。与青年模型组相同时间点比较，老龄模型组Ⅳ型胶原（I3h、I／R6h、I／R12h）、LN（I3h、I／R6h～24h）、t-PA（I／R6h～24h）、u-PA（I／R12h～144h）表达增强，PAI-1（I／R12h、I／R24h）表达降低，差异均有显著性。另外，PAI-1的反向酶谱分析比较，量的变化与免疫表达规律基本一致。结论随着增龄，大鼠脑微血管基底膜成分Ⅳ型胶原、LN增加。在脑I／R微血管基底膜损伤方面，老龄大鼠较青年严重，其损伤的特点与纤溶酶原激活系变化有关。     

辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的作用及机制

目的探讨辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增生、胶原合成的影响。方法用消化法对新生SD大鼠心肌成纤维细胞做传代培养,实验均采用第二代或第三代细胞。在10^-6mol／L血管紧张素Ⅱ刺激的基础上用辛伐他汀（10^-7、10r6、10^-5Smmol／L）及辛伐他汀（10。、10“mol／L）＋甲羟戊酸（2×10。mol／L）共育,对各组用MTTIZ色法测成纤维细胞增殖能力,应用羟脯氨酸比色法测定羟脯氨酸含量。结果1．AngII刺激乳鼠心肌细胞48h后应用MTT法测得吸光度值、羟脯氨酸含量较正常对照组明显升高（P〈0．05）;而辛伐他汀各浓度之间差别不明显。3．血管紧张素Ⅱ、10^-5mol／L或10^-44mol／L辛伐他汀与甲羟戊酸共同刺激成纤维细胞后,上述指标均与AngII刺激组无统计学差异（P〉0．05）。结论1．AnglI刺激乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌。2．辛伐他汀可以抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌,其作用可能通过甲羟戊酸途径和下调TGF．BlmRNA表达实现。     

乳酸和饱和氢盐水联合药物后适应减轻大鼠心肌再灌注损伤的研究

目的探讨乳酸和氢饱和盐水能否减轻心肌细胞损伤。方法72只SD大鼠随机分为假手术、缺血再灌注（R／I）、机械后适应（Post,再灌注／缺血时间为20／20s×4）、乳酸（Lac,微量注射器心肌注射乳酸）、氢饱和盐水（Hyd,微量注射器心肌注射低剂量氢饱和盐水）和乳酸＋氢饱和盐水组（Lac＋Hyd,微量注射器心肌注射乳酸和低剂量氢饱和盐水）6组。测定再灌注3min后右心房血浆pH值,处死大鼠取心肌组织测定MDA和SOD含量;另测定24h后血流动力学、动脉血心肌酶含量和心肌梗死面积。结果Lac＋Hyd组再灌注后3min右心房血浆pH值显著低于R／I组（7．32±0．06vs．7．43±0．03,P〈0．05）,MDA含量显著低于R／I组[（1．14±0．16）nmol／mgprovs．（1．56±0．21）nmol／mgpro,P〈0．05],SOD含量高于R／I组[（57．92±15．12）U／mgprovs．（35．48±12．46）U／mg pro,P〈0．05]。再灌注24h后,Lac＋Hyd组CK[（579．00±223．61）U／Lvs．（1268．52±211．53）U/L,P〈0．05]和CK-MB[（392．94±166．25）U／Lvs．（962．21±273．80）U／L,P〈0．05]含量显著低于R／I组,心肌梗死面积比例显著低于R／I组（27．01％±6．56％vs．49．18％±8．52％,P〈0．05）。以上指标均与Post组相比均无明显差异（P均〉0．05）。Lac组和Syd组CK和CK-MB含量显著低于R／I组,显著高于Post组Lac＋Hyd组（P均〈0．05）,但心肌梗死面积比例同R／I组比较无统计学差异（P〉0．05）。结论局部注射乳酸和氢饱和盐水可较好模拟机械后适应,有效减轻心肌细胞损伤。     

应用成纤维细胞胶原网格体外三维培养模型观察重组核心蛋白多糖固相态时对转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的应答

目的：模拟体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1接触方式，研究核心蛋白多糖在固相抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用。 方法：实验于2005-01／09在广州市创伤研究所完成。①实验成纤维细胞的组织来源：取材于广州市红十字会医院，患者自愿，正常皮肤为包皮。取新鲜包皮，修除表皮和皮下组织，加入含体积分数0．02的胎牛血清的DMEM培养，实验用第4-8代细胞。②采用醋酸法从鼠尾腱中提取Ⅰ型胶原，使用浓度为2g/L，网格胶原终浓度为1g／L，成纤维细胞密度为1&;#215;10^9L^-1将胶原细胞混悬液按2mL／皿均匀加入直径35min的培养皿内，37℃培养10min，混悬液便形成凝胶即成纤维细胞胶原网格，再加入相应的培养液。分为4组：对照组、核心蛋白多糖组、转化生长因子β1组、转化生长因子β1＋心蛋白多糖组。③观察成纤维细胞胶原网格的收缩，Western blot法检测成纤维细胞胶原网格中成纤维细胞纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的表达，反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达。 结果：①成纤维细胞胶原网格收缩的变化：对照组成纤维细胞胶原网格培养12h，收缩到起始面积的（81．2&;#177;4．9）％，12-24h收缩加剧，在24h收缩到起始面积的（47．4&;#177;4．7）%，以后收缩减慢，在48h收缩到起始面积的（37．3&;#177;3．6）％，72h收缩到起始面积的（29．6&;#177;3．6）％，96h收缩到起始面积的（28．7&;#177;2．8）％，以后不再收缩；核心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在12，24，48，72，96h均高于对照组（P〈0．05）：转化生长因子β1组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均低于对照组（P〈0．01）；转化生长因子β1＋心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均高于转化生长因子β1组（P〈0．05），与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。 ②成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的变化：核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达（1391．61&;#177;126．27，525．97&;#177;60．10），与对照组（1474．52&;#177;133．84，569．41&;#177;62．55）比较无显著差异（P〉0．05），转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达（2909．77&;#177;264．04，2725．46&;#177;150．54）显著高于对照组（P〈0．01），转化生长因子β1＋核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达（1775．25&;#177;161．09，926．34&;#177;51．16）显著低于转化生长因子β1组（P〈0．05），且与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。③成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的变化：核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达（0．19&;#177;0．05，0．07&;#177;0．02），与对照组（0．2l&;#177;0．06，0．08&;#177;0．03）比较无显著差异（P〉0．05），转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达（0．86&;#177;0．15。0．36&;#177;0．10）显著高于对照组（P〈0．01），转化生长因子β1＋核心蛋白多糖组纤渣酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达（0．34&;#177;0．09，0．13&;#177;0．04）显著低于转化生长因子β1组（P〈0．05），且与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。 结论：重组核心蛋白多糖融入胶原凝胶，能显著抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用，表明在体内核心蛋白多糖具有拮抗转化生长因子β1的作用。     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后Hsp20表达的影响

【目的】探讨丹红注射液干预大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白（Hsp ）20表达及意义。【方法】104只SD大鼠随机分为：8只正常对照（C组）,未做任何处理;缺血再灌注损伤48只（I／R组）,丹红注射液干预48只（DI／R组）。I／R组与DI／R组均采用大脑中动脉闭塞方法制作大鼠脑缺血再灌注模型,DI／R组从实验前一天开始腹腔注射丹红注射液（8 mL／kg ,Qd）,直到各时间点（脑缺血2h再灌注后6h、24h、48h、72h、7d,每个时间点8只）处死,I／R组与DI／R组相同时间点注射生理盐水。比较I／R组与DI／R组脑梗死体积和各时间点神经功能缺损评分和 Hsp20阳性细胞数。【结果】I／R组脑梗死体积为（105．11±10．60）mm3,显著高于DI／R组（82．16±7．02）mm3,其差异有统计学意义（ P ＜0．05）。I／R组脑缺血再灌注后6 h神经功能缺损评分与DI／R组比较无显著性差异（P＞0．05）,而在24h、48h、72h、7d时,I／R组的神经功能缺损评分显著高于DI／R组（P＜0．05）,DI／R组缺血再灌注时间越长,神经功能缺损评分越低。正常对照组神经细胞中Hsp20阳性细胞很少;I／R组 Hsp20的表达6 h开始随时间增加,在72 h Hsp20表达达到高峰,7 d表达陡然减少;DI／R组 Hsp20阳性细胞数趋势同I／R组,且均显著高于I／R组相应的各时间点阳性细胞数（ P ＜0．05）。【结论】大鼠脑缺血再灌注损伤后丹红干预,其大鼠Hsp20的表达增加,脑缺血后损伤程度减轻。     

12-脂加氧酶在病毒性心肌炎小鼠心肌内的表达

目的 探讨12-脂加氧酶(12-LO)在病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌内的表达.方法 将4周龄Balb／c小鼠随机分成实验组和正常对照组:采用柯萨奇病毒亲心株B3(CVB3)感染Balb／c小鼠建立VMC小鼠模型;通过RT-PCR法测定外周血12-脂加氧酶mRNA(12-LO mRNA),比色法测NO的变化,化学发光免 疫法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI),HE染色观察心肌损害程度.结果 (1)实验组12-LOmRNA表达于CVB3感染第3天(0.623±O.321)、第7天(1.311±0.208)、第14天(1.018±0.302)升高,与对照组(O.401 ±0.014)比较差异有统计学意义(P<0.01),第28天(0.512±0.025)虽逐渐下降,但与对照组(0.401 ±0.014)比较差异仍有统计学意义(P相似文献   

黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的影响

[目的]探讨黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因与蛋白表达的影响.[方法]Balb/C小鼠50只随机分5组（每组10只）,A组空白对照组：腹腔无菌注射不含病毒的Eagle＇s培养基0.1 mL,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;B组病毒性心肌炎对照组：小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含50%组织感染率（TCID50） 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组（分别为C、D、E组）,在腹腔注射0.1 mL内含TCID50 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/（kg·d）]0.1 mL灌胃,共7 d.采用缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.[结果]与A组比较,B组心肌细胞凋亡发生率增高（0.57±0.16vs 0.06±0.02,P〈0.01）;抑制凋亡因子Bcl-2基因（0.52±0.12 vs 0.76±0.11,P〈0.01）及蛋白（6.08±1.15 vs 12.38±3.05, P 〈0.01）表达下降,而促进凋亡因子Bax基因（0.79±0.12 vs 0.61±0.14, P 〈0.01）及蛋白（6.21±1.52 vs 3.01±0.75, P 〈0.01）表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低（0.58±0.14vs0.87±0.12,P〈0.05）.与B组比较,E组CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数（0.09±0.03vs 0.57±0.16,P〈0.05）降低,Bcl-2基因（0.74±0.12 vs 0.52±0.12,P〈0.05）及蛋白水平（11.82±2.96 vs 6.08±1.15, P 〈0.05）表达增强,Bax基因（0.63±0.13 vs 0.79±0.12,P〈0.05）及蛋白（3.15±0.72 vs 6.21±1.52,P〈0.05）水平表达下降.[结论]黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进抑制凋亡基因Bcl-2表达,而抑制促凋亡Bax基因表达.     

醛固酮与转化生长因子-β1在心肌纤维化中的作用机制

目的探讨醛固酮与转化生长因子-β1（TGF-β1）在心肌纤维化的作用机制。方法将体外培养的心肌成纤维细胞（CFs）分为对照组、醛固酮组、醛固酮＋依普利酮组、依普利酮组及SB431542预处理组。给予相应处理后,ELISA检测TGF-β1水平,RT-PCR检测Smad2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达。结果与对照组比较,醛固酮处理后,能显著促进TGF-β1分泌,促进Smad2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达（P〈0.01）;与醛固酮组比较,醛固酮＋依普利酮组TGF-β1分泌、Smad2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达均明显下降（P〈0.01）;与醛固酮组比较,SB43l542预处理组抑制Smad2、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论醛固酮通过激活MR促进CFs细胞TGF-β1分泌,激活Smad2,使Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达增加,诱导心肌纤维化。     

醛固酮受体拮抗剂对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 研究螺内酯对急性心肌梗死心肌细胞凋亡的影响.方法 通过结扎左冠状动脉前降支造成大鼠左心室大面积心肌梗死模型.大鼠随机分为心肌梗死组24只和螺内酯组24只,另设假手术组24只,每时点6只,分别于术后2天、7天、14天、21天观察下列指标:①用免疫组织化学方法测定非梗死区心肌组织Ⅰ/Ⅲ胶原比值;②用流式细胞学方法测定非梗死区心肌细胞凋亡率.结果 在2、7、14、21天假手术组的心肌细胞凋亡率分别为(4.05±1.21)％、(4.03±1.20)％、(4.02±1.18)％和(4.01±1.13)％,心肌梗死组分别为(22.01±1.85)％、(20.15±1.02)％、(14.27±1.14)％和(12.46±1.18)％,明显高于假手术组,而螺内酯组低于心肌梗死组(22.11±1.68)％、(18.95±1.35)％、(12.67±1.12)％、(9.67±1.08)％.与假手术组相比较,心肌梗死组非梗死区心肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原比值在2天时差异无统计学意义(P＞0.05),7天、14天和21天时均显著增高(P＜0.05或＜0.01),与心肌梗死组比较,螺内酯组大鼠心肌组织Ⅰ/Ⅲ型腔原比在2天、7天及14天时差异无统计学意义(P＞0.05),21天时明显降低(P＜0.05).结论 醛固酮受体拮抗剂可减少急性心肌梗死后非梗死区心肌细胞的凋亡.同时对Ⅰ/Ⅲ型胶原比值有明显的抑制作用,醛固酮受体拮抗剂可能通过减少心肌细胞凋亡而减少腔原的沉积,抑制心室重构.     

婴儿室间隔缺损合并肺动脉高压心房肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达改变

[目的]探讨室间隔缺损合并肺动脉高压婴儿心房肌Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白含量的变化,并分析心肌间质胶原成分含量及比值的改变与肺动脉压力的相关性.[方法]试验组为30例室间隔缺损合并肺动脉高压婴儿,体外循环建立时留取少量右心房肌标本,对照组为8例非心血管疾病及胶原疾病死亡的儿童,尸体解剖时留取右心房肌,并应用免疫组化及数字图像分析技术观测其心房肌Ⅰ、Ⅲ胶原的表达.[结果]正常心房肌Ⅰ型胶原为粗、细不等的条状纤维,彼此连接成网,Ⅲ型胶原呈散在的斑片状分布,而婴儿室间隔缺损合并肺动脉高压患儿Ⅰ型胶原呈现出大斑片状增加,Ⅲ胶原呈现出条索状增加.免疫组化图像分析显示：对照组Ⅰ型胶原含量明显高于Ⅲ型胶原,有显著差异（P〈0.01）,Ⅰ型/Ⅲ型比值为5.66±0.43,试验组中：Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量均较对照组显著增加（P〈0.01）,Ⅰ型/Ⅲ型比值为3.04±2.06,Ⅲ型胶原蛋白增加幅度较大,Ⅰ型/Ⅲ型比值较前明显减少.线性回归模型拟合显示肺动脉压力与Ⅰ型/Ⅲ型呈显著相关,肺动脉压力=0.927-0.058（Ⅰ/Ⅲ）.[结论]室间隔缺损合并肺动脉高压婴儿心房肌中,Ⅰ型及Ⅲ型胶原含量均较正常心房肌中明显增加,且以Ⅲ型胶原含量增加明显,表明室间隔缺损合并肺动脉高压婴儿未成熟心肌组织亦存在心肌间质重构.室间隔缺损合并肺动脉压力患儿中,肺动脉压力与Ⅰ型及Ⅲ型胶原含量之比（Ⅰ/Ⅲ值）呈线性关系,即：肺动脉压力=0.927～0.058（Ⅰ/Ⅲ）,表明随着肺动脉压力的增高,心肌间质重构将逐步加重.     

TACE治疗对原发性肝癌患者血HIF-1α、骨桥蛋白表达的影响

目的：探究肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗前后原发性肝癌患者血缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、骨桥蛋白的变化及意义。方法：原发性肝癌患者35例,采用ELISA检测TACE治疗前、治疗后2d、治疗后30d外周血HIF-1α、骨桥蛋白的动态变化,15名体检者为健康对照组。结果：TACE治疗前肝癌患者外周血HIF-1α为（2562±656）pg/ml、骨桥蛋白为（123±30）μg/L,显著高于健康对照组的（1963±61）pg/ml和（34±12）μg/L（P均（0.01）;且上述2指标水平有癌栓组分别为（3020±752）pg/ml和（137±23）μg/L,表达高于无癌栓组的（2294±430）pg/ml和（119±33）μg/L（P均（0.05）;有远处转移组为（2985±696）pg/ml和（146±28）μg/L,高于无转移组的（2341±497）pg/ml、（115±27）μg/L（P均（0.05）。TACE治疗后2d患者血清HIF-1α和骨桥蛋白为（3001±985）pg/ml、（170±68）μg/L,较治疗前升高（P均（0.05）;TACE治疗后30d患者外周血HIF-1α（2150±289）pg/ml和骨桥蛋白（108±31）μg/L较治疗前、治疗后2d下降（P均（0.05）。肝癌患者外周血HIF-1α、骨桥蛋白的表达明显相关（r=0.983,P（0.05）。结论：TACE治疗后肝癌患者血HIF-1α、骨桥蛋白短期内升高,可能与肿瘤血管栓塞后加重肿瘤的缺氧微环境有关,但术后30d内下降,提示TACE在治疗肿瘤的同时未增加肝癌的侵袭性。     

柯萨奇病毒B3诱导HeLa细胞凋亡

目的：观测柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导HeLa细胞凋亡的动态过程。方法：用CVB3感染HeLa细胞后,在不同时间点收集细胞,通过相差显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA缺口末端标记法（TUNEL）检测HeLa细胞的病变。结果：CVB3感染HeLa细胞4h后,细胞发生凋亡（11.79%±0.962%比4.07%±0.665%,P〈0.05）并呈时间依赖性增高,36~48h达高峰。但在病毒感染CVB3后1h时,CVB3则抑制细胞凋亡的发生（2.21%±0.448%比3.73%±0.637%,P〈0.05）。结论：CVB3可诱导HeLa细胞发生凋亡,但感染早期病毒则抑制细胞凋亡。     

黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠TLR4、NF-KB及TNF—α表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠Toll样受体4（TLR4）mRNA、核因子-KB（NF-KB）mRNA表达及血清肿瘤坏死因子（TNF-α）的影响。方法将80只雄性BALB／c小鼠随机分为柯萨奇病毒感染组（感染组,30只）、黄芪甲苷治疗组（治疗组,30只）和正常对照组（对照组,20只）。感染组和治疗组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）,建立病毒性心肌炎模型。治疗组于注射病毒后30min开始灌服黄芪甲苷,每日1次×7d;感染组以生理盐水灌胃;对照组用不含病毒的Eagle液腹腔注射、生理盐水灌胃。各组分别在7d、14d各随机抽取8只小鼠处死,HE染色后检测心肌病理积分、逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌中TLR4mRNA和NF-KBmRNA的表达,ELLSA法检测血清TNF-α的含量。结果感染组心肌病理积分、TLR4mRNA、NF-KBmRNA表达及血清TNF-α的含量较对照组明显增加（P〈0．01）,治疗组心肌病理积分、TLR4mRNA、NF-KBmRNA表达及血清TNF．仅的含量较感染组明显降低（P〈0．05）。结论黄芪甲苷可以通过调节TLR4、NF-KB及TNF-α在病毒性心肌炎中的表达,减轻心肌损伤。