多轨迹神经微移植策略在亨廷顿病大鼠模型移植治疗研究中的应用

目的:探讨单轨迹和多轨迹神经微移植技术在亨廷顿病(HD)大鼠毁损模型中的作用及机制。方法:SD大鼠59只,分为对照组(n=15)、毁损组(n=14)、多轨迹(MT)移植组(n=15)和单轨迹(ST)移植组(n=15)。对照组不予任何处理,其它3组实施单侧纹状体毁损手术,其中MT或ST移植组分别由MT或ST注射移植相同数量的胎龄15d的鼠胎神经节隆起处细胞。移植4个月后行组织学评估及多巴胺和cAMP调节的磷蛋白(DARRP-32)阳性细胞计数。结果:MT移植组计数的DARRP-32阳性神经元约为ST移植组的2倍。移植物体积、DARPP-32碎片体积和新生多巴胺能神经支配体积在2组中未见统计学差异。结论:MT神经微移植方式可以增加新生纹状体神经元的数量,其机制可能是移植物-宿主接触面积的增大使得移植物更强地暴露于宿主环境诱导因素之下。     

胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗大鼠帕金森病

背景：研究表明胚胎干细胞移植可改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能,增强神经的可塑性,诱导自身定向迁移并分化为成熟神经元。目的：观察胚胎神经上皮干细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠及移植细胞的迁徙情况。方法：将绿色荧光蛋白转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞分别移植到帕金森病大鼠的黑质、纹状体和侧脑室内,移植后检测移植细胞的存活、迁徙与分化;利用高效液相色谱法检测实验动物脑内多巴胺神经递质的含量：对比实验动物旋转行为的改变,评估胚胎神经上皮干细胞移植对帕金森病大鼠的治疗作用。结果与结论：移植细胞存活良好且分化出了酪氨酸羟化酶阳性细胞,向黑质纹状体环路迁徙趋势明显;脑内多巴胺含量增加,动物旋转行为改善明显。表明移植到帕金森病大鼠脑内的神经上度干细胞多向黑质纹状体环路迁徙,且可增加脑内多巴胺神经递质的含量治疗帕金森病。     

神经干细胞移植在脑损伤治疗中的应用

背景:成年鼠脑纹状体中已分离出具有分化成神经元及各种胶质细胞潜能的神经干细胞后,医学工作者试图从中寻找新思路用于脑损伤的治疗.目的:总结神经干细胞移植对治疗脑损伤中的作用及其前景.方法:电子检索EMbase(1980-01/2011-04),MEDLINE(1966-01/2011-04),中国生物医学文献数据库(CBM,1978/2011-04)和中国期刊全文数据库(CNKI),筛查相关文章的参考文献.中文检索词"神经干细胞,脑损伤,脑卒中,脑梗死",英文检索词"neural stem cells,brain injury,stroke,cerebral infarction",最终纳入符合标准的文献12 篇.结果与结论:动物研究结果显示神经干细胞移植可以改善神经功能并且明显降低脑组织炎症反应,沉默NgR 基因、GDNF基因修饰和联合移植BDNF 可更大程度上恢复神经功能.临床试验发现神经干细胞移植能在一定程度上改善脑卒中患者的后遗症.提示神经干细胞移植在动物实验中获取明显效果,可进一步应用于临床并研究其疗效.     

神经干细胞移植在脑损伤治疗中的应用

背景：成年鼠脑纹状体中已分离出具有分化成神经元及各种胶质细胞潜能的神经干细胞后,医学工作者试图从中寻找新思路用于脑损伤的治疗。目的：总结神经干细胞移植对治疗脑损伤中的作用及其前景。方法：电子检索EMbase（1980-01/2011-04）,MEDLINE（1966-01/2011-04）,中国生物医学文献数据库（CBM,1978/2011-04）和中国期刊全文数据库（CNKI）,筛查相关文章的参考文献。中文检索词＂神经干细胞,脑损伤,脑卒中,脑梗死＂,英文检索词＂neural stem cells,brain injury,stroke,cerebral infarction＂,最终纳入符合标准的文献12篇。结果与结论：动物研究结果显示神经干细胞移植可以改善神经功能并且明显降低脑组织炎症反应,沉默NgR基因、GDNF基因修饰和联合移植BDNF可更大程度上恢复神经功能。临床试验发现神经干细胞移植能在一定程度上改善脑卒中患者的后遗症。提示神经干细胞移植在动物实验中获取明显效果,可进一步应用于临床并研究其疗效。     

神经干细胞移植治疗大鼠恢复期脊髓损伤

背景：研究发现,脊髓损伤后细胞外信号调节激酶在反应性胶质细胞中存在上调现象,且磷酸化的细胞外信号调节激酶急剧增多.目的：验证神经干细胞移植对恢复期脊髓损伤大鼠的功能影响及其在病灶局部的分化及机制.方法：90只SD大鼠被随机分为3组,每组30只.对照组大鼠造模但不进行神经干细胞移植;静脉移植组及局部移植组造模后分别进行神经干细胞移植,分别于移植后的1,2,4,12,24周对各组随机抽取的6只动物后肢功能进行BBB评分及免疫组织化学染色.结果与结论：神经干细胞移植后,静脉移植组和局部移植组病灶局部可见 Brdu 阳性细胞;大鼠 BBB评分逐渐提高,移植4周后静脉移植组和局部移植组BBB评分明显高于同期对照组;大鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白、细胞外信号调节激酶1/2逐渐提高,4周达最大值,移植12周后胶质纤维酸性蛋白、细胞外信号调节激酶1/2较同期减少（P〈0.05）;微管相关蛋白2逐渐提高,4周达最大值,4周以后呈下降趋势,12周后不再有明显变化,但微管相关蛋白2较同期对照组增多（P〈0.01）.结果提示,神经干细胞移植后可在病灶局部增殖分化为神经元和神经胶质细胞;两种移植方式的作用没有明显区别;神经胶质细胞再生的过程和细胞外信号调节激酶通路密切相关.     

Tα1启动子驱动的荧光报告系统在人胚胎干细胞神经分化示踪中的应用

目的观察携带Tα1(α-tubulin)基因启动子驱动的荧光报告系统在人胚胎干细胞(h ESCs)神经分化示踪中的应用。方法胎鼠成纤维细胞(MEF)培养h ESCs,免疫荧光染色鉴定其生物学标记。将携带p LV/Final-puro-Tα1(α-tubulin)-hr GFP载体的慢病毒感染人胚胎干细胞(h ESCs),嘌呤霉素(puromycin)筛选14 d后获得纯化h ESCs,并诱导其向神经元样细胞分化,同时显微镜观察细胞绿色荧光变化。第23天对表达绿色荧光的细胞行免疫荧光染色鉴定。结果 h ESCs细胞的OCT-4、SSEA-4及TRA-1-60表达呈强阳性。慢病毒感染并筛选14 d后得到具有puromycin抗性的纯化h ESCs。该细胞经神经分化后,显微镜下观察到绿色荧光表达,且α-tubulin、βⅢ-tubulin、nestin表达均呈阳性。结论成功获得了表达Tα1(α-tubulin)-hr GFP载体的h ESCs,该细胞可以示踪Tα1的表达。     

神经干细胞移植技术在脑卒中和颅脑损伤治疗中的应用

目的:介绍神经干细胞移植治疗脑卒中和颅脑损伤的实验和临床效果,并探讨神经干细胞移植应用于临床存在的问题。资料来源:应用计算机检索PUBMED2000/2007与神经干细胞移植治疗脑卒中和颅脑损伤相关的文章,检索词“neural stem cell,stroke,brain damage”,限定文献语种为“English”;同时检索万方数据库2000/2007相关文章,检索词“神经干细胞,脑卒中,脑损伤”,限定文献语种为中文。资料选择:共检索到相关文献500余条,选择与以下内容相关文章:①神经干细胞在脑缺血模型大鼠脑内的存活、迁移、分化,以及对颅脑损伤模型大鼠运动功能的影响。②神经干细胞在临床上的应用效果,包括对脑卒中患者的日常生活活动能力、神经功能的影响。③神经干细胞移植在临床上应用尚存在的问题。资料提炼:将初步筛选的文章进一步查找全文,排除综述和重复文献,纳入43条进行综述。其中论述脑卒中和颅脑损伤后主要的功能障碍问题的有14条,神经干细胞移植治疗脑卒中和脑损伤的动物实验文章25条,临床应用文章4条。资料综合:神经干细胞移植后可在脑缺血模型大鼠脑内存活、迁移、分化,从而使受损的脑组织得到修复。同时神经干细胞移植可改善脑损伤动物的运动和感觉功能。在临床方面,可改善大面积脑梗死患者的神经功能,以及脑卒中患者的日常生活活动能力。但目前神经干细胞移植治疗脑卒中和脑损伤尚主要处于动物实验阶段,且最终神经干细胞移植主要是通过分泌神经营养因子,增加有利于受损的脑神经细胞恢复的蛋白表达起作用,还是以其替代作用起主要作用尚不肯定。结论:应用神经干细胞移植在动物实验和临床中取得了一定正性效果,但仍存在问题,有待进一步解决。     

干细胞移植在中枢神经系统疾病中的应用进展

长期以来,医学界一直认为,神经细胞属于一种永久细胞,缺乏再生能力。因此,传统观点认为:中枢神经系统受损后造成大量神经元缺失时,因不能产生新的神经元,建立新的突触联系,而致损伤后的功能难于恢复。因此,中枢神经     

神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元与胚胎中脑多巴胺能神经元移植治疗帕金森病效果比较

目的:目前对于体外诱导分化的多巴胺能神经元的生物学功能、体内存活状况,以及与胚胎中脑多巴胺能神经元移植治疗帕金森病大鼠的疗效比较方面尚缺乏深入的研究.观察神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病大鼠的作用,并与胚胎中脑多巴胺能神经元组织移植治疗帕金森病大鼠的疗效进行比较.方法:实验于2006-06/2007-09在中山大学附属第一医院完成.①实验材料:健康成年雄性SD大鼠及孕14～15 d的SD大鼠由中山大学动物实验中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:在含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中培养胚胎大鼠中脑神经干细胞.经传代扩增后,在含白细胞介素1a、白细胞介素11、白血病抑制因子、胶质细胞源性神经营养因子的诱导分化液中向多巴胺能神经元分化,并进行免疫细胞化学鉴定和流式细胞仪检测.参考Sauer和Lee等方法制备帕金森病大鼠模型,并将造模成功大鼠随机分组,每组9只:分化细胞组向每一坐标点注入1×1011 L-1神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元;胚胎中脑组注入 1×1011 L -1胚胎中脑多巴胺能神经元;手术对照组注入DMEM/F12细胞培养液.③实验评估:移植术后10、20、40、60 d诱发大鼠不对称旋转行为以观察治疗效果,并对移植区进行酪氨酸羟化酶免疫组织化学检测以了解移植细胞体内存活的情况.结果:①大鼠神经干细胞球在诱导分化液中呈贴壁生长,球内细胞从球体中央逐渐向四周分化扩展出形态各异的细胞.免疫细胞化学染色显示,分化细胞中含有酪氨酸羟化酶染色阳性细胞.流式细胞仪检测诱导分化6 d的细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞的比率为(16.7±2.8)%.②移植后20 d分化细胞组大鼠的不对称旋转行为开始明显下降(P < 0.05).移植后40 d和60 d,分化细胞组大鼠的旋转圈数与胚胎中脑组比较差异不显著(P > 0.05).③分化细胞组和胚胎中脑组大鼠纹状体移植区有酪氨酸羟化酶染色阳性细胞,多数细胞位于移植针道边缘.结论:神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元与胚胎中脑多巴胺能神经元移植治疗帕金森病大鼠具有相同的疗效.     

早期微生态肠内营养在老年神经重症机械通气中的应用价值分析

目的 观察早期微生态肠内营养支持对老年神经重症机械通气患者的应用效果。方法 将收治的90例老年神经重症机械通气患者,随机分对照组和试验组各45例。对照组给予早期肠内营养支持,试验组于对照组基础上加入微生态制剂进行治疗。比较两组治疗前后营养状态指标（TP、PA、ALB）、免疫功能（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、健康状况（APACHE II评分）,并比较两组预后情况（脱机成功率、4周内病死率）。结果 治疗后,试验组TP、PA、ALB水平高于对照组（P<0.05）;CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于对照组（P<0.05）,两组CD8+治疗前后比较,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后,观察组APACHE II评分显著低于对照组（P<0.05）;脱机成功率（93.33%）高于对照组（77.78%）(P<0.05),4周内病死率（4.44%）低于对照组（8.89%）,但差异无统计学有意义（P>0.05）。结论 对老年神经重症机械通气患者进行早期微生态肠内营养支持可显著改善其营养状态、免疫功能、健康状况,促进预后改善。     

绿色荧光蛋白转基因胚胎大鼠神经干细胞生物学特性研究

目的:体外分离、培养、鉴定绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因胚胎大鼠神经干细胞,研究其体外活性与生物学性状,为在体分化示踪研究奠定基础。方法:采用机械分离,无血清传代培养法从GFP胚胎大鼠海马获得神经干细胞,免疫荧光和免疫细胞化学法染色进行体外神经干细胞性质和分化活性鉴定,并利用流式细胞计数法行纯度检测。结果:成功从GFP胎鼠海马获得神经干细胞,体外生长情况与活性良好,能分化成神经元和胶质细胞;体外连续传代3次后绝大部分细胞Nestin表达阳性,且分化后细胞的GFP表达不受影响。结论:GFP胚胎大鼠来源神经干细胞具有普通胎鼠神经干细胞相同的自我更新和多向分化潜能,且能稳定表达GFP,因此它可以成为示踪神经干细胞研究的有效工具细胞。     

应激状态下急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤模型的建立

[目的]建立应激状态下急性酒精中毒胃黏膜损伤的动物模型。[方法]采用析因实验设计,将96只Wis-tar大鼠分为应激组(A组)、酒精中毒组(B组)、应激后酒精中毒组(C组)、空白对照组(D组)。A组和C组大鼠倒立8h,之后给B组和C组大鼠灌入56度白酒,直到大鼠出现酒精中毒症状为止。A组、D组大鼠灌入等量生理盐水。分别于酒精中毒后2h、24h、48h处死8只大鼠,观察胃黏膜的病理变化,并进行胃黏膜损伤评分。[结果]B组与A组、C组胃黏膜损伤评分差异均有统计学意义(P<0.05);且不同时间点胃黏膜损伤评分差异亦有统计学意义(P<0.05);不同处理方法和时间因素有交互作用。[结论]倒立8h后酗酒法能成功地建立应激状态下急性酒精中毒大鼠胃黏膜损伤的模型,并出现胃黏膜损伤的征象。     

高敏C反应蛋白结合压力导丝在临界冠脉病变介入治疗中的应用效果评价

目的探讨高敏C反应蛋白联合压力导丝检查对冠心病临界病变介入治疗的指导作用及对术后发生主要心脏不良事件的影响。方法75例临床诊断冠心病患者术前检测高敏C反应蛋白（hs—CRP）,经冠状动脉造影检查明确至少有1支主要冠状动脉狭窄程度在40％--70％,所有患者均行压力导丝检查测定血流储备分数（FFR）。根据FFR值将患者分为PCI组和对照组,PCI组：对FFR〈0．75的病变行PCI治疗,其中根据hs-CRP值又分为hs-CRP升高组（≥3mg／L）和hs-CRP正常组（〈3mg／L）;对照组：对FFR≥0．75的病变予药物保守治疗。观察PCI组中患者病变处及支架植入数量,比较3组住院和随访期间发生典型心绞痛、非致死性心肌梗死、心源性死亡和靶血管重建等主要心脏不良事件（MACE）的发生率。结果hS—CRP升高PCI组共有31处临界狭窄病变,置入支架45枚;hs-cRP正常PCI组共有26处临界狭窄病变,置人支架29枚;2组患者在临界病变数及植入支架数方面比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。主要心脏不良事件方面,bCI冲升高PCI组显著高于hs-CRP正常PCI组（P〈0．01）;而hs-CRP正常PCI组与对照组比较无显著差别。结论hs-CRP检测联合FFR检查可指导冠心病临界病变介入治疗,并可预测术后的心脏不良事件发生率。     

运动处方在光量子氧透射液体疗法治疗糖尿病末梢神经病变中的作用

目的在光量子氧透射液体治疗糖尿病末梢神经病变的基础上探讨运动处方的作用。方法随机将透射组58例分为运动组38例与非运动组20例。患者先接受光量子氧透射疗法;运动组再接受中等强度有氧训练。结果运动组较非运动组治疗后的血糖、血脂、红细胞压积下降具有显著意义(P<0.05);且运动组治疗后的运动、感觉神经传导速度的提高较非运动组显著(P<0.05)。结论透射液体疗法配合运动处方是一种治疗糖尿病末梢神经病变的有效方法。     

小鼠胚胎神经干细胞的体外培养及增强型绿色荧光蛋白基因转染研究

目的：探索小鼠胚胎神经干细胞（neural stem cells．NSCs）的体外培养，探讨NSCs作为基因靶细胞．以及增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）标记NSCs的可行性。方法：胚胎小鼠脑组织分离神经干细胞，无血清细胞培养，免疫细胞荧光染色技术鉴定。NucleofectorTM转染仪将增强型绿色荧光蛋白基因转导入NSCs，用G418筛选，在荧光显微镜下观察并挑选EGFP表达最强的克隆．并做免疫荧光鉴定及诱导分化细胞的鉴定。结果：从胚胎小鼠脑组织分离的细胞具有连续克隆能力。表达神经上皮干细胞蛋白，诱导分化后的细胞表达神经细胞和星形胶质细胞特异性的蛋白。增强型绿色荧光蛋白报告基因转染神经干细胞后能高效表达，且不影响其增殖、分化能力。结论：小鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养；神经干细胞可直接作为基因靶细胞；转染EGFP的神经干细胞表达稳定且对NSCs的增殖和分化无明显影响。     

骨髓间充质干细胞移植治疗急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠模型的基础研究

目的探讨体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）移植治疗一氧化碳中毒迟发性脑病（DEACMP）前后神经元及星形胶质细胞的变化。方法以随机抽签方法将SD大鼠分为3组：对照组、假手术组及干细胞移植组。采用腹腔注入一氧化碳方法制作DEACMP模型,干细胞移植组在注射后第0、3、6、12、24、72小时及1周时将同种异体MSCs经左侧颈动脉植入到大鼠脑内;假手术组扎闭颈外动脉,用磷酸盐缓冲液（PBS）代替细胞悬液;对照组不进行细胞移植。移植后1、2、3、4周采用免疫组织化学的方法检测神经元核心抗原（NeuN）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的变化。结果①体外分离培养至第4代的MSCs呈梭形成纤维样细胞,细胞表面抗原CD44呈阳性表达而CD34呈阴性表达。②大鼠脑内NeuN的平均光密度3、6、12、24小时移植组明显高于假手术组及对照组（P〈0.01）,各移植组细胞移植后大鼠脑内NeuN的表达在第1、2、3、4周之间差异无统计学意义（P〉0.05）。移植后大鼠脑内GFAP的表达在12、24小时移植组明显高于假手术组及对照组（P〈0.05）,细胞移植后各组大鼠脑内GFAP在第1、2、3、4周之间的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 MSCs经左侧颈动脉移植到DEACMP大鼠体内后可以增加成熟神经元的数量,增加星形胶质细胞反应性。移植的最佳时机为发病后的3~24小时之间。     

高危型HPV DNA检测负荷量及其最佳阈值在宫颈癌前病变中的应用研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)DNA检测中的负荷量和最佳阈值在宫颈癌前病变中的应用。方法检测805例非宫颈癌患者HPV DNA,同时通过阴道镜活检进行病理学诊断。根据病理结果将患者分为正常无病变组86例、慢性宫颈炎组492例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)组117例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)组110例。比较各组HPV DNA阳性率,采用受试者工作特征(ROC)曲线确定HPV DNA判断宫颈鳞状上皮内病变的最佳RLU/CO值。结果正常无病变组、慢性宫颈炎组、LSIL组、HSIL组HPV DNA阳性率分别为20.93%、34.96%、75.21%、95.45%,高危型HPV DNA负荷量(中位数)分别为0.355 0、0.455 0、47.41、286.68。将宫颈鳞状上皮内病变的HPV DNA负荷量从小到大数量分级,其检测异常率分别为8.29%、24.42%、48.94%、59.66%、68.54%。根据ROC曲线结果,判断宫颈鳞状上皮内病变的最佳RLU/CO值为3.155 0,该值的敏感性为82.2%、特异性为73.9%、Youden指数为1.561;判断HSIL的最佳RLU/CO值为5.965 0,该值的敏感性为92.0%、特异性为68.8%、Youden指数为1.608。结论宫颈鳞状上皮内病变患者的高危型HPV DNA负荷量与宫颈病变的检测阳性率呈正比。适当提高最佳RLU/CO值,能够提高检测的特异性,降低宫颈鳞状上皮内病变的假阳性率。     

超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的实验研究

目的探讨超声破坏微泡介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的效率及可行性，为实现外源基因高效、定向的转移目的奠定基础。方法将30只Long-evans大鼠分为6组，第1组仅以0．5w／cm。的超声波辐照大鼠眼球，第2组于尾静脉输入适当剂量的微泡造影剂，并立即以相同能量的超声波辐照大鼠眼球，第3组于尾静脉输入质粒，第4组于尾静脉输入质粒，并以超声辐照大鼠眼球，第5组于尾静脉输入质粒与微泡，第6组尾静脉输入质粒、微泡，并用超声辐照眼球。转染2周后，在激光共聚焦显微镜下观察EGFP表达情况。结果超声微泡介导的EGFP质粒对大鼠视网膜的转染效率，明显高于其他实验组。一定能量和时间的超声波辐照，及适当浓度的微泡，对大鼠视网膜脉络膜无明显损伤。结论利用低频率和一定能量的超声击碎携带EGFP质粒的超声微泡造影剂，能够有效地提高EGFP质粒在大鼠视网膜的转染效率。     

程序康复法治疗下肢周围神经病变所致运动功能障碍的疗效观察

目的探讨程序康复法对下肢周围神经病变所致的运动功能障碍的治疗作用 . 方法 40例下肢周围神经病变患者 , 随机分康复组和对照组 . 两组均进行内外科的常规处理 , 康复组为在此基础上行程序康复法 . 结果康复组膝伸、踝背伸肌力恢复明显优于对照组 , 两组疗效具有显著性差异 ( P