人结直肠癌组织中Smad^4蛋白和TGF—β及其Ⅱ型受体表达的临床意义

目的探讨Smad4蛋白和TGF—β及其Ⅱ型受体在人结直肠癌组织中表达的临床意义。方法应用免疫组织化学法，对76例结直肠癌组织标本进行检测，并与临床病理特点进行分析。结果Smad4蛋白在肿瘤组织和正常黏膜组织中的阳性率分别为35．5％和61．8％，差异有非常显著性（P〈0．01）；Smad4蛋白的表达与肿瘤分期和淋巴结转移相关（P〈0．05）；TGF—β蛋白在肿瘤组织和正常黏膜组织中的阳性率分别为25．0％和42．1％，差异有显著性（P〈0．05）；TGF-βⅡR蛋自在肿瘤组织和正常黏膜组织的阳性率分别为18．4％和21．1％，差异无显著性（P〉0．05）；Smad4、TGF—β、TGF—βⅡR与患者性别、年龄及肿瘤部位、大小、分化程度、有无瘤栓、组织类型、大体类型等差异均无显著性（P〉0．05）。结论与正常黏膜组织相比，Smad4、TGF—β在肿瘤组织中表达下调，且Smad4低表达的结直肠癌大多分期较迟、淋巴结转移较多，而TGF—β表达与肿瘤分期及淋巴结转移无关；TGF—βⅡR在肿瘤组织与正常组织中表达差异无显著性，与肿瘤分期及淋巴结转移差异亦无显著性。     

IgA1对人肾小球系膜细胞TGF-β1、Smad7和纤连蛋白表达的影响

目的：研究IgA1对人肾小球系膜细胞（HMCL）转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad7和纤连蛋白（FN）表达的影响。方法：分别以正常人IgA1（NIgA1）、正常人聚合IgA1（aNIgA1）、IgA肾病（IgAN）患者IgA1（PIgA1）和IgAN患者聚合IgA1（aPIgA1）刺激体外培养的HMCL;RTPCR法检测HMCLTGF-β1、Smad7和FNmRNA的表达,Western印迹法检测HMCL Smad7蛋白水平,ELISA法检测HMCL TGF-β1和FN蛋白水平。结果：PIgA1和aPIgA1能显著上调TGF-β1、Smad7、FN mRNA和蛋白的表达,且aPIgA1刺激组明显强于PIgA1刺激组（P〈O．01或P〈0．05）。在对照组、NIgA1刺激组和aNIgA1刺激组间,TGF-β1、Smad7、FN表达水平的差异无统计学意义（P〉O．05）。在aPIgA1刺激HMCL不同时间组,TGF-β1、Smad7和FN表达水平逐渐升高,mRNA分别在12h、12h和24h达高峰,蛋白水平分别在12h、24h和24h达高峰。结论：PIgA1和aPIgA1能上调HMCL TGF—β1、Smad7和FN的表达,aPIgA1的作用强于PIgA1,且呈一定的时间依赖性,提示IgAN患者血清IgA1,而且主要是aIgA1可通过影响TGF-β1、Smad7和FN而在IgAN进展中发挥作用。     

咪喹莫特对哮喘小鼠TGF—β1及Smads蛋白的影响

目的 观察咪喹莫特对哮喘小鼠肺组织转化生长因子β1（TGF-β1）及其信号转导分子Smads表达的影响。方法 40只小鼠按随机数字表法分成4组，每组10只。正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、布地奈德治疗组（C组）和咪喹莫特治疗组（D组）。小鼠于第0、14天以卵白蛋白（OVA）致敏，第24天开始雾化吸入1％OVA激发并持续28d，建立哮喘气道重塑模型，C组和D组在吸入OVA前2h分别雾化吸入布地奈德或咪喹莫特30min。于最后1次雾化结束后24h，对肺组织切片行苏木精-伊红（HE）染色观察病理学改变、过碘酸雪夫（AB—PAS）染色定量杯状细胞百分比及黏液分泌、Masson染色测定胶原沉积；用免疫组化方法检测肺组织TGF-β1的蛋白表达水平；用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织TGF-β1 mRNA以及Smad2、Smad7 mRNA表达水平。结果 B组杯状细胞增生明显，伴黏液高分泌，气管壁胶原过度沉积，与A组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；D组杯状细胞轻度增生，黏液分泌减少，气管壁胶原沉积减轻，与B组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；B组TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表达较A组增加，差异有统计学意义（P〈0．05），C、D组TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表达下降，与B组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），D组可显著上调Smad7mRNA的表达，与B组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 雾化吸入咪喹莫特通过抑制慢性哮喘小鼠肺组织TGF-β1，蛋白和mRNA、Smad2mRNA的过度表达，上调Smad7mRNA的表达，从而阻断TGF-β1的胞内信号转导，可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道重塑。     

辛伐他汀对高糖诱导下人腹膜间皮细胞TGF—β1和CTGF表达的影响

【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法（Semi—QuantitativeRT—PCR）检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;酶联免疫双抗夹心法（ELISA）检测细胞上清液中TGF—β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。【结果】辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平（TGF—β1,P〈0．05;CTGF,P〈0．01）,并下调其mRNA表达（TGF-β1,P〈0.01;CTGF,P〈0．05）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达。     

TGF-β／Smad阻遏子c-Ski与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨阻遏子c—Ski对TGF-β／Smad信号途径的抑制作用与糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的关系。方法将所有大鼠随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病（diabetes mellitus,DM）模型组（DM组）和吡格列酮干预组（PT组）。尾静脉小剂量注射链脲佐菌素建立DM大鼠模型。在实验期间连续监测血糖,8w末处死动物并采集血尿标本用于相关的生化指标测定,采用real—timePCR方法检测TGF-β和c—Ski的mRNA水平,免疫组化法检测TGF—β1和c—Ski蛋白表达情况,并进行统计学分析。结果与NC组相比,DM组血糖和血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、24h尿微量白蛋白（24 hours urinary microalbumin,24hUMA）水平明显升高,经PT干预后大鼠血糖、BUN、24hUMA水平较DM组均显著下降,差异均有统计学意义（P均〈0．05）。PCR结果显示,DM组的TGF-β1mRNA水平较NC组显著升高,经PT干预后,其表达量显著降低,差异均有统计学意义（P均〈0．05）,而c—SkimRNA水平三组间差异无统计学意义（P〉0．05）。与NC组比较,DM组肾组织病理形态呈阳性表达,而PT组与NC组相近。免疫组化结果显示TGF-β1表达量在DM组较NC组显著增加,但c—Ski蛋白表达低于NC组,经盯干预后TGF-β1表达较DM组下降,而c—Ski表达显著增加,差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论DN中阻遏子c—Ski表达的下调减少了对TGF-β／Smad途径的阻断作用,而PPAR-γ可减少这种下调,为DN治疗机制的研究提供新的实验依据。     

低频超声联合微泡影响前列腺癌DU145细胞血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的探讨低频超声联合微泡对前列腺癌DUl45细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法体外培养前列腺癌DUl45细胞,细胞呈对数生长时分为4组进行实验：对照组（细胞悬液1ml）、单纯微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue）、单纯低频超声组（1ml细胞悬液以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30S）、低频超声联合微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue后立即以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30s）。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率,Western印迹法检测细胞VEGF蛋白的表达。采用单因素方差分析比较对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率、凋亡率、VEGF蛋白表达量差异,进一步组间两两比较采用SNK-q检验。结果对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率分别为100％、（96．50±12．49）％、（93．20±5.31）％、（81．30±9．32）％;凋亡率分别为（1．10±0．26）％、（1．78±0．63）％、（5．85±0．45）％、（9．36±0．90）％;VEGF蛋白表达量分别为0．81±0．05、0．79±0．06、0．58±0．04、0．38±0．05。单纯微泡组、单纯低频超声组细胞存活率与对照组比较差异均无统计学意义,低频超声联合微泡组细胞存活率较对照组降低,且差异有统计学意义（q=5．88,P〈0．05）。单纯微泡组细胞凋亡率、VEGF蛋白表达量与对照组比较差异均无统计学意义;单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞凋亡率均高于对照组,VEGF蛋白表达量均低于对照组,且差异均有统计学意义（q=14．09、24．51、8．06、14．89,P均〈0．05）。低频超声联合微泡组细胞凋亡率高于而VEGF蛋白表达量低于单纯低频超声组,且差异亦均有统计学意义（q=10．42、6．83,P均〈0．05）。结论微泡能增强低频超声抑制前列腺癌DUl45细胞增殖及促进凋亡,其机制可能与其下调前列腺癌DUl45细胞VEGF表达有关。     

SIP1在TGF—β1诱导的人腹膜间皮细胞转分化的作用

【目的】阐明Smad作用蛋白1（Smad interacting proteinl,SIP1）与转化生长因子－β1（transforming growth factor－β1,TGF-β1）诱导的人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells）转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）的关系,探讨TGF－β1可能通过调控SIP1引起腹膜间皮细胞EMT的机制。【方法】培养的人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）随机分为对照组（TGF-β1刺激Oh）和TGF－β1刺激组,通过western blot及realtime PCR检测细胞中E－钙粘素（E－eadherin）、紧密连接蛋白（claudinl）、波形蛋白（vimentin）及纤维连接蛋白（fibronectin,FN）在不同时间点（12h,24h,48h,72h）的表达;并通过western blot及realtime PCR检测相应时间点细胞中SIP1的表达。【结果】5ng／ml TGF－β1刺激后,HMrsV5细胞E-cadherin、claudinl蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性降低（P〈0．01）;vimentin、FN蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性升高（P〈0．01）;SIP1蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性上调（P〈0．01）。【结论】TGF-β1可能通过上调HMrSV5细胞SIP1表达诱导HMrSV5细胞EMT及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）沉积,将为进一步研究腹膜纤维化的分子机制提供新的靶点。     

JAK/STAT信号转导途径在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中的表达

目的：观察Janus酪氨酸蛋白激酶／信号转导子和转录激活子（JAK／STAT）信号转导途径在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中的表达。方法：将体外培养的人肾近曲小管上皮细胞株（HKC）随机分为高糖组（30mrnol／L）、低糖组（5．5mmol／L）和低糖＋甘露醇组（糖5．5mmol／L＋甘露醇24．5mmol／L）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定HKC细胞上清液中转化生长因子-β1（TGF-β1）和Ⅰ型胶原的分泌；蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏素（E—cadherin）及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化-STAT1（p—STAT1）和p—STAT3的表达；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TGF-β1 mRNA表达。结果：与低糖组比较，高糖组不同时间点细胞培养上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌明显增加（P均〈0．01）；HKC中p—STAT1和p-STAT3的蛋白及TGF-β1 mRNA表达自6h起明显增加，至48h达最高，72h有所回落，而STAT1和STAT3在各时间点差异无显著性；HKC中α—SMA表达随刺激时间延长明显升高，E—cadherin表达明显下调（P均〈0．01）。结论：JAK参与高糖诱导的HKC转分化，并刺激TGF-β1和细胞外基质的分泌。     

甲状腺乳头状癌TGF-β1、nm23-H1、CD31表达及其与肿瘤转移的关系

目的研究甲状腺乳头状癌组织中TGF－β1、nm23－H1和CD31的表达水平及其与甲状腺癌转移的关系。方法应用EnVisionTM免疫组织化学法检测55例甲状腺乳头状癌和10例癌周组织TGF－β1、nm23－H1和CD31的表达；并计数CD31标记的肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果甲状腺乳头状癌组织中TGF－β1阳性表达率76．37％、nm23－H1阳性表达率65．46％，均高于癌周组织，两者之间的差异有统计学意义（χ^2分别=16．64、10．61，P均〈0．05）；MVD与TGF—B1的表达之间存在正相关关系（r=-0．70，P〈0．05），MVD与nm23－H1的表达之间存在负相关关系（r=－0．62，P〈0．05）。结论甲状腺乳头状癌中TGF—β1、nm23－H1和CD31表达水平可作为判断病情进展和肿瘤转移的指标之一。     

福辛普利和氯沙坦对糖尿病大鼠尿TGF-β1排泄的影响

目的观察血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）-福辛普利和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）-氯沙坦对糖尿病大鼠尿TGF-β1排泄的影响及其对肾小球病变保护的可能机制。方法建立糖尿病大鼠模型，分为正常对照（A组）、糖尿病组（B组）、福辛普利治疗组（C组）、氯沙坦治疗组（D组），每组各2只，C，D两组在模型建立一周后分别以福辛普利（5mg／kg．d）、氯沙坦（10mg／kg．d）灌胃给药。检测各组第1，2，4，12周血糖、2，4小时尿视黄醇结合蛋白（RBP）、尿TGFβ1排泄率以及尿白蛋白（Alb）排泄率，进行组间差异比较并分析各指标之间的相关性。结果（1）第1周（未用药）B，C，D组尿Alb排泄率与A组无统计学差异（P〉0，05），但三组糖尿病大鼠尿RBP，TGFβ1排泄率均高于A组（P〈0．05；P〈0．01），尤其以TGFβ1排泄率升高最为显著；（2）第2，4，12周尿Alb，RBP，排泄率B组均显著高于A组（P〈0．01），并随病程的延长不断增高，C，D组则较B组明显减少；（3）尿TGFβ1排泄率与尿Alb及RBP排泄率呈正相关（r=0．884，P〈0．01；r=0．942，P〈0．01）。结论ACE／和ARB可降低糖尿病大鼠尿TGFβ1的排泄，其保护糖尿病肾脏的机制部分可能与其下调肾组织TGFβ1的过度表达有关。     

肝细胞生长因子对肾小管上皮细胞转分化及整合素连接激酶表达的影响

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）在转化生长因子β1（TGF-β1）介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用及对整合素连接激酶（ILK）表达的影响。方法将体外培养人肾小管上皮细胞（HKC）分为正常对照组、TGF-β1刺激组和HGF干预组。应用Western blotting方法检测ILK、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达,实时RT-PCR法测定ILK、α-SMA、纤维连接蛋白（Fn）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的mRNA表达。结果在TGF-β1刺激组,ILK和α-SMA的蛋白表达量显著增加,ILK、α-SMA和Fn的mRNA表达量也明显升高,E-cad-herin mRNA表达量则明显降低（与正常对照组比较,P〈0.001）。而在HGF干预组,ILK、α-SMA的蛋白表达量以及ILK、α-SMA、Fn的mRNA表达量均较TGF-β1刺激组显著降低,E-cadherin mRNA表达量则明显升高（与TGF-β1刺激组比较,P〈0.01）。结论HGF能抑制TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化,并可降低ILK蛋白和mRNA表达水平。     

整合素连接激酶在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨整合素连接激酶（ILK）在转化生长因子β1（TGF-β1）介导的肾小管上皮细胞转分化（EMT）中的表达及作用。方法采用不同浓度的TGF-β1刺激体外培养的人肾小管上皮细胞（HKC）,观察HKC形态学改变,并应用Western blotting方法检测其ILK、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,实时RT-PCR法测定ILK、α-SMA、纤维连接蛋白（FN）、E钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA的表达。结果（1）细胞形态学改变：在TGF-β1刺激下HKC细胞由正常状态下的圆形或卵圆形变为梭形,且随着孵育时间的延长,梭形细胞比例增大。（2）Western blotting和实时RT-PCR检测结果：在TGF-β1刺激下,ILK和α-SMA的蛋白表达量显著增加;ILK、α-SMA和FN的mRNA表达量也明显升高,而E-cadherin mRNA表达量明显减少。TGF-β1呈时间和剂量依赖性刺激HKC表达ILK蛋白和mRNA。（3）相关分析：ILK蛋白表达量与α-SMA蛋白表达量呈正相关（r=0.940,P〈0.01）;ILK mRNA表达量与α-SMA mRNA、FN mRNA表达量呈正相关（r=0.926,r=0.915,P〈0.01）,与E-cadherin mRNA表达量呈负相关（r=-0.820,P〈0.01）。结论ILK参与TGF-β1诱导的肾小管EMT,并在其中发挥关键作用。     

TGF—β1诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的影响

目的观察TGF-β1在诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的调节作用。方法选择正常大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E,经TGF-β1（15μg／L）体外诱导3天,RT-PCR检测细胞廿平滑肌动蛋白（α-SMA）评价细胞的转分化状态,观察细胞形态,同时检测细胞骨架成分β-actin、α—tubulin mRNA的表达;免疫荧光染色观察上述细胞骨架蛋白在细胞内的排列。结果培养的NRK52E细胞经TGF-81体外诱导3天后,细胞中α—SMAmRNA的表达水平明显增多,高于相应的对照组细胞（P〈0．001）,说明NRK52E上皮细胞出现了表型转化,此时培养细胞的形态也发生了改变,由典型的鹅卵石样变为成纤维细胞样,并有多个突起;细胞骨架蛋白β-actinmRNA的表达也明显增多（P〈0．05）;β—actin蛋白的排列也发生了改变,其在胞膜下形成的厚的板样结构消失,转而在胞浆中形成粗大的束状应力纤维,沿细胞长轴纵行排列,此外,β-actin尚在某些细胞边缘形成了片层样伪足和丝状伪足。微管成分α-tubulinmRNA的表达和分布与对照组比较无明显不同。结论TGF-β1能够诱导体外培养的NRK52E细胞转分化,在此过程中细胞形态发生了改变,骨架蛋白β-actin的表达增多并发生了重建,同时骨架蛋白α—tubulin未见明显变化。     

转化生长因子β1及其受体以及Smad4和Smad7在胃癌组织表达的临床病理学意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体(TGF-βRⅡ)和Smad4、Smad7蛋白在胃癌组织中表达的临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例胃癌、28例高度不典型增生、20例低度不典型增生、30例慢性萎缩性胃炎、29例肠上皮化生和21例正常对照的胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白的表达变化.结果 在胃癌和不典型增生组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达均明显高于慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和正常胃黏膜组织(P均<0.001).而Smad4蛋白在高度和低度不典型增生组织中虽呈高表达状态(细胞质染色分数分别为4.89±2.38、5.80±1.54;细胞核染色分数分别为3.89±1.52、3.80±1.33),但在胃癌组织中其表达水平(细胞质染色分数为2.41±2.27、核染色分数为2.02±2.14)又明显降低(P均<0.001).在胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad7蛋白的表达在进展期胃癌(分别为4.36±2.66、3.05±1.93、4.84±3.06)高于早期胃癌(分别为2.93±1.85、2.17±1.87、4.14±2.46),差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.05),而Smad4蛋白的表达则在早期胃癌中表达更高(P<0.001).同时,Smad4蛋白表达与肿瘤的大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.001)、组织学分期(T分期)(P<0.001)和临床分期(P<0.001)均有关系,而TGF-βRⅡ和Smad4蛋白的表达则与患者的5年生存率有密切关系(P<0.05,P<0.01).在蛋白表达相关性上,TGF-β1蛋白表达与TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达之间存在正相关性(r1=0.45,P<0.05;r2=0.49,P<0.05),而与Smad4蛋白的表达呈负相关(r=-0.21,P<0.05).结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白共同参与胃癌的形成,且Smad4蛋白是TGF-β信号传导通路中的最关键因素.四种蛋白的检测对反映胃癌的侵袭、转移和预后是一个非常有意义的指标.     

MiR-122在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤表型标志物的相关性研究

目的：检测肝细胞癌（HCC）组织中 miR-122和上皮性钙粘蛋白（E-cadherin）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达,并分析miR-122与E-cadherin、TGF-β1之间的相关性。方法应用实时荧光定量PCR技术检测45例HCC及其配对癌旁组织中miR-122的表达情况;免疫组织化学法检测上述HCC及其配对癌旁组织中E-cadherin、TGF-β1的表达,分析miR-122的表达量与E-cadherin、TGF-β1之间的相关性。结果 miR-122在肝癌组织低表达,肝癌组织中miR-122表达量低于其癌旁组织者有41例,表达量相仿或高于其癌旁组织者4例,差异具有统计学意义（P＜0.05）。E-cadherin在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织（P＜0.05）,HCC组织中TGF-β1表达显著高于癌旁组织（P＜0.05）。HCC组织中miR-122表达与E-cadherin呈正相关（r＝0.827）,与TGF-β1表达呈负相关（r＝-0.356）。结论 miR-122在HCC组织中低表达,其表达量与肝癌分化程度正相关。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化：Notch1受体阻断剂的影响

背景：研究发现,在病理状态下各种细胞可通过转化生长因子β1的介导,促进肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化为肌成纤维细胞,进而加速肾小管间质纤维化的进展。目的：验证Notch1受体特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能否有效阻断、部分逆转或者完全逆转转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化。方法：以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞为观察对象,建立转化生长因子β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化体外模型,实验分为空白对照组、10μg/L转化生长因子β1组、转化生长因子β1（10μg/L）＋γ-分泌酶抑制剂DAPT（5μmol/L）组、转化生长因子β1（10μg/L）＋γ-分泌酶抑制剂DAPT（5μmol/L）部分延迟加入组、转化生长因子β1（10μg/L）＋γ-分泌酶抑制剂DAPT（5μmol/L）延迟加入组。分别于12,24,48,72 h,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;用免疫组织化学法和RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白、E-钙粘连素蛋白和mR NA表达变化。结果与结论：1在干预后在12,24,48,72 h,与空白对照组相比较,转化生长因子β1组α-平滑肌肌动蛋白蛋白和mR NA表达均明显增加（P〈0.05）,E-钙粘连素蛋白和mR NA表达逐渐减少（P〈0.05）。2转化生长因子β1＋γ-分泌酶抑制剂DAPT组α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mR NA、E-钙粘连素蛋白和mR NA的表达各时间段均接近空白对照组（P〉0.05）。3γ-分泌酶抑制剂DAPT部分延迟加入组,α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mR NA的表达在12 h增加（P〈0.05）,之后其表达逐渐减少（P〈0.05）,E-钙粘连素蛋白表达在24 h开始减少（P〈0.05）,之后逐渐增加,E-钙粘连素mR NA各时间段都与空白对照组相接近,72 h时α-平滑肌肌动蛋白与E-钙粘连素的蛋白及mR NA表达均与空白对照组无显著差异（P〉0.05）。4与空白对照组相比较,延迟加入组各时间点的α-平滑肌肌动蛋?     

谷氨酰胺对体外肠上皮细胞缺血再灌注损伤后occludin蛋白表达的影响

目的 探讨谷氨酰胺(GLN)对体外肠缺血再灌注损伤后肠上皮细胞活性及紧密连接蛋白occludin表达的影响,以研究GLN对肠黏膜保护作用的机制.方法 利用Caco-2细胞建立缺氧/复氧模型,模仿肠缺血再灌注,然后用含有不同浓度GLN的培养液继续培养.利用MTT检测细胞活性,利用RT-PCR和Western blot检测occludin蛋白的表达情况.结果 MTT结果显示,与0 mmol/L GLN组(0.635±0.041、0.690±0.032)相比,补充GLN后细胞OD值明显增加(4 mmol/L GLN组:0.716±0.040、0.904±0.089,8 mmol/L GLN组:0.768±0.040、0.856±0.073,P均<0.05).RT-PCR结果显示,与0 mmol/L GLN组(0.244±0.037、0.591±0.031)相比,GLN影响occludin蛋白mRNA的相对表达量(4 mmol/L GLN组:0.371±0.057、0.799±0.054,8 mmol/L GLN组:0.714±0.030、0.547±0.064,P均<0.05).Western blot结果显示,与0 mmol/L GLN组(35.056±2.313、74.309±1.528)相比,GLN可以增加紧密连接蛋白occludin表达(4 mmol/L GLN组:63.432±0.649、101.759±1.214,8 mmol/L GLN组:99.453±0.526、99.573±2.082,P均<0.05).结论 GLN促进肠上皮的增殖,同时在基因和蛋白水平上影响紧密连接蛋白occludin的表达.     

醛固酮与转化生长因子-β1在心肌纤维化中的作用机制

目的探讨醛固酮与转化生长因子-β1（TGF-β1）在心肌纤维化的作用机制。方法将体外培养的心肌成纤维细胞（CFs）分为对照组、醛固酮组、醛固酮＋依普利酮组、依普利酮组及SB431542预处理组。给予相应处理后,ELISA检测TGF-β1水平,RT-PCR检测Smad2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达。结果与对照组比较,醛固酮处理后,能显著促进TGF-β1分泌,促进Smad2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达（P〈0.01）;与醛固酮组比较,醛固酮＋依普利酮组TGF-β1分泌、Smad2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达均明显下降（P〈0.01）;与醛固酮组比较,SB43l542预处理组抑制Smad2、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论醛固酮通过激活MR促进CFs细胞TGF-β1分泌,激活Smad2,使Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达增加,诱导心肌纤维化。