CD34^＋细胞与骨髓增生异常综合征患者生存率的关系

目的 探讨CD34^ 细胞与骨髓增生异常综合征（MDS）患者生存率的相关性。方法 应用免疫组化SAP法对56例MDS患者骨髓细胞CD34抗原进行检测,并随访3－5年,同时定期门诊复诊及住院治疗。结果 56例中,CD34^-33例,CD34^ 23例,随访3－5年后,阴性组10例（30．3％）转为急性白血病（AL）,阳性组14例（60．9％）转为AL,差异有显著性（P＜0．01）。17例RAEB患者中,CD34^-中数生存期47月,CD34^ 者16月,3年生存率前者69％,后者21．1％。12例CD34^ 高表达RAEB－T患者中,转化成AL时间明显缩短。结论 CD34^ 患者具有高危转为AL,CD34^ 高表达RAEB－T短期内转化为AL,提示预后不佳。     

骨髓增生异常综合征和急性白血病患者外周血中CD34+水平的研究

目的:探讨正常健康人?再生障碍性贫血(AA)?骨髓增生异常综合征(MDS)?急性白血病(AL)患者外周血循环CD34+的水平及意义?方法:用流式细胞仪测定16例正常健康人,9例AA,17例MDS,24例AL患者的外周血CD34+百分比,CD34+绝对数值及单个核细胞数目,结合临床资料进行Kruskal-Waillis检验?结果:AA患者的CD34+的百分比和绝对数值与正常健康人水平类似(P > 0.05),单个核细胞数较正常健康人低(P < 0.01)?MDS?AL的CD34+百分比和绝对数值均高于正常健康人水平(P < 0.01,P < 0.05),单个核细胞数与正常健康人无差异(P > 0.05)?MDS高危组的CD34+百分比和绝对数值高于低危组(P < 0.01),单个核细胞数两组类似(P > 0.05);AL的CD34+百分比和绝对数值及单个核细胞数目高于MDS组(P < 0.05)?17例中短期随访内3例MDS发生演变,患者CD34+细胞百分比和绝对数值进行性增高,余疾病相对稳定者未见显著改变?结论:MDS和AL患者的外周血中存在CD34+细胞水平异常增高现象,并与疾病状态密切相关,CD34+水平的检测有助MDS类型演变和预后的观察?     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡的研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞凋亡改变,以探讨MDS疾病本质。方法采用TUNEL法检测42例MDS、11例巨幼细胞贫血(MegA)、8例阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、6例Evans综合征患者和10例正常健康对照组的新鲜骨髓单个核细胞(BMMNC)的凋亡情况。结果23例(54.8%)MDS患者BMMNC呈现凋亡过度,而MegA、PNH、Evans综合征患者与对照组比较无显著差异;且MDS患者凋亡累及粒、红、巨三系各阶段造血细胞,随病情进展,凋亡程度逐渐下降。结论MDS患者存在骨髓细胞过度凋亡,凋亡过度可能为导致MDS无效造血的机制之一,病情进展可能与异常克隆逃逸凋亡有关,抗凋亡治疗为早期MDS治疗提供了新思路。     

CD_(34)~+细胞与骨髓增生异常综合征患者生存率的关系

目的　探讨CD34+细胞与骨髓增生异常综合征 (MDS)患者生存率的相关性。方法　应用免疫组化SAP法对 56例MDS患者骨髓细胞CD34抗原进行检测 ,并随访 3～ 5年 ,同时定期门诊复诊及住院治疗。结果　 56例中 ,CD34- 3 3例 ,CD34+2 3例 ,随访 3～ 5年后 ,阴性组 10例 ( 3 0 .3 % )转为急性白血病 (AL) ,阳性组 14例 ( 60 .9% )转为AL ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 17例RAEB患者中 ,CD34- 中数生存期 4 7月 ,CD34+者 16月 ,3年生存率前者 69% ,后者 2 1.1% .12例CD34+高表达RAEB T患者中 ,转化成AL时间明显缩短。结论　CD34+患者具有高危转为AL ,CD34+高表达RAEB T短期内转化为AL ,提示预后不佳     

miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响

目的 研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响.方法 我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞.然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达.用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证.结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)％,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)％、(2.78±1.04)％,P＜0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高.用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达.结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达.     

骨髓增生异常综合征CD7抗原的表达

目的 ＣＤ７的测定在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）的诊断及预后判断中的意义。方法 应用单克隆抗体采用间接免疫荧光法对３０例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行ＣＤ７的检测。结果 ＭＤＳ患者ＣＤ７抗原表达增高,而且随ＭＤＳ恶化,即由ＲＡ／ＲＡＳ向ＲＡＥＢ／ＲＡＥＢ－Ｔ转化,ＣＤ７抗原表达增高,易于转化为白血病。结论 ＭＤＳ患者ＭＮＣ表面ＣＤ７的检测有助于ＭＤＳ的诊断,也可协助预后判断。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子α的研究

目的：探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓细胞凋亡及髓内肿瘤坏死因子α（TNFα）水平,初步揭示MDS无效造血机制,方法：采用TUNEL法检测26例MDS及10例正常健康对照组新鲜骨髓单个核细胞（BMMNC）凋亡,RT－PCR探讨…BMMNC中TNFαmRNA表达,ELISA法测定骨髓上清液TNFα蛋白水平。结果：早期MDS（RA＋BM原始细胞＜10％RAEB）患者的骨髓细胞凋亡率明显增加,进展期MDS（BM原始细胞＞10％RAEB＋RAEB－t)骨髓细胞凋亡率与对照组无显著差异,凋亡累及各阶段幼稚粒细胞及有核红细胞。早期MDS细胞凋亡程度与骨髓增殖程度有关。58％（15／26）MDSTNFαmRNA,77%(20/26)MDS髓内TNFα蛋白升高,早期MDS髓内TNFα水平与凋亡呈正相关,并于外周血血红蛋白（Hb）量呈负相关。结论：早期MDS骨髓细胞凋亡增加,随病情演变,凋亡逐渐下降,这可能与异常克隆逃逸凋亡有关。髓内TNFα增加是骨髓细胞发生凋亡的机制之一。α     

抑制性消减杂交技术检测骨髓CD34+细胞基因差异表达

目的 检测、比较骨髓和动员外周血2种来源不同的CD34+细胞基因表达的差异。方法 从一健康供者分别获取骨髓和动员外周血,分离出CD34+细胞,利用抑制性消减杂交技术检测、比较该2种来源不同的CD34+细胞的基因表达差异。结果在骨髓CD34+细胞中共有21个基因高表达,主要涉及2类:（1）与细胞周期S期、G2期和M期转化相关的基因;（2）C/EBP（CCAAT/增强子结合蛋白）转录因子家族。结论骨髓和外周血CD34+细胞在基因表达上具有明显的不同,大部分骨髓CD34+细胞处于S期、G2期和M明,提示骨髓CD34+细胞比外周血CD34+增殖活跃。     

免疫磁珠法分离骨髓CD34~+细胞的方法研究

目的 探讨免疫磁珠法分离CD34 细胞的方法. 方法 应用密度梯度离心法分离骨髓单一核细胞,后采用免疫磁珠法从单一核细胞中分选出CD34 细胞,流式细胞仪鉴定其纯度. 结果 各样品分离出的CD34 细胞占骨髓单一核细胞含量的(2.19±0.12)%,经流式细胞仪鉴定应用免疫磁珠分离的CD34 细胞纯度为(94.6±2.1)%. 结论 免疫磁珠法是分离CD34 细胞较理想的方法.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面造血因子受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞亚群及其表面干细胞因子受体(SCF-R)、红细胞生成素受体(EpoR)、粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)及血小板生成素受体(TpoR)的表达情况及其意义.方法 采用流式细胞术检测2008年7月至2010年3月天津医科大学总医院新诊断的45例MDS患者(17例低危患者、28例高危患者)及30名对照组原代骨髓CD34+CD38+及CD34+CD38-细胞亚群及其表面SCF-R、EpoR、G-CSFR及TpoR的表达率.结果 高危组CD34+细胞比例[0.53%(0.10%～1.68%)]明显高于对照组[0.13%(0.08%～0.32%),P＜0.01],其他2组间比较差异无统计学意义.低危组和高危组CD34+CD38+细胞比例(86.3%±8.5%、82.6%±11.1%)显著低于对照组(92.3%±3.4%,均P＜0.05),而CD34+CD38-细胞比例(13.7%±8.5%、17.4%±11.0%)显著高于对照组(7.7%±3.4%,均P＜0.05).对照组骨髓CD34+CD38+细胞亚群EpoR表达率(18.7%±18.3%)显著低于CD34+CD38-细胞亚群(63.6%±20.0%,P＜0.01),两亚群之间SCF-R、G-CSFR及TpoR表达率差异无统计学意义.在CD34+CD38+细胞亚群中,3组间SCF-R和TpoR表达率差异无统计学意义,而低危组和高危组EpoR的表达率[9.0%(1.4%～12.7%)、5.2%(1.1%～14.1%)]明显低于对照组[9.6%(5.1%～30.1%),均P＜0.05],G-CSFR的表达率(29.8%±19.1%、28.7%±21.1%)明显低于对照组(44.4%±23.4%,均P＜0.05);在CD34+CD38-细胞亚群中,3组间SCF-R和G-CSFR表达率差异无统计学意义,低危组和高危组EpoR的表达率(42.2%±21.9%、25.7%±15.6%)明显低于对照组(63.6%±20.0%,均P＜0.01),TpoR的表达率(5.4%±4.7%、4.1%±4.0%)明显低于对照组(10.1%±8.3%,均P＜0.05).MDS患者骨髓CD34+CD38+和CD34+CD38-细胞亚群表面受体表达率低的患者其外周血血红蛋白水平、中性粒细胞及血小板计数减低的发生率明显高于受体表达率不低的患者(均P＜0.05).结论 MDS患者的原代骨髓CD34+细胞亚群分化异常,膜表面部分造血细胞因子受体表达减低,这可能与MDS患者血细胞减少有关,有望用于辅助诊断MDS.

Abstract：

Objective To detect the abnormalities of differentiation and expression of membrane hemopoietic cytokine receptors on CD34 + bone marrow cells in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). Methods Forty-five newly diagnosed MDS cases from July 2008 to March 2010 in our hospitaland 30 normal controls were enrolled. There were 17 low-risk and 28 high-risk patients. The CD34 + CD38 +and CD34 + CD38- bone marrow cells and the expressions of stem cell factor receptor (SCF-R),erythropoietin receptor (EpoR), granulocyte colony-stimulating factor receptors (G-CSFR) and thrombopoietin receptor (TpoR) on those cells were measured by flow cytometry. Results The mean percentage of CD34+ in karyocyte of MDS cases in high-risk patients [0. 53% (0. 10% - 1.68% )] was significantly higher than that of control group [0. 13% ( 0. 08% - 0. 32% ), P ＜ 0. 01] . The mean percentages of CD34 + CD38 + cells were significantly lower in low and high-risk groups (86. 3% ± 8.5% and 82. 6% ± 11.1% ) than those in control group (92. 3% ± 3.4% ). And the percentage of CD34+ CD38-cells was significantly higher in either low-risk or high-risk group ( 13.7% ±8. 5% and 17.4% ± 11.0% )than that in control group (7.7% ± 3.4%, both P ＜ 0. 05 ). In control group, the mean percentage of antigen expression of EpoR was significantly lower in CD34 + CD38 + cells than that in CD34 + CD38 - cells ( 18.7% ± 18. 3% vs 63. 6% ±20. 0%, P ＜0. 01 ). The expressions of SCF-R, G-CSFR and TpoR were not significantly different between two cell populations. The expressions of EpoR on CD34 + CD38 + cells of low and high-risk MDS groups [9.0% ( 1.4% - 12. 7% ), 5. 2% ( 1.1% - 14. 1% )] were significantly lower than those of control group [9. 6% (5.1% - 30. 1% ), both P ＜ 0. 05]. The expressions of G-CSFR on CD34+CD38+ cells of low and high-risk MDS groups (29.8% ± 19. 1%, 28.7% ± 21.1%) were significantly lower than those of control group (44.4% ± 23.4%, both P ＜ 0. 05 ). The quantities of EpoR on CD34 + CD38 - cells of low and high-risk MDS groups ( 42. 2% ± 21.9%, 25.7% ± 15. 6% ) were significantly lower than those of control group ( 63. 6% ± 20. 0%, both P ＜ 0. 01 ). The expressions of TpoR on CD34+ CD38- cells of low and high-risk MDS groups (5.4% ± 4.7%, 4.1% ± 4.0%) were significantly lower than those of control group ( 10. 1% ± 8. 3%, both P ＜ 0. 05 ). The incidence of cytopenia with low expression rates of hemopoietic cytokine receptors on CD34 + cells was higher than that of MDS with high expression rates. Conclusion The abnormalities of differentiation and membrane hemopoietic cytokine receptors expression of CD34 + bone marrow cells in MDS are associated with MDS cytopenia and may be useful for the diagnosis of MDS.     

CD34+细胞体外定向诱导分化的实验研究

目的:探讨造血生长因子不同组合方式对CD34+细胞体外定向诱导分化作用.方法:应用阴性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC),在液体培养体系加入不同组合细胞因子对CD34+细胞进行诱导,检测细胞总数、CD71+细胞和CD15+细胞比例及粒单系祖细胞和红系祖细胞扩增数量.结果:液体培养体系中,以FL+Tpo+SCF+IL-3+Epo细胞因子组合对CD34+细胞向红系细胞的诱导分化能力最强,2w后CD71+细胞比例为61.20%±5.31%,BFU-E、CFU-E分别扩增27.12±3.95和30.65±40.26倍.以FL+Tpo+SCF+IL-3+GM-CSF+G-CSF细胞因子组合对CD34+细胞向粒系细胞的诱导分化能力最强,2w后CD15+细胞比例为56.18%±6.57%,CFU-GM扩增29.87±10.52倍.结论:合理组合生长因子,可定向诱导CD34+细胞生成大量血细胞,将有助于满足临床应用的需要.     

成人骨髓间充质干细胞对脐血CD34+细胞的体外扩增作用

目的: 探讨骨髓间充质干细胞(MSCS)对脐血CD34 细胞体外扩增作用. 方法: 分离培养成人MSCS作为滋养层,联合SCF, IL-11和GM-CSF分别组成对脐血CD34 细胞的不同扩增体系,培养3 wk后观察脐血有核细胞、CFCs以及CD34 细胞扩增倍数的变化. 结果: MSCS联合细胞因子组较其他组培养体系对有核细胞总数、CFCs含量及CD34 细胞含量均具有明显的扩增作用,分别扩增了114.2±2.4, 40.5±8.6, 11.3±0.4 倍. 结论: 成人MSCS协同其他细胞因子可增强脐血CD34 细胞的体外扩增作用.     

胚胎与成人骨髓CD34~+细胞RUNX1相关基因及Notch信号通路的比较研究

目的 了解引产儿胚胎与成人骨髓CD34+细胞生物学活性,寻找新的造血干细胞来源RUNX1相关基因和Notch信号通路差异.方法 RT-PCR检测引产儿胚胎和成人骨髓CD34+细胞RUNX1、Hes-1、SLC9A3R1、Notch1、Notch2、HLA-C、PDCD1、PKC-βI的mRNA表达水平.结果 引产儿胚胎骨髓CD34+细胞RUNX1、Hes-1、SLC9A3R1、Notch1、Notch2、HLA-C、PDCD1和PKC-βI的mRNA表达水平与成人组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 引产儿胚胎骨髓CD34+细胞具有与成人骨髓CD34+细胞相似的生物学活性,可以作为实验中正常对照使用,满足实验需要.     

G-CSF动员的外周血与骨髓CD34+细胞黏附分子的表达

目的：研究黏附分子在外周血干细胞动员机制中的作用。 方法：应用流式细胞仪检测粒细胞集落刺激因子G-CSF动员的外周血细胞与骨髓CD34⁺细胞表达的黏附分子非常延迟抗原4(VLA-4)、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)和L-选择素(CD62L)。 结果：G-CSF动员后的外周血CD34⁺细胞表达的VLA-4、LFA-1与骨髓CD34⁺细胞相比明显减少,CD62L无明显改变。 结论：黏附分子VLA-4及LFA-1降低可能是G-CSF动员造血干细胞进入外周血过程中的一个重要环节。     

不同细胞因子对脐血CD34+细胞扩增的影响

目的探讨不同细胞因子促进脐血CD34 细胞扩增的效应,为下一步的临床应用奠定基础。方法采用EasySep免疫磁珠阳性选择系统分离脐血中CD34 细胞,在无血清、无基质细胞培养体系中添加不同细胞因子培养2周,分组:A组,SCF FL TPOB组,SCF FL TPO IL-3C组,SCF FL TPO G-CSF。结果CD34 细胞数目于培养后7d达到峰值,3组间差异无显著性;B组扩增至14d时细胞总数达(384.40±17.48)倍,显著高于另外2组。扩增7d后的脐血细胞经体外培养可形成造血集落。结论体外扩增脐血CD34 细胞理想的细胞因子组合为SCF TPO FL,以7d为宜。     

肾母细胞瘤基因衍生肽诱导细胞毒性T淋巴细胞对白血病患者骨髓CD34+细胞的体外杀伤效应

目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P＜0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P＜0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.