吉非替尼联合塞来昔布对肺腺癌细胞凋亡和EGFR、COX 2表达的影响

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼联合环氧合酶 2（COX 2）抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞株凋亡和EGFR、COX 2表达的影响。方法A549细胞培养于RPMI 1640培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5?μmol/L组、塞来昔布25?μmol/L组、吉非替尼5?μmol/L联合塞来昔布25?μmol/L组。药物干预细胞48?h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞抑制率、流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡和药物作用周期、免疫荧光检测EGFR和COX 2蛋白的表达情况。结果吉非替尼和塞来昔布对A549细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,两制剂联合作用时抑制作用更强（P<0.01）。吉非替尼和塞来昔布均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高（P<0.01）;联合用药与单独用药相比,可使细胞发生明显的G1期阻滞（P<0.01）,进一步下调了EGFR和COX 2蛋白的表达（P<0.05）。结论吉非替尼与塞来昔布联合应用具有协同作用,可进一步抑制细胞的生长。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制、环氧化酶-2表达的影响和化疗敏感性

目的：探讨环氧化酶（COX）-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）对肺癌A549细胞的增殖抑制、COX-2表达和化疗敏感性的影响。方法：用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTY法）检测塞来昔布单药及联合顺铂（DDP）对COX-2高表达的人肺腺癌细胞A549的增殖抑制，流式细胞术分析塞来昔布联合DDP对细胞周期及细胞凋亡的影响,Westernblot法分析不同浓度塞来昔布干预后对A549细胞内COX-2蛋白表达的影响。结果：MTT法检测显示，塞来昔布（0-100μmol／L）对肺腺癌A549细胞的抑制作用呈时间依赖性、剂量依赖性效应。联合用药组与单药组相比差异有显著性（P〈0．001）。流式细胞术分析显示，塞来昔布12．5μmol／L与25μmol／L联合DDP0．5ms／L时，A549细胞明显阻滞于c,o-Gl期，S期细胞比例减少，联合用药组的凋亡率明显高于单药组（P〈0．001）。Westem blot法分析显示，塞来昔布浓度超过50μmol／L时，COX-2蛋白的表达受到了抑制。结论：塞来昔布的抗肿瘤作用机制涉及到COX．2依赖性途径。塞来昔布能增加DDP的化疗敏感性，塞来昔布与DDP联用对人肺腺癌A549细胞有明显协同抗肿瘤效应，该作用可能是通过增强对A549细胞的增殖抑制、诱导凋亡来实现的。     

塞来昔布对高表达Her-2/neu的人乳腺癌SKBr3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞SKB r3的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法4种不同浓度的塞来昔布处理乳腺癌细胞系SKB r3细胞24、48 h,MTT法测定24、48 h后SKB r3细胞的增殖活性,流式细胞仪（FCM）检测48 h后各浓度塞来昔布诱导细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。结果与对照组相比,塞来昔布以时间、剂量依赖性方式抑制SKB r3细胞增殖（P〈0.05）。作用48 h后,塞来昔布诱导SKB r3细胞凋亡并阻断了细胞周期进展,凋亡率随塞来昔布浓度的增加而增加（P〈0.05）,且随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增加、S期及G2/M期细胞比例逐渐下降（P（0.05）。结论塞来昔布抑制高表达Her-2/neu的SKB r3细胞的增殖,诱导其凋亡。     

汗防已甲素联合塞来昔布逆转白血病细胞耐药的体外研究

目的：通过汗防已甲素联合塞来昔布逆转白血病细胞耐药的实验研究,探讨有关多药联合逆转肿瘤细胞的耐药机制.方法： 噻唑蓝（MTT）比色法检测汗防已甲素联合塞来昔布对K562细胞的细胞毒试验;用流式细胞技术（FCM）检测各组K562细胞内的药物浓度;用FCM检测各组的早期凋亡（Annexin Ⅴ）;用RT-PCR检测各组COX-2/COX-1的表达.结果： 汗防已甲素联合塞来昔布对K562细胞的抑制作用与其他组相比有显著性差异（P〈0.05）;细胞内的药物浓度高于其他实验组;诱导凋亡率（17.67%）高于其他实验组;COX-2/COX-1的表达明显低于其他实验组.结论： 汗防已甲素联合塞来昔布逆转K562细胞的效果明显,能够增加K562细胞内药物浓度,诱导细胞凋亡,降低 COX-2/COX-1的表达.     

选择性COX-2抑制剂抑制肺癌生长的实验研究

目的：观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对肺癌A549细胞在体内外的抑制作用．方法：噻唑蓝（MTr）比色法检测塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞技术检测药物处理后A549的细胞周期,观察塞来昔布对裸鼠A549细胞移植瘤的抑制作用,移植瘤切片TUNEL法检测癌细胞凋亡．结果：塞来昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,IC50为500ummol／L;阻滞G1期细胞进入S期．称量裸鼠移植肿瘤的瘤结节质量,对照组（2．16±0．98）g,药物组（0．98±0．51）g,两组差异有统计学意义（P〈0．05）,抑瘤率为54．6％．TUNEL法移植瘤切片凋亡细胞染色对照组凋亡指数（AI）为1．6±0．6,用药组为9．5±2．5,差异有统计学意义（P〈0．05）．结论：塞来昔布在体内及体外均对肺癌细胞表现有抑制作用,将细胞周期阻滞在G1期并诱导肿瘤细胞凋亡可能是抑制肺癌细胞增殖的重要机制．     

塞来昔布联合厄罗替尼对人肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 探讨厄洛替尼和塞来昔布联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COx-2),对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长及血管形成的影响.方法 人肺癌细胞A549接种于裸鼠皮下,成瘤后随机分为4组:对照组、厄洛替尼组、塞来昔布组、塞来昔布和厄洛替尼联合用药组,给予灌胃处理,观察裸鼠生长状况,每周两次测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线.40 d后处死裸鼠,称取移植瘤质量.采用免疫组化检测肿瘤微血管密度(MVD),ELISA法检测裸鼠血清中血管内皮生长因子(sVEGF)的含量,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达情况并计算Bcl-2/Bax的值.结果 联合用药组肿瘤明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P＜0.05).联合用药组微血管数目、sVEGF的含量明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P＜0.05).厄洛替尼组Bcl-2的表达明显小于对照组(P＜0.05),塞来昔布组Bcl-2的表达与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),联合用药组Bcl-2的表达与对照组、塞来昔布组、厄洛替尼组相比均明显降低(P＜0.05).Bax的表达在各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).联合用药组Bcl-2/Bax较塞来昔布组、厄洛替尼组明显降低(P＜0.05).结论 塞来昔布联合厄洛替尼相对厄洛替尼或塞来昔布明显抑制人肺癌移植瘤的生长.其中减少微血管生成、增加肿瘤细胞的凋亡可能为其抗肿瘤机制.     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞Bgc-823增殖的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂——美洛昔康、塞来昔布对胃癌细胞Bgc-823增殖与凋亡的影响。方法四唑盐比色实验法（MTT法）检测Bgc-823细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果美洛昔康、塞来昔布呈剂量和时间依赖性抑制Bgc-823细胞的增殖;塞来昔布的作用强于美洛昔康。塞来昔布可诱导Bgc-823细胞凋亡,将细胞阻滞在G0/G1期;随着药物浓度的增加,凋亡率增加,G0/G1期细胞比例增加。结论选择性COX-2抑制剂呈剂量和时间依赖性抑制胃癌细胞生长,这种作用可能依赖于对COX-2表达的抑制。选择性COX-2抑制剂呈剂量依赖性影响细胞周期,诱导胃癌细胞凋亡。     

塞来昔布对人肺腺癌增殖及凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布在人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡中的作用及其机制。方法应用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法分析1、5和10μmol·L-1塞来昔布对A549细胞分别处理0、12、24、48和72 h后的增殖能力,分光光度法检测Caspase-3和Caspase-9活性,用免疫荧光法检测凋亡标志分子Annexin V的表达。结果塞来昔布处理组细胞的增殖能力明显低于未处理对照组细胞,差异有统计学意义（P〈0.05）,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;处理组癌细胞Caspase-3、Caspase-9和Annexin V的表达水平显著高于未处理对照组（P〈0.05）。结论塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导凋亡,可作为肺癌患者靶向性预防和治疗药物。     

选择性环氧化酶-2抑制剂调节Egr-1作用机制的研究

目的:以肺腺癌细胞株A549为研究对象,观察不同浓度的塞来昔布对A549细胞的生长周期及凋亡率的影响,以及对早期反应基因-1(Early growth response-1,Egr-1)表达的影响,探讨环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂调节Egr-1的具体机制,从分子水平上寻找COX-2抑制剂抗肿瘤作用的具体机制.进一步指导临床治疗.方法:体外培养肺腺癌细胞A549,经25.0、50.0、100.0 μmol/L浓度的塞来昔布处理细胞,24 h后采用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)测定细胞周期,TUNEL法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测Egr-1、Fas基因的表达.结果:25.0、50.0、100.0 μmol/L赛来昔布作用24 h后,A549细胞不同程度的阻滞在G0/G1期,A549细胞凋亡指数分别是10.67%±1.46%、18.33%±2.54%、25.67%±2.10%,差异具有统计学意义(P＜0.05);随着塞来昔布药物浓度的增加,Egr-1和Fas的mRNA表达量逐步增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:高度选择性COX-2抑制剂塞来昔布可通过调节细胞周期和细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过上调细胞中Egr-1的表达,进而上调Fas的表达.使细胞周期阻滞于G0/G1,最终促进细胞凋亡,这可能是环氧化酶抑制剂发挥抗癌作用的分子生物学基础.     

塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖和凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞后细胞增殖的变化;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;RT-PCR检测细胞中COX-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,塞来昔布对HEC-1B细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性;不同浓度塞来昔布作用HEC-1B细胞24 h后,流式细胞仪结果显示G0/G1期细胞增加,S期和G2/M细胞减少,细胞凋亡率增加,各药物组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);RT-PCR结果显示,在50 ～ 200 μmol/L塞来昔布组,随着药物浓度的增加COX-2 mRNA的表达逐渐减弱(P＜0.05).结论 塞来昔布能抑制HEC-1B细胞的增殖,并能改变细胞周期和诱导凋亡,其机制可能与下调细胞中COX-2 mRNA的表达有关.     

肺康饮口服液对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的通过观察肺康饮口服液对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的肺康饮口服液作用为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应,透射电镜观察药物对细胞形态学的影响,流式细胞术检测A549细胞中p53和Be1-2蛋白表达情况。结果不同浓度肺康饮口服液作用A549细胞24h增殖抑制明显（P〈0．05）,其抑制效应具有剂量依赖的特点,并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调Bc1-2基因表达（P〈0．05）。结论肺康饮口服液可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。     

1,25（OH）2D3和ATRA对HO8910生长的协同抑制作用

目的：通过单独或联合使用1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitaminD3,1,25（OH）2D3]和全反式维甲酸（all trans rinoic acid,ATRA）,研究其对人卵巢癌细胞HO8910生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及维生素D受体（vitamin D recept VDR）及维甲酸α受体受体（retinoic acid receptorα,RARα）mRNA的表达变化,探讨其作用的分子机制。方法：选用人卵巢癌细株HO8910在体外进行培养,培养时分别添加1,25（OH）2D3、ATRA或二者联合,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）进行细胞周期和细胞凋亡分析,用RT-PCR检测VDR及RARαmRNA的表达。结果：结果是单独或联合使用1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸诱导后,HO8910细胞生长均受到不同程度的抑制（P〈0.05）,并呈时间依赖关系;能够引起细胞周期时相的改变,G1细胞增多（P〈0.05）;能够诱导细胞产生细胞凋亡（P〈0.05）;能够上调VDR及RARαmRNA的表达（P〈0.05）,进而抑卵巢癌细胞增殖,其中以联合用药组最为显著。结论：说明1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸能抑制人卵巢癌细胞株HO8910生长;诱导细胞周期发生G1期阻滞,同时产生细胞凋亡作用;通过上调VDR及RARαmRNA的表达,从而抑制癌细胞增当1,25-二羟维生素D3与全反式维甲酸联合用药时,能够对HO8910细胞生长产生协同抑制作用。     

吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的实验研究

目的：研究吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的影响。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和培养肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株,待24 h、48 h、72 h后采用不同浓度的吉非替尼、奥曲肽、顺铂、5-FU进行单用和联用处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析药物的增效效果。结果联合用药对肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株可起到协同抑制作用,与单独用药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。联合用药组的肺癌敏感 A549、耐药A549/GR 细胞株培育48 h 后的IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8） mg/L,单药组IC50=（20.1±1.2）、（20.3±1.4） mg/L,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组、单药组、联合用药组诱导肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株后凋亡率差异明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论吉非替尼联合用药对细胞的增生具有协同抑制作用,对其他肺癌的治疗也具有一定的效果。     

盐酸埃克替尼联合DC-CIK治疗晚期NSCLC临床观察

目的：观察盐酸埃克替尼联合DC-CIK生物免疫治疗在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）维持性治疗中的效果。方法将经含铂类两药联合化疗方案治疗后疗效达到稳定或以上的60例晚期NSCLC患者随机分为2组,对照组给予盐酸埃克替尼治疗,观察组在对照组的基础上联合DC-CIK生物免疫治疗。评价2组的临床疗效及毒副反应。结果观察组患者的无进展生存期与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）,但2组毒副反应差异不明显（P〉0.05）,主要表现在皮肤和胃肠道反应。结论盐酸埃克替尼联合DC-CIK在晚期NSCLC维持治疗中是一种安全有效的方法。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

自噬在塞来昔布对脑胶质瘤SHG-44细胞放射增敏效应中的作用

目的探讨自噬在塞来昔布对脑胶质瘤SHG-44细胞放射增敏中的作用。方法选择脑胶质瘤细胞株SHG-44作为实验对象,并分成对照组（C组）、塞来昔布组（D组）、辐射组（R组）和联合组（D＋R组）。集落形成法检测塞来昔布对SHG-44细胞的放射增敏作用。吖啶橙染色、FITC标记LC3-Ⅱ抗体和电镜共同检测细胞的自噬水平。流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况。结果塞来昔布（30μmol/L）增加SHG-44细胞的放射敏感性,诱导肿瘤细胞自噬和G2/M期阻滞。电镜观察发现塞来昔布、辐射及联合作用后胞质内可见自噬体,而无明显的核浓缩和核碎片。吖啶橙染色和FITC-MAP1-LC3-Ⅱ标记自噬体发现D＋R组细胞自噬水平明显高于R组（P〈0.05）。D＋R组G2/M期细胞比例为（34.26±2.20）%,R组为（29.15±1.99）%,D＋R组明显多于R组（P〈0.05）,而相应的凋亡比例分别为（9.7±1.24）%和（8.2±0.93）%,两组差异无统计学意义（P〉0.05）。随着辐射剂量的增加,细胞自噬水平增高,而细胞存活率呈指数性递减（决定指数R=0.98,P〈0.05）。结论塞来昔布增强辐射诱导SHG-44细胞G2/M期阻滞、促进细胞自噬、诱导细胞自噬性死亡,可能是其增加放射敏感性的机制之一。     

得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响

目的探讨中成药得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应（RT—PCR）法测定survivin mRNA的表达。结果（1）得力生在4mL／L-100mL／L浓度范围内可抑制A549细胞增殖,此作用与药物体积浓度无明显相关关系,但该作用具有时间依赖性（r=0．991,P=0．001）。（2）20mL／L浓度的得力生在体外可诱导A549细胞凋亡,且其作用具有时间依赖性（r=0．997,P=0．049）。（3）RT—PCR结果显示,得力生可明显抑制A549细胞中表达survivin,与对照组相比,差异具有统计学意义（r=4．333,P〈0．05）。结论得力生可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与抑制survivin基因表达有关。     

三七皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）对人肺腺癌A549（hA549）细胞的致凋亡作用.方法 体外培养的hA549细胞,经不同浓度的PNS或联合应用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002处理.采用MTT比色法检测肺腺癌A549细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法检测其细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bax和蛋白激酶B（Akt）蛋白的表达.结果 PNS能降低肺腺癌细胞的存活率,且其效应随剂量和作用时间的增加有增强的趋势;在PNS组可见细胞核出现固缩、边集和凋亡小体,并发现肺癌细胞凋亡率提高,细胞内Bax蛋白表达上调,Bcl-2、Akt蛋白表达下调.各浓度PNS组与空白对照组及溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;PNS与LY294002联合应用则具有协同作用,可进一步促进肺癌细胞的凋亡及其细胞内的Bax蛋白表达上调和Bcl-2及Akt蛋白表达下调,与单用PNS组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 PNS具有降低肺癌细胞存活率、诱导癌细胞凋亡的作用,并与PI3K特异性抑制剂LY294002具有协同作用,这可能与抑制PI3K/Akt信号通路、促进凋亡蛋白表达有关.