血管抑制素治疗脑胶质瘤的实验研究

目的：探讨Angiostatin（血管抑制素）抑制血管生成在治疗胶质瘤中的作用。方法：应用Angiostatin分别作用于C6胶质瘤细胞系的体外培养细胞和动物肿瘤模型,计算细胞存活率及抑瘤率,SABC免疫组化技术检测体内胶质瘤中的微血管密度。结果：Angiostatin不抑制体外培养胶质瘤细胞生长,细胞存活率为100％,对体内生长的胶质瘤则有显著抑制作用且呈剂量依赖关系,抑瘤率可达78．1％（P＜0．01）。经Angiostatin处理的胶质瘤中微血管密度较对照组降低（P＜0．01）。结论:Angiostatin能抑制胶质瘤血管生成,在胶质瘤临床治疗中可能有应用价值。     

血管紧张素Ⅱ升压化疗治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

目的观察血管紧张素Ⅱ升压化疗法治疗大鼠脑胶质瘤的效果。方法建立大鼠脑胶质瘤动物模型，采用血管紧张素Ⅱ升压联合化疗的方法治疗胶质瘤，测定局部脑血流和肿瘤局部的药物浓度，观察瘤鼠肿瘤的大小及生存期的变化。结果联合升压化疗组肿瘤局部血流增加，药物浓度增加，肿瘤鼠的生存期延长。结论升压化疗法治疗大鼠脑胶质瘤强于未升压化疗法，生存期延长，存活率增加。     

靶向血管治疗脑胶质瘤

目的探讨靶向血管治疗脑胶质瘤的研究进展。方法分别从该方法的依据、具体方法、肿瘤血管抑制剂的开发、抗血管基因治疗、优越性以及存在问题与展望等方面对靶向血管治疗脑胶质瘤这一策略进行回顾总结。结果靶向血管治疗脑胶质瘤方法可行,前景诱人。结论随着分子生物学的发展,肿瘤血管抑制剂的不断开发和研究,对于脑胶质瘤这一血管增生极为突出的肿瘤,深入研究抗血管治疗具有重要意义。     

血管内皮生长因子、微血管密度在脑胶质瘤中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VGEF)在胶质瘤微血管形成中的作用以及与胶质瘤生物学行为的关系.方法选择45例脑胶质瘤手术标本,采用免疫组织化学方法测定血管内皮生长因子及Ⅷ因子相关抗原的表达.结果血管内皮生长因子在胶质瘤中的阳性表达率为Ⅰ级19.4±4.5,Ⅱ级24.9±15.1,Ⅲ级53.8±10.7,Ⅳ级70.3±10.3,MVD的阳性率为Ⅰ级8.2±1.6,Ⅱ级8.8±1.7,Ⅲ级16.6±3.6,Ⅳ级19.5±6.1,低度恶性(Ⅰ-Ⅱ级)与高度恶性(Ⅲ-Ⅳ级)有显著差异(P＜0.05)结论血管内皮生长因子能促进肿瘤中微血管形成,它与微血管密度均可作为脑胶质瘤恶性程度的重要指标.     

重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法体外培养人脑胶质瘤细胞,设立对照组与重组人血管内皮抑制素实验组（终浓度分别为50、100、150 ng/ml）,采用MTT法来判定该抑制因子对人脑胶质瘤细胞有无抑制作用。结果对照组OD值为0.302±0.012,实验组的OD值分别为0.284±0.006,0.218±0.014,0.175±0.012,P值均〈0.05。结论重组人血管内皮抑制素能够抑制人脑胶质瘤细胞的增殖且呈剂量依赖性。     

能量多普勒评价高级别脑胶质瘤及瘤周组织血管生成水平的相关研究

目的 探讨能量多普勒血管指数与微血管密度相关性及术中能量多普勒应用对提高超声识别胶质瘤与瘤周水肿能力的可靠性与可行性.方法 选择25例拟行肿瘤根治术高级别脑胶质瘤患者,于肿瘤切除术中行能量多普勒检查,选取瘤灶及瘤周水肿目标区域,以Photoshop7.0软件分别测量血管指数(Ⅵ).术中定点取材,行CD34免疫组化染色,对微血管密度(MVD)进行测值.对Ⅵ与MVD进行相关性分析,比较两组间Ⅵ和MVD.结果 胶质瘤瘤灶内能量多普勒Ⅵ测定结果为13.52±3.57.明显高于瘤周组织内能量多普勒血流指数(Ⅵ=7.69±2.46)(t=0.00,P<0.01).CD34免疫组化染色测值.胶质瘤瘤灶内MVD为38.48±8.47个/HP,瘤周组织MVD计数为13.52±3.57个/HP,两者间差异显著(t=0.00,P<0.01).在胶质瘤瘤灶内及瘤周组织内,能量多普勒Ⅵ与MVD测值均有良好相关性(瘤灶内r=0.7248,p=0.0000:瘤周组织内r=0.6608,P=0.0002).结论 高级别脑胶质瘤术中采用能量多普勒进一步准确区分瘤灶与瘤周水肿组织的病理学基础是二者间血管生成水平存在显著差异.二者能量多普勒VI间差异显著,且均与其对应组织MVD具有良好相关性,证实了能量多普勒在高级别脑胶质瘤切除术中应用的可靠性与可行性,但具体应用技术方法尚待进一步完善.     

血管生成抑制素治疗血管瘤的研究

目的：观察血管生成抑制素治疗血管瘤的效果。方法发酵毕赤酵母工程菌组成型表达重组血管生成抑制素,用SP-Sepharose Fast Flow (阳离子交换剂)柱进行蛋白纯化;通过抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成试验和诱发血管内皮细胞凋亡试验,分析重组血管生成抑制素的生物学活性,在血管瘤模型(公鸡肉垂)中注射血管生成抑制素,分析血管生成抑制素对血管瘤的药效。结果血管生成抑制素在毕赤酵母中高效表达,经过纯化,收获达98%的重组血管生成抑制素;重组血管生成抑制素具有抑制CAM血管生成和诱发血管内皮细胞凋亡的活性;重组血管生成抑制素与血管瘤模型作用14 d后,瘤体血管生长抑制率为51%(P<0.01),血管瘤增殖抑制率为39%(P<0.05)。结论成功制备重组血管生成抑制素药物,血管生成抑制素对于血管瘤模型具有显著的药效。     

脑胶质瘤患者微血管密度的测定及其临床意义

目的　以微血管密度 (MicrovesselDensity ,MVD)为指标 ,探讨血管形成与人脑胶质瘤恶性程度的关系。方法　用免疫组化SP法对 49例人脑胶质瘤手术切除标本及 12例脑外伤内减压术中得到的正常脑组织进行了MVD值测定 ,分析MVD值与胶质瘤恶性程度的关系。结果　脑胶质瘤组织中MVD为 2 1.17± 8.0 5 ,显著高于正常脑组织 (9.92± 4.36 ) (P <0 .0 1) ,随着胶质瘤级别的升高 ,MVD水平有相应增高趋势。结论　MVD对脑胶质瘤的恶性生物学行为的评估有重要意义。     

可溶性血管内皮钙粘素与脑胶质瘤患者生存期相关性研究

目的 分析结构改变的血管内皮(vascular endothelial,VE)-钙粘素(包括酪氨酸磷酸化和裂解)在脑胶质瘤患者中的表达及临床意义.方法 研究对象为60例在本院手术的脑胶质瘤患者,采用免疫组化染色和Western blot观察肿瘤标本的VE-钙粘素的表达及磷酸化情况.通过去糖基化分析和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量分析脑胶质瘤患者血清中裂解VE-钙粘素浓度(soluble VE-cadherin,sVE),分析其与患者生存期的相关性.结果 相对于非肿瘤组织,VE-钙粘素在人胶质瘤组织中高表达(P＜0.05),VE-钙粘素酪氨酸磷酸化表达也明显增高(P＜0.05).与此同时,胶质瘤患者血清中sVE浓度增高,患者(sVE＜840 ng/ml)中位进展期为1 095 d,患者(840＜sVE＜1 247 ng/ml)中位进展期为365 d,患者(sVE＞1 247 ng/ml)中位进展期为204 d,同组织学分级无关.结论 sVE的表达与患者的预后不良有关,可以作为脑肿瘤预后标志物.     

血管内皮细胞生长因子抗体对胶质瘤生长的影响

探讨血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfctor,VEGF)对胶质瘤生长的抑制作用。方法应用vEGF抗体作用于C6胶质瘤细胞动物肿瘤模型,观察其抑瘤作用;应用SABC免疫组化技术检测体内生长胶质瘤中微血管密度。结果VEGF抗体对体内生长的胶质瘤有显著抑制作用且呈剂量依赖关系,押瘤率可达82.8％(P<0.01)。经VEGF抗体治疗的胶质瘤中微血管密度较对照组降低(P<0.01)。结论vEGF抗体通过抑制血管生成而抑制胶质瘤生长。     

脑胶质瘤低密度脂蛋白受体含量的研究

对２１例脑胶质瘤组织及同体正常脑组织进行了低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体饱和分析、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图及ＬＤＬ受体的活性测定。结果显示，脑胶质细胞瘤ＬＤＬ受体的亲和性和特异性与同体正常脑组织无明显差异，脑内胶质瘤组织中ＬＤＬ受体活性比同体正常脑组织高４倍以上，表明脑胶质瘤组织中ＬＤＬ受体活性升高与脑胶质瘤的发生、发展有关。     

人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞的分离培养与活性测定

目的分离、培养人脑胶质瘤肿瘤浸润淋巴细胞并对其进行活性测定，探讨临床应用肿瘤浸润淋巴细胞的理论根据。方法采用机械分离、酶解聚和不连续密度梯度离心方法从１０例脑胶质瘤制备肿瘤浸润淋巴细胞单细胞悬液，体外培养扩增；采用ＮＡＧ酶荧光比色法测定肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性。结果肿瘤浸润淋巴细胞得率达到７２５±３２１；在ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中生长旺盛，第３、４周能够达到１０９数量级，此时杀伤活性亦达到高峰。结论肿瘤浸润淋巴细胞适当条件体外培养扩增，在数量和杀伤活性等方面能够满足临床要求，培养第３、４周是肿瘤浸润淋巴细胞应用的时机。     

神经生长因子在胶质瘤中的表达与意义

目的：探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）在胶质瘤中的表达及其临床意义。方法：用免疫组化Envision法检测胶质瘤中NGF的表达,以10例瘤周正常脑组织为对照。结果：①NGF在各级别胶质瘤中均呈阳性表达,在正常脑组织中低表达,两组间的差异有统计学意义（x^2=14．729,P〈0．001）;②NGF在各级别胶质瘤中的表达有统计学意义（F=20．49,P〈0．001）,且其表达强度随病理级别的增加而增加（r=0．6977,P〈0．0001）;③NGF的表达与患者年龄、性别及肿瘤大小无关,脑室肿瘤表达较其它部位低（x^2=8．336,P=0．015〈0．05）。结论：NGF在胶质瘤细胞中的含量变化与胶质瘤的发生发展密切相关,可能成为判断胶质瘤生物学行为、预测病人预后的重要指标,进一步深入研究其调节机制可能为胶质瘤的治疗开辟新的有用的方法。     

葡萄糖转运蛋白3在胶质瘤中的表达与意义

目的：探讨葡萄糖转运蛋白3（glucose transporter proteins,GLUT3）在胶质瘤中的表达及其临床意义。方法：用免疫组化Envision法检测80例皎质瘤GLUT3的表达。结果：①在胶质瘤中,GLUT3在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的阳性率分别为35％,60％,80％,100％,在对照组中无表达,各组间有显著差异（x^2=37．19,P〈0．01）;②各级胶质瘤,表达强度随胶质瘤病理级别增加而增加（r=0．6906,P〈0．0001）;③GLUT3表达分别与患者年龄（x^2=1．05,P〉0．05）、性别（x^2=0．15,P〉0．05）、肿瘤大小（x^2=0．30,P〉0．05）、部位无关（x^2=0．74,P〉0．05）。结论：GLUT3在胶质瘤中的表达强度分别与肿瘤的病理级别呈正相关,可以作为判断胶质瘤生物学行为、预测病人预后的重要指标。     

恶性脑胶质瘤细胞体外药敏及P-糖蛋白检测的临床意义

目的 :检测脑胶质瘤细胞体外药敏及P -糖蛋白的表达 ,为临床选择化疗药物制定方案提供依据。方法 :采用MTT法检测 30例脑胶质瘤患者肿瘤细胞 ,对化疗药物的敏感性以及采用免疫组化方法检测脑胶质瘤细胞的P -糖蛋白的表达。结果 :30例脑胶质瘤患者肿瘤细胞体外药敏显示 :高三尖杉酯碱 (H)、长春新碱(VCR)、阿糖胞苷 (Ara -C)、足叶乙甙 (Vp - 16 )、柔红霉素 (DNR)、米托葸昆 (MX)、平阳霉素 (SP)、阿克拉霉素 (ACR)、阿霉素 (ADM )、环已亚硝脲 (CCNU)等化疗药物对肿瘤细胞均有一定的抑制作用 ,以CCNU、ADM、ACR、DNR、MX、Vp - 16抑制作用较强。检测 2 8例患者脑胶质瘤细胞P -糖蛋白表达 ,2 4例表达(- ) ,4例表达 ( ) ,其中 3例为复发患者。结论 :胶质瘤细胞体外药敏及P -糖蛋白表达的检测 ,可为临床指导用药 ,制定化疗方案 ,提供重要参考实用价值。     

卡氮芥与铜铁制剂联合用于抗脑胶质瘤的动物实验

采用诱发小鼠脑胶质母细胞瘤G_(422)瘤株进行卡氮芥(BCNU)与铜铁制剂(AC7851)联合用于抗脑胶质瘤,结果显示:小剂量BCNU(10 mg/kg)与AC 7851(0.96g/kg)联合应用,荷瘤小鼠生存期延长23.62％～40.09％;且能明显抑制肿瘤生长,抑瘤率为54.60％～81.90％。联合用药时使肿瘤细胞周期G_1期细胞减少10.6％,S期细胞增加10.4％。同时使骨髓造血祖细胞(GM-CFU)克隆形成率恢复正常。上述结果表明AC 7851可增强BCNU的抗脑胶质瘤作用,同时减轻BCNU的骨髓抑制作用。     

INHIBITION OF ANGIOSTATIN TO THE GROWTH AND METASTASIS OF GASTRIC CANCER IN NUDE MICE

Objective To study the inhibition effect on tumor angiogenesis and metastasis of angionstatin, which generated from human plasminogen. Methods Plasminogen was isolated metastasis of angio-from human plasma by Sepharose chromatography arm then catalyzed by elastase. Angiostatin was isolated by Sepharose 4B-Lysine chromatography. Nude mice model of metastatic gastric cancer was set up by intact tumor tissue implantation orthotopically. From the day of operation, mice received daily intraperitoneal injections of human angiostatin,intact plasminogen, or saline, respectively. 24μg ( 1.2mg/kg) of angiostatin or plasminogen was given on the day of operation, followed by a daily dose of 12μg( 0. 6mg /kg ) via intraperitoneal injection for three weeks.Ten weeks after implantation, mice were sacrificed and autopsied. Microvascular density was measured by im.munohistochemistry. Results Molecular weight of plasminogen isolated from plasma was 94KD. Plaanino-gen was catalyzed into two fragment peptides by elastase , which were 41～43KD and 51～53KD in molecular weight. Growth of the orthotopically implanted tumor was significantly reduced in size in the mice treated with angiostastin with an inhibition rate of 54.0%. Tumor metastasis to the liver and peritoneum was also signifi-cantly inhibited by angiostatin with inhibition rate of 61.9% and 55.6% respectively. The microvascular den-sity was also decreased significantly in the angiostatin treated mice. Conclusion Angiostatin may be generat-ed from plasma, and has inhibitory effect both on tumor growth and metastasis in nude mice model of human gastric cancer.     

神经再生素对神经细胞生长影响的实验研究

目的：探讨神经再生素（NRF）对离体培养的PC12细胞、背根神经节细胞、大脑皮层细胞生长影响的分子生物学机制。方法：采用细胞体外培养、半定量RT-PCR、Western blot方法，观察和比较NRF组（添加NRF）、NGF组（添加NGF）和空白对照组（基础培养基）中细胞生存状况及相关基因mRNA及其蛋白水平的表达变化。结果：NRF作用于离体培养的PC12细胞，可促使其分化；作用于背根神经节细胞，GAP-43和NF-L mRNA表达在不同时间呈不同程度的上调；作用于大脑皮层细胞，GAP-43和NF蛋白亦比对照组表达量为高。结论：NRF具有维持细胞生存和促进神经细胞突起生长的作用，并可使神经元GAP-43和NF mRNA表达及其蛋白合成上调。     

替莫唑胺-尼莫地平-O6-苄基鸟嘌呤联用对胶质瘤细胞株U251抑制作用的研究

目的观察替莫唑胺（TMZ）、尼莫地平（NIM）、O6-苄基鸟嘌呤（O6-BG）联用对脑胶质瘤细胞株的抑制作用。探讨胶质瘤耐药发生的机制,寻找有效的多药耐药逆转剂,克服耐药性的产生,提高化疗效果,增加肢质瘤细胞对化疗药物的敏感性,最大限度地抑制胶质瘤细胞增殖,延缓肿瘤复发。方法用免疫细胞化学法检测胶质瘤细胞中MGMT蛋白表达,观察比较MGMT在用O6-BG处理前后表达的差异。分别以尼莫地平和O6-BG作为耐药逆转剂,与替莫唑胺单独或联合应用于体外培养的脑胶质瘤细胞U251。用MTT法检测细胞抑制率;观察TMZ、NIM、O6-BG联用对脑胶质瘤细胞的抑制作用。结果与对照组相比,MGMT在用O6-BG处理后表达明显减少。MTT比色法分别检测TMZ、TMZ＋NIM、TMZ＋O6-BG组及TMZ＋NIM＋O6-BG组对胶质瘤细胞U251的抑制作用,结果显示各组对胶质瘤细胞的抑制作用为TMZ＋NIM＋O6-BG联合组〉TMZ＋O6-BG〉TMZ＋NIM〉TMZ。与TMZ组比较,TMZ＋NIM组、TMZ＋O6-BG组对U251细胞株的抑制率显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;同样,与TMZ组比较,TMZ＋NIM＋O6-BG组对U251细胞株的抑制率也显著升高,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论O6-BG能够有效抑制MGMT表达,从而能逆转人脑胶质瘤细胞株U251对替莫唑胺的耐药性。尼莫地平、O6-BG二者均可增强替莫唑胺时脑胶质瘤细胞株U251的细胞毒作用,对于替莫唑胺的耐药有较好的逆转效果,因而可望作为临床化疗增敏剂与替莫唑胺联合使用。替莫唑胺、尼莫地平、O6-BG三者联用对肢质瘤细胞株U251有更好的抑制作用,其效果优于二者联合应用,强于单独应用替莫唑胺。