神经母细胞瘤原代培养及细胞类型意义的研究

目的:应用骨髓转移标本及原发肿瘤建立神经母细胞瘤原代培养细胞并鉴别N、S和I型细胞,根据细胞集落形成及特征经过提示不同种类细胞与神经母细胞瘤临床预后之间的关系.方法:应用体外原代培养技术对8例骨髓转移神经母细胞瘤患儿骨髓液及4例神经母细胞瘤手术切除肿瘤进行原代细胞培养,观察培养细胞形态学特点,应用Western blot法检测特异性标志物的表达以区分N、S和I型细胞,并应用细胞集落形成实验检测不同类型细胞所致集落形成情况,结合临床治疗及预后结果来评价N、S和I型细胞在神经母细胞瘤中的不同作用及对预后的指示作用.结果:N型细胞呈现聚集生长、核浆比例增大,轴突生长;S型细胞呈单层生长、胞体大而扁平,无轴突突起;I型细胞兼有以上两种细胞特点.I型细胞形成集落的数鼍高于N型细胞,而s型细胞并未形成集落.临床预后中N型及I型临床进展快,预后差,3年生存率为1/5及0(0/4);而s型临床有自发消退逆转迹象,预后良好,3年生存率为3/3.结论:神经母细胞瘤细胞类型包括N、S及I型,I型细胞具有肿瘤干细胞特点,可同时表达N及S型细胞的特异标志物且具有较强形成集落的能力,临床提示预后极差.N型细胞形成集落能力较I型细胞弱,且临床预后不良,而S型细胞无集落形成,临床预后良好.     

血管周细胞在肿瘤血管生成和转移过程中的作用研究进展

大量研究证明肿瘤的生长和转移与肿瘤血管生成密切相关。血管周细胞作为血管组织的重要组成部分, 在血管新生以及维持血管稳定中发挥重要作用。作为一种血管周基质细胞, 血管周细胞能为血管提供结构支持以及通过影响血管稳定性来调整局部组织生理环境。尽管目前血管周细胞在癌症病理机制中的作用还不完全清楚, 但大量研究结果揭示血管周细胞-内皮细胞信号网络的失常对肿瘤血管生成和转移有重要意义。本文旨在评价关于血管周细胞在肿瘤病理机制方面的重要研究成果以及探讨潜在的抗癌治疗靶点。      

罗格列酮对癌性条件下肝星状细胞表达PDGF-B、α-SMA的影响

目的观察罗格列酮对癌性条件下生长的肝星状细胞表达PDGF-B和α-SMA的影响。方法肝星状细胞（HSC）经肝癌细胞（HCC）条件培养液（按1∶1、1∶2的比例稀释）处理24h后,再用15μmol/L罗格列酮处理HSC 24h（另设空白对照组、单纯罗格列酮组和单纯24h肝癌细胞条件培养液组）。观察肝星状细胞表达PDGF-B、α-SMA表达变化。结果罗格列酮作用于经肝癌细胞条件培养液处理后的HSC,α-SMA和PDGF-B的表达,均有显著下降（P＜0.05）。结论罗格列酮可以抑制癌性条件下生长的HSC 的活化和PDGF-B的表达。     

儿茶素对血管平滑肌细胞的抑制作用及其可能的机制

目的：探讨儿茶素对血管平滑肌细胞生长的抑制作用及其可能的作用机制。方法：采用MTT法检测不同剂量儿茶素对血管平滑肌细胞的抑制作用,分别用50、100、150、200、250、300μg/ml的儿茶素作用血管平滑肌细胞24和48 h后,观察细胞形态学的改变,并用RT-PCR检测儿茶素对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和基质金属蛋白酶抑制因子（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达的影响。结果：250μg/ml儿茶素明显抑制细胞的生长,且明显下调血管平滑肌细胞中MMP-2 mRNA的表达,并同时上调TIMP-1 mRNA的表达。结论：儿茶素可以抑制血管平滑肌细胞的生长并且调节MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达水平。     

体外培养技术及其在头颈部鳞状细胞癌研究中的应用

 头颈肿瘤占全身肿瘤的5 % ,其中90 %是恶性肿瘤。头颈肿瘤具有独特的特征,如癌前病变易于识别;上气消化道(upperaerodigestivetract)肿瘤常位于体表,较易监测;流行病学资料显示能从肿瘤发生的部位和分期来预测局部和远处转移情况;原发肿瘤易复发并有继发其他部位肿瘤的危险性;另外,头颈部肿瘤是用化学药物预防肿瘤复发的理想模型。头颈肿瘤的这些特点决定了其在人体肿瘤研究中所具有的重要地位。当前,尽管头颈部鳞状细胞癌研究已取得重大进展,但随着研究的广泛和深入,出现愈来愈多待解决的问题。较多证据表明,体外培养技术的应用可望为头颈部鳞状细胞癌发生发展机制的阐明和防治带来新契机。本文将介绍这一领域的进展。1　体外培养技术概述体外培养(InVitroculture)是指从体内取出组织或器官摹拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。包括细胞培养(CellCulture)、组织培养(TissueCulture)和器官培养(OrganCulture)。组织培养和细胞培养并无严格区别。培养过程中,不论培养物是组织还是细胞都要生活在人工环境中,长期的培养易导...     

TGF-β1、CD34和ɑ-SMA在鼻咽癌中的表达及其意义

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤相关纤维母细胞相关蛋白CD34和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与鼻咽癌侵袭转移的关系。方法:采用免疫组化Supervision二步法检测75例鼻咽癌患者和20例鼻咽黏膜慢性炎症患者鼻咽组织中TGF-β1、CD34和α-SMA表达。结果:TGF-β1、α-SMA在鼻咽癌组织中表达阳性率均明显高于鼻咽黏膜慢性炎组织中表达阳性率(P<0.05),而CD34在鼻咽黏膜慢性炎组织中的表达阳性率显著高于在鼻咽癌组织中表达阳性率(P<0.05)。TGF-β1、α-SMA表达与性别无关(P>0.05),与鼻咽癌TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05);鼻咽癌组织中,TGF-β1与α-SMA表达呈正相关(r=0.368,P<0.01),与CD34表达呈负相关(r=-0.397,P<0.01);α-SMA与CD34表达呈负相关(r=-0.434,P<0.01)。结论:肿瘤相关纤维母细胞相关蛋白可能与鼻咽癌侵袭转移密切相关。与鼻咽黏膜慢性炎组织中的成纤维母细胞相比,鼻咽癌细胞可能通过分泌TGF-β1作用于肿瘤间质,促使肿瘤相关纤维母细胞CD34表达缺失,而高表达α-SMA,通过表型改变为肌纤维母细胞。     

HIF-1α在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中的表达及其与血管生成的关系

目的研究皮肤鳞状细胞癌(SCC)和基底细胞癌(BCC)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,分析肿瘤组织中HIF-1α与血管生成的相关性。方法采用免疫组化S-P法检测石蜡包埋组织(其中SCC 25例,BCC 25例,正常皮肤20例)中HIF-1α的表达,并用CD34标记血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果HIF-1α主要表达于瘤细胞胞浆中,在两种肿瘤组织中均呈弥漫性表达;CD34表达于血管内皮细胞胞膜,分布于间质及癌巢。HIF-1α在SCC和BCC中表达阳性率分别为88%(22/25)、56%(14/25),SCC与BCC比较有显著性差异(P<0.05)。HIF-1α在正常皮肤中阴性表达。MVD平均值在SCC和BCC中分别为42.55±5.02,23.47±6.21,两者比较有显著性差异(P<0.05)。HIF-1α阳性的肿瘤组织MVD高于其表达阴性者(P<0.05)。结论HIF-1α在两种肿瘤组织尤其是SCC中过表达,HIF-1α可能通过促进肿瘤新生血管形成,从而促进SCC和BCC的生长、浸润和转移。     

人外周血Vα24 NKT细胞抗肿瘤免疫机制的初步研究

目的：进一步认识Vα24NKT细胞在抗肿瘤免疫中的作用。方法：从正常人外周血中扩增并纯化得到Vα24NKT细胞，通过流式细胞术检测其表型、活化后的细胞因子、细胞坏死相关因子的表达情况，采用DIOC18染色及流式细胞术测定Vα24NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤率，并利用不同的阻断剂进行阻断实验。结果：Vα24NKT细胞分泌高水平的IFN-γ和IL-4，并表达TNF-α、穿孔素（perforin）、FasL、TRAIL等细胞坏死相关因子。Vα24NKT细胞对表面表达CD1d分子的肿瘤细胞株的杀伤率高于不表达CD1d分子的肿瘤细胞株，同时在α—GalCer存在时，Vα24NKT细胞的杀伤活性增强。对Perforin、FasL、TNF-α、TRAIL进行阻断后，ConA对Vα24NKT细胞的杀伤作用的阻断效果最为明显。结论：Va24NKT对肿瘤的杀伤作用是CD1d分子限制性和抗原特异性的。Vα24NKT通过穿孔素途径和TNF家族成员发挥其细胞毒作用，而穿孔素途径是其肿瘤杀伤的最主要途径。     

131Ⅰ-美罗华显像在B细胞淋巴瘤中的初步临床应用研究

  目的 通过 131Ⅰ-美罗华显像监测CD20阳性B细胞淋巴瘤（NHL）病灶摄取美罗华情况,为准确分期和美罗华合理应用提供依据。方法 准备充分后静脉滴注131Ⅰ-美罗华370 MBq／人次,于给药后即刻及第1、3、5天行全身平面显像,第5或第7天行头－盆部断层显像,观察阳性病灶部位及数目。结果 经由临床医生核实14例CD20阳性B细胞NHL患者已知病灶数目总计109个,131Ⅰ-美罗华显像发现阳性病灶46个,其中有37个阳性病灶在已知病灶范围内,故131Ⅰ-美罗华显像总的阳性检出率为33.94 %（37／109）。不同部位病灶的阳性检出率不同,131Ⅰ-美罗华显像对浅表淋巴结、深层淋巴结及脏器的阳性检出率分别为为23.52 ％,58.33 ％,44.00 ％（P <0.01）。另有9个阳性病灶被其他检查所遗漏,其中脾脏阳性病灶后经病理证实。结论 131Ⅰ-美罗华显像对CD20阳性B细胞NHL的诊断分期有一定帮助,并可为美罗华免疫治疗提供依据。     

TNF-α和IL-6在急性淋巴细胞白血病儿童血清中的水平及其临床意义

目的 探讨急性淋巴细胞白血病患儿血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6水平及其临床意义.方法 选择80例急性淋巴细胞白血病患儿,其中初诊44例、完全缓解24例、难治复发12例,同期收集在我院行体检的健康儿童50例为对照组.检测所有研究对象血清中TNF-α和IL-6水平.分析急性淋巴细胞白血病初诊患儿血清TNF-α和IL-6水平与临床特征的关系.结果 与对照组相比,急性淋巴细胞白血病初诊组患儿血清TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.01).与初诊组相比,急性淋巴细胞白血病完全缓解组患儿血清中TNF-α和IL-6明显升高(P<0.01).与初诊组相比,急性淋巴细胞白血病复发难治组患儿血清中TNF-α和IL-6水平明显降低(P<0.01).急性淋巴细胞白血病初诊患儿血清中TNF-α和IL-6水平与其年龄、性别、FAB分型、肝肿大及淋巴结肿大无明显相关性(P>0.05),与危险度分型呈显著相关(P<0.01).结论 急性淋巴细胞白血病患儿血清中TNF-α和IL-6水平明显降低,与急性淋巴细胞白血病患儿的危险度分型呈显著性相关.     

原代小鼠肝细胞培养方法的比较

目的: 比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能,寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方。方法: 采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞,糖原染色观察细胞纯度,在贴壁4 h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO+EGF组)等3种不同的条件培养肝细胞。镜下观察肝细胞形态,用MTT法检测细胞活力,生化分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白蛋白水平。结果: 成功分离小鼠原代肝细胞,肝细胞纯度达95%以上;原代肝细胞培养至96 h时,DMSO组仍能较好地维持细胞形态,基础培养基组的细胞活力比DMSO组和DMSO+EGF组分别降低了66.87%和67.16%(P<0.05),且基础培养基组的LDH水平均高于DMSO组和DMSO+EGF组(P<0.05)。此外DMSO组在96 h时仍能维持较高水平的白蛋白分泌,比基础培养基组和DMSO+EGF组分别增加了185%和24.2% (P<0.05)。结论: 小鼠原代肝细胞培养基中加入DMSO对于维持肝细胞的形态和功能有促进作用,本研究为体外原代肝细胞培养模型的建立和优化提供了实用的方法。     

Long-term culture of primary breast cancer in defined medium

Summary Over a period of 6 1/2 years between January 1986 and May 1992, 135 unselected primary breast cancers were cultured and of these 10 developed into cell lines. Six of the lines grew in defined serum-free medium, while the other four required supplementation with 0.5% fetal calf serum. Two of the lines are from the same breast, being derived from a local excision specimen and from a mastectomy specimen 12 months later. In addition, 12 lymph nodes containing metastatic breast cancer were cultured; one of these cultures became permanent in a defined serum-free medium.Oestrogen receptor (ER) status was negative in all but one of the tumours which grew successfully, and even in this case the derived cell line is ER negative. The epithelial nature of the lines has been confirmed by immunocytochemistry and by electron microscopy (EM), while their malignant nature is shown by morphology, unattached growth, chromosome analysis, and, in the case of the line from a lymph node metastasis, the absence of any benign source of epithelial cells.     

人肾癌细胞原代培养方法比较及其生长特性观察

目的:分析比较三种方法分离人肾癌组织原代培养肾癌细胞及其传代能力,探讨建立理想的人肾癌细胞体外实验模型。方法:分别采用组织块贴壁法、机械分散法及差速贴壁分离法、混合酶消化法及差速贴壁分离法进行人肾癌细胞的体外培养,并从细胞形态学、表型、增殖生长曲线和细胞活力曲线等方面进行对比研究。结果:三种方法均可获得原代肾癌细胞,采用组织块贴壁法可获得较多数量的肾癌细胞,采用混合酶消化加分步贴壁后培养情况最好,数量较多,形态完整,第4代后肿瘤细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期,且与肾癌细胞系769-P细胞具有相似的表面抗原表达。结论:采用混合酶消化加分步贴壁法可获得较纯的肿瘤细胞,培养生长时间短,成功率高,适宜体外原代培养。     

Global analysis of metastasis-associated gene expression in primary cultures from clinical specimens of clear-cell renal-cell carcinoma

Metastatic clear-cell renal-cell carcinoma (ccRCC) has a poor prognosis and unpredictable course, and there are no molecular markers that reliably predict ccRCC metastasis. In this study, ccRCC specimens from 84 patients were directly cultured in vitro. Primary cultures from 38 of 94 specimens contained more than 90% tumor cells at the fourth passage. After identification by immunostaining, the primary cultures of metastatic and nonmetastatic ccRCC specimens from the age- and gender-matched patients were subjected to cDNA microarray assays. A total of 842 differentially expressed genes with a FDR (false discovery rate) of 4.79% were identified. Pathway analysis and co-occurrence with "cancer", "metastasis" and "invasion" in the literature annotations functionally enriched the 842 genes and provided an indication of the reliability of our microarray assays. Novel genes associated with metastasis were selected based on protein-protein interactions between 205 differentially expressed genes that co-occurred with "metastasis" and those that did not co-occur with "metastasis" on Medline, and the results of co-expression analysis between the co-occurred genes and unpublished genes. FSTL1, AV722783, SLC15A1, DDX17, ORC2L and PKMYT1 were found to be potential ccRCC metastasis-associated novel genes, according to expression patterns in cultures and tumor tissues. Interestingly, the upregulated genes (CAV1, PKMYT1 and ORC2L) were also upregulated and the downregulated genes (FSTL1, GSTM3, CYR61, SLC15A1 and AV722783) were also downregulated in the primary ccRCC specimens compared with expression in adjacent renal tissues in 37 patients. This study has identified new candidate biomarkers and targets for the early diagnosis and treatment of ccRCC metastasis.     

84例原发性肝癌患者肝动脉化疗栓塞术后预后的影响因素分析

目的 探讨原发性肝癌患者肝动脉化疗栓塞(TACE)术后预后影响因素及预后诊断指标的价值.方法 选取行TACE治疗的84例原发性肝癌患者,采用Cox风险比例模型分析患者的预后因素,另选取80例肝囊肿患者为对照组,采用酶联免疫吸附法测定两组患者的血清AFP、SCC、CYFRA21-1水平.结果 经Cox风险比例模型分析可知,门脉癌栓、肝内转移、Child-Pugh分级、AFP术后阳性、SCC术后阳性、CYFRA21-1术后阳性是原发性肝癌患者远期预后的独立危险因素.原发性肝癌组患者TACE术前、术后血清AFP、SCC、CYFRA21-1水平及AFP、SCC、CYFRA21-1阳性率均高于对照组,而TACE术后血清AFP、SCC、CYFRA21-1水平及AFP、SCC、CYFRA21-1阳性率低于TACE术前,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AFP术后阳性、SCC术后阳性、CYFRA21-1术后阳性是原发性肝癌患者TACE术后预后的独立危险因素,在预测原发性肝癌患者TACE术后预后方面具有潜在的临床价值.     

新型肝癌组织的体外三维培养模型

目的:利用肝癌组织进行体外的三维（three-dimension,3D）组织块培养,通过添加PD98059和霍乱毒素（cholera toxin,CT）优化培养条件,建立一种高活性的肝癌组织体外培养模型。方法:收集中山大学肿瘤防治中心肝胆科的肝癌组织标本,经清洗、冻存、复苏等处理后分为对照组、PD组、CT组、PD+CT组,同时进行体外的二维（two-dimension,2D）和三维培养。各组组织采用DNA断裂的原位末端标记法（TUNEL）检测组织细胞凋亡情况,qRT-PCR检测BCL-2、BID、Caspase 3、Cyclin D1、CDK2、ELK-1、C-FOS、C-MYC、C-JUN等相关基因的mRNA表达水平,免疫荧光染色检测BCL-2和cleaved caspase-3蛋白表达情况,筛选并确定最优的体外培养方法。结果:3D培养组的组织细胞凋亡均少于2D培养组;PD98059通过上调BCL-2蛋白的表达,下调cleaved caspase-3蛋白的表达,激活MEK/ERK下游基因,从而减少体外培养的组织细胞凋亡,增强其抗凋亡能力;霍乱毒素通过上调Cyclin D1、CDK2的基因表达,促进其增殖。结论:我们开发了一种新型肝癌组织的体外三维培养模型,它可以作为进一步的药物试验和人源性异种移植(PDX)模型的工具。     

Prospectives for cell and organ culture systems in the study of pancreatic carcinoma

Adenocarcinoma of the pancreas is presumed to arise from ductal cell precursors. This brief article questions the definitions on which this assumption is based and suggests possible ways to answer the question since for future studies on the etiology of this cancer it is imperative to study the appropriate cell of origin. Possible approaches for future work on pancreatic carcinogenesis utilizing cell and organ culture systems are discussed.     

A combinatorial drug screen in PDX-derived primary rhabdomyosarcoma cells identifies the NOXA - BCL-XL/MCL-1 balance as target for re-sensitization to first-line therapy in recurrent tumors

First-line therapy for most pediatric sarcoma is based on chemotherapy in combination with radiotherapy and surgery. A significant number of patients experience drug resistance and development of relapsed tumors. Drugs that have the potential to re-sensitize relapsed tumor cells toward chemotherapy treatment are therefore of great clinical interest. Here, we used a drug profiling platform with PDX-derived primary rhabdomyosarcoma cells to screen a large drug library for compounds re-sensitizing relapse tumor cells toward standard chemotherapeutics used in rhabdomyosarcoma therapy. We identified ABT-263 (navitoclax) as most potent compound enhancing general chemosensitivity and used different pharmacologic and genetic approaches in vitro and in vivo to detect the NOXA-BCL-XL/MCL-1 balance to be involved in modulating drug response. Our data therefore suggests that players of the intrinsic mitochondrial apoptotic cascade are major targets for stimulation of response toward first-line therapies in rhabdomyosarcoma.