CXCR7在胃癌细胞中的表达及对SGC-7901细胞迁移及侵袭的影响

目的 探讨趋化因子受体7(CXCR7)在不同分化程度的胃癌细胞系中的表达以及siRNA沉默CXCR7后对胃癌SGC-7901细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 体外培养5种人胃癌细胞系:未分化腺癌HGC-27、低分化黏液腺癌MGC-803、低分化腺癌BGC-823、中分化腺癌SGC-7901和高分化腺癌MKN-28。采用Western blot及RT-PCR法分别检测CXCR7的蛋白及mRNA表达。应用脂质体转染siRNA的方法沉默SGC-7901细胞CXCR7的表达,并采用其配体基质细胞衍生因子-1（SDF-1）干预,实验分为4组:阴性对照siRNA(NC siRNA组), NC siRNA+SDF-1组,CXCR7 siRNA组和CXCR7 siRNA+SDF-1组。应用Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力。结果 CXCR7在不同人胃癌细胞系中表达程度不一,其中高分化MKN-28几乎不表达,中分化SGC-7901细胞表达程度最高。与 NC siRNA组相比,NC siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数增加（P CXCR7 siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA抑制。     

Toll样受体7在人胃癌细胞株中的表达及其激动剂诱导SGC-7901细胞发生凋亡的实验研究

目的探讨Toll 样受体7（TLR7）在不同人胃癌细胞株中的表达及其激动剂咪喹莫特对SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影
响。方法Western blot法检测3种胃癌细胞株（SGC-7901、HGC-27和MKN-28）中TLR7蛋白表达差异,选取高表达TLR7的胃
癌细胞作为主要研究对象;MTT法考察不同浓度咪喹莫特处理TLR7高表达胃癌细胞12~72 h后细胞增殖活性的改变;流式细
胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法观察100 μg/ml咪喹莫特干预12及24 h后细胞早期凋亡比率的改变;透射电镜下观察细胞凋
亡形态学改变;实时定量PCR法分析Bcl-2及Bax mRNA在咪喹莫特作用前后表达差异。结果TLR7蛋白在SGC-7901中表
达水平高于其他两种胃癌细胞,其激动剂咪喹莫特能够明显抑制SGC-7901细胞增殖并且呈现出浓度及时间依赖性;100 μg/ml
咪喹莫特干预24 h 后SGC-7901 细胞早期凋亡比率明显上升,透射电镜下可观察到典型的凋亡形态学改变;咪喹莫特处理后
SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA表达呈浓度依赖性下降,Bax mRNA呈浓度依赖性上升。结论TLR7在3种不同分化程度的胃癌
细胞中均有表达,其激动剂咪喹莫特能够明显抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡。
     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人胃癌细胞SGC-7901
细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生
长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化
及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901 细胞中Fas 蛋白的表达。结果MTT 法显示17-AAG 能明显抑制胃癌
SGC-7901 细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901 细胞发生
G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的
加大,阳性表达率也逐渐增加。结论17-AAG 通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,上调
SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。
     

生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义

目的：探讨多种人胃癌细胞株中及胃癌组织中生长抑制因子4（ING4）的表达及其意义。方法：体外培养3种分化不同的胃癌细胞MKN-1（高分化）、SGC-7901（中分化）、BGC-823（低分化）以及人胃黏膜细胞GES-1,收集绍兴第二医院病理科40例原发胃癌患者的石蜡标本。以RT-PCR、Western Blot法分别检测4种细胞株ING4 mRNA及其蛋白表达水平。免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中ING4蛋白表达情况。结果：SGC-7901、BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较MKN-1、GES-1组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较SGC-7901组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,MKN-1组与GES-1组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组织中ING4表达阳性率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：ING4作为抑癌基因参与了胃癌的发生,且与胃癌分化程度有关。     

RASSF1A基因在胃癌中的表达及意义

目的：检测抑癌基因RASSF1A在胃癌细胞株及组织中的表达情况,探讨RASSF1A在胃癌发生发展中的作用及临床意义。方法：用RT-PCR及Western blot检测细胞株、胃癌及癌旁组织中RASSF1A基因及蛋白的表达水平。结果：RASSF1A在低分化BGC-823细胞中的表达量明显低于中分化SGC-7901细胞,在胃癌中的表达阳性率（43.48%）显著低于癌旁组织（85.51%）,且低分化胃癌中的表达低于中高分化,Ⅲ、Ⅳ期胃癌中的表达低于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.05）。结论：在原发性胃癌组织中,RASSF1A的表达明显缺失或低下,且与肿瘤的分化程度及分期相关。     

RASSF1基因在胃癌组织和细胞中的表达及意义

目的 研究RASSF1基因的3种剪接体(RASSF1A、RASSF1B、RASSF1C)在胃癌组织及细胞中的表达特点.方法 应用生物信息学分析RASSF1基因的3种剪接体的结构特点; 同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中3种剪接体的mRNA表达水平.结果 RASSF1基因3种剪接体在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A、RASSF1B表达缺失率分别为60.2%(37/60)、25%(15/60),RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%(55/60).结论 RASSF1 3种剪接体在胃癌组织中的表达下调, RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达差异无显著性,其余基因比较差异有显著性.RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关.     

微小RNA-141和Yes相关蛋白1在胃癌组织中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的:探究微小RNA-141(miR-141)和Yes相关蛋白1(YAP1)在胃癌组织中的表达情况,同时分析它们对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法:选择行胃癌手术的40例患者为研究对象,取手术切除的胃癌组织及癌旁组织,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-141表达,采用免疫组化检测YAP1表达。分析miR-14、YAP1表达与胃癌患者临床病理特征的相关性。分别使用miR-141和YAP1对胃癌SGC-7901细胞系进行干预,分析它们对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。结果:胃癌组织中miR-141表达水平低于癌旁组织,YAP1蛋白表达水平高于癌旁组织(均P<0.05)。miR-141表达水平与胃癌患者组织分化程度及TNM分期存在明显相关性(均P<0.05)。YAP1表达水平与胃癌患者TNM分期、肿瘤直径以及组织分化程度相关(均P<0.05)。在24、48、72 h三个时间点,与阴性对照组比较,转染miR-141模拟物后,胃癌SGC-7901细胞活力出现明显降低,而转染miR-141抑制剂后胃癌SGC-7901细胞活力出现明显升高(均P<0....     

β-榄香烯对SGC7901 胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨β-榄香烯对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）、流式
细胞术检测细胞凋亡、周期分布和平板克隆形成实验检测β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞的影响,同时评价β-榄香烯对正常胃黏
膜上皮细胞GES-1的毒性作用;通过Western blots检测β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞的蛋白表达影响。结果β-榄香烯显著抑
制SGC7901胃癌细胞的活性并诱导细胞凋亡,两种作用在正常胃黏膜上皮细胞GES-1中明显减弱。β-榄香烯降低SGC7901胃
癌细胞克隆形成率,诱导SGC7901 细胞发生G2/M期阻滞。β-榄香烯降低了SGC7901 胃癌细胞Bcl-2 蛋白表达水平,增加了
Bax和活化的Caspase-3（17Kd）表达水平。β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞Pak1（p21-activated protein kinase 1）的总蛋白表达无
明显影响,但降低了Pak1（Thr423）和ERK1/2（Extracellular signal-Regulated Kinase 1/2）的磷酸化水平。结论β-榄香烯抑制胃
癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其可能的分子机制为抑制Pak1/ERK信号通路的活化、调控Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达。
     

RASSF1基因在胃癌组织及细胞中的表达

[摘要] 目的 研究RASSF1基因的三种转录本(RASSF1-A, -B, -C)在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法 应用生物信息学分析RASSF1基因的3种转录本的结构特点; 同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC和SGC细胞中三种转录本的mRNA表达水平。结果 RASSF1基因3种转录本在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A,RASSF1B 表达缺失率分别为60.2%(37/60),25%（15/60）,RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%（55/60）。结论 RASSF1三种转录本在胃癌组织中的表达下调, RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达无差异,其余基因比较有差异。RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关。     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

PSMA7在胃癌中的表达及对胃癌增殖、侵袭迁移及成瘤能力的影响

目的研究PSMA7在胃癌中的表达及其对胃癌增殖、侵袭迁移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法收集60例胃癌患者的 癌组织及配对的癌旁组织,应用免疫组化法检测胃癌和配对癌旁组织中PSMA7的表达水平;应用慢病毒转染技术在胃癌细胞 株SGC7901中干扰PSMA7;应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）和细胞克隆形成实验检测胃癌细胞增殖能力的变化,Transwell实 验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的变化;稳转细胞株构建裸鼠皮下移植瘤模型,研究干扰PSMA7对皮下移植瘤的影响。结果 免疫组化结果显示PSMA7在胃癌组织中的表达水平显著高于其配对的癌旁组织（P<0.05）;在人胃癌细胞株SGC7901中下调 PSMA7表达能够显著抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭迁移能力（P<0.05）;在BALB/c小鼠皮下移植瘤模型中干扰PSMA7的表达能 够明显抑制皮下移植瘤的生长（P<0.05）。结论PSMA7在胃癌组织中高表达,干扰PSMA7抑制胃癌细胞增殖、侵袭迁移及裸 鼠皮下成瘤的能力。     

RNA干扰下调SPHK1基因表达抑制胃癌细胞增殖

【目的】 应用RNA干扰方法下调鞘氨醇激酶1(SPHK1)基因表达,研究SPHK1对胃癌细胞SGC-7901?MGC-803细胞增殖的影响及其可能的作用机制?【方法】 免疫组织化学法检测5对胃癌及癌旁组织的SPHK1蛋白表达量;构建质粒?制备逆转录病毒并感染胃癌细胞株SGC-7901?MGC-803,筛选并鉴定SPHK1-RNAi和对照载体(RNAi-Vector)稳定表达细胞株;MTT法检测胃癌细胞的增殖变化;Western blot法检测SPHK1?p21?p27?Akt?p-Akt?Rb?p-Rb蛋白的表达水平?【结果】 SPHK1蛋白在胃癌组织中过表达;与对照组比较,两株SPHK1-RNAi稳定表达的胃癌细胞SGC-7901?MGC-803中SPHK1表达显著下调,抑制率分别为81.2%?65.1%; SPHK1-RNAi胃癌细胞增殖能力较对照组显著减弱;SPHK1-RNAi胃癌细胞的磷酸化Akt及磷酸化Rb蛋白表达明显降低,而p21?p27的蛋白表达水平明显上调?【结论】 下调SPHK1基因表达能抑制胃癌细胞的增殖,其机制可能与细胞内Akt信号被减弱,细胞周期抑制蛋白p21?p27的表达上调有关?     

原癌基因c—met在胃癌细胞株中的表达

目的：观察原癌基因c—met在不同分化的胃癌细胞株中的表达水平。方法：采用实时荧光定量PCR仪和Westernblotting检测高分化胃癌MKN28、中分化胃癌SGC-7901、低分化胃癌MKN45和正常胃细胞GESl中c—met的表达情况。结果：荧光定量PCR显示原癌基因c—met在三个胃癌细胞株中均有高表达，但以中分化的胃癌细胞SGC-7901的表达（0．064606＋0．0025）显著高于低分化的胃癌细胞株MKN45（0．016657±0．0002）和高分化的胃癌细胞株MKN28（0．002419±0．0002）（P〈0．01）；Westernblotting显示c—met在蛋白水平的结果与前-致。结论：四个胃癌细胞株中，原癌基因c—met均有表达，以SGC-7901表达量最高。     

miRNA-34a 对人胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究 microRNA-34a(mir-34a)在人胃癌细胞中的表达水平及对胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。方法通过实时定量 PCR(RT-PCR)检测人正常胃黏膜上皮细胞 GES 及人胃癌细胞株 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平。体外将表达人 mir-34a ( has-mir-34a)慢病毒感染人胃癌 SGC-7901细胞。荧光显微镜观察评估细胞感染情况,MTT 实验、流式细胞术检测感染后胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期及凋亡情况。结果胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平较正常胃黏膜上皮细胞 GES 明显降低,其中以胃癌 SGC-7901细胞降低最为明显(P <0．01)。与阴性对照组相比, mir-34a 感染组 SGC-7901细胞增殖明显减慢( P <0．01), G1/ G0期细胞比例显著增加(P <0．05),细胞凋亡率显著升高(P <0．01)。结论 mir-34a 在多种人胃癌细胞,尤其是SGC-7901细胞中呈低表达。 mir-34a 可以抑制胃癌 SGC7901细胞的增殖,诱导细胞周期停滞及细胞凋亡。     

钙离子结合蛋白S100A16对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨钙结合蛋白S100A16在胃癌组织和细胞中的表达,及其对胃癌细胞SGC?7901增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法：应用免疫组织化学染色法检测S100A16在胃癌和相应癌旁组织中的差异表达。应用Western blot检测正常胃上皮细胞GES?1以及胃癌细胞MGC?803和SGC?7901中S100A16的表达水平。将S100A16高表达质粒和干扰质粒分别转染至人胃癌细胞株SGC?7901中,用Western blot检测各组细胞中S100A16的表达。采用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）比色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果：在胃癌组织及胃癌细胞中,S100A16的表达量明显高于相应癌旁组织及正常胃上皮细胞。SRB染色和克隆形成实验显示,过表达S100A16会增加SGC?7901细胞的增殖能力,敲低S100A16后增殖能力降低。划痕实验Transwell实验显示,过表达S100A16会增加SGC?7901细胞的迁移和侵袭能力,敲低S100A16则会降低。免疫共沉淀实验显示在胃癌细胞SGC?7901中,S100A16与YBX?1存在结合。结论：胃癌组织及细胞中S100A16的表达明显上调,S100A16在胃癌中的异常表达可能是由于与YBX?1的相互结合,进而促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭从而影响胃癌的发生发展。     

Up-regulation of Let-7a Expression Induces Gastric Carcinoma Cell ApoptosisIn Vitro

Objective To investigate effect of let-7a gene over-expression on apoptosis of gastric cancer cell lines SGC-7901. Methods The stablelet-7a gene over-expressing SGC-7901 cells, SGC-7901/let-7a cells, were established using shRNA lentiviral vector methods. Real-time RT-PCR analysis was used to evaluate the expression level of let-7a mRNA. Cells apoptosis was assessed by flow cytometry. Results RT-PCR analysis revealedlet-7a expression in SGC-7901/let-7a cells was significantly increased. Cellular apoptosis assay showed that over-expression oflet-7a could increase apoptosis of SGC-7901 cells (P=0.002). Conclusion Up-regulatinglet-7a expression promoted apoptosis in SGC-7901 cells.     

胃腺癌细胞株和高转移株中雌激素受体相关受体的表达

目的探讨雌激素受体相关受体（ERR）α、β、γ各亚型在胃腺癌细胞系SGC-7901及高转移株OCUM-2MD3中的表达情况。方法采用RT-PCR法定性检测ERRs家族各亚型的mRNA表达,采用Western blot蛋白印迹检测ERR各亚型的表达。结果ERRα在SGC-7901低表达、在OCUM-2MD3高表达;ERRβ基本无变化;ERRγ在SGC-7901高表达、在OCUM-2MD3低表达。结论在不同类型的胃腺癌细胞株中,ERRα和ERRγ表达方式不同,提示用ERRα/ERRγ比值的改变显示胃腺癌转移有一定的临床意义。