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相似文献
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1.
目的通过研究鳖甲煎丸对肝细胞癌中Wnt 信号通路及抑制基因DKK-1、FrpHe 表达的影响,探讨其抗肝细胞癌转移
侵袭的作用机制与Wnt/β-catenin 信号通路的关系。方法24 只Wistar 大鼠随机分为3 组(8 只/组),分别以临床剂量的20 倍、
10 倍的鳖甲煎丸和生理盐水灌胃3 d,3 d 后采血,离心,获取血清。分别将3 组血清加入DMEM培养液中培养肝癌细胞
HepG2,48 h 后采用流式细胞术检测细胞中的β-catenin 蛋白含量,qRT-PCR法检测DKK-1、FrpHe基因的表达情况,以进一步
阐明药物的作用机制与Wnt/β-catenin 信号通路的关系。结果流式细胞术结果:高剂量组和中剂量组含药血清均可显著降
低细胞中β-catenin 蛋白表达,且该作用与药物浓度有关。RT-PCR结果:高剂量组和中剂量组含药血清均可显著下调DKK-1
基因的表达,且该作用与药物浓度有关。而高剂量组和中剂量组含药血清对FrpHe 基因的表达影响不明显。结论鳖甲煎
丸能显著抑制肝细胞癌的生长、粘附和转移,且这种抑制作用与显著降低肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达、显著下调DKK-1 基
因的表达,从而阻断Wnt/β-catenin 信号通路有关。
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2.
目的观察人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后对其下游基因MMP-2、MMP-7和MMP-9的影响。方法采用GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于正常人滑膜细胞,提取胞核蛋白β-catenin,采用Western blotting检测胞核蛋白β-catenin的表达变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达变化。结果 Western blotting结果显示,GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用于人滑膜细胞后,β-catenin在胞核蛋白中的表达水平明显升高,并随着GSK-3β选择性抑制剂作用时间的延长,β-catenin的表达逐渐增强,呈时间依赖性,而在其干预的第48小时,胞核蛋白β-catenin的表达变化最明显,是正常组滑膜细胞的5.8696倍,具有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附法(ELISA)结果显示,与正常组滑膜细胞比较,SB-216763干预的滑膜细胞上清液中MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达分别是正常滑膜细胞的4.6188、3.2443和2.9979倍,具有统计学意义(P<0.05)。结论①SB-216763成功激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;②MMP-2、7、9在人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路激活后其表达显著升高,证明激活Wnt/β-catenin信号通路对MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达有一定的调控作用。③Wnt/β-catenin信号通路在骨性关节炎患者中是激活的,而其对MMP-2、MMP-7和MMP-9的调控可能是导致关节软骨降解,促进骨关节炎形成的作用机制之一。该实验结果有助于从单一通路阐释Wnt/β-catenin信号通路对膝骨关节炎的作用机制。  相似文献   

3.
NGX6对Wnt/β-catenin通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的:探讨NGX6基因对结肠癌Wnt信号转导通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响,明确NGX6在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用机制.方法:(1)构建β-catenin野生型真核表达载体pcDNA3.1( )-β-catenin(WT),(2)转染外源性pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)及pCMV-myc-NGX6于COS-7细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测转染NGX6前后TCF-4的转录活性.(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6单独转染COS-7细胞及结肠癌SW620细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测TCF-4的转录活性,并采用Western blot的方法检测两组细胞核内β-catenin及TCF-4的表达.结果:(1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1( )-β-catenin(WT);(2)pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)与pCMV-myc-NGX6共转染COS-7细胞较pcDNA3.1( )-β-catenin(WT)单独转染时TCF-4荧光素酶活性明显下降(P<0.05);(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6转染COS-7及SW620细胞后TCF-4荧光素酶活性较空白质粒转染组下降(P<0.05);(4)NGX6转染COS-7及SW620后核内β-catenin及TCF-4的表达下降.结论:NGX6对结肠癌中Wnt/β-catenin通路的β-catenin/TCF/LEF转录活化具有负性调节作用,其作用机制可能与NGX6抑制β-catenin的核转位有关.  相似文献   

4.
目的 探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP 对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化.设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组.结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05).加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性.激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低.加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度.荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05).LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05).结论 ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性.  相似文献   

5.
目的通过研究鳖甲煎丸对肝癌细胞HepG2中Wnt信号通路的信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移
侵袭的分子机制。方法使用含鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞HepG2,48 h后采用Western blotting技术检测Wnt/β-catenin通
路信号分子β-catenin、GSK-3β和磷酸化GSK-3β表达水平,免疫组化技术检测靶基因CD44v6、VEGF的表达情况。结果含鳖甲
煎丸药物血清可以降低肝癌细胞HepG2 中β-catenin 表达水平,下调磷酸化GSK-3β表达水平,明显抑制CD44v6、VEGF的表
达。结论鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的药理作用可能与其下调肝癌细胞HepG2 中Wnt/β-catenin 信号通路的信号分子
β-catenin及磷酸化GSK-3β的表达水平并有效降低靶基因CD44v6、VEGF的表达水平具有相关性,这可能是鳖甲煎丸抑制肝癌
细胞HepG2的生长、黏附及转移的重要分子机制之一。
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6.
目的探讨鳖甲煎丸对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠转化生长因子-β/Smads信号传导通路的干预作用,并阐述各项指标之间的内在联系。方法采用皮下注射四氯化碳配合高脂饮食制备肝纤维化模型,观察鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠血清TGF-β1及肝组织Smad3和Smad7蛋白表达的影响,并以西药秋水仙碱片作对照。结果鳖甲煎丸能减轻肝细胞变性,减少胶原的合成与分泌,减轻纤维组织增生,明显抑制大鼠血清TGF-β1及肝组织Smad3的表达,增高Smad7的表达。结论鳖甲煎丸可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制与调控TGF-β1和Smads蛋白表达有关。  相似文献   

7.
目的 探讨NKD1、β-catenin和Cyclin D1在乳腺癌中的表达及意义.方法 选取2010年至2016年大连市妇女儿童医疗中心和大连市友谊医院病理科30例正常乳腺组织和124例乳腺浸润性癌非特殊型标本及临床资料.采用免疫组化法检测标本中NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系.结果 在乳腺癌组织中NKD1阳性表达率为30.65%;β-catenin异常表达率为72.58%;Cyclin D1阳性表达率为54.03%,与正常乳腺组织比较,差异均有显著性意义(P均<0.05).NKD1和β-catenin表达与乳腺癌组织学分级、pTNM分期及淋巴结转移有关,Cyclin D1表达与乳腺癌pTNM分期及淋巴结转移亦有关,且NKD1表达缺失还与ER状态相关,差异均有统计学意义(P均<0.05).NKD1与β-catenin和Cyclin D1表达呈正相关(r分剐为0.454,0.332,P均<0.05).结论 NKD1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达与乳腺癌侵袭和转移密切相关,联合检测3种蛋白有助于判断乳腺癌生物学行为和评估预后.  相似文献   

8.
目的探讨Wnt基因对肾透明细胞癌Caki-2细胞的生物学影响。方法细胞分3组:Caki-2组(空白对照)、shRNA+Wnt+Caki-2组(慢病毒沉默Caki-2细胞中的Wnt基因)、空载体组(实验对照),CCK-8法观察不同时间各组细胞的增殖情况;透射电镜观察沉默Wnt基因对Caki-2细胞凋亡的影响;Transwell小室方法检测各组细胞侵袭能力的变化;实时PCR观察Wnt/β-catenin信号通路中下游基因的变化和凋亡相关基因的变化。结果 shRNA+Wnt+Caki-2组出现了细胞增殖抑制,其增殖能力与其他2组相比差异有统计学意义(P<0.05)。sh RNA+Wnt+Caki-2组表现出明显的细胞凋亡变化,出现凋亡小体。侵袭实验显示,shRNA+Wnt+Caki-2组迁出的细胞数明显低于其他2组(P<0.05);shRNA+Wnt+Caki-2组中Wnt mRNA、β-catenin mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平均低于其他2组(P<0.05)。结论慢病毒沉默Wnt基因,影响了肾透明细胞癌Caki-2细胞的增殖,促进了细胞的凋亡,抑制了Caki-2细胞的侵袭。  相似文献   

9.
[目的]探讨鳖甲煎丸含药血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)作用下HSC-LX2细胞中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)-富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)/SRC通路的影响。[方法]以人源肝星状细胞HSC-LX2为研究对象,以AngⅡ诱导产生ROS,再以鳖甲煎丸含药血清进行干预,以MTT法检测HSC-LX2细胞的增殖情况,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS含量,Western blot检测PKC、Pyk2、SRC蛋白表达情况。[结果] MTT结果显示,与AngⅡ组比较,5%鳖甲煎丸含药血清培养24h后,鳖甲煎丸高、中剂量组显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P0.05,P0.01);培养48h后,鳖甲煎丸高、中、低剂量组均能显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P0.05,P0.05,P0.01);培养72h后,中剂量组有显著抑制效果(P0.01)。此外,除了15%中剂量鳖甲煎丸含药血清培养48h后有显著抑制效果(P0.05),其余各组、各时间段均无明显抑制作用,差异无统计学意义(P0.05)。荧光探针DCFH-DA结果显示,与空白对照组比较,AngⅡ组ROS产生明显增多,经鳖甲煎丸含药血清高、中剂量组干预后,ROS均不同程度减少。Western blot显示,鳖甲煎丸含药血清干预后,PKC(P0.001,P0.001,P0.001)、Pyk2(P0.05,P0.001,P0.001)、SRC(P0.001,P0.001,P0.01)蛋白表达均受到显著抑制。[结论] HSC-LX2细胞经AngⅡ刺激后可以产生ROS,且细胞增殖明显,此过程与PKC、Pyk2、SRC蛋白的激活有关。鳖甲煎丸可通过减少ROS的产生来阻止HSC-LX2细胞的增殖,其机制与抑制PKC、Pyk2、SRC蛋白的表达有关。  相似文献   

10.
目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在胚胎癌细胞增殖中的作用及其机制。方法取小鼠胚胎癌细胞系P19进行传代培养,将细胞分为正常对照组(Con组)、添加反式维甲酸组(RA组)、添加GSK-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加SB216763+RA组(SB+RA组)四组。采用免疫荧光染色、RT-PCR和Western blot-ting法分别检测细胞中β-catenin、Oct4及C-myc的表达状况;通过BrdU标记与MTT法检测细胞的增殖。结果 加入SB216763可促进P19细胞β-catenin入核,同时促进Oct4和C-myc基因的表达,阻断RA诱导的细胞分化,并可明显促进细胞增殖。结论 激活Wnt/β-catenin信号通路可促进胚胎癌细胞P19的增殖并抑制分化,其作用机制可能是通过上调C-myc基因表达来实现的。  相似文献   

11.
目的研究亚硒酸钠对结直肠癌HCT116和SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响。方法采用10μmol/L亚硒酸钠处理HCT116和SW480细胞,Western blot及RT-PCR检测亚硒酸钠处理后不同时间HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达情况,并观察蛋白酶体抑制剂MG132预处理后对HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1表达的影响。采用免疫共沉淀方法检测亚硒酸钠对HCT116和SW480细胞中β-catenin与T细胞因子4(TCF4)相互作用的影响。结果亚硒酸钠可降低HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达水平,用蛋白酶体抑制剂MG132预处理可增加亚硒酸钠处理后HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达水平。免疫共沉淀实验结果显示,亚硒酸钠能破坏β-catenin与TCF4间的相互作用。结论亚硒酸钠可降低结直肠癌HCT116和SW480细胞中β-catenin及cyclin D1的表达水平,蛋白酶体介导的降解途径可能在这一过程中发...  相似文献   

12.
β-catenin和cyclin D1在子宫内膜癌中表达及临床意义   总被引:1,自引:1,他引:1  
目的探讨β-catenin和cyclin D1在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测87例子宫内膜癌和30例正常子宫内膜中β-catenin和cyclin D1的表达。结果β-catenin和cyclin D1在子宫内膜癌中的阳性表达率分别为37.9%(33/87)和43.7%(38/87),明显高于正常子宫内膜组(P〈0.01)。子宫内膜癌中,β-catenin的表达与病理分级、FIGO分期、肌层浸润和淋巴结转移密切相关(P〈0.05),cyclin D1的表达与FIGO分期和淋巴结转移密切相关(P〈0.05)。β-catenin和cyclin D1在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0、458,P〈0、01)。结论β-catenin和cyclin D1可能在子宫内膜癌发生发展中起重要作用,可作为评估预后的指标。  相似文献   

13.
背景 恶性黑色素瘤是源自黑色素细胞的恶性肿瘤,恶性程度高.其中转移性黑色素瘤患者的5年生存率不足10%,且发病率逐渐增加.黑色素瘤相关抗原家族A1(melanoma?associated?antigen?family?A1,MAGEA1)是MAGE-A基因亚家族的成员,在多种恶性肿瘤中均有表达,但其在恶性黑色素瘤中的表...  相似文献   

14.
[目的]对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP-2)/Smads信号通路在骨代谢中的作用及其在骨质疏松症(osteoporosis,OP)预防和治疗中的作用进行综述,以期为OP相关疾病的预防和治疗提供新思路。[方法]通过中国知网、万方、Pubmed等数据库检索近年来国内外关于Wnt/β-catenin与BMP-2/Smads信号通路与OP疾病关系的实验研究文献,总结Wnt/β-catenin与BMP-2/Smads信号通路与OP疾病关系的研究概况。[结果] ①Wnt/β-catenin信号传导对于骨骼谱系分化至关重要,可防止成骨细胞转分化为软骨细胞。其中的负调控信号分子可能是治疗骨质疏松症的药物靶点,并成为药物治疗骨质疏松症的手段之一。②BMP-2/Smads信号通路中的信号分子可用于骨质疏松靶标的治疗,但其应用时间、浓度也应再继续深入研究,以期达到更好的治疗骨质疏松的效果。③Wnt/β-catenin和BMP-2/Smads信号通路在许多生物学行为中相互重叠、互补或抑制,提示两种信号途径之间存在着复杂的交联关系。[结论] Wnt/β-catenin和BMP-2/Smads信号通路是调节成骨细胞生长、发育和分化的两个重要信号通路,在成骨细胞分化和骨形成过程中发挥重要作用。Wnt/β-catenin和BMP-2/Smads信号通路在OP的预防、治疗及新药的研制和开发中具有广泛应用前景。  相似文献   

15.
16.
目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P<0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P<0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P<0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P<0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.  相似文献   

17.
本研究旨在探讨甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin的检测及临床意义。采用RT-PCR方法检测Wnt-1,β-catenin mRNA表达情况,采用Western blot和免疫组化方法检测Wnt-1,β-catenin蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,疾病组Wnt-1,β-catenin mRNA和蛋白的表达量均升高。肿瘤组织中,疾病组的Wnt-1蛋白表达阳性率和β-catenin蛋白表达阳性率均高于对照组。结果表明,Wnt-1表达与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切相关。β-catenin表达也与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切密切相关。甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin蛋白表达上调,且其表达与肿瘤生物学状态密切相关。  相似文献   

18.
目的探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧(ROS)水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组(Vector组)和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组(pcDNA3.1-SOX7组)。转染48 h,Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Western blotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24 h、48 h和72 h的细胞活力。结果pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组(P < 0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclin D1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高(P < 0.05)。结论过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。  相似文献   

19.
目的 研究Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中的作用及在肝癌细胞中的调控表达机制.方法 通过TOP-flash实验验证Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中调控作用机制;采用实时定量PCR方法检测各种肝癌细胞株(HepG2、H HCC、HB611)及正常肝细胞株(LO2)中Apaf-1基因的表达量;构建Apaf-1 RNA干扰质粒,转染到HepG2中并检测转染效率,检测相关基因及蛋白表达.结果 TOPflash实验发现Apaf-1可以抑制wnt/β-catenin信号通路,并且这种抑制作用具有剂量依赖效应;在肝癌细胞株中,Apaf-1表达量较正常肝细胞表达量降低,且在HepG2细胞株中表达量最低;在肝癌细胞株(HepG2)中RNA干扰Apaf-1基因,Apaf-1基因的的表达量显著降低,wnt信号通路下游基因及蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、wnt5a、STAT3、EGFR、APC)的表达量均显著性升高或降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Apaf-1基因通过wnt/β-catenin信号通路在肝癌细胞的生成过程中具有重要功能.  相似文献   

20.
《中医学报》2019,(4):859-862
目的:观察糖尿病足溃疡患者中Wnt/β-catenin信号通路基因表达的变化及紫朱软膏外用对此信号通路的影响。方法:观察糖尿病足溃疡患者60例外用紫朱软膏后创面愈合情况,治疗前后肝肾功能等安全性评价及创面组织中Wnt/β-catenin信号通路相关指标基因的表达变化。结果:紫朱软膏能促进糖尿病足溃疡的愈合,且未对患者肝、肾功能造成影响;与治疗前比较,紫朱软膏能上调糖尿病足溃疡患者创面组织中β-catenin、c-Myc、Rspo-3等基因表达,下调GSK-3β表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:紫朱软膏可能通过激活表达低下的Wnt/β-catenin信号通路促进糖尿病足溃疡愈合。  相似文献   

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