脊髓性肌萎缩症SMN基因拷贝数定量分析

目的　探讨临床诊断为脊髓性肌萎缩症 (spinal muscular atrophy,SMA)而 PCR定性无运动神经元生存 (survival motor neuron,SMN )基因 T拷贝 (SMN - T)缺失患者的遗传基础 ;并探索 SMA表型与SMN基因 C(SMN- C)拷贝数的关系及 SMA患者及其直系亲属和正常人 SMN基因拷贝数的分布。方法对临床和病理诊断为 SMA ～ 型及少见型 4 5例患者、2 5名表型正常的 SMA直系亲属进行 SMN- T和SMN- C基因拷贝数定量分析 ,并与 33名正常人进行对比 ;所有对象均已经 PCR Dra 酶切法定性检测SMN基因 ,其中 ～ 型的 7例和 型的 2例为 SMN- T纯合缺失 ,余者无缺失。建立 SMN- T和囊性纤维化跨膜调节因子 (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)的内标 ,所有标本进行非放射性、非荧光标记的多重竞争性 PCR,根据产物 SMN- T/ CFTR和 SMN- C/ CFTR比值 ,计算 SMN- T和SMN - C拷贝数。结果　 7例 ～ 型 SMN - T拷贝数均为 0 ; 型 2例拷贝数为 0 ,2例为 1个拷贝数 ,系杂合缺失 ,4例为 2个拷贝 ; 型及其他型患者均为 2个拷贝 ;直系亲属中 9例为 1个拷贝 ,系杂合缺失 ,其余及正常对照组均为 2个拷贝。SMN - C拷贝数在 SMA 型为≤ 2 , ～ 型为≤ 3, 型及其它型 SMA、直系亲属和正常对照组均为 0～ 3。结     

儿童脊髓性肌萎缩症的基因诊断研究进展

儿童脊髓性肌萎缩症居致死性常染色体隐性遗传病的第二位。近年来，该病的致病基因被定位于5q13，目前发现与该病有关的基因有运动神经元存活基因、神经元凋亡抑制蛋白基因、基本转录因子2p44基因。本文对该病的最新基因学及基因诊断学进展做一综述。     

儿童脊髓性肌萎缩症的基因诊断研究进展

儿童脊髓性肌萎缩症居致死性常染色体隐性遗传病的第二位。近年来,该病的致病基因被定位于5q13,目前发现与该病有关的基因有运动神经元存活基因、神经元凋亡抑制蛋白基因、基本转录因子2p44基因。本文对该病的最新基因学及基因诊断学进展做一综述。     

脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究进展

本文就脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究方面的进展进行了综述。SMN2基因拷贝数、SMN基因mRNA、SMN蛋白、细胞核内gems数、NAIP基因等，均与SMA的临床表型有密切的相关性。目前对于SMA还没有有效的治疗方法。调控SMN2基因表达，促进全长SMN蛋白产生和核内gems数的恢复达到治疗的目的，此为SMA基因治疗的新途径。因此，研究不同表型SMA的分子遗传学机制不仅有助于基因治疗策略的制定，而且有助于在分子水平观察疗效。     

脊髓性肌萎缩患儿的NAIP基因分析

目的探讨脊髓性肌萎缩的基因型与临床表型（ｓｕｒｖｉｖａｌｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎｅ,ＳＭＮ）的关系。方法应用ＰＣＲ技术对１３例运动神经元型基因缺失的脊髓性肌萎缩患儿进一步进行神经原性细胞凋亡抑制蛋白（ｎｅｕｒｏｎａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎＮＡＩＰ）基因分析（Ⅰ型５例,Ⅱ型４例,Ⅲ型４例）。结果２例Ⅰ型患儿携有ＮＡＩＰ基因缺失（２／５,４０％）。结论ＮＡＩＰ基因缺失可能与脊髓性肌萎缩的临床表型严重程度有关     

脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究进展

本文就脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究方面的进展进行了综述。SMN2基因拷贝数、SMN基因mRNA、SMN蛋白、细胞核内gems数、NAIP基因等,均与SMA的临床表型有密切的相关性。目前对于SMA还没有有效的治疗方法。调控SMN2基因表达,促进全长SMN蛋白产生和核内gems数的恢复达到治疗的目的,此为SMA基因治疗的新途径。因此,研究不同表型SMA的分子遗传学机制不仅有助于基因治疗策略的制定,而且有助于在分子水平观察疗效。     

脊髓性肌萎缩症的基因诊断及其应用研究

目的 对脊髓性肌萎缩症患者及携带者进行基因诊断和产前基因诊断.方法 对26例脊髓性肌萎缩症患者应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-restiction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测SMN1基因第7外显子是否缺失;对于患者的父母应用多重PCR结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的方法进行携带者诊断;而既往生产过患儿的孕妇于孕中期抽取羊水,进行产前基因诊断.结果 26例脊髓性肌萎缩症患者中查出25例存在SMN1基因第7外显子纯合缺失;患者的父母全部为SMN1基因第7外显子杂合缺失携带者;对20名既往生产过患儿的孕妇进行了产前诊断,8名存在SMN1基因第7外显子纯合缺失.结论 PCR-RFLP、多重PCR结合DHPLC技术可应用于患者及携带者基因诊断;PCR-RFLP可用于脊髓性肌萎缩症的产前基因诊断.     

一例脊肌萎缩症患者及其家系的SMN基因突变分析

目的 对1例脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)患者及其家系成员的SMN基因行突变分析.方法 采用多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术、逆转录聚合酶链反应及T克隆-测序技术对患者SMN基因进行拷贝数分析和点突变的鉴定,应用MLPA和针对点突变区域的SMN基因第5外显子PCR-直接测序法对患者父母SMN基因进行拷贝数分析和点突变的证实,同时用200名正常人外周血进行相关位点对照研究.结果 患者具有1个拷贝的SMNl基因和1个拷贝的SMN2基因,在这个SMNl基因第230位密码子上存在1个未见报道的错义突变S230L(TCA→TTA);父亲具有两个SMN1和两个SMN2拷贝,其中1个SMNl基因存在S230L突变;母亲具有1个SMN1拷贝,而SMN2基因是纯合缺失的.200名对照中未发现该位点突变.结论 在1个SMA家系中发现了1个新的SMNI基因点突变,即S230L,并准确分析了此家系各成员的SMN基因型.     

SMNT and NAIP mutations in Canadian families with spinal muscular atrophy (SMA): Genotype/phenotype correlations with disease severity

Childhood-onset spinal muscular atrophy (SMA) is an autosomal recessive neuropathy characterized by selective degeneration of α-motor neuron cells of the spinal cord. Age of onset and motor development varies greatly among patients, but the molecular basis of this variability remains unclear. The SMA locus contains two copies of a 500-kb element and deletions within the telomeric element have been shown to be the most common cause of SMA. To study the relationship between genotype and phenotype, 60 SMA families, all but two of which are of French Canadian origin, were screened for deletions in the telomeric survival motor neuron (SMN^T) and the intact neuronal apoptosis inhibitory protein (NAIP) genes. Combining these results with those obtained for the multicopy microsatellite marker Ag1-CA (D5S1556) indicated that there are at least two types of SMA alleles. Most type I SMA patients are homozygous for large scale deletions involving the entire SMN^T gene as well as exons 5 and 6 of the NAIP gene. The strong association between the 100-bp allele of Ag1-CA and large scale deletions in populations of diverse ethnic origin suggests that this allele marks an unstable or founder SMA chromosome. In contrast, most chronic SMA patients have at least one SMA allele with either an intragenic SMN^T deletion or a SMN^C:SMN^T chimeric gene which replaces the normal SMN^T gene. The broad continuum of disease presentation in chronic SMA is most likely a consequence of the interaction between different SMA alleles. Am. J. Med. Genet. 72:51–58, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.     

Bone loss in survival motor neuron (Smn−/− SMN2) genetic mouse model of spinal muscular atrophy

Spinal muscular atrophy (SMA) is characterized by degenerating lower motor neurons and an increased incidence of congenital bone fractures. Survival motor neuron (SMN) levels are significantly reduced due to deletions/mutations in the telomeric SMN1 gene in these patients. We utilized the Smn^?/? SMN2 mouse model of SMA to determine the functional role for SMN in bone remodelling. µCT analysis of lumber vertebrae, tibia and femur bones from SMA mice revealed an osteoporotic bone phenotype. Histological analysis demonstrated a thin porous cortex of cortical bone and thin trabeculae at the proximal end of the growth plate in the vertebrae of SMA mice compared to wild‐type mice. Histochemical staining of the vertebrae showed the presence of abundant activated osteoclasts on the sparse trabeculae and on the endosteal surface of the thin cortex in SMA mice. Histomorphometric analysis of vertebrae from SMA mice showed an increased number of osteoclasts. Serum TRAcP5b and urinary NTx levels were elevated, consistent with increased bone resorption in these mice. SMA mice showed a significant decrease in the levels of osteoblast differentiation markers, osteocalcin, osteopontin and osterix mRNA expression; however, there were no change in the levels of alkaline phosphatase expression compared to WT mice. SMA mouse bone marrow cultures revealed an increased rate of osteoclast formation (54%) and bone resorption capacity (46%) compared to WT mice. Pre‐osteoclast cells from SMA mice showed constitutive up‐regulation of RANK receptor signalling molecules critical for osteoclast differentiation. Our results implicate SMN function in bone remodelling and skeletal pathogenesis in SMA. Understanding basic mechanisms of SMN action in bone remodelling may uncover new therapeutic targets for preventing bone loss/fracture risk in SMA. Copyright © 2009 Pathological Society of Great Britain and Ireland. Published by John Wiley & Sons, Ltd.     

应用多重连接依赖性探针扩增技术进行脊髓性肌萎缩症的基因诊断及产前诊断

目的 探讨多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术在脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)基因诊断及产前诊断中的应用.方法 选择来自8个SMA家系的患者4例,父母16例,胎儿4例,应用MLPA技术进行分析,对患者同时应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法进行分析.结果 对患者的检测,MLPA分析结果与PCR-RFLP检测结果相符,4例患者的运动神经元存活基因(survival motor neuron gene,SMN)1的第7和第8外显子均为纯合缺失.除家系1、4母亲的SMN1基因MLPA检测结果与其他家系不同外,其余各家系14名父母均明确诊断为SMN1基因杂合缺失突变携带者.结论 MLPA技术是一种准确可靠的基因定量分析方法 ,适合于SMA患者、携带者的基因诊断及产前诊断.     

脊髓性肌萎缩症SMN1基因定量研究及基因携带者的筛查

目的进行脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA）基因携带者的筛查，为遗传咨询提供理论依据。方法应用实时荧光定量PCR特异性扩增264名健康人、88例经基因诊断确诊SMA患者的双亲、32名SMA家系其它成员的SMN1基因第7外显子及其邻近区域，以已确定只有2拷贝SMN1的样品作为标准对照。结果88例确诊SMA患者双亲除4名SMN1拷贝数为2外，其余均只有1拷贝SMN1。264名正常人中5人仅有1拷贝SMN1，为基因携带者，该组中含2、3、4拷贝SMN1的人数分别为232、25、2。32名SMA家系成员中有2名SMN1拷贝数为1，为基因携带者，25名SMN1拷贝数为2，另5名拷贝数为3。结论实时荧光定量PCR技术可进行单拷贝差异SMN1基因的定量检测，结果准确、重复性好，基因携带者的筛查为本病遗传咨询提供了重要依据。