少精不育患者的雄性激素受体基因突变分析

目的了解雄性激素受体（ＡＲ）基因突变对少精不育症发生所起的作用。方法利用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）对３０例少精不育患者精液标本的ＡＲ基因８个外显子分别进行扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯胺的ＣＤＧＥ电泳分析,检测基因片段的插入,缺失和点突变。结果３０例患者中,外显子Ａ即基因转录激活区发生点突变３例,插入突变４例共７例,突变率为２３３％。外显子Ｈ发生缺失突变１例,约占３３％,外显子Ｇ处发生点突变１例,约占３３％,总突变率为３００％。结论雄性激素受体基因外显子Ａ即基因转录激活区的突变是造成少精不育的重要原因。     

宫颈癌组织P16基因突变分析

探讨Ｐ１６基因突变在宫颈癌发生中的作用及基突变的机制，利用点突变检测仪，水平和垂直板电泳对Ｐ１６基因的外显子１，外显子２的ＰＣＲ扩增产物作缺失和点突变发析，结果在２９例临床宫颈癌标本中的有８例发生缺失突变，４例发生点突变，突变率为４１％，其中１例外显子１为不完全缺失突变即有低于３４３ｂｐ的扩增带，Ｐ１６基因的发突变原因是因为其含有“ＣＧ”ＤＮＡ重复顺序，易发生ＤＮＡ重组及易位和重排。     

白血病细胞p16基因突变分析

目的探讨ｐ１６基因突变在白血病发生中的作用及基因突变的机制。方法利用点突变检测仪、水平和垂直板电泳对ｐ１６基因的外显子１、外显子２的ＰＣＲ扩增产物作缺失和点突变分析。结果在白血病３５例临床标本中有２２例发生缺失突变，６例发生点突变，突变率约８０％。在２２例缺失突变病例中，有１０例为不完全缺失突变即有低于外显子５０９ｂｐ的扩增产物。结论ｐ１６基因含有“ＧＣ”ＤＮＡ重复顺序，易发生ＤＮＡ重组及易位和重排。在白血病发生中起重要作用     

非缺失型HbH病基因突变类型的研究

采用选择性聚合酶链反应扩增技术及等位基因特异寡核苷酸探针斑点杂交，分析了１２例经血液学检测及基因图谱分析确认为非缺失型ＨｂＨ病的样品。结果显示，１２例非缺失型ＨｂＨ病样品中，ＨｂＣｏｎｓｔａｎｔＳｐｒｉｎｇ８例（６６．７％），Ｈｂ广西２例（１６．７％），２例为未知突变类型（１６．７％），对这２例未知样品的α＿２％基因外显子ＩＩＩ及其旁侧的突变热点区域进行了扩增、克隆和测序，结果发现这２例的α＿２基因密码子１２４均有ＴＣＣ→ＴＣＧ突变，其中１例的α＿２基因３＇非编码区第３６位碱基发生Ａ→Ｃ突变。     

胆固醇酯转运蛋白基因15显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）的方法检测１１０例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）基因１５外显子Ｄ４２Ｇ错义突变。首先用聚合酶链反应行异性扩增包含人ＣＥＴＰ基因１５外显子第１５０６位碱基的基因序列，扩增产和用限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。１１０例脑动脉粥样硬化患者中发现４例杂俣突变。突变率３．６％，与对照组４％比较无明显差异。该     

应用ARMS法检测广东省常见的三种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因点突变

目的应用突变特异性扩增系统（ＡＲＭＳ）法筛查广东省常见的葡萄糖６磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因的Ｇ１３８８Ａ、Ｇ１３７６Ｔ和Ａ９５Ｇ,并初步估计其频率。方法应用已建立的Ｇ１３８８Ａ和Ｇ１３７６ＴＡＲＭＳ法和新建立的Ａ９５ＧＡＲＭＳ法,对９０例广东地区男性,经Ｇ６ＰＤ定性和定量证明为Ｇ６ＰＤ缺乏者进行检测。结果在９０例男性中检出Ｇ１３８８Ａ４２例（４６７％）,Ｇ１３７６Ｔ１４例（１５６％）,Ａ９５Ｇ１２例（１３３％）,共计７２例（７５６％）。其余为稀有突变和未定型者。结论ＡＲＭＳ法为一种简便、快速、经济、准确的检测Ｇ６ＰＤ基因常见突变的方法。     

3型血管性血友病的基因突变与临床研究

目的：研究３型血管性血友病（ｖＷＤ）的分子病理机制。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选了３型ｖＷＤ患者ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因编码区的基因突变，对ＰＣＲ－ＤＧＧＥ行为发生改变的片段直接进行ＤＮＡ序列分析。结果：检测到１例基因突变，在ｖＷＦ基因外显子３第２１２号核苷酸，发生了Ｃ→Ａ的替换，使Ｓｅｒ７１突变为终止密码子。该突变创造了ＸｂａⅠ酶切位点，消除了原有的ＴａｑⅠ位点。结论：ＰＣＲ－ＤＧＧＥ和酶切分析均证实，患者为该突变的纯合子，其父母则均为该突变的携带者。     

先天性甲状腺功能减退症壮族患儿 ＴＳＨＲ 基因突变遗 传分析

摘要：目的 分析南宁市先天性甲状腺功能减退症壮族患儿促甲状腺激素受体（ＴＳＨＲ）基因突变及其特点。方法 以 ２１ 例患 有先天性甲状腺功能减退症的壮族患儿及其父母为研究对象。提取患儿及其父母的外周血 ＤＮＡ，采用荧光定量 ＰＣＲ 扩增 ＴＳＨＲ 基因所有 １２ 个外显子、外显子－内含子交界区以及 ３′端和 ５′端非翻译区，利用第一代测序法对基因扩增产物进行测序 并进行分析。结果 ２１ 例患儿中的 １２ 例存在 ＴＳＨＲ 基因突变，分别为 ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）纯合突变 ６ 例，ｃ．Ｃ１５４Ａ（ｐ．Ｐ５２Ｔ）和 ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）复合杂合突变 １ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）杂合子复合 ｃ．Ｇ２１８１Ｃ（ｐ．Ｅ７２７Ｄ）纯合突变 １ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ） 杂合子突变 ４ 例。４０ 例父母中存在的 ＴＳＨＲ 位点基因突变分别为 ｃ．Ｃ１５４Ａ（ｐ．Ｐ５２Ｔ）１ 例，ｃ．Ｇ２１８１Ｃ（ｐ．Ｅ７２７Ｄ）９ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ （ｐ．Ｒ２６９Ｓ）２４ 例。结论 先天性甲状腺功能减退症患儿的发病与父母 ＴＳＨＲ 基因具有遗传相关性，新发现的 ｃ． Ｃ８０５Ａ （ｐ．Ｒ２６９Ｓ）基因突变位点可能是壮族人群遗传性先天性甲状腺功能减退症的主要突变位点     

一例凝血因子Ⅷ B区错义突变导致重型血友病A

目的：检测一例重型血友病Ａ患者（ＳＨ９）的基因突变。方法：用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和ＤＮＡ测序检测因子Ⅷ基因突变。先用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ排除内含子２２倒位，然后应用ＰＣＲ对凝血因子Ⅷ基因进行扩增。扩增范围包括所有外显子及其侧翼内含子序列。结果：片段１４２在ＤＧＧＥ中泳动异常。ＤＮＡ测序证实Ｃ２５３５Ａ导致Ｂ区错义突变８２６Ａｓｐ（ＧＡＣ）→Ｇｌｕ（ＧＡＡ）。结论：该突变可能是导致重型血友病Ａ的原因，但有待进一步研究证实。     

聚合酶链反应用于进行性脊髓性肌萎缩的诊断

目的了解儿童期发作的进行性脊髓性肌萎缩（ＳＭＡ）患者的运动神经元存活基因（ＳＭＮ）的缺失，探讨聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）技术用于检测ＳＭＡ疾病的诊断价值。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ技术对１０例拟诊为ＳＭＡ患者、６个家系的２０例非ＳＭＡ成员及３０例正常人的ＳＭＮ基因外显子７和８进行了检测。结果１０例ＳＭＡ可疑患者中９例（９０％）有ＳＭＮ基因缺失，其中仅外显子７或８缺失各为１例。家系其他成员及对照组均无ＳＭＮ端粒基因缺失。结论用ＰＣＲＲＦＬＰ法对高度可疑ＳＭＡ的病例进行诊断，具有较高敏感性和特异性，简便易行     

von Willebrand因子基因外显子28Arg611 His突变导致的2型血…

为阐明ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因外显子２８发生突变导致的血管性血友病（ｖＷＤ）的基因缺陷，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术获得ｖＷＦ基因外显子２８，分１０个基因片段（Ｃ￣Ｌ）用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）技术筛选ｖＷＤ患者的基因突变，对变性行为有改变的片段直接测序。在一例２型ｖＷＤ患者ｖＷＦ基因外显子２８的５＇端，ＤＧＧＥ显示波动明显减慢的条带，直接测序表明发生Ｇ→Ａ杂合突变，导     

妊娠期肝内胆汁淤积症中ABCB4基因外显子23突变的研究

目的：探讨ABCB4基因外显子23点突变与妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）发病的关系。方法：采用聚合酶链反应（Pcrt）方法对31例妊娠期肝内胆汁淤积症患者扩增ABCB4基因外显子23．PCR产物进行DNA序列测定，以检测突变情况。结果：31例妊娠期肝内胆汁淤积症患者的血样标本。均扩增出ABCB4基因的外显子23。未发现外显子23的缺失。随机挑选20例标本测定外显子23的DNA序列。未发现点突变。结论：ABCB4基因外显子23与中国皖南地区的ICP发生无关或关联很小，皖南地区ICP患者中可能存在其他的ABCB4基因突变热点。ABCB4基因点突变与ICP发病的相关性仍应进行更大样本量的研究及其他突变热点的筛查。     

非小细胞肺癌组织及胸水中EGFR基因TKD结构域突变的临床病理研究

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR基因酪氨酸蛋白激酶结构域（TKD）18—21外显子突变情况;比较常见突变（19号外显子的缺失突变及21号外显子错义突变-L858R）和非常见突变患者的临床病理改变。方法从91例NSCLC组织及胸水标本中提取基因组DNA;巢式PCR方法扩增EGFR基因18～21外显子;应用PCR-LIS-SSCP及直接测序方法检测EGFR基因18～21外显子突变情况;对存在常见及非常见突变患者的组织病理、酪氨酸蛋白激酶小分子抑制剂（TKIs）的治疗反应和预后等的临床病理改变进行分析。结果91例NSCLC患者中27例存在EGFR基因TKD突变,其中常见突变19例,突变率为20．9％（19／91）;非常见突变8例（其中4例为20号外显子的短片段插入突变）,突变率为8．8％（8／91）。两组患者组织学类型均为腺癌,且对TKIs治疗均有较好反应。2例非常见突变患者化疗时出现肺间质纤维化（ILD）。结论NSCLC患者EGFR基因TKD存在多种非常见突变;具有非常见突变的患者可能存在独特的临床病理改变。     

变性梯度凝胶电泳检测到四例新的FⅨ基因突变

目的：研究凝血因子Ⅸ的基因突变。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选技术，分析了１２例血友病Ｂ患者ＦⅨ基因的全部８个外显子，剪接区及３′，５′端部分非编码区，并对ＤＧＧＥ行为异常片段进行双脱氧链终止法ＤＮＡ序列分析。结果：发现４例新的基因突变，分别位于ＦⅨ基因第１号外显子Ｔ（ＴＧＴ）１１１Ｇ（ＧＧＴ），导致Ｃｙｓ－１９Ｇｌｙ；第３号内含子剪接位点Ｃ１０３８０Ｔ和第８号外显子Ａ（ＴＡＣ）３０９１８Ｇ（ＴＧＣ），导致Ｔｙｒ２６６Ｃｙｓ；第８号外显子Ａ（ＡＣＧ）３１００７Ｃ（ＣＣＧ），导致Ｔｈｒ２９９Ｐｒｏ。结论：阐明血友病Ｂ的点突变有助于进一步了解ＦⅨ蛋白各功能域的精细功能，并为血友病Ｂ家系携带者检测和产前诊断提供了一个重要的遗传信息。     

急性非淋巴细胞白血病中转录因子GATA—2基因插入突变

采用ＲＴ－ＰＣＲ,单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和核苷序列分析检测８５例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）病人外周血单个核细胞中ＧＡＴＡ－２基因的表达和突变情况。结果发现绝大多数ＡＮＬＬ都表达了ＧＡＴＡ－２基因（８９．４％）,并发现１例Ｍ１病人的ＰＣＲ产物较正常产物大,序列分析显示在ＧＡＴＡ－２基因等二锌指区出现１８个核苷酸的插突变,使其ＧＡＴＡ－２因子的第二锌指增加６个氨基酸,其中含有１个能与锌离子结合的半胱氨酸,该插入突变可能引起ＧＡＴＡ－２的功能改变,该结果为首次发现ＡＮＬＬ中的ＧＡＴＡ－２基因的插入突变。     

变性梯度凝胶电泳检测到一种新的凝血因子Ⅷ基因突变

凝血因子Ⅷ基因的第８号和第１４号外显子的３′端编码ＦⅧ的重要功能区，涉及凝血酶的激活、蛋白Ｃ的降解灭活及与ｖＷＦ结合。应用ＰＣＲ和变性梯度凝胶电泳（Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃ－ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＤＧＧＥ）技术，研究了２８例血友病甲患者ＦⅧ基因的这两个外显子，发现一例轻型血友病甲患者ＦⅧ基因第８号外显子的ＤＧＧＥ行为发生了改变，经双脱氧链终止法测序证实，该外显子发生了单个碱基的置换：Ｔ（ＧＡＴ）→Ｇ（ＧＡＧ），导致Ａｓｐ３４９Ｇｌｕ。     

von Willebrand因子基因外显子28 Arg611 His突变导致的2型血管性血友病

为阐明ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）基因外显子２８发生突变导致的血管性血友病（ｖＷＤ）的基因缺陷，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术获得ｖＷＦ基因外显子２８，分１０个基因片段（Ｃ～Ｌ）用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）技术筛选ｖＷＤ患者的基因突变，对变性行为有改变的片段直接测序。在一例２型ｖＷＤ患者ｖＷＦ基因外显子２８的５′端，ＤＧＧＥ显示泳动明显减慢的条带，直接测序表明发生Ｇ→Ａ杂合突变，导致ｖＷＦ成熟蛋白Ａ１区Ａｒｇ６１１Ｈｉｓ替换；此外还发现在中国人群存在Ａｌａ６１８／Ｔｈｒ６１８（Ｇ４１４０Ａ）双态性。位于Ａ１区的Ａｒｇ６１１Ｈｉｓ突变产生血小板依赖性功能减低的２型ｖＷＤ，有助于了解ｖＷＦ的结构与功能的关系；而Ａｌａ６１８／Ｔｈｒ６１８双态性则可作为连锁分析标记用于ｖＷＤ家系的遗传咨询     

非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变

目的建立银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术筛查葡萄糖激酶基因点突变。方法收集１０个ＮＩＤＤＭ家系的１１２例基因组（ＤＮＡ），经多聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增葡萄糖激酶基因第２～１０号外显子，ＳＳＣＰ电泳，硝酸银染色筛查点突变。结果发现３个家系，９例受试者第５，６号外显子出现异常ＤＮＡ片段条带，经顺序分析证实为第５号内含子１２位碱基Ｃ→Ｇ突变。结论非同位素ＳＳＣＰ技术是一种简便、经济、快速、准确和有效的筛查基因点突变的方法。     

以PCR—SSCP分析和核苷酸序列直接测定技术检测人类白血病p53…

以多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析（技术研究）３６例不同类型的白血病ｐ５３抗癌基因点突变，结果在１４例淋巴细胞白血病中发现３例有ｐ５３基因片段的泳动变位。进一步对其中的１例急性淋巴细胞白血病进行核苷酸序列直接测定，显示在第７外显子的２５７位编码子核工本酸由ＣＴＧ突变为ＣＡＧ、氨基酸由天冬氨酸突变为缬氨酸，２２例髓系白 血病未发现有ｐ５３基因的点突变。结果提示ｐ５３抗癌基因点突变     

ABCB4基因外显子12和23突变与妊娠期肝内胆汁淤积症的关系

目的：探讨ABCB4基因外显子12和23的突变与妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）发病的关系。方法：从31例ICP患者外周血标本中提取出基因组DNA，聚合酶链反应（PCR）扩增ABCB4基因外显子12和23，PCR产物经DNA序列测定检测突变情况。结果：31例ICP患者均扩增出ABCB4基因外显子12和23的靶基因片段，未见外显子12和23的缺失,DNA测序分析31例ICP患者ABCB4基因外显子12和23，未发现点突变。结论：ABCB4基因外显子12和23的突变与中国皖南地区的ICP发生无关或关联很小，皖南地区ICP患者中可能存在其他ABCB4基因突变热点。ABCB4基因的突变与中国人ICP发病的相关性仍应进行更大样本的研究和其他外显子的筛查。