多重聚合酶链反应-微流芯片检测人血小板抗原系统基因型方法的建立与应用

目的建立人血小板抗原（HPA）-2、4、5系统基因型的检测方法。方法用多重聚合酶链反应和微流芯片检测方法，通过设计9条特异性引物、优化反应体系和反应条件，在一个体系中同时扩增HPA-2、4、5系统特异性的目的基因片段，利用微流芯片快速检测HPA-2、4、5系统基因型；并把分型结果与采用聚合酶链反应．序列特异性引物（PCR-SSP）获得的结果进行比较。结果对35名健康单采血小板者进行HPA-2、4、5系统分型的结果为：33名为2a／2a型，2名为2a／2b型；34名为4a／4a型，1名为4a／4b型；29名为5a／5a型，6名为5a／5b型。未发现2b／2b、4b／4b及5b／5b纯合子个体。该结果与PCR．SSP方法获得的结果完全一致。结论该方法可快速、准确地用于血小板血型抗原基因分型，尤其适合于大样本检测。     

突发性耳聋的脑干听觉诱发电位检测

20 0 0～ 2 0 0 1年我院对 64例突发性耳聋患者进行了脑干听觉诱发电位ＢＡＥＰ检查 ,异常率为 87.5 % ,现报道如下。一、资料与方法病例组 :经门诊确诊 ,突发性耳聋患者 64例 ,男 2 7例 ,女37例 ;年龄 2 0～ 44岁 ,平均 31岁。正常组 :健康自愿者 5 2例 ,男 2 7例 ,女 2 5例 ;年龄 18～ 48岁 ,平均 30岁。均于起病 1周且未治疗前采用丹麦产肌电 /诱发电位仪进行检测。受检者取仰卧位 ,记录电极置于头顶 ,参考电极置于同侧耳后乳突 ,以短声刺激 ,声音强度采用感觉极 (主观感觉极 +60ｄＢ) ,对侧耳以40～ 5 0ｄＢ的白噪声掩蔽 ,刺激频率 10Ｈ…     

1例高原反应致突发性耳聋患者的护理

总结1例由于高原反应而致左耳听力完全丧失患者的护理体会,探索高原反应致突发性耳聋患者的护理方法,观察在治疗护理过程中患者听力的变化以及是否有高原反应其他并发症的出现,采取有针对性的护理措施,同时给予患者必要的心理支持。经过精心的护理,患者的积极配合,无任何不良反应发生,疗效显著。     

高压氧治疗突发性耳聋70例疗效与病程的关系

本院2009～2011年应用高压氧综合疗法治疗突发性耳聋70例,共80耳,疗效满意。现对突发性耳聋的疗效与病程的关系总结如下。1资料与方法1.1一般资料选择2009～2011年已确诊的突发性耳聋在本院作高压氧治疗的70例患者（其中10例为双耳聋）。男34例,女36例;年龄16～70岁,平均43岁;病程1d至1年。患者主诉突然发生耳聋,少数患者伴有不同程度的耳鸣及眩晕。电测听显示,每例患者均有不同程度的听力损失。     

对不同类型突发性耳聋患者其血液流变学检测的探讨

目的探讨血液流变学检测在不同类型的突发性耳聋(以下简称突聋)患者中的临床意义。方法检测54例突聋患者(其中病毒性14例,血管性34例,其他原因6例)的血液流变学指标,并观察中西医结合治疗后血液流变学指标的变化。结果病毒性和其他原因突聋患者的全血黏度(低切、中切)、红细胞聚集指数较参考值显著升高(P<0.05),血管性突聋患者的全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数及红细胞变形指数与参考值比较升高更加显著(P<0.01),54例突聋患者在治疗后血流变指标均有显著改善(P<0.05)。结论血管性突聋患者的微循环障碍尤为显著,且血液流变学指标的变化可以为判断突聋患者疗效提供有价值的信息。     

银杏叶提取物注射液治疗突发性耳聋量效关系探讨

目的 研究银杏叶提取物注射液剂量与治疗突发性耳聋疗效的相关性.方法 将72例(73耳)突发性耳聋患者随机分为A、B两组,A组42耳,B组31耳,A组42耳治疗方案为:0.9%氯化钠注射液250ml+银杏叶提取物注射液(金纳多注射液)70mg(4支)静脉滴注,1次/d,共14d,地塞米松10mg莫菲管滴入,1次/d,共3d;B组31患耳治疗方案为:0.9%氯化钠注射液250ml+银杏叶提取物注射液(金纳多注射液)140mg(8支)静脉滴注,1次/d,共14d,地塞米松10mg莫菲管滴入,1次/d,共3d.结果 A组总有效率66.66%,B组总有效率90.32%,两组之间差异有统计学意义(χ2=4.34,P<0.05);结论 银杏叶提取物注射液治疗突发性耳聋效果好且有明显的量效关系.     

高压氧治疗突发性耳聋的疗效与护理

目的:探讨高压氧综合治疗突发性耳聋的护理方法与疗效。方法:对85例突发性耳聋患者行高压氧治疗,同时给予药物、心理护理和健康教育等综合治疗。结果:病程在7 d以内治疗的有效率高达86.67%,1个月内治疗的有效率52.95%,3个月以内治疗的有效率50.00%,3个月以后疗效差。结论:在高压氧综合治疗过程中,建立良好的医患关系,实施个性化的健康教育、心理护理等人文关怀服务,提高了患者的遵医行为,确保了高压氧综合治疗突发性耳聋的治疗效果。     

血液流变学指标分析与突发性耳聋的治疗

对33例突发性耳聋患者进行了血液流变学检测，并与健康对照组进行对比分析，结果显示病例组与健康组血液流变学指标差别有显著性（P＜0．05），而且病例中听力改善组与听力未改善组血液流变学指标有显著性差异（P＜0．05），说明血液粘滞度增高与突发性耳聋的发生和治疗转归有一定关系。     

高压氧综合治疗突发性耳聋的最佳方案与预后探讨

目的探讨高压氧治疗突发性耳聋(突聋)的最佳方案及其预后。方法将88例(106耳)突聋患者均进行高压氧治疗,根据患者患病时的不同情况(患病天数、就诊时听力损失、高压氧治疗疗程)等进行分组分析。结果(1)患病天数越短疗效越高。(2)就诊时平均听力损失越小疗效越好。(3)高压氧治疗疗程越长疗效越好,但超过24次则反而下降。(4)突聋是否合并耳鸣或眩晕,两者疗效比,前者P>0.05,后者P<0.05。结论突聋治疗越早越好,高压氧的疗效与突聋的病情(听力损失程度)有关,治疗疗程以一两个疗程为宜。突聋的预后与多种因素有关。     

Human platelet antigen-1 (Zw) typing using PCR-RFLP

Summary. The agreement between human platelet antigen-1 typing with polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and typing with a serological ELISA method was evaluated. A total of 82 individuals were typed and an absolute correlation was found between the two typing methods. The PCR-RFLP typing method could be clinically useful in a number of immunologically mediated platelet disorders, characterized by severe thrombocytopenia and in early prenatal diagnosis of neonatal alloimmune thrombocytopenia, in which serological methods are difficult to apply because of their dependency on access to platelets and access to well-characterized anti-HPA-lb antisera.     

低水平乙型肝炎病毒表面抗原S区序列分析

目的对低水平乙型肝炎病毒表面抗原进行病毒S区基因分析。方法利用套式PCR法（Nested PCR）特异性扩增乙型肝炎病毒DNA的S区,对PCR扩增产物直接进行DNA序列分析,测序结果经Genotyping软件分型并与美国GeneBank中基因序列进行BLAST比对。结果 37例低水平乙型肝炎病毒表面抗原标本中,成功扩增并测序32份,其余5份扩增产物因不满足测序要求无法进行S区序列分析,32份成功测序标本经Genotyping分型,B型20例,C型12例,分别与GeneBank中收录的AF100309、AB014381同源性最高;血清学分型18例为adr,10例为adw,3例为ayw,1例为ayr,并发现21例S区核酸序列发生点突变,其中15例突变不会引起编码抗原决定簇氨基酸突变,为无义突变,而其他6例点突变均可引起抗原决定族编码的氨基酸的改变,从而导致表面抗原结构改变。结论对低水平乙型肝炎病毒表面抗原患者S区序列研究将为低水平乙型肝炎发病机制、流行病学以及个体化治疗奠定理论基础。     

荧光定量PCR与PP65抗原检测在诊断儿童巨细胞病毒活动性感染的比较

目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的符合程度进行比较。结果全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的一致率为81.17%,其标准误为0.39,Kappa值为0.60;PCR检测HCMV感染的灵敏度为98.4%,特异度为97.3%,Youden指数为0.957,PVP和PVN分别为0.961和0.989;pp65抗原检测用于检测HC-MV感染的灵敏度为59.2%,特异度为100%,Youden指数为0.592,PVP和PVN分别为1.00和0.782。结论全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的结果有较好的一致性,诊断HCMV感染PCR检测的灵敏度较pp65抗原检测的灵敏度要高,而后者的特异度较前者高。二种方法都可用于CMV活动性感染的诊断。     

多重聚合酶链反应用于人血小板抗原-2、-4、-5系统基因分型的研究

目的建立用于检测人血小板抗原(HPA)-2、-4、-5系统基因型的多重聚合酶链反应(PCR)。方法在一个反应体系中同时扩增HPA-2、-4、-5系统特异性目的基因片段。用琼脂糖凝胶电泳确定HPA-2、-4、-5系统基因型;再用多重PCR对75名健康的单采血小板者进行HPA-2、-4-、5系统基因分型,分型结果与PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)获得的结果进行比较。结果HPA-2、-4、-5系统分型的结果为:70名为2 a/2 a型,5名为2 a/2b型;73名为4 a/4 a型,2名为4 a/4b型;66名为5 a/5 a型,9名为5 a/5b型。未发现2b/2b、4b/4b及5b/5b纯合子个体。多重PCR结果与PCR-SSP方法获得的结果一致。结论多重PCR具有操作简便、快速、准确等特点,可以用于血小板血型抗原基因分型。     

湖北地区汉族健康人群白细胞介素-1β基因5号外显子+3953C/T位点多态性的研究

目的 了解白细胞介素—1β基因(IL-1B)5号外显子 3953位点的单核苷酸多态性(SNP）在中国湖北地区汉族健康人群中的分布及其与不同种族比较的特点。方法 采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)的方法,对251名湖北地区汉族健康者IL-lB( 3953)位点的SNP进行了检测,计算其基因型和等位基因频率,并结合文献进行了不同种族间的分析比较。结果 湖北地区汉族健康人群CC基因型频率最高,CT基因型次之,没有发现TT基因型;CC和CT基因型频率分别为0．96和0．04。与德国、西班牙等欧洲人群相比,湖北地区汉族健康人群C等位基因频率明显偏高,21等位基因频率明显偏低(P＜0．005),而与亚洲日本人群相似(P＞0．05)。结论 湖北地区汉族健康人群IL—1B( 3953)位点碱基突变率极低,其SNP在不同种族间的分布存在明显的差异。     

乙型肝炎病毒载量与血清学标志及preS1抗原的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)载量与血清学标志及preS1抗原的关系,为乙型肝炎的诊断、疗效评估提供科学依据。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测患者血清HBVDNA载量、血清学标志及preS1抗原。结果155例HBVDNA载量大于103拷贝/ml的标本中,preS1阳性136例,HBeAg阳性100例,两种检测指标间存在显著性差异(P<0·01)。preS1/HBeAg组合分析检测HBV复制的灵敏度100%、特异性78·1%。preS1或HBeAg阳性患者HBVDNA拷贝数显著高于preS1或HBeAg阴性患者(P<0·01)。结论血清preS1、HBeAg与HBV复制密切相关。作为反映HBV复制的指标,preS1优于HBeAg,preS1/HBeAg组合分析优于preS1,preS1/HBeAg在HBV的诊断和疗效评估方面有重要的临床应用价值。     

突变富集型PCR-RFLP粪检对大肠癌的诊断价值

[目的]探讨突变富集型聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(mutant-enriched PCR-RFLP)方法粪检对大肠癌的诊断价值.[方法]提取25例大肠癌患者粪便、相应肿瘤组织DNA和17例正常对照者粪便DNA,结合限制性内切酶Mva I,运用突变富集型PCR-RFLP,分析c-ki-ras2基因点突变;随机取10例患者、10例正常对照作PCR片段测序以分析特异性,用已知含突变的A549肺腺癌细胞株(12GGT→AGT)与正常人结肠黏膜上皮细胞按不同比例混合反应分析敏感性.[结果]突变富集型PCR-RFLP特异性达100%,敏感度0.1%即能分辨混杂在1 000个正常细胞中的1个含突变的肿瘤细胞.[结论]突变富集型PCR-RFLP粪检大肠癌致癌基因点突变特异性强,敏感性高,对诊断大肠癌有一定的应用前景,但如何选取敏感的肿瘤检测指标是一个有待解决的重要问题.     

1种人类血小板抗原1～17及Cab等位基因全血直接检测方法的建立

目的 结合靶序列富集多重聚合酶链反应(TEM-PCR)、荧光探针溶解曲线SNP分型和血液直接PCR技术,建立一种方便、准确的人类血小板抗原(HPA)等位基因分型方法。方法 TEM-PCR方法设计HPA1~17、Cab这18种HPA亚型等位基因的引物及荧光探针,使用血液直接PCR酶同时扩增血液标本中的18个等位基因目标片段,并利用荧光探针的溶解温度变化区分不同SNP位点。结果 TEM-PCR可同时扩增18个等位基因的目标片段,并通过溶解峰的Tm值变化区分SNP位点,结果与序列特异性引物聚合酶链反应位点相比较有相同的准确度,且操作更为简便,无需提取血液基因组DNA,无PCR后续电泳步骤,减少污染风险。结论 成功建立了1种基于TEM-PCR,血液直接PCR和荧光探针溶解曲线分析技术检测HPA1~17,Cab等位基因。     

预制备抗体—DNA偶联物的免疫聚合酶链反应检测HBsAg

目的：探讨一种实用敏感的乙型肝炎表面抗原（HBsAg)检测方法。方法：利用亲和素作为桥梁连接生物素化DNA和抗体，形成抗体－亲和素－DNA偶联物，在抗原抗体特异性反应的基础上，聚合酶链反应（PCR）扩增抗体所连的DNA片段，通过检测DNA来判断相应抗原存在与否。结果：免疫PCR检测敏感度为常规酶联免疫试剂盒的300倍，结论：预制备抗体＿DNA偶联物的免疫PCR是一种检测HBsAg的敏感方法。     

乳腺癌组织中PSAmRNA的表达及临床意义

目的　探讨PSAmRNA在乳腺癌组织、癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤组织中的表达及其在乳腺癌发生发展中的意义。方法　以β actin作为内部参照半定量RT PCR方法检测 35例乳腺癌组织、12癌旁乳腺组织和 10例乳腺纤维瘤中PSAmRNA的表达。结果　在乳腺癌组织中PSAmRNA阳性表达率为 5 4 2 8% ,癌旁乳腺组织中为 83 3% ,乳腺纤维瘤中为 90 0 %。乳腺癌组织中PSAmRNA阳性表达率明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤者 ,差异有显著性 (P =0 0 4 1)。而且PSAmRNA在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤组织 ,差异有显著性 (t=5 394、4 6 32 ,P均 =0 0 0 0 )。结论　乳腺癌组织中PSAmRNA的表达水平低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤 ,表达下调。