荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

临床血清标本的HBV－DNAPCR检测指标与若干HBV免疫学指标关系

临床血清标本的ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检测指标与若干ＨＢＶ免疫学指标关系程宗浩上海青浦县卫校我们应用上海复华公司的ＰＣＲ检测试剂和上海科华公司ＥＬＩＳＡ检测试剂分别检测了３４７份血清标本的ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ指标。其中ＨＢｓＡｇ阴性３０...     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

246份母—脐血配对HBV检测结果与分析

我们收集了 2 4 6份母 脐配对血进行ＨＢＶ血清标志物及ＤＮＡ定量检测 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　 2 4 6份母 脐配对血均来自 1999年 11月至 2 0 0 0年 6月本院产科住院产妇静脉血及所产新生儿脐带血 ,分离血清置 - 2 0℃冰箱内保存。对ＨＢｓＡｇ阳性的母血 ,无论其对应脐血ＨＢＶ血清标志物结果怎样 ,均进一步用荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ ＰＣＲ)检测ＨＢＶ ＤＮＡ。1 2　试剂与方法　ＨＢＶ Ｍ检测使用科华公司试剂盒按说明书操作。ＦＱ ＨＢＶＤＮＡ试剂购自复星公司。用ＰＥ5 70 0荧光定量扩增仪 ,结果自动测出。1 3　结…     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

聚合酶链反应技术检测HBSAg阳性病人血清中HBV核心前/核心DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是嗜肝ＤＮＡ病毒之一，以往临床上通过放射免疫或酶联免疫吸附法检测血清中的ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢＳ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ、抗ＨＢＣ等指标判断乙型肝炎的传染性。近年来应用ＰＣＲ技术检测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，是反映ＨＢＶ感染者体内病毒复制...     

乙肝标志物中ＨＢｓＡｇ“阴性”结果的探讨

我们随机对在我院就诊患的５６１２份血清标本进行了乙肝标志物（ＨＢＶＭ）五项指标（ＨＢｓＡｇ、抗—ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗—ＨＢｅ、抗—ＨＢｃ）的检测，并着重对ＨＢｓＡｇ阴性而其他标志物阳性的血清标本进行了探讨，同时观察了ＨＢｓＡｇ的滴度与其他标志物阳性的关系。     

江门市120例静脉毒瘾者HBV,HCV,HGV感染状况调查分析

目的：了解静脉毒瘾者乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）及庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染状况。方法：对广东省江门市１２０例静脉毒产瘾者血浆ＨＢＶ,ＨＣＶ和ＨＧＶ的标记物进行检测,采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ,抗ＨＢｃＡｂ,抗ＨＢｓＡｂ,抗ＨＣＶ抗体;逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果：１２０例静脉毒瘾者中ＨＢｓＡｇ转阳１３例（１０．８３％）,抗ＨＢｓＡｂ     

＂套式＂PCR检测丙型肝炎病毒

取临床上检测乙肝ＨＢｓＡｇ阳性之血清标本，用＂套式＂ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ分别检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染情况，结果显示，２０份血清标本用ＥＬＬＳＡ检测仅１例阳性，而用＂套式＂ＰＣＲ有６例阳性。     

荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

PCR检测HBV—DNA与乙型型肝炎病毒不同血清标志的对比分析

为探讨ＨＢＶ－ＤＮＡ在乙肝炎病毒血清不同标志模式中的分布状况及临床意义。方法：应用聚合酶链反应技术在４８５例血清标本进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ的检测，并与血清五项免疫指标对比分析。结果：ＨＢＶ－ＤＮＡ在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗－ＨＢｃ阳性模式中，阳性率最高达９２．８６％；其次是ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ及ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｃ，阳性率分别为６６．２５％和６８．８３％；除单项抗－ＨＢｓ和免疫指标     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗体、E抗体及核心抗体阳性人群HBV-DNA临床意义

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染后 ,有复杂的乙型肝炎病毒标志 (ＨＢＶＭ)变化 ,其临床意义不同 ,我们用荧光定量聚合酶链反应 (ＦＱ ＰＣＲ) [1] 对普通人群中 12 8例乙型肝炎表面抗体(ＨＢｓＡｂ)、Ｅ抗体 (ＨＢｅＡｂ)、核心抗体 (ＨＢｃＡｂ)均阳性的血清 ,进行了乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (ＨＢＶ ＤＮＡ)定量检测 ,以进一步探讨其临床意义 ,现报告如下。1　资料与方法1.1　观察对象　观察组① 12 8例为 2 0 0 0年 12月至 2 0 0 1年7月 ,我院进行健康查体时发现ＨＢＶＭ呈ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ均阳性的普通人群 ,否认既往有…     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ＧＤＳ）技术，并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像、分析，并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较，对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析出阳性的血清标本，用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果通过３８份血清标本的检测，发现用凝胶呈像技术判断的结果比单纯肉眼观察的阳性率高。前者１９份阳性（５０％），后者１６份阳性（４２．１％），符合率为９２．１％。经χ２检验（χ２＝０．４７７，Ｐ＞０．０５），说明两种方法有很好的一致性。凝胶呈像分析为阳性，而肉眼观察阴性的３份血清标本，经定量ＰＣＲ检测为阳性。结论应用凝胶呈像技术比ＰＣＲ产物电泳后紫外灯下肉眼观察的灵敏度高、客观性强，能避免与紫外线接触，并可长期保留检测结果。     

乙型肝炎患者HBV－DNA和HBeAg检测的比较

乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ检测的比较上海第二医科大学（２０００２５）刘丹，支立民，徐伯忠本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫吸附法对６６例确诊为乙型肝炎患者的血清，分别检测ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ、ＨＢｓＡｇ，现将结果报道如下。一、...     

189例原发性肝癌AFP、HBV感染标志物分析

目的：ＨＢＶ感染与ＡＦＰ关系密切，应引起临床重视，加强防范措施，应用抗癌药物治疗的同时应加强保肝及抗病毒治疗。方法：对１８９例原发性肝癌的ＡＦＰ、ＨＢＶ感染标志物检测结果进行分析和比较。结果：ＡＦＰ水平因ＨＢｓＡｇ状态不同而有高度显著性差异，ＨＢｓＡｇ（＋）的ＰＨＣ患者ＡＦＰ水平呈“高（水平）多低（水平）少”，ＨＢｓＡｇ（－）的ＰＨＣ患者ＡＦＰ水平呈“高少低多”分布。ＡＦＰ异常率以ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｂ（＋）、ＨＢｃＡｂ（＋）和ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｃＡｂ（＋）两种感染模式为高，与其它感染模式有高度显著之差异（Ｐ＜０．００１）。结论：ＰＨＣ患者ＨＢＶ感染标志物阳性率７３．５％，ＨＢｃＡｂ与ＨＢｓＡｇ和ＨＢｓＡｂ相比能更好地说明既往有过ＨＢＶ感染，ＰＨＣ患者可同时伴有ＨＢＶ的活跃复制     

459例HBsAg阴性乙肝血清带毒情况观察

一般认为乙肝患者和感染者ＨＢｓＡｇ消失、ＨＢＶ抗体出现便意味着病毒被清除。本文报告用放免法检测此类乙肝患者４９例（肝炎组）、ＨＢＶ感染者４１０例（感染组）血清ＨＢｃＡｇ结果。发现ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阴性的肝炎组有２２．４５％、感染组７．３９％血清中存在ＨＢｃＡｇ－ＲＩＡ，即部分人血清中还存在有病毒。并发现此４５９例，凡查出ＨＢｃＡｇ－ＲＩＡ者的血清中含有抗－ＨＢｃ。指出献血员乙肝筛选只检测ＨＢｓ