HPLC测定龙血竭提取物中龙血素A B和7,4'-二羟基黄酮的含量

目的: 建立龙血竭提取物中龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮的含量测定方法。方法: 采用Kromasil C₁₈ 色谱柱流动相乙腈-1%冰醋酸梯度洗脱,体积流量1 mL ·min^-1,柱温40 ℃,进样量10 μL,检测波长龙血素A,B为278 nm,7,4'-二羟基黄酮为330 nm。结果: 龙血素A,B和7,4'-二羟基黄酮分别在10.05~60.36 μg,10.08~60.48 μg,3.26~19.56 μg呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为108.6%(RSD 0.99%),109.6%(RSD 1.03%),102.7%(RSD 1.24%)。结论: 方法简便易行,结果准确,可用于龙血竭提取物的质量控制。     

一测多评法测定龙血竭中5种有效成分

目的建立龙血竭中5种有效成分的一测多评法,探讨一测多评法在龙血竭质量控制中的应用。方法采用高效液相色谱法,使用Fortis Xi C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-1.0%冰醋酸水溶液(B),梯度洗脱,0~10 min,25%~30%A;10~60 min,30%~50%A,体积流量1.0 mL/min;检测波长278 nm;柱温30℃;进样量10μL。以紫檀茋为内参,分别建立7,4′-二羟基黄酮、白藜芦醇、龙血素A和龙血素B相对于紫檀茋的相对校正因子,分别采用外标法和一测多评法测定5种成分的量,并比较二者结果的相对误差。结果 7,4′-二羟基黄酮质量浓度在10.23~102.27μg/mL、白藜芦醇质量浓度在11.01~110.14μg/mL、龙血素A质量浓度在9.47~94.72μg/mL、龙血素B质量浓度在11.59~115.90μg/mL、紫檀茋质量浓度在24.35~243.52μg/mL线性关系良好;4种化学成分相对于紫檀茋的相对校正因子分别为0.626、1.064、1.154、0.837;且在不同实验条件下耐用性良好(RSD3.0%);一测多评法的计算结果与外标法测得结果无显著差异。结论建立的一测多评法可作为龙血竭中5种有效成分的测定方法,一测多评法为龙血竭质量控制提供了新的模式与方法。     

龙血竭特征成分对照指纹图谱研究

目的:建立以5个特征成分为对照的龙血竭HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用Phenomenex lura C18(4.6mm×250mm,5μm)柱,以甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温35℃,检测波长306nm。结果:不同厂家的12批龙血竭的指纹图谱相似度在0.95以上,确定了12个共有峰,并通过对照指认了白藜芦醇、紫檀茋、龙血素A、龙血素B、7,4,-二羟基黄酮共5个特征性化学成分。结论:建立的分析方法能同步检测出龙血竭中茋类、二氢查耳酮类及黄酮类的特征性成分,为更全面评价其质量提供依据。     

不同工艺提取的龙血竭中龙血素A、B的含量的测定

目的：测定不同提取工艺提取的龙血竭中龙素A和龙血素B的含量。方法：采用HPLC法，以C18反相键合硅胶为固定相，乙腈－1％冰醋酸（34：66）为流动相，检测波长为280nm，用外标法定量。结果：龙血素A在98－490ng范围有良好线性关系，r=0.9996，方法平均回收率为97.45%，RSD为1.82%。龙血素B在43.2-259.2ng范围有良好线性关系，r=0.9993，方法平均回收率为96.92%，RSD为1.57%。免加热工艺提取的龙血竭中龙血素A和龙血素B含量匀高于传统工艺提取的血竭，结论：免加热工艺为一种独创的、提取率高的新技术，具有推广价值。     

龙血竭酚类提取物主要成分在Caco-2细胞中吸收机制研究

该研究旨在以人源结肠癌细胞Caco-2细胞为模型,研究龙血竭酚类提取物中8个主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明龙血竭酚类提取物的口服吸收机制。采用UPLC-MS/MS同时测定龙血竭酚类提取物中紫草黄酮、7,4′-二羟基黄酮、7,4′-二羟基-5-甲氧基高异黄烷酮、7,4′-二羟基高异黄烷酮、龙血素C、龙血素A、龙血素B和紫檀茋8种主要成分,在Caco-2细胞中分别考察不同孵育时间、浓度、温度、P-gp抑制剂、MRP抑制剂、OCTN1抑制剂、OCTN2抑制剂对龙血竭主要成分细胞摄取的影响,并通过转运试验测定8种主要成分的表观渗透系数P_(app)及转运速率,预测龙血竭提取物口服吸收机制。结果显示,龙血竭酚类提取物中8种主要成分的细胞摄取具有时间依赖性和浓度依赖性,且各成分的摄取均不需要消耗能量,符合被动扩散过程;P-gp抑制剂、MRP抑制剂和OCTN1抑制剂对各主要成分的细胞摄取量均无影响,仅OCTN2抑制剂的加入显著降低了紫檀茋的摄取量(P0.05);转运结果中,8种成分的流出率ER均1.5。说明龙血竭酚类提取物中8种主要成分的吸收机制可能为被动扩散,且紫檀茋可能是OCTN2的底物。     

龙血竭胶囊中龙血素B的含量测定及比较

目的用HPLC法测定龙血竭胶囊中龙血素B的含量,简化前处理,并对市售不同品牌的龙血竭胶囊中龙血素B的含量进行比较。方法选用色谱柱Eclipse XDB-C18(5μm,4.6 mm×150 mm,Agilent),乙腈-0.4%磷酸溶液(35∶65)为流动相,流速为1 ml/min,柱温30℃,检测波长275 nm。结果龙血素B在6.2~31.5μg/ml范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 99,n=5),龙血素B的加样回收率99.66%(RSD=1.48%)。结论该方法简便,准确,可靠,便于日常生产时制剂的含量控制,且市售中不同品牌的龙血竭胶囊中龙血素B的含量均符合国家标准(不低于0.6 mg/粒)。     

基于指纹图谱分析和多成分同时定量的龙血通络胶囊质量评价研究

目的建立龙血通络胶囊指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价龙血通络胶囊提供依据。方法采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温35℃,检测波长为280、325 nm。测定10批次龙血通络胶囊,建立指纹图谱,同时采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认及对部分特征峰进行定量分析。结果得到分离度、重复性均较好的龙血通络胶囊指纹图谱,标示出18个共有峰,相似度在0.92以上;采用LC-Q-TOF/MS方法指认了16个共有峰,其中7个共有峰经对照品比对,分别为白藜芦醇、7,4′-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、紫檀茋、2,6-二甲氧基-4,4′-二羟基二氢查耳酮和2-甲氧基-4,4′-二羟基二氢查耳酮,并对这7个成分进行了定量分析,平均回收率在98.47%~101.93%(RSD均小于2.27%)。结论同时对龙血通络胶囊指纹图谱和7个指标成分进行分析,方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。     

HPLC-DPPH评价剑叶龙血树中抗氧化活性成分及构效关系

目的采用HPLC-DPPH法评价剑叶龙血树主要成分的抗氧化活性并分析其构效关系。方法采用HPLC法测定剑叶龙血树中自藜芦醇、龙血素A、龙血素B、紫檀芪、7,4′-二羟基黄酮,色谱条件:PhenomenexluraC_(18)(250mmn×4.6mmn,5μm)色谱柱,甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长306 nm。通过对比剑叶龙血树药材溶液加1,1二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)反应前后的各化合物色谱峰面积衰减情况,以各化合物峰面积比值计算清除率,评价各化合物抗氧化活性。结果二苯乙烯类、二氢查耳酮类成分为剑叶龙血树中主要抗氧化活性成分;抗氧化能力强弱依次为紫檀芪(清除率73.19%)白藜芦醇(清除率71.10%)龙血素B(清除率39.01%)龙血素A(清除率12.14%)。从构效关系上分析,二苯乙烯类化合物,当羟基甲基化后,其抗氧化能力并未减弱;二氢查耳酮类化合物,苯环上甲氧基取代成对称结构有助于发挥其抗氧化能力;而仅有C7,4′位羟基取代的黄酮类化合物未显示抗氧化活性。结论建立的HPLC-DPPH评价方法能量化表达剑叶龙血树中主要抗氧化成分,为筛选药效指标成分及建立全面谱效相关质量标准奠定基础。     

基于薄层色谱法和超高效液相色谱法对龙血竭的质量评价研究

目的：建立龙血竭药材的薄层色谱、超高效液相色谱指纹图谱和含量测定方法,为其质量标准的制定提供依据。方法：采用薄层色谱（TLC）法,以龙血竭对照药材、龙血素A及龙血素B为对照进行18批样品的定性鉴别;采用超高效液相色谱（UPLC）法同时建立龙血竭的指纹图谱和含量测定方法;使用聚类分析、主成分分析进行化学计量学的分析,建立综合评分方法,评价云南省不同产地样品的质量。结果：开发的TLC方法操作简单,能高效鉴定龙血竭药材;通过对18批样品的指纹图谱分析,识别了16个共有峰,确证了白藜芦醇、7,4’-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、紫檀茋5个化学成分,并对5个成分进行定量分析,回收率在98.64%～100.89%之间;通过聚类分析,发现样品大致可分为三类,与产地因素具有一定的相关性;通过主成分分析与综合得分F结果表明整体质量最好的为第Ⅱ类。结论：建立龙血竭的薄层色谱、含量测定及指纹图谱与化学计量学相结合的方法,为龙血竭的质量评价提供新的思路,对质量标准的研究提供参考。     

生肌化瘀膏质量标准研究

目的:建立生肌化瘀膏(龙血竭、大黄、当归、等)的质量标准。方法:采用TLC法对处方中龙血竭、大黄和当归进行定性鉴别,采用HPLC法测定制剂中龙血素A和龙血素B的含量。结果:TLC能特异性地鉴别龙血竭、大黄和当归。龙血素A进样量在3.65~365μg/mL范围内,线性关系良好,回归系数r=0.999 9(n=7),平均回收率为100.3%,RSD为1.33%(n=6);龙血素B进样量在3.62~362μg/mL范围内,线性关系良好,回归系数r=0.999 9(n=7),平均回收率为99.1%,RSD为1.50%(n=6)。结论:该法专属性强,简便,准确,可作为控制生肌化瘀膏质量的方法。     

龙血竭高效液相色谱特征研究

目的：用HPLC法对龙血竭指纹图谱进行研究。方法：采用色谱条件Eclipse XDB-ODS柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相乙腈-水,梯度洗脱进行色谱分离；检测波长为275 nm；流速为1.0 mL·min^-1；柱温为40 ℃,以龙血素B作为参照物。结果：初步建立了龙血竭的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价。结论：方法简单可行,能够有效地控制龙血竭的内在质量。     

基于近红外光谱技术的散结镇痛胶囊中龙血素A、B的含量测定

目的：利用近红外光谱分析技术（NIRS）快速测定散结镇痛胶囊中龙血素A、B的含量。方法：利用HPLC法测定散结镇痛胶囊龙血素A、B的含量,运用偏最小二乘法（PLS）建立NIRS与HPLC测定值之间的多元校正模型,对未知样品进行预测。结果：龙血素A、B的定量校正模型相关系数r分别为0.987 9、0.981 5,校正集验证均方差（RMSEC）分别为0.021 3、0.020 7,内部交叉验证均方差（RMSEV）分别为0.025 5、0.023 6,对预测集进行预测,预测值与真实值的相关性良好。结论：近红外光谱法对散结镇痛胶囊中龙血素A和龙血素B含量预测结果较好,能满足制药中检测的精度要求,为中药生产过程的在线、无损定量分析提供了依据。     

小儿肝炎颗粒多成分含量测定

目的:建立小儿肝炎颗粒中7种特征成分的高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法。方法:采用Agilent-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,绿原酸、滨蒿内酯检测波长为330 nm,栀子苷、大豆苷、盐酸小檗碱检测波长为250 nm,盐酸黄柏碱、黄芩苷检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果:绿原酸、滨蒿内酯、大豆苷、栀子苷、盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱、黄芩苷进样量分别在4.342~86.848、1.361~27.216、2.082~41.644、4.666~93.328、6.025~120.504、1.971~39.420、8.243~164.856μg·mL^-1与峰面积呈良好线性关系(r为0.9995~0.9999);平均加样回收率分别为101.2%、99.2%、99.5%、99.8%、99.5%、99.6%、99.6%(RSD<1.5%,n=6);精密度、重复性、稳定性(48 h)试验的RSD均小于2.0%(n=6)。6批小儿肝炎颗粒中7种成分均有检出,但含量存在差异。结论:建立的HPLC准确可靠、专属性好,可用于小儿肝炎颗粒中绿原酸等7种活性成分含量的同时测定。     

UFLC法同时测定参芎葡萄糖注射液中6种主要成分

目的建立超快速液相色谱(UFLC)同时测定参芎葡萄糖注射液(丹参、盐酸川芎嗪)中丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的方法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,检测波长220 nm,柱温40℃。结果 6种被测成分的线性关系良好(r>0.999),精密度、重复性、稳定性的RSD都低于3%,平均加样回收率在95.19%～101.02%,RSD在0.92%～2.70%(n=6)。结论本方法简便、快速、准确,能有效控制参芎葡萄糖注射液的质量。     

醋柳黄酮片中异鼠李素和槲皮素含量的HPLC法测定

目的采用高效液相色谱法测定醋柳黄酮片中异鼠李素和槲皮素的含量.方法采用Diamonsil C18(250mm×4 6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸溶液(5446),柱温40℃,检测波长368nm.结果异鼠李素、槲皮素的线性范围分别为6.5～32 μg/ml(r=0.9996)、2.5～12.4 μg/ml(r=0.9991),平均回收率为99.4%、99.8%.日内精密度RSD分别为1.22%、1.32%(n=6);日间精密度RSD为1.07%、1.35%(n=5).结论本方法简便、准确,适用于该药的质量控制     

HPLC法同时测定大果飞蛾藤中8种成分

目的建立HPLC法同时测定大果飞蛾藤中新绿原酸、东莨菪苷、绿原酸、隐绿原酸、东莨菪内酯、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含有量。方法大果飞蛾藤80%甲醇提取物的分析采用Agilent 5 TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长345 nm。结果 8种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 2),平均加样回收率98.22%~101.03%, RSD 0.87%~1.75%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于大果飞蛾藤的质量控制。     

大风艾药材中总黄酮和3,3′,5,7-四羟基-4′-甲氧基二氢黄酮含量测定

目的:测定大风艾药材中总黄酮和3,3′,5,7-四羟基-4′-甲氧基二氢黄酮的含量。方法:总黄酮含量采用分光光度法测定,于271 nm处测定;3,3′,5,7-四羟基-4′-甲氧基二氢黄酮含量采用高效液相色谱法测定,色谱柱为AKZONOBEL Kromasil 100-5C18(4.6×250 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸(B),梯度洗脱(0~10 min, 45%A;10~20 min, 80%A),流速为1 mL/min,检测波长为289 nm,柱温为30℃。结果:总黄酮线性范围为8.26~66.05μg/mL,R^2=0.9997,加样回收率为100.5%;3,3′,5,7-四羟基-4′-甲氧基二氢黄酮线性范围为2.06~825.6μg/mL,R^2=1,加样回收率为101.7%。结论:该方法可作为艾纳香的质量控制方法。     

HPLC测定复方昆丹胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、二苯乙烯苷、五没食子酰葡萄糖

目的:建立昆丹胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、二苯乙烯苷、五没食子酰葡萄糖的含量测定方法.方法:采用Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长230 nm,柱温30℃,流速1.0 mL?min-1.结果:芍药内酯苷、芍药苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷及五没食子酰葡萄糖浓度分别在0.02 ～ 1.84,0.03～1.65,0.03 ～3.44,0.01～0.81 mg(r＞0.9999)线性关系良好.低、中、高3个浓度的平均加样回收率分别为99.5％ ～ 102.6％(RSD 1.3％ ～2.1％),98.5％～103.5％(RSD 0.5％ ～2.4％),98.3％～104.2％(RSD 0.5％ ～ 2.2％).结论:方法准确,灵敏,能有效测定昆丹胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷及五没食子酰葡萄糖成分的含量.     

UPLC-DAD技术快速分析黄芪药材及制剂中主要黄酮成分

目的:采用UPLC-DAD技术快速测定黄芪及其制剂中主要黄酮类成分的含量.方法:采用超高效液相色谱仪,用ACQUITY UPLC TMBEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm);流动相由甲醇-0.2％甲酸水溶液线性梯度洗脱;流速0.5 mL·min -1,检测波长200～400 nm,柱温30℃.结果:毛蕊异黄酮苷、芒柄花素苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的线性范围分别为0.1313～1.313 g·L-1(r=0.9997),0.1186～1.186 g·L-1 (r=0·9994),0.0206～0.206 g·L-1(r=0.999 5),0.015 0 ～0.150 g·L-1(r =0.999 5);平均同收率分别为97.07％,97.26％,97.45％,96.97％.结论:本方法快速、准确、可靠,可以作为控制黄芪药材及制剂质量的方法.