尘螨过敏性支气管哮喘患者肺泡巨噬细胞表面CD86的表达及抗CD86单抗对其炎性细胞因子生成的作用

目的　观察尘螨过敏性支气管哮喘 (简称哮喘 )患者肺泡巨噬细胞表面CD86的表达 ,探讨抗CD86单抗抑制哮喘炎症反应的机制。方法　从 10例尘螨过敏性哮喘患者支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中分离出肺泡巨噬细胞 (AM)和CD 4 T淋巴细胞 ,AM经螨变应原的刺激活化后与CD 4 T淋巴细胞共培养。每例患者的培养细胞分为抗CD86单抗干预组和CD86表达组 ,每组内再分为实验组和对照组。抗CD86单抗干预组、实验组分别加抗CD86单抗至 0 1mg/L(低剂量 )和 1.0mg/L(高剂量 )两个剂量 ,对照组不加相应抗体。共培养 72h后分别留取培养上清液 ,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞因子γ干扰素 (INF γ)、白细胞介素 4 (IL 4 )、IL 5的产生量。CD86表达组、实验组加螨变应原 ,对照组不加变应原 ,共培养 2 4h后收集培养细胞 ,流式细胞仪 (FCM)检测AM表面CD86分子的表达水平。结果　AM在尘螨变应原的刺激活化下 ,实验组AM表面CD86分子平均荧光密度表达水平为 (5 0± 9) % ,对照组为 (2 3± 5 ) % ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;实验低剂量组IL 4、IL 5的分泌量分别为 (135± 19)ng/L、(10 4± 2 1)ng/L ,实验高剂量组分别为 (90± 17)ng/L、(6 8± 14 )ng/L ,对照组IL 4、IL 5的分泌量分别为 (187± 2 4 )ng/L、(16     

反义内皮素转换酶核酸对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞释放白细胞介素5的抑制作用

目的　探讨转导反义内皮素转换酶 (ECE)核酸的气道上皮细胞对尘螨过敏性患者外周血单个核细胞释放Th1/Th2相关细胞因子的影响。方法　尘螨过敏患者 2 1例 ,分离其外周血单个核细胞 (PBMC) ,根据实验要求分为 :未刺激组 (A组 )、反义ECE上皮细胞 +PBMCs组 (A1组 )、对照组上皮细胞 +PBMCs组 (A2 组 )及螨刺激组 (B组 )、反义ECE上皮细胞 +PBMCs+尘螨提取液组 (B1组 )、对照组上皮细胞 +PBMCs+尘螨提取液组 (B2 组 ) ,共培养 72h ,螨刺激组同时加入尘螨提取液 2 0 μg/ml。培养上清用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测白细胞介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)。结果2 1例患者中有 12例患者经尘螨刺激后IL 5释放明显增加。将 12例患者进行统计学分析发现 ,未经尘螨刺激时 ,A1组IL 5和IFN γ水平分别为 [(6 0± 1 3)× 10 -9g/L]和 [(6 3± 2 6 )× 10 -9g/L],A2 组为 [(7 5± 1 1)× 10 -9g/L]、[(70± 5 2 )× 10 -9g/L],两组比较差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;尘螨刺激后 ,B1组的IL 5水平和IFN γ分别为 [(8 2± 1 6 )× 10 -9g/L]、[(10 0± 4 1)× 10 -9g/L],B2 组分别为[(12 0± 1 8)× 10 -9g/L]、[(15 3± 71)× 10 -9g/L],两组IL 5比较差异有显著性 (P =0 0 4 7) ,而IFN γ水平比较差异无显著性 (P >     

牛磺酸治疗支气管哮喘缓解期患者气道炎症的前瞻性研究

目的　观察牛磺酸对支气管哮喘缓解期患者气道炎症的治疗效果。方法　采用随机、对照、双盲、前瞻性研究方法 ,对 84例非急性发作期的轻、中度哮喘患者 ,从病情进入缓解期开始口服牛磺酸 (A组 )和安慰剂 (B组 ) ,疗程 1年 ,比较哮喘症状计分、治疗期间因哮喘复发或病情加重而住院的日数、每月使用沙丁胺醇的喷数、肺功能和气道反应性的变化以及血清中白细胞介素 5和白细胞介素 8的水平。结果　A组获得有效病例 32例 ,B组获得有效病例数 2 9例。A组患者治疗后的哮喘症状计分 (12 5± 4 8)分 /月、每月使用沙丁胺醇的喷数 (6 5± 2 9)次/月、治疗期间的住院日数 (1 2± 0 5 )d、FEV1(2 6± 0 5 )L与B组 (15 2± 5 1)分 /月 ;(9 8± 3 2 )次 /月 ;(3 3±0 9)d ;(2 2± 0 8)L差异显著 (P <0 0 5 ) ;两组患者的气道反应性无显著差异 ;血清中IL 5 [(16 3± 4 5 )ng/L]和IL 8[(15 8± 4 9) μg/L]的水平与B组 [(2 6 9± 12 7) μg/L ,(19 3± 5 2 ) μg/L]差异显著 (P <0 0 5 )。结论　牛磺酸能有效地改善支气管哮喘缓解期患者的临床症状和肺功能 ,抑制血清中炎症介质的释放 ,无明显的毒副作用 ,依从性良好 ,可能对哮喘缓解期气道炎症的治疗具有重要意义     

干扰素γ、白细胞介素12及腺苷脱氨酶同工酶对结核性胸腔积液的诊断价值

目的　研究胸腔积液中干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 12 (IL 12 )的浓度及腺苷脱氨酶同工酶 (ADA2 )的活性三者在结核性胸腔积液诊断中的临床价值。方法　以 2 0 0 2年 3月～ 2 0 0 3年2月期间在北京大学人民医院、北京胸科医院、北京结核病胸部肿瘤研究所等医院的未经治疗的胸腔积液患者为研究对象 ,其中结核性胸腔积液 14 1例、恶性胸腔积液 4 9例。应用酶速率法检测胸腔积液标本中腺苷脱氨酶 (ADA)、ADA2 的活性 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测IFN γ和IL 12的浓度。比较两组胸腔积液中ADA和ADA2 活性 ,以及IFN γ和IL 12浓度之间的区别。结果　 (1)结核性胸腔积液组ADA、ADA2 活性分别为 (5 1 6± 10 9)U/L和 (4 7 9± 6 9)U/L ,恶性胸腔积液组ADA、ADA2 活性分别为 (2 0 4± 4 4 )U/L、(13 2± 3 2 )U/L ,结核性胸腔积液组的ADA、ADA2 活性显著高于恶性胸腔积液组 (P <0 0 1)。结核性胸腔积液组IFN γ和IL 12浓度分别为 (112 1± 4 5 8)ng/L及 (10 4 3± 32 3)ng/L ,恶性胸腔积液组IFN γ和IL 12浓度分别为 (2 4 8± 5 9)ng/L和 (6 1 8±10 8)ng/L ,结核性胸腔积液组的IFN γ和IL 12浓度水平显著高于恶性胸腔积液组 (P <0 0 1,0 0 5 ) ;(2 )ROC曲线分析结果 ,IFN γ以 6 1 7ng/L为诊     

大鼠胰岛B细胞功能对Th1/Th2淋巴细胞分化的影响

目的　探讨大鼠胰岛B细胞功能对Th1/Th2淋巴细胞分化的影响及其机制。方法　 2 0 0 2 - 11～ 2 0 0 3- 0 9在北京大学人民医院将 4 0只雄性SD大鼠随机分A、B、C、D和E组 ,每组 8只。A组 :腹腔注射链脲菌素(STZ)建成 1型糖尿病模型 ;B组 :腹腔注射卵清蛋白 (OVA )致敏 OVA激发建成哮喘大鼠模型 ;C组 :腹腔注射STZ OVA致敏和激发 ;D组 :腹腔注射STZ 皮下注射胰岛素 OVA致敏和激发 ;E组为对照组。检测各组血清C肽浓度、支气管肺泡灌洗液 (BALF)IL 4和IFN γ质量浓度。结果　与对照组比较 ,A、C组的血清C肽浓度显著下降 ,而BALF的IFN γ质量浓度显著增高 ,IL 4质量浓度显著下降 ;与C组比较 ,D组经注射胰岛素后 ,其BALF中的IFN γ质量浓度显著降低 (137 6 3± 9 94vs 111 0 0± 12 14 ,P <0 0 5 ) ,IL 4质量浓度显著增高 (11 0 0± 3 93vs15 6 3± 2 6 7,P <0 0 5 )。结论　大鼠胰岛B细胞功能对Th1/Th2淋巴细胞的分化有调节作用。     

鼠白细胞介素12质粒对小鼠支气管哮喘模型气道炎症及细胞因子的影响

目的　研究鼠白细胞介素 12 (IL 12 )基因表达 (mIL 12 )质粒对小鼠支气管哮喘 (简称哮喘 )模型气道炎症及细胞因子的影响 ,并分析其作用机制。方法　卵白蛋白 (OVA)致敏建立小鼠哮喘模型。BALB/c小鼠 4 1只 ,分为 6组。即哮喘模型组 (A组 ) 8只 :OVA致敏 +OVA气雾攻击 ;模型对照组 (B组 ) 6只 :用生理盐水代替 1%OVA溶液雾化 ,余处理同A组 ;mIL 12质粒预防组 (C组 ) 8只 :实验第 1、3、5天各肌肉注射mIL 12质粒 10 0 μg ;mIL 12质粒治疗组 (D组 ) 8只 :实验第 14、16、18天各肌肉注射mIL 12质粒 10 0 μg ;空质粒预防组 (E组 ) 5只 :实验第 1、3、5天各肌肉注射空质粒 10 0 μg ;空质粒治疗组 (F组 ) 6只 :实验第 14、16、18天各肌肉注射空质粒 10 0 μg。测定所有小鼠支气管 肺泡灌洗液 (BALF)中的嗜酸粒细胞 (EOS)个数和IL 4、IL 5、γ干扰素 (IFN γ)水平。结果B组小鼠EOS个数和IL 4、IL 5、IFN γ浓度分别为 (0 0 1± 0 0 3)× 10 8/L、(2 4± 4 ) pg/ml、(33± 6 ) pg/ml、(72 5± 5 9) pg/ml,C组为 (0 0 6± 0 0 4 )× 10 8/L、(43± 13) pg/ml、(6 3± 10 )pg/ml、(6 2 6± 6 0 ) pg/ml,D组为 (0 11± 0 12 )× 10 8/L、(38± 14 )pg/ml、(6 6± 14 ) pg/ml、(6 6 1± 4 0 ) pg/ml,与A     

过氧化物酶体增殖活化受体γ对支气管哮喘豚鼠气道炎症的影响

目的　探讨过氧化物酶体增殖活化受体γ (PPAR γ)和PPAR γ配体激动剂罗格列酮对支气管哮喘 (简称哮喘 )豚鼠气道炎症的影响及机制。方法　 35只豚鼠按随机数字表法分为对照组(A组 )、哮喘组 (B组 )、地塞米松 (DXM)组 (C组 )、罗格列酮组 (D组 )、罗格列酮 1/ 2DXM用量组 (E组 ) ,每组各 7只。并测定各组豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及分类 ,观察各组豚鼠支气管肺组织病理的改变 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测豚鼠肺组织中PPAR γ、还氧化酶2 (COX 2 )等的表达。结果　D组豚鼠BALF中的嗜酸粒细胞数为 0 0 5 0± 0 0 2 0 ,B组为 0 110± 0 0 2 0 ,两组比较差异有显著性 (t=5 6 1,P <0 0 0 1) ,D组豚鼠BALF中的细胞总数、中性粒细胞数分别为(15 5± 3 9)× 10 8/L、0 0 6 9± 0 0 2 0 ,B组分别为 (19 9± 4 3)× 10 8/L、0 0 76± 0 0 2 0 ,两组比较差异无显著性 (t值分别 =2 0 2、0 6 6 ,P均 >0 0 5 ) ;D组豚鼠气道壁厚度为 (2 2 0± 5 0 ) μm ,B组为 (2 8 0± 5 0 )μm ,两组比较差异有显著性 (t=2 6 1,P <0 0 5 ) ,但D组黏膜及黏膜下层厚度 [(12 2± 2 9) μm]与B组[(14 9± 3 3) μm]比较差异无显著性 (t =1 6 3,P >0 0 5 ) ;D组PPAR γmRNA的表     

过敏性支气管哮喘儿童正常T淋巴细胞表达和分泌的活性调节蛋白基因启动子-28位基因多态性研究

目的　探讨中国儿童正常T淋巴细胞表达和分泌的活性调节蛋白 (RANTES)基因启动子 - 2 8位基因多态性对儿童过敏性哮喘的影响。方法　采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)方法 ,对 10 0例过敏性哮喘儿童 (A组 )的RANTES基因进行多态性分析 ,用化学发光法检测患者血浆总IgE浓度 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测血浆中RANTES浓度 ,用全自动血细胞计数仪进行嗜酸粒细胞计数 ;并与 90名健康儿童 (B组 )进行比较。结果　 (1)RANTES启动子 - 2 8位存在C/G 2种等位基因 ,A组和B组G等位基因频率分别为 19 5 %、10 6 % ,两组间G等位基因频率比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;(2 )基因型CC、CG、GG的哮喘儿童血浆RANTES浓度分别为 (2 89± 199)ng/L、(5 15± 119)ng/L、(10 71± 138)ng/L ,3种基因型间比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;(3)A组血浆总IgE浓度 (以lgIgE表示 )分别为 2 4 5± 0 12、2 77± 0 0 7、3 16± 0 0 9,组间 3种浓度比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;(4)A组外周血嗜酸粒细胞计数分别为 (2 9± 1 4 )× 10 8/L、(6 4± 0 8)× 10 8/L、(9 9± 2 3)×10 8/L ,组间细胞计数比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　RANTES启动子 - 2 8C/G基因多态性与儿童过敏性哮喘易感性相关 ,     

尼氟灭酸对支气管哮喘小鼠模型气道高反应性的抑制作用

目的　观察钙激活Cl-通道 (ClCa)阻断剂尼氟灭酸 (NFA)对支气管哮喘 (简称哮喘 )气道高反应性的抑制作用。方法　BALB/c小鼠 4 5只 ,按随机数字表法分为哮喘组 (A组 )、吸入NFA预防组 (B组 )和正常对照组 (C组 ) ,每组 15只。检测各组小鼠气道压力峰值 时间指数 (APTI)的差异 ,并比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中内皮素 1(ET 1)和一氧化氮 (NO)的含量。制备A组、C组小鼠的离体完整上皮气管环 (A1、C1组 )和去上皮气管环 (A2 、C2 组 ) ,观察在梯度浓度乙酰甲胆碱(mACh)的激发下 ,5 0 μmol/LNFA预处理对气管环收缩张力的影响。 结果　A组APTI与B组 (mACh为 2 .0mg/kg时 ,两者分别为 1.6 2± 0 .14和 1.2 1± 0 .0 7)比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;A组BALF中ET 1和NO含量分别为 (10 3± 9)ng/L、(48.5± 3.2 ) μmol/L ,B组分别为 (5 3± 5 )ng/L和 (2 3.7± 2 .5 )μmol/L ,A组与B组比较差异有显著性(P <0 .0 1) ;离体气管环收缩张力实验显示 ,C1组完整上皮气管环的张力峰值比为 1.2 6± 0 .14 ,A1组完整上皮气管环的张力峰值比为 3.79± 0 .4 4 ,C2 组去上皮气管环的张力峰值比为 2 .0 6± 0 .18,A2 组去上皮气管环的张力峰值比为 2 .15± 0 .2 1,A1组与C1组、A1组与A2 组比较差异有显著性 (     

结核分支杆菌抗原85B DNA疫苗转染人气道上皮细胞对哮喘患者Th1/Th2平衡的调节作用

目的　研究结核分支杆菌抗原 85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用。方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG Ag85B ,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE ,并收集转化细胞培养上清液 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85BmRNA水平的表达 ,螨过敏哮喘组 (18例 )和正常组 (13例 )PBMC在离体单独与螨或与Ag85B转染上清液共同培养 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定其培养上清液中白介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　RT PCR法扩增转染的 16HBE细胞中有 992bp长度的预期片断。无刺激状态下 ,哮喘患者和正常人PBMC培养上清液的IL 5、IFN γ无差异 ,螨刺激可促进哮喘患者PBMC分泌IL 5 ,刺激和未刺激处理分别为 (17 1± 1 9)pg/ml和 (11 9± 0 9)pg/ml(P =0 0 2 ) ;螨 +Ag85B转染上清液与单纯螨刺激比较 ,前者IFN γ水平显著高于后者 ,分别为 (111 5± 15 9)pg/ml和 (5 8 8± 7 8)pg/ml(P =0 0 4 ) ,IFN γ/IL 5的比值分别为 7 2± 4 8和 4 9± 2 5 (P =0 0 8)。正常人不同刺激方法间比较 ,所有指标差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　螨过敏的变应性     

支气管哮喘大鼠转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症的关系

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)转录因子T-bet/GATA-3表达量比值的变化及其与气道炎症的关系。方法24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组,每组12只。用动物肺功能仪测定大鼠气道反应性;用苏木精-伊红染色观察气道病理改变;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、γ干扰素(IFN-γ)含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织中IL-4、IL-5、IFNγ-、T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平;用免疫印迹(W estern b lot)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/m l)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3 710.83±197.49)cm H2O.m l-1.s-1,对照组分别为(1.51±0.18)、(2.15±0.36)、(6.08±1.06)、(37.17±6.12)cm H2O.m l-1.s-1,两组不同激素剂量比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞数,管壁面积/支气管管腔内周长(WA/P i)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/P i)哮喘组分别为(26.0±1.6)个/mm2、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,对照组分别为(2.9±1.2)个/mm2、(8.8±1.8)个/mm2、6.4±0.8、2.7±0.5,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ含量哮喘组为(23.4±0.7)pg/m l、(24.8±0.5)pg/m l和(21.7±1.1)pg/m l,对照组为(9.3±0.3)pg/m l、(12.5±0.3)pg/m l、(65.8±2.1)pg/m l,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中IL-4、IL-5和IFN-γmRNA表达水平哮喘组分别为2.260±0.210、0.510±0.100、0.100±0.020,对照组分别为0.060±0.020、0.160±0.020、0.850±0.260,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中T-bet/GATA-3 mRNA表达量比值对照组为0.73±0.32,哮喘组为0.06±0.09,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值哮喘组为0.09±0.04,对照组为0.75±0.25,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。两组大鼠T-bet/GATA-3蛋白表达量比值与20、40、80μg/m l氯化乙酰胆碱激发时的呼气阻力呈负相关(r分别=-0.959、-0.919、-0.943,P均<0.01);与EOS数、淋巴细胞数呈负相关(r=-0.832、-0.831,P均<0.01);与WA/P i、ASM/P i呈负相关(r=-0.837、-0.863,P均<0.01);与BALF中IL-4和IL-5含量呈负相关(r=-0.921、-0.920,P均<0.01);与IFN-γ含量呈正相关(r=0.934,P<0.01);与肺组织中IL-4、IL-5mRNA表达水平呈负相关(r=-0.964、-0.931,P均<0.01);与IFN-γmRNA表达呈正相关(r=0.983,P<0.01)。结论转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症密切相关,能客观反应哮喘免疫失衡,很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。     

罗格列酮对支气管哮喘急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet/GATA-3表达的调控

目的 探讨罗格列酮对支气管哮喘（简称哮喘）急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet与转录因子GATA-3表达的调控、对Th1／Th2细胞因子的影响及与地塞米松（DXM）作用机制的异同。方法 哮喘急性发作期患者（A组）10例及健康自愿者（B组）10名。分离、纯化、培养外周血T淋巴细胞，根据实验要求将两组分为3、24h组，再根据不同的干预分为：未干预对照组（A1组、B1组）、罗格列酮干预组（A2组、B2组）及DXM干预组（A3组、B3组）；用酶联免疫吸附（ELISA）法检测T淋巴细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）及白细胞介素4（IL-4）的水平，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测T淋巴细胞T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达水平。结果 A组3、24hT淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IFN-γ／IL-4和T淋巴细胞的T-bet mRNA、T-bet mRNA／GATA-3 mRNA水平分别为357±31、783±47、5．5±1．0、8．4±1．5、18．7±3．7、11．9±2．9、1．20±0．11、0．290±0．020．与B组3、24h（659±41、1394±120、11．5±3．0、17．4±4．0、29．0±4．0、18．9±4．0、3．82±0．81、0．870±0．090）比较差异有统计学意义（t值分别为18．59、5．95、14．87、6．25、6．06、4．63、10．23、18．67，P均〈0．05），A组3、24h IL-4、GATA-3 mRNA水平分别为65±6、96±9、16．4±4．2、41±6，与B组3、24h（57±5、83±7、7．8±2．2、23±4）比较差异有统计学意义（t值分别为3．19、3．90、5．77、7．76，P均〈0．05）；A、B组T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4、IFN-γ／IL-4在3h水平分别为357±31、65±6、5．5±1．0、659±41、57±5、11．5±3．0，与24h（783±47、96±9、8．4±1．5、1394±120、83±7、17．4±4．0）水平比较差异有统计学意义（t值分别为23．8、9．48、5．03、18．21、9．01、3．53，P均〈0．05）：A、B组T淋巴细胞T-bet mRNA和T-bet mRNA／GATA-3 mRNA在3h时分别为18．7±3．7、1．20±0．11、29.0±4．0、3.82±0．81，与24h（11．9±2．9．0．290±0．020、18．9±4．0、0．870±0．090）水平比较差异有统计学意义（t值分别为4．62、5．66、29．67、11．5，P均〈0．05），但A、B组GATA-3 mRNA在3h（16．4±4．2．7．8±2．2）的水平，分别低于24h（41±6、23±4）水平（t值分别为10．70、10．11，P均〈0．05）；A组T淋巴细胞T-bet mRNA表达与T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ呈正相关r=0．581，P〈0.05），与IL-4呈负相关（r=-0．493，P〈0．05）；A组GATA-3 mRNA表达与IFN-γ呈负相关（r=-0.501，P〈0．05），与IL-4呈正相关（r=0．579，P〈0．05）；A组T—bet mRNA／GATA-3 mRNA比值与IFN-γ/IL4比值呈正相关（r=0．696，P〈0．05）。结论 罗格列酮通过影响哮喘急性发作期患者T淋巴细胞T-bet和GATA-3的表达，从而调控IFN-γ和IL-4的平衡。     

粉尘螨抗原对支气管哮喘患者外周血单个核细胞T-bet和GATA-3及FOXP3 mRNA表达水平的影响

目的 对支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMC)经粉尘螨刺激前、后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平及相互关系进行研究.方法 选择25例哮喘患者和15名健康人为研究对象,每例受试者又分为变应原刺激组和未经变应原刺激的自体对照组,采用半定量-逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组受试者PBMC培养后T-bet mRNA、GATA-3mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平.结果 哮喘患者PBMC中FOXP3、T-bet的表达水平分别为0.3±0.4、0.42±0.24,与健康人(0.4±0.3、0.39±0.37)比较差异无统计学意义(t值分别为0.78、0.38,P均＞0.05),哮喘患者GATA-3(1.0±0.3)的表达与健康人(0.8±0.3)比较差异有统计学意义(t=2.27,P＜0.05);健康人PBMC经变应原刺激后FOXP3的表达(0.72±0.61)与未经变应原刺激的自体对照组(0.27±0.21)比较差异有统计学意义(t=3.12,P＜0.01);而T-bet、GATA-3的表达分别为0.3±0.4、0.9±1.0,与未经变应原刺激的自体对照组(0.3±0.6、0.8±0.6)比较差异无统计学意义(t值分别为0.27、0.77,P均＞0.05);哮喘患者PBMC经变应原刺激后T-bet、GATA-3的表达分别为0.49±0.42、2.1±1.7,与未经变应原刺激的自体对照组(0.16±0.06、0.6±0.3)比较差异有统计学意义(t值分别为3.72、5.15,P均＜0.01);但哮喘患者PBMC中经变应原刺激后FOXP3的表达为0.5±0.4,与未经变应原刺激的自体对照组(0.4±0.4)比较差异无统计学意义(t=1.60,P＞0.05);经变应原刺激后哮喘患者PBMC中△T-bet、△GATA-3、△FOXP3的表达分别为0.33±0.39、1.58±1.44、0.11±0.32,与健康人(0.03±0.40、0.11±0.53、0.43±0.66)比较差异有统计学意义(t值分别为2.30、3.79、2.08,P分别＜0.05、＜0.01、＜0.05);哮喘患者△FOXP3与△GATA-3、△T-bet表达水平呈负相关(r值分别为-0.62、-0.46,P分别＜0.01、＜0.05).结论 哮喘患者经变应原刺激后,既存在Th2特定转录因子GATA-3的优势表达,也存在Th1特定转录因子T-bet的优势表达,同时还存在调节性T淋巴细胞(Treg)特定转录因子FOXP3的表达低下.     

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘（哮喘）患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞（PBMC）,用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为（21.96±7.31）ng/ml,（118.73±22.59）pg/ml,明显低于对照组[分别为（64.88±25.27）ng/ml和（145.53±29.50）pg/ml,（均P〈0.01）],哮喘组IL-4（425.22±4.37）pg/ml高于对照组（69.72±10.15）pg/ml,（P〈0.01）。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平（0.12±0.01,0.25±0.04）显著低于对照组（0.48±0.12,1.894±0.65）（均P〈0.01）,GATA-3mRNA表达（0.45±0.05）较对照组明显升高（0.30±0.08）（P〈0.01）。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关（r分别为0.792,0.761,均P〈0.01）;与GATA-3mRNA无明显相关性（r=-0.146,P=0.551）。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。     

重组中国人γ干扰素对小鼠肺损伤的防治作用

目的观察重组中国人γ干扰素(INF-γ)对博莱霉素(BLM)所致小鼠肺损伤(PI)的防治作用。方法75只C57小鼠随机分为对照组、BLM组、BLM+INF-γ小剂量组(0.25μg/d)、BLM+INF-γ中剂量组(0.5μg/d)、BLM+INF-γ大剂量组(1.0μg/d),每组15只。实验组小鼠以BLM诱导PI,分别用不同剂量的INF-γ进行防治。对照组小鼠不进行任何处理。实验结束后处死小鼠分别进行肺羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)测定,用图像分析法计算Ⅰ、Ⅲ型胶原面积与切片面积,肺泡面积与肺视野面积比。结果对照组小鼠肺组织Hyp为(0.65±0.06)μg/mg、BLM组为(0.78±0.08)μg/mg,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组Ⅰ、Ⅲ型胶原为(0.004±0.001)、BLM组为(0.048±0.006),两者比较差异有统计学意义(P<0.01);BLM+INF-γ大剂量组大鼠肺组织Hyp为(0.67±0.08)、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量为(0.008±0.001)与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.01);各组肺泡与肺组织面积比随着INF-γ的剂量增加而增高,分别为1.78、0.12、0.67、0.73、1.65。结论INF-γ能有效抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,减少肺内胶原合成,对PI有一定防治作用。     

咪喹莫特治疗支气管哮喘作用机制的实验研究

目的 研究新型免疫调节剂咪喹莫特对支气管哮喘(简称哮喘)的治疗作用,探讨其可能的作用机制.方法 (1)40只BALB/c小鼠(每组10只)和48只SD大鼠(每组12只)分为对照组、哮喘组、咪喹莫特组和地塞米松组,建立大鼠和小鼠哮喘模型.用卵清白蛋白激发前吸入0.15%咪喹莫特混悬液5 ml.末次激发后24 h观察肺组织炎症及测定气道反应性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、嗜酸粒细胞活化趋化因子(eotaxin)、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、T-bet、GATA-3、信息转导转录激活子6(STAT6)mRNA的表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中eotaxin、MDC、TARC及支气管肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ浓度;用Western blot法测定肺组织中T-bet、GATA-3、STAT6蛋白水平;(2)分离和培养致敏大鼠气管旁淋巴结细胞(PBLN),分为空白对照组、阳性对照组、地塞米松组和药物1～3组,测定不同时间点各组细胞上清液中IL-4、IFN-γ蛋白和细胞的mRNA表达;(3)分离和培养致敏小鼠的脾脏T淋巴细胞,用流式细胞仪测定经咪喹莫特刺激后不同时间点细胞内IL-4、IFN-γ水平;(4)培养致敏大鼠CD+4T淋巴细胞,测定经咪喹莫特干预后T-bet、GATA-3 mRNA和蛋白的表达水平.结果 用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/ml)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3710.83±197.49)cm H20·ml-1·s-1(1 cm H20=0.098 kPa),咪喹莫特组分别为(1.34±0.16)、(3.47±0.49)、(9.29±1.27)、(25.22±5.44)cm H2O·ml-1·s-1,两组相同剂量比较差异有统计学意义(D值分别为88.98、56.00、45.00、108.00,P均＜0.01);哮喘组大鼠气道壁和肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)、支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)分别为(26.0±1.6)、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,咪喹莫特组分别为(12.4±2.9)、(24.2±3.7)个/mm2、9.2±0.6、4.0±0.5,两组比较差异有统计学意义(D和q值分别为193.00、16.92、185.50、7.66,P均＜0.01);哮喘组肺组织中T-bet mRNA和蛋白表达量分别为0.08±0.12、0.18±0.06,咪喹莫特组分别为0.48±0.08、0.48±0.17,两组比较差异有统计学意义(D值分别为120.96、177.98,P均＜0.01);哮喘组肺组织中GATA-3 mRNA和蛋白表达量分别为1.56±0.28、2.25±0.74,咪喹莫特组分别为0.54±0.14、0.50±0.14,两组比较差异有统计学意义(D值分别为166.96、310.97,P均＜0.01);空白对照组24、48 h时PBLN细胞培养液中IL-4、IFN-γ分别为(0±0、0±0、22±5、31±5) pg/ml.随着培养时间的延长,药物2组24、48 h时IL-4、IFN-γ水平分别为(23±5)、(39±11)、(149±31)、(154±28) pg/ml,药物3组24、48 h时IL-4、IFN-γ水平分别为(25±6)、(40±12)、(166±30)、(158±31) pg/ml,与阳性对照组[(43±13)、(56±12)、(100±22)、(112±33) pg/ml)]比较差异有统计学意义(药物2、3组24、48 h时IL-4的D值分别为9.90、8.79、8.80、8.10;药物2、3组24、48 h时IFN-γ的q值分别为4.80、6.40、3.95、4.31,P均＜0.05);哮喘组小鼠BALF中细胞总数及EOS分别为(8.7±1.4)×106 /L、(29.80±7.00)%,咪喹莫特组为(4.1±1.3)×106 /L、(8.90±2.40)%,两组比较差异有统计学意义(q值分别为16.40、7.40,P均＜0.05);哮喘组小鼠血清eotaxin、MDC和TARC水平分别为(593±41)、(170±20)、(221±25) pg/ml,咪喹莫特组分别为(501±76)、(84±13)、(163±35) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(q值分别为3.70、9.80、4.50,P均＜0.05);(4)咪喹莫特组小鼠肺组织eotaxin、MDC、TARC mRNA表达分别为0.65±0.17、0.66±0.12、0.66±0.34,哮喘组分别为0.85±0.11、0.96±0.10、0.94±0.28,对照组分别为0.45±0.08、0.39±0.09、0.24±0.08,哮喘组与咪喹莫特组比较差异有统计学意义(q值分别为1.50、8.10、2.40,P均＜0.05);哮喘组与对照组比较差异有统计学意义(q值分别为3.00、15.40、5.90,P均＜0.05).结论 咪喹莫特可能通过提高转录因子T-bet mRNA\蛋白的表达和抑制转录因子GATA-3和STAT6 mRNA和蛋白表达,使失衡的Th1/Th2细胞得以纠正,从而抑制哮喘气道炎症.     

支气管哮喘大鼠气道重塑中肺泡巨噬细胞的作用

目的研究支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道重塑过程中肺泡巨噬细胞(AM)的变化及其作用。方法48只清洁级雄性幼年SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、哮喘3d组(B组)、哮喘14d组(C组)和哮喘30d组(D组),每组12只。应用鸡卵白蛋白(OVA)建立哮喘大鼠模型,纯化支气管肺泡灌洗液(BALF)中的AM,测定AM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量和基质金属蛋白酶9基因(MMP-9mRNA)及其组织抑制物1基因(TIMP-1mRNA)的表达,并测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算单位基底膜周径(Pbm)的支气管壁厚度(WAt)和平滑肌厚度(WAm)。结果D组WAt和WAm[(85±9)μm2/μm、(28.6±4.9)μm2/μm]与A组[(67±10)μm2/μm、(16.8±2.4)μm2/μm]比较差异有统计学意义(t值分别为2.938、3.227,P均<0.01);D组AM中TNF-α和PGE2含量[(0.68±0.25)μg/L、(0.122±0.030)μg/L]与A组[(0.37±0.09)μg/L、(0.079±0.018)μg/L]比较差异有统计学意义(t值分别为2.683、3.016,P均<0.01),与B组[(0.74±0.29)μg/L、(0.120±0.028)μg/L]、C组[(0.71±0.23)μg/L、(0.117±0.028)μg/L]比较差异无统计学意义(t值分别为1.624、0.472、0.935、0.533,P均>0.05);D组AM中MMP-9mRNA及TIMP-1mRNA含量吸光度(A)值分别为0.346±0.033、0.361±0.040,与C组(0.279±0.015、0.259±0.015)比较差异有统计学意义(t值分别为2.574、2.716,P均<0.01),D组(0.183±0.025)与B组(0.136±0.014)比较差异有统计学意义(t值分别为2.913、3.017,P均<0.01),D组(0.104±0.007)与A组(0.109±0.008)比较差异有统计学意义(t值分别为3.632、3.487,P均<0.01);各组AM中MMP-9mRNA含量与WAt、WAm呈正相关(r值分别为0.693、0.738,P均<0.01),AM中TIMP-1mRNA含量与WAt、WAm呈正相关(r值分别为0.823、0.876,P均<0.01)。结论哮喘大鼠AM及其分泌的一些细胞因子与气道重塑关系密切。     

基于T-bet和GATA-3表达研究特异性免疫治疗对过敏性哮喘患者治疗机制

目的 探讨屋尘螨特异性免疫治疗 (SIT)过程中,转录因子 T-bet 和 GATA-3在外周血单个核细胞 (PBMCs)中的表达变化,分析该治疗方案的作用机制.方法 纳入2015年1月至12月我院收治的过敏性哮喘患者89例,进行回顾性分析,根据治疗方案及转归划分为4组:接受SIT治疗,且显效患者纳为观察 A组,共22例;接受 SIT治疗,且未达显效标准者纳为观察 B组,共12例;未接受 SIT治疗,且显效患者纳为对照 A 组,共15例;未接受 SIT 治疗,且未达显效标准者纳为对照B组,共40例.检测对比4组治疗前、治疗12个月时 PBMCs 中 T-bet和 GATA-3 mRNA 表达水平、外周血Th1和Th2细胞比率.结果 观察 A 组、对照 A 组在治疗后 GATA-3 mRNA、Th2细胞比率明显下降,T-bet mRNA/GATA-3 mRNA、Th1/Th2明显上升,观察 A 组在治疗后 T-bet mRNA、Th1细胞比率明显升高.观察B组在治疗后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、Th1细胞比率、Th2细胞比率明显升高,上述差异均有统计学意义 (P <0.05).②各时点所有患者 T-bet mRNA/GATA-3 mRNA与Th1/Th2均呈显著正相关 (治疗前r=0.811,P=0.004;治疗后r=0.801,P =0.000).检测对比4组治疗前、治疗12个月时PBMCs中T-bet和GATA-3 mRNA表达水平、外周血Th1和Th2细胞比率.结论 仅采用常规疗法,有助于抑制哮喘患者 GATA-3 mRNA 过表达,协同采用特异性免疫治疗则能同时促进T-bet mRNA表达,发挥双向治疗作用,从而提升疗效.     

T淋巴细胞活化衔接子及其调控因子在支气管哮喘患者T淋巴细胞中的表达

目的 探讨T淋巴细胞活化衔接子(LAT)及其上游调控因子(Syk、Lck和ZAP-70)在支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血T淋巴细胞中的转录表达水平是否存在异常.方法 对20例哮喘患者(哮喘组)及20例非特应症对照者(对照组)采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周静脉血T淋巴细胞的LAT及Lck、Syk和ZAP-70 mRNA的表达,有关LAT基因转录的结果通过实时定量RT-PCR法进行验证.统计学处理采用SPSS 11.5软件.数据以-x±s表示.组间比较采用t检验.结果 哮喘组患者外周血T淋巴细胞LAT基因的mRNA表达水平为0.54±0.14,对照组为0.72±0.17,两组比较差异有统计学意义(t=3.11,P＜0.01);实时定量RT-PCR法(0.0065±0.0066)证实哮喘患者外周血T淋巴细胞LAT转录水平较对照组(0.0124±0.0045)下调(t=0.0022,P＜0.01).20例哮喘患者Lek和ZAP-70基因mRNA表达水平分别为0.71±0.16、1.05±0.41,对照组分别为0.53±0.17、0.82±0.27.两组比较差异有统计学意义(t值分别为3.18、2.10,P分别＜0.01、＜0.05);哮喘患者Syk基因mRNA表达水平为1.16±0.42,对照组为1.24±0.34,两组间Syk基因转录水平比较差异无统计学意义(t=0.22,P＞0.05).结论 哮喘患者外周血T淋巴细胞LAT基因转录水平下调可能与上游调控因子Lck和ZAP-70基因转录水平上调有关,LAT及上游调控因子Lck和ZAP-70转录水平异常可能是哮喘发病机制之一.