早期牙髓损伤修复中牙本质涎磷蛋白表达的免疫组化研究

目的：衬步探讨牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP)在早期早贿损伤修复中的作用。方法：制备大鼠牙髓损伤模型,分别对损伤后6h,12h,1d,2d,3d,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色,检测各实验组标本中DSPP的表达。结果：正常大鼠牙髓中仅在成牙本质细胞层有DSPP的阳性着色;牙髓损伤后6h,12h,DSPP在成牙本质细胞层的染色明显减弱;损伤后1-3d,梁色较正常牙增强。此时,牙尖及富细胞区的牙髓细胞也有了性着色;损伤后7d,染色与正常对照无明显差异。结论：DSPP在牙髓损伤的早期阶段表达下调;随后在成牙本质细胞及富细胞区牙髓细胞中表达增强;7d时表达趋于正常。提示：它可能在牙髓损伤早期的自身修复中起作用。     

Notch信号通路在牙髓和牙周细胞矿化及组织损伤修复中的调控作用研究

目的 探讨Notch信号通路在人牙髓细胞(dental pulp cells, DPCs)和牙周韧带细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)向成牙本质/成骨样细胞分化及组织损伤修复中的调控作用.方法 酶消化法分离培养DPCs和PDLCs,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch信号通路相关基因Notch1、Notch2、DLL1和DLL3 mRNA在DPCs和PDLCs矿化诱导过程中表达水平变化;建立大鼠牙髓和牙周联合损伤动物模型,观察4周后牙髓牙本质复合体及牙周附着装置修复情况,免疫组织荧光染色检测Notch1在牙髓和牙周联合损伤修复动物体内模型的表达和分布.结果 DPCs和PDLCs经矿化诱导,Notch1、Notch2、DLL1 mRNA表达均上调,与对照组间的差异有统计学意义(P<0.05);DLL3 mRNA表达上调,与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).免疫荧光示Notch1蛋白在损伤处的新生牙髓及牙周韧带组织细胞浆强表达,而在正常牙髓及牙周韧带组织基本无表达.结论 在DPCs和PDLCs诱导成牙本质/成骨分化的过程中,Notch1、Notch2、DLL1呈现相似的表达变化趋势上调,Notch1信号在牙髓及牙周损伤修复的新生组织明显激活,提示Notch信号通路参与DPCs和PDLCs成牙本质/成骨分化,且在牙髓牙本质复合体和牙周附着装置的损伤修复中起重要的调控作用.     

LIM矿化蛋白1在大鼠牙髓损伤修复中的时空表达

目的:探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达.方法:建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件及单因素方差分析比较各组间的差异.结果:在正常大鼠牙髓组织中LMP-1表达阴性;在大鼠牙髓损伤后1d,LMP-1表达于成牙本质细胞及部分牙髓成纤维细胞;术后3 d,LMP-1表达于坏死牙髓下方的细胞增殖层;术后7d,LMP-1显著表达于增殖活跃的牙髓细胞及部分成牙本质细胞中.结论:LMP-1在牙髓损伤修复过程中呈时空特异性表达,可能参与成牙本质细胞及牙髓细胞的增殖、分化及修复性牙本质的形成.     

Notch 1信号蛋白在大鼠牙胚发育中的免疫组化表达研究

目的通过检测大鼠牙胚发育不同阶段Notch1信号的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法采用免疫组织化学染色技术观测大鼠孕期12、14、16、17、18、19d和出生后1、3、5、7、9d牙胚中Notch1的表达。结果Notch1的表达始于钟状中期。在钟状中晚期，Notch1的表达在牙乳头间充质、成牙本质细胞层呈弱阳性。在内釉细胞层呈阳性。牙体组织形成开始，Notch1则在成釉细胞的中间层有反复表达，在成牙本质细胞层中有一过性表达。牙齿萌出后，该信号在成牙本质细胞和成釉细胞表达均为阴性。结论Notch1在牙胚发育过程中与成釉细胞分化有关，它可能在牙齿发育早期基质触发前成釉细胞向成釉细胞分化中起重要作用。     

大鼠磨牙牙髓组织在程度不同的机械性损伤刺激后HSP70的表达及意义的研究

目的 检测大鼠磨牙在程度不同的机械性钻磨损伤刺激(浅磨、深磨、穿髓)后热休克蛋白70(HSP70)的动态表达。方法 采用"二步法"免疫组化法观察HSP70在正常组、浅磨组、深磨24h组、穿髓24h组、穿髓3d组和穿髓7d组牙髓组织中的表达情况。结果 浅磨组和正常组HSP70在牙髓组织中有个别标本弱阳性着色,与后4组相比P<0.01;深磨24h组可见成牙本质细胞、成纤维细胞阳性表达,血管内皮细胞弱阳性表达;穿髓24h组和3d组表现为急性炎症反应,HSP70在成牙本质细胞、血管内皮细胞、中性粒细胞中均呈强阳性表达,成纤维细胞呈阳性表达;至穿髓7d时为弱阳性表达。结论 在程度不同的钻磨刺激下,HSP70在鼠牙髓组织中的表达有强弱不同的动态变化;HSP70在牙髓损伤修复过程中可能是主要介导牙齿矿化修复的细胞因子之一。     

基质细胞衍生因子1α及其受体CXCR4在牙本质-牙髓复合体损伤修复过程中的表达

目的:通过构建牙本质-牙髓复合体损伤修复动物模型,研究基质细胞衍生因子1α及其受体CXCR4(SDF-1α/CXCR4)在其损伤修复过程中的表达。方法:制备大鼠牙本质-牙髓损伤模型,通过免疫组织化学染色、PCR技术分别对损伤后0、6h和1、3、7d及正常大鼠牙髓标本中SDF-1α/CXCR4进行检测。结果:正常大鼠组牙髓中没有发现SDF-1α、CXCR4阳性表达,实验大鼠组损伤6h后少量的成牙本质细胞和前期牙本质开始出现较弱阳性表达,损伤1d后成牙本质细胞阳性表达增强,损伤3d后牙髓成纤维细胞出现阳性表达,损伤7d后未分化间充质细胞出现阳性表达,大鼠牙髓损伤后SDF-1α、CXCR4随着时间的增加阳性表达程度明显增强。图像分析结果显示,SD大鼠牙本质-牙髓复合体损伤后牙髓中SDF-1α、CXCR4的表达(灰度值)除Oh外其余各组均高于对照组(P<0.05)。PCR结果显示,损伤后大鼠牙髓中SDF-1α、CXCR4均符合产物设计大小。其表达(灰度值)除Oh外其余各组均高于对照组(P<0.05)。结论:大鼠牙本质-牙髓复合体损伤后,前期牙本质、成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞和未分化间充质细胞对SDF-1α、CXCR4的表达呈时间依赖性,提示SDF-1α、CXCR4可能参与了修复性牙本质的形成。     

Notch-2在大鼠牙髓炎中的时空分布及其意义

目的:研究单纯开髓导致大鼠牙髓炎进程中Notch-2在牙髓损伤修复中的作用.方法:通过开髓建立大鼠牙髓炎模型,用免疫组织化学染色方法研究Notch-2的时空表达变化及其意义.结果:牙髓损伤早期(3 d),牙髓间充质细胞和牙髓成纤维细胞中Notch-2均呈弱阳性表达,成牙本质细胞为阴性表达.牙髓损伤中期(5 d),靠近损伤区的成牙本质细胞深层细胞Notch-2阳性表达达到高峰;同时,新生毛细血管内皮细胞呈强阳性表达.牙髓损伤晚期(7 d),Notch-2在牙髓间充质细胞、血管内皮细胞中表达均减弱,而在成牙本质细胞阳性表达达到高峰.牙髓损伤末期(14 d),Notch-2仅在成牙本质细胞下层细胞中尚有微弱表达,而其余牙髓细胞均为阴性表达.对照组正常牙髓组织Notch-2表达为阴性.结论:Notch-2在牙髓损伤应激情况下在牙髓间充质细胞和成牙本质细胞中上调表达,对于启动牙髓自我修复、诱导牙髓间充质细胞功能性分化以及抑制受损成牙本质细胞凋亡、维系和调动其相对正常的生理功能可能具有重要作用.     

大鼠磨牙钻磨后牙髓中肌动蛋白表达的研究

目的：探讨肌动蛋白在大鼠正常牙髓及钻磨刺激后牙髓中的分布变化。方法：建立大鼠磨牙牙髓损伤模型，用免疫组化方法观察正常牙髓及钻磨后2h～14d牙髓中肌动蛋白的分布情况。结果：正常组成牙本质细胞及血管内皮细胞阳性；钻磨刺激2h组，穿髓点附近的成牙本质细胞转为阴性，血管内皮细胞及管周细胞强阳性；8h--5d各组可见强阳性血管在牙髓中分布并始终位于炎症发展的前沿区。结论：肌动蛋白对维持成牙本质细胞排列方式及正常生理功能有重要作用；其在血管内皮细胞及管周细胞的表达上调可能与牙髓损伤的早期修复有关。     

Notch_2-Delta在体外人牙髓细胞分化中的表达及调控

目的　探讨Notch信号在体外牙髓细胞向成牙本质样细胞分化过程中的作用。方法　人牙髓细胞体外连续培养,采用免疫组化染色及Western blot方法对该过程中人牙髓细胞Notch2-Delta的表达及rhBMP-2对Delta 表达的影响进行定性及半定量研究。结果　体外牙髓细胞增殖、分化过程中有Notch2-Delta的表达,随细胞增殖、分化状态的不同,二者表达的部位及表达强度发生变化,外源性rhBMP-2在牙髓细胞结节形成后期可上调Delta的表达。结论　Notch信号途径参与了体外牙髓细胞向成牙本质样细胞分化过程,其介导的细胞间相互作用可能是控制牙髓细胞对信号分子反应性的机制。     

热休克蛋白70在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的　研究内毒素 (LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中诱导型热休克蛋白 (HSP) 70在不同时间动态表达及定位情况 ;推测其在牙髓炎发生、发展中的意义。方法　通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织进行连续切片 ,同时行超敏免疫组化分析。结果　 1d组、3d组HSP70在成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈强阳性表达 ,成牙本质细胞呈中度阳性表达 ,随后表达逐渐减弱 ,至 2周修复期为弱阳性表达。 2周以后 ,成牙本质细胞 ,前期牙本质细胞层仍有阳性表达。 3周、4周以后 ,成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达。 5周以后 ,牙髓组织变性、坏死 ,呈均质弱阳性染色。结论　HSP70在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞 ,限制炎症发展 ,在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

小鼠切牙损伤对成牙本质细胞Notch表达和细胞凋亡的影响

目的:观察小鼠切牙机械损伤后成牙本质细胞(OB)的Notch表达及细胞凋亡情况,分析Notch信号与OB细胞凋亡的可能关系。方法:小鼠下颌切牙牙冠远中颈部机械备洞制造牙齿损伤,损伤后1、3、5、7 d取材,用免疫组织化学染色方法检测OB细胞Notch1、Notch2表达情况,用TUNEL染色法观察OB细胞凋亡情况。结果:机械损伤可激活OB细胞Notch表达并呈动态变化:损伤后1 d,Notch1、Notch2呈阳性表达;损伤后3d,Notch1、Notch2表达最明显,呈强阳性;损伤后5 d,Notch1、Notch2仍呈阳性表达;损伤后7 d,Notch1、Notch2表达均减弱。对照组OB细胞Notch1、Notch2仅有微弱表达。细胞凋亡检测显示:对照组OB层仅见零星凋亡细胞;损伤组的近损伤区凋亡细胞明显增多。OB细胞凋亡在损伤后1 d最多,损伤后3~7 d逐渐减少。以上说明:机械损伤导致OB层细胞凋亡和Notch表达激活伴行出现,前者1 d最明显,后者3 d达高峰。结论:小鼠切牙机械损伤后成牙本质细胞Notch信号表达激活并可能与细胞凋亡调控存在联系。     

血红素氧合酶-1在大鼠牙髓炎中表达的实验研究

目的:研究血红素氧合酶-1(HemeOxygenase-1,HO-1)在大鼠实验性牙髓炎不同时间点的表达及定位情况,探讨HO-1在牙髓炎发生发展过程中的可能作用。方法:单纯开放法建立大鼠牙髓炎模型,采用HE染色和免疫组织化学染色观察单纯开髓1天,3天,6天,9天后牙髓组织病理学改变和HO-1的表达情况。结果:HO-1在大鼠正常牙髓组织的成牙本质细胞及成纤维细胞中有弱阳性表达,在牙髓炎1天组成牙本质细胞和成纤维细胞中呈阳性表达,在血管内皮细胞中有弱阳性表达,其余时间点牙髓组织呈现阴性表达。结论:HO-1主要是在牙髓炎早期被诱导表达,参与抗炎反应,保护组织细胞。     

大鼠正畸牙移动中牙髓iNOS表达的免疫组化研究

目的:建立大鼠正畸牙移动模型,观察牙髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及分布,探讨正畸牙移动过程中牙髓改建的分子机制。方法:采用免疫组织化学方法对正畸加力后12h、1d、3d、7d和14d大鼠牙髓组织中iNOS进行检测,观察iNOS的时空分布。结果:iNOS阳性反应的产物呈深褐色均质沉淀,主要在血管内皮细胞、成牙本质细胞胞浆核周区颗粒状阳性表达。这种染色在正畸加力后12h、1d、3d天有不同程度的增强,3d达到高峰,加力后7d和14d表达减弱,第14d与对照组无明显差异。结论:正畸牙移动过程中牙髓组织iNOS的表达先升高后逐渐恢复正常,提示iNOS可能在正畸牙移动牙髓组织改建过程中起重要作用。     

神经生长因子在大鼠牙髓炎症中的作用的实验研究

目的 探讨神经生长因子（NGF）在牙髓炎症中的作用。方法 建立大鼠磨牙内毒素炎症模型后,进行NGF的免疫组化染色。结果 经开髓和内毒素处理后12h－3d,冠髓内牙髓细胞表达NGF明显增加,5d反恢复正常。结论 NGF参与牙髓炎症过程,可能与牙髓炎的激发痛症状相关。     

大鼠磨牙矿物三氧化物凝聚体直接盖髓术后牙髓组织中转化生长因子-β1表达变化研究

目的 观察大鼠磨牙应用矿物三氧化物凝聚体（MTA）直接盖髓术后牙髓组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达变化及其在牙髓损伤修复中的作用。方法 本研究于2012年10月至2013年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。28只雌性Wistar大鼠第一磨牙机械穿髓后用MTA直接盖髓,并以对侧第一磨牙为对照,分别于术后1、3、5、7、14、21、28 d处死动物并取材（每次处死4只）,进行免疫组化染色,观察TGF-β1在牙髓组织的动态表达和定位情况,用图像分析软件测定各组标本中TGF-β1阳性染色的光密度值。结果 在正常牙髓组织中TGF-β1基本无表达,MTA直接盖髓后TGF-β1表达强度呈先升高后降低的基本变化,其中盖髓后5 d 的TGF-β1表达最强,21 d时接近正常水平。表达主要位于盖髓剂下方中性粒细胞、成牙本质细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞。结论 MTA直接盖髓后,TGF-β1可能参与牙髓的损伤修复过程。     

Fas/FasL在牙髓炎症过程中的分布及意义

目的：观察Fas/FasL基因及其蛋白在正常牙髓和炎症牙髓中的表达和分布，探讨其在牙髓炎症过程中的作用机制。方法：采用免疫组织化学染色及原位杂交方法。结果：正常牙髓组织中Fas表达量不高，FasL呈阴性表达，而在牙髓炎症过程中两者均有阳性表达，且其组织细胞的分布与TUNEL法的结果相似。结论：牙髓炎症过程中的细胞凋亡可能是通过Fas介导的LPS等一些因素可能使牙髓组织细胞膜上的Fas和FasL的表达量增加，从而通过其介导的信号转导途径引起细胞凋亡。