RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用

目的 探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786 0增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响.方法 构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组.应用RT-PCR技术检测786-0细胞p38 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达.CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-0细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低.与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3～5 d时的增殖率均降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1) μmol/mL vs (5.4±0.2)μmol/mL,P＜0.05].siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞.转染24 h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降(P＜0.01).结论 通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础.     

miR-21下调程序性死亡细胞4对抑制裸鼠肾细胞癌肿瘤转化和增殖的实验研究

目的研究微小核糖核酸-21(miR-21)下调程序性死亡细胞4(PDCD4)对裸鼠肾细胞癌的影响和关系。方法将24只BALB/c雄性裸鼠按随机数字表法分为以下3组:阴性对照(NC组,n=8)、miR-21模拟物组(n=8)和miR-21抑制剂组(n=8)。将肾细胞癌786-0细胞皮下移植到小鼠的腋下,然后每天注射NC小干扰RNA(siRNA),前体-miR-21(模拟物)或抗-miR-21(抑制剂)。786-0细胞移植后16 d,从小鼠中取出肿瘤并称重。使用逆转录一定量PCR分析癌组织中miR-21和PDCD4 mRNA的表达。采用免疫组织化学和Western blot检测PDCD4蛋白在癌组织中的表达,用PDCD4 siRNA或NC siRNA转染786-0细胞,观察沉默PDCD4对肿瘤细胞生长、增殖和侵袭的影响。雌性软琼脂克隆形成、EdU细胞增殖测定和Transwell迁移和侵袭测定。另取16只BALB/c雄性裸鼠随机分为2组:NC(n=8)和PDCD4 siRNA(n=8)。将786-0细胞皮下移植到小鼠的腋下,每天注射NC siRNA或PDCD4siRNA。移植后16 d取出肿瘤并称重。结果与NC组相比,miR-21模拟组的肿瘤重量显著增加,miR-21抑制剂组中的肿瘤重量显著降低(P<0.01)。裸鼠肾癌模型中的miR-21表达在miR-21模拟组中显著上调,与NC组相比显著降低(P<0.01)。在miR-21抑制剂组中,miR-21模拟组PDCD4蛋白水平显著降低,miR-21抑制剂组显著增加(P<0. 01),而PDCD4 mRNA表达没有显著改变(P>0.05)。在EdU增殖测定中,NC siRNA组中的新细胞合并EdU的平均百分比为28.6%,并且在PDCD4 siRNA转染的细胞中显著增加至44.7%(P <0. 05)。在软琼脂克隆形成实验中,Transwell和迁移和侵袭实验显示,PDCD4 siRNA转染细胞的集落形成、迁移和侵袭能力显著增加,与NC组相比,肿瘤重量在PDCD4 siRNA组中显著增加(P<0.01)。结论 miR-21可促进裸鼠肾癌模型癌细胞增生和增殖,转录后下调PDCD4蛋白表达可抑制癌细胞增生和增殖,提示增加PDCD4表达或抑制miR-21表达可能成为治疗肾癌的有效新治疗策略。     

尼克酰胺对肾癌786-0细胞的作用及意义

目的:探讨尼克酰胺对肾癌786-0细胞生物学行为的影响。方法:不同浓度尼克酰胺(10、20、30 mmol/L)处理肾癌786-0细胞;细胞计数法测定细胞增殖,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell小室检测尼克酰胺对肾癌786-0细胞迁移及含基质胶的Transwell小室检测尼克酰胺对肾癌786-0细胞侵袭、Western blot检测P53和沉默信息调节因子(SIRT)1的蛋白表达。结果:尼克酰胺呈浓度-依赖性抑制786-0细胞的增殖和侵袭能力,并促进其凋亡。结论:尼克酰胺可抑制肾癌786-0细胞增殖、迁移、侵袭,并可能通过抑制SIRT1上调P53促进786-0细胞凋亡。     

RNA干扰抑制细胞外基质COL6A1基因表达对肾癌786-0细胞增殖和侵袭的影响

研究小干扰RNA(siRNA)抑制COL6A1基因表达对肾癌786-0细胞增殖和侵袭能力的影响。设计合成靶向COL6A1基因的siRNA,瞬时转染肾癌细胞株786-0,利用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测RNA干扰后COL6A1基因沉默效果,在RNA干扰后1、2、3天应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;应用transwell小室侵袭实验检测肾癌细胞侵袭能力。靶向COL6A1的siRNA成功抑制肾癌细胞株786-0中COL6A1信使RNA(mRNA)及蛋白表达(P<0.05),经MTT测定,肾癌细胞生长受到抑制(P<0.05);transwell小室侵袭实验表明,COL6A1被抑制后,肾癌穿膜细胞数明显减少,侵袭力降低(P<0.05)。应用siRNA技术可有效地抑制COL6A1基因的表达,抑制786-0细胞的体外增殖和侵袭。     

沉默CML66基因对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的探讨应用siRNA(small interfering RNA)沉默慢性粒细胞白血病肿瘤抗原66基因(CML66)对人肾癌786-O细胞生物功能及对LIS1/Dynein信号通路的影响。方法将CML66-siRNA予以应用脂质体转染方法转染入人肾癌786-O细胞中,采用蛋白质印迹法检测转染CML66-siRNA后,检测786-O细胞CML66、LIS1和Dynein蛋白的表达。采用CCK8增殖法检测肾癌细胞的增殖水平;采用Transwell法及Matrigel法检测肾癌细胞的迁移、侵袭能力。结果与对照组比较,转染CML66-siRNA后,肾癌细胞中CML66、LIS1和Dynein蛋白表达下降(P0.01)。siRNA-CML66组转染2、3、4 d后细胞增殖能力较对照组显著降低(P0.05)。siRNA-CML66转染组中肾癌细胞侵袭及迁移能力较对照组亦明显减弱(P0.01)。结论 CML66在786-O细胞中高表达,沉默CML66能够降低肾癌细胞的迁移、侵袭及增殖能力,其机制可能与LIS1/Dynein信号通路有关。     

腺病毒重组人白细胞介素24对肾癌细胞株786-O 细胞生长和凋亡的影响

目的探讨腺病毒重组人白细胞介素24(IL-24)对肾癌细胞株786-O细胞的生长和凋亡的影响。方法将培养的肾癌细胞株786-O细胞随机分为空白对照组、阴性对照组(转染腺病毒重组人IL-24对照组)及实验组(转染腺病毒重组人IL-24组)。取对数生长期肾癌细胞株786-O,构建腺病毒重组人IL-24及对照并转染至肾癌细胞株786-O实验组细胞及阴性对照组细胞。使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测肾癌细胞株786-O生长能力;采用流式细胞术检测肾癌细胞株786-O凋亡情况;应用Western Blot检测肾癌细胞株786-O中MMP-9蛋白的表达水平。结果实验组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞表面磷脂酰丝氨酸表达水平高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞中MMP-9蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力、细胞膜表面磷脂酰丝氨酸表达水平、MMP-9蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染腺病毒重组人IL-24可抑制肾癌细胞株786-O细胞的生长并诱导细胞凋亡,腺病毒重组人IL-24可能通过下调MMP-9诱导肾癌细胞株786-O细胞的凋亡。     

hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响

目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的-类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性.本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinorna,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响.方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)Ty法检测hepaCAM mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比heP-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6 d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P＜0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6 ±5.3(实验组)、35.5 4±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01).结论:抑癌基闪hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性.     

慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖?迁移和凋亡的影响?【方法】 构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株?实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)?CLU-RNAi-LV2(KD2)?CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)?应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化?用细胞划痕实验?MST-1?流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖?迁移?凋亡等生物学行为的改变?【结果】 成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒?Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1?KD2?KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%~96.5%和0?Western blot结果显示KD1?KD2?KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%?46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达?划痕实验显示24 h时 KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43 ± 25.92)小于NC组(101.35 ± 6.05)和CON组(68.13 ± 6.64,P < 0.05)?WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P < 0.05),各组间差异(P < 0.05),均有统计学意义?流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组?CON组细胞凋亡率分别为(6.23 ± 2.51)%?(1.05 ± 0.30)%和(1.17 ± 0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组?CON组相比凋亡率增加(P < 0.05),差异有统计学意义?肾癌786-O细胞的增殖?迁移受到抑制,而凋亡率增加?【结论】 筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株?CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖?迁移并促进细胞凋亡?     

缺氧对786-0细胞体外黏附和迁移能力的影响

目的:探讨缺氧条件下肾癌786-0细胞体外黏附和迁移能力的变化.方法:将786-0细胞分别置于正常氧(37℃体积分数为5%CO2和21%O2饱和度,正常组)和缺氧(37℃体积分数为10%O2、5%CO2及85%N2,缺氧组)环境中培养,采用MTT法和Boyden小室法检测2组细胞的黏附能力和侵袭能力.结果:正常组786-0细胞的黏附率为(71.6±6.1)%,与缺氧组的(84.2±4.4)%相比,差异有统计学意义(t=3.748,P=0.006).缺氧组786-0细胞的穿膜细胞数为(48±6),高于正常组的(28±5)(t=5.722,P=0.001).结论:缺氧条件下肾癌786-0细胞的黏附和迁移能力增强.     

游离脂肪酸通过刺激整合素连接激酶表达促进肾癌786-O细胞增殖

目的:探讨游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)异常对人肾癌786-O细胞增殖以及整合素连接激酶(inte-grin-linked kinase,ILK)蛋白表达的影响。方法:分别用0、0.05、0.1和0.2 mmol/L的油酸(oleic acid,OA)作用人肾癌786-O细胞48 h,其中0 mmol/L组作为对照组。利用MTT方法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Western blot方法检测各组细胞中ILK、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果:MTT检测结果显示,0.05、0.1和0.2 mmol/L OA组与对照组相比,细胞增殖活性显著增高(光密度0.657±0.056、0.682±0.028、0.718±0.042 vs.0.495±0.034,P均<0.001);而不同浓度的OA对786-O细胞的凋亡作用并不明显(凋亡率2.42%±0.25%vs.2.33%±0.87%vs.2.25%±0.51%,P=0.082);与对照组相比,OA组中的ILK、p-Akt蛋白表达显著上调。结论:FFAs通过刺激ILK/Akt通路可促进细胞增殖,可能与肾癌发生有关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …