乐尔脉对脑缺血再灌注中期大鼠海马神经细胞凋亡作用与机制

目的探讨乐尔脉对脑缺血再灌注损伤中期大鼠海马神经细胞凋亡和Fas、Bax表达的作用与机制。方法采用大鼠右侧大脑中动脉内栓线阻断法（MCA（））造成局灶性脑缺血再灌注模型,凋亡细胞原位未端标记法（TUNEL）检测海马神经细胞凋亡,免疫组化与逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测大鼠海马Fas、Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达,并进行图像处理分析结果。结果在缺血再灌注损伤海马组织可检测到较多的凋亡细胞,主要分布在CA1区。海马Fas mRNA表达上调,海马CA,区锥体层神经元、胶质细胞、室管膜细胞Fas蛋白表达均明显增加,与凋亡呈同样趋势。海马Bax mRNA上调,但与假手术组比较无统计学意义（P〉0．05）,Bax蛋白水平却显著增加,下游Caspase-3、Caspase-9 mRNA显著上调。乐尔脉和氟桂利嗪可明显降低缺血再灌注损伤大鼠海马神经元细胞凋亡．降低Fas mRNA和Fas蛋白表达,但不降低Bax mRNA和Bax蛋白表达。结论乐尔脉限制和减少脑缺血再灌注损伤中期神经细胞凋亡的发生和发展,对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与乐尔鼠、降低海马Fas mRNA表达而抑制神经细胞凋亡有关。     

消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响

目的：观察消栓肠溶胶囊对慢性脑低灌注大鼠皮层神经元损伤的影响。方法采用随机数字表完全随机化将大鼠分为假手术组12只，模型组17只，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组各15只。采用双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)法制备大鼠慢性脑低灌注模型。造模后2 h开始灌胃给药，消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组分别灌胃消栓肠溶胶囊混悬液420、140、47 mg/kg，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次/d，连续给药40 d后取材。采用免疫荧光染色法检测皮层神经元特异性核蛋白(NeuN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达。采用生化法检测皮层组织GSH-PX、SOD 及 MDA 水平。结果与模型组比较，消栓肠溶胶囊大、中剂量组大鼠皮层神经元NeuN阳性表达[(8716.86±2539.93)、(9549.31±1663.26)比(7297.05±1932.49)]增强(P＜0.05或 P＜0.01)、GSH-PX 水平[(7.37±1.08)U/mg、(7.77±3.26)U/mg比(3.67±2.52)U/mg]升高(P＜0.05)；消栓肠溶胶囊大、中、小剂量组大鼠皮层 Caspase-3阳性细胞数[(11.65±2.68)个/mm2、(14.05±4.55)个/mm2、(12.60±4.56)个/mm2比(16.80±5.41)个/mm2]减少(P＜0.05或 P＜0.01)、皮层组织 MDA 水平[(1.44±0.40)nmol/mg、(1.96±1.13)nmol/mg、(2.12±1.19)nmol/mg 比(3.19±0.98)nmol/mg]降低(P＜0.05或 P＜0.01)，SOD 水平[(555.61±92.45)U/mg、(607.90±228.45)U/mg、(515.98±184.01)U/mg比(348.12±108.84)U/mg]升高(P＜0.05或P＜0.01)。结论消栓肠溶胶囊减轻慢低脑灌注引起的神经元损伤与改善脑组织自由基代谢关系密切。     

醒脑启智胶囊药物血清对缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响

脑发生缺血缺氧损伤时常出现神经元迟发性死亡[1],其主要机理是细胞凋亡[2],而细胞凋亡受基因调控.前期行为学研究已经表明,醒脑启智胶囊(XNQZ)对脑缺血再灌注学习记忆障碍模型小鼠的学习记忆障碍有明显的改善作用[3],XNQZ药物血清能明显减轻缺血缺氧、缺糖、钙离子、谷氨酸、一氧化氮、自由基对PC12细胞的损伤[4-9].为了进一步探讨XNQZ对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制,运用流式细胞术(FCM)和末端标记法(TUNEL),观察了XNQZ药物血清体外抑制PC12细胞凋亡作用.     

羟基红花黄色素A保护缺氧缺糖再灌注诱导PC12细胞损伤及对基质金属蛋白酶-9的影响

 目的探讨羟基红花黄色素A对缺氧缺糖再灌注诱导肾上腺嗜铬细胞瘤细胞损伤的保护作用及基质金属蛋白酶-9表达的影响。方法以肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺氧缺糖再灌注损伤模拟脑缺血再灌注损伤,四甲基偶氮唑蓝法检测肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的存活率,乳酸脱氢酶法检测肾上腺嗜铬细胞瘤细胞死亡率,Hoechst33342检测肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡;细胞免疫化学法检测肾上腺嗜铬细胞瘤细胞经缺氧缺糖再灌注诱导后基质金属蛋白酶-9表达。结果缺氧缺糖再灌注可诱导肾上腺嗜铬细胞瘤细胞损伤,与正常对照组相比,缺氧缺糖4h-再灌注2h组细胞存活率为（75.5±3.7）%,明显降低（P<0.01）。四甲基偶氮唑蓝法、乳酸脱氢酶法及Hoechst33342染色结果显示,1μmol·L^-1羟基红花黄色素A预处理能增加缺氧缺糖再灌注诱导后肾上腺嗜铬细胞瘤细胞存活率（90.8±7.6）%,降低细胞乳酸脱氢酶释放率（109.5±7.0）%,同时减少肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡率（19.7±7.5）%,与模型组（缺氧缺糖4h再灌注2h）相比,均具有显著性差异（P<0.01）。基质金属蛋白酶-9经缺氧缺糖再灌注处理后能产生诱导表达,而羟基红花黄色素A能抑制其表达。结论羟基红花黄色素A对缺氧缺糖再灌注诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞损伤具有明显保护作用,能减少细胞凋亡,其机制可能与抑制基质金属蛋白酶-9的诱导表达有关。     

银杏内酯对PC12细胞缺糖损伤凋亡相关基因的影响

目的：考察银杏内酯对缺糖引起的PC12细胞损伤的保护作用及对凋亡相关基因表达的影响,探讨银杏内酯对中枢神经系统的保护机制。方法：缺糖培养引起PC12细胞损伤,分别加入100,10,1,0.1 mg·L^-1的银杏内酯,MTT法检测给药前后与正常组的细胞活力变化,实时荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR, FQ-PCR)法分析各组抑制凋亡基因(Bcl-2),凋亡诱导基因(Bax)及原癌基因(c-myc)的表达情况。结果：缺糖培养早期12 h时,银杏内酯给药使Bcl-2表达量增高,Bax和c-myc表达量降低；缺糖培养24 h时,银杏内酯仅能引起c-myc的表达量下降。结论：在细胞缺糖损伤早期,银杏内酯通过调节凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-myc产生细胞应激保护效应,在损伤晚期主要通过调节c-myc的表达量产生应激保护效应。     

舒络粉针剂对PC12细胞缺氧、缺糖损伤的保护作用

目的探讨舒络粉针剂对PC12细胞缺糖、缺氧损伤模型的影响.方法用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)、无糖Earle′s液复制PC12细胞缺氧、缺糖模型,通过MTT染色和乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定研究舒络粉针剂对PC12细胞的保护作用.结果含舒络血清不同程度的抑制Na2S2O4、无糖Earle′s液造成的缺氧、缺糖样损伤,降低LDH的漏出.结论舒络粉针剂对缺氧、缺糖引起PC12细胞损伤具有保护作用.     

通窍化栓颗粒对脑缺血细胞损伤的抗凋亡作用研究

目的:探讨通窍化栓颗粒对大鼠脑缺血细胞损伤的抗凋亡作用及其机制。方法:采用H_2O_2建立PC12细胞损伤模型,通过MTT法检测计算通窍化栓颗粒含药血清对PC12细胞损伤模型的抗凋亡作用。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,观察脑缺血损伤后脑水肿、HE染色情况,并检测大脑Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:通窍化栓颗粒能抑制H_2O_2损伤的PC12细胞的调亡(P0.05),并可以减轻局灶性脑缺血模型大鼠脑水肿程度及脑灶性区域神经细胞结构病理损伤(P0.05),研究还发现通窍化栓颗粒给药组大鼠脑组织中Bcl-2阳性的细胞密度均显著增多(P0.05),Bax阳性细胞密度显著减少(P0.05)。结论:通窍化栓颗粒能改善脑缺血后的脑水肿症状、抑制脑缺血后神经细胞的凋亡,其作用机制可能与促进脑组织Bcl-2、抑制Bax表达有关。     

复方脑康胶囊对PC12细胞的促进增殖和对缺血样损伤的保护作用

目的研究复方脑康胶囊对PC12细胞的促进增殖和对损伤的保护作用。方法以PC12细胞为实验模型,通过形态学观察、MTT自动微量法检测及乳酸脱氢酶(LDH)活性检测,考察复方脑康胶囊水提取液对PC12细胞的增殖影响和对缺血样损伤的保护作用。结果复方脑康胶囊水提取液能不同程度地促进PC12细胞的增殖,降低NaCN加缺糖对细胞造成的缺血样损伤。结论复方脑康胶囊具有促进PC12细胞增殖的作用,并对损伤细胞具有保护作用。     

聪圣胶囊对拟缺血再灌注大鼠原代培养皮层神经细胞的保护作用

目的：研究聪圣胶囊对大鼠原代培养皮层神经细胞拟缺血再灌注损伤的影响。方法：采用血清药理学和流式细胞仪的方法，观察聪圣胶囊含药血清对缺糖缺氧（3h）拟缺血再灌注（0，3，6，18h）损伤神经细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出及神经细胞凋亡率的影响。结果：聪圣胶囊含血清（2，4，8g/kg）可抑制缺糖-缺氧3h再灌（0，3，6和18h）引起的神经细胞内LDH的释放。降低缺糖-缺氧3h再灌18h导致的凋亡细胞率。结论：聪圣胶囊可减轻缺血性脑损伤。     

小胶质细胞缺氧再复氧模型的建立方法

目的建立小胶质细胞体外缺血再灌注模型,并观察小胶质细胞生存活性、炎症因子表达的变化。方法体外培养小鼠小胶质细胞BV2,三气培养箱中1％氧气缺氧12h再复氧12h模拟脑缺血再灌注损伤,用MTT比色法检测细胞生存活性,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度变化,实时荧光定量PCR检测细胞环氧酶-2（COX-2）mRNA的表达。结果缺氧12h再复氧12h可造成小鼠小胶质细胞活化损伤,模型组A值明显低于正常组（P％0．01）,TNF—α浓度、COX2mRNA的表达明显高于正常组（P％0．01）。结论成功建立小胶质细胞体外缺血再灌注模型。     

当归挥发油通过抑制自噬减轻拟缺血再灌注神经细胞损伤

目的:探讨自噬在拟缺血再灌注损伤神经细胞中的作用以及当归挥发油对自噬的影响。方法:采用"缺糖-复糖"结合"缺氧-复氧"的方法,在体外用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)处理高分化PC12细胞,模拟"缺血再灌注"损伤,用CCK-8比色法检测当归挥发油对细胞增殖的影响,AO荧光染色观察自噬细胞形态,Western-blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5、LC3B-Ⅱ的表达。结果:在6.25~25μg/ml的浓度范围内,当归挥发能够显著提高PC12细胞存活率,减少受损细胞酸性自噬泡的数量,25μg/ml的当归挥发油能够抑制自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5、LC3B-Ⅱ的表达。结论:当归挥发油可能通过抑制自噬减轻拟缺血再灌注神经细胞的损伤。     

三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察三化汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP-9 mRNA表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、三化汤低、高剂量组(7.2,14.4 g·kg-1) ig、尼莫地平组(8.1 mg·kg-1)ig.大鼠常规饲养3d后ig给药,每日1次,连续给药7d后采用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型.采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织MMP-9的表达,采用逆转录聚式酶链反应法(RT-PCR)检测脑组织MMP-9 mRNA的表达.结果:模型组脑组织MMP-9,MMP-9mRNA表达显著升高(P＜0.01);三化汤高剂量组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达显著降低(P＜0.01),尼莫地平组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达也明显降低(JP＜0.05),三化汤低剂量组脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达降低不明显;三化汤高剂量组降低脑组织MMP-9,MMP-9 mRNA表达较尼莫地平组明显.结论:三化汤对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

黄芪水煎剂对肾缺血再灌注损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪水煎剂(AE)对肾缺血再灌注损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响及机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注损伤组(IR)及IR+不同剂量(0.5、1.0、2.0g/kg)AE预处理组(每组8只),夹闭双侧肾动脉45min再灌注6h后采用原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管细胞凋亡,荧光试剂盒检测肾组织Caspase 3活性;实时定量PCR法检测Bcl-2、Bax mRAN表达。结果:与Sham组相比,IR组凋亡细胞数、Caspase 3活性及Bax mRNA表达均显著升高,而Bcl-2 mRNA表达明显降低(P0.05);AE预处理组凋亡细胞数、Caspase 3活性及Bax mRNA表达均明显减少,而Bcl-2mRAN表达明显升高(P0.05)。结论:AE能显著抑制IR大鼠肾小管细胞凋亡,机制可能与其调节Bcl-2、Bax表达有关。     

清开灵有效组分调控大鼠脑MVEC缺血再灌注损伤MMP-9mRNA表达的研究

目的:观察大鼠脑微血管内皮细胞缺血再灌注损伤MMP-9表达的影响,探讨清开灵有效组分保护血脑屏障阻抑脑缺血再灌注损伤的作用途径。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,采用RT-PCR方法半定量检测MMP-9mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组MMP-9mRNA表达明显增加(P<0.01);与模型组比,黄芩苷及新清开灵复方显著降低MMP-9mRNA的表达(P<0.05)。结论:清开灵有效组分可能通过减少血脑屏障内皮细胞MMP-9mRNA表达而阻抑脑缺血损伤炎症反应。     

黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用

目的观察黄芩苷对神经细胞缺氧缺糖-再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷治疗脑缺血-再灌注损伤的作用机制。方法选用SH-SY5Y神经细胞,采用缺氧-复氧结合缺糖-复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血-再灌注损伤,观察黄芩苷对此损伤的治疗作用。结果缺氧、缺糖8h结合复氧、复糖12h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞线粒体的活性下降,凋亡率明显上升;而黄芩苷可以显著减轻上述损伤。结论黄芩苷对缺氧、缺糖-再灌注损伤的神经细胞有保护作用。     

血管活性肠肽对脑缺血再灌注损伤模型大鼠P-选择素的影响

目的通过活体实验研究体外注射血菅活性肠肽（VIP）对脑缺血再灌注损伤模型大鼠P－选择素动态变化的影响,探讨VIP在缺血再灌注炎症损伤中的神经保护作用。方法模型组大鼠侧脑室注射VIP后,用线栓法制作大鼠大脑中动脉再灌注（MCA0）模型。通过神经学的评价对MCAO大鼠进行判定和筛选;选取再灌注后12h、24h、48h和72h共4个时间点,采用原位杂交法检测P－选择素mRNA的表达;应用免疫组化检测P－选择素蛋白表达。结果模型组大鼠VIP注射后P－选择素mRNA和蛋白在脑缺血再灌注后较对照组表达下降;且在各时间点与非VIP注射的对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论VIP脑内注射可明显降低脑缺血再灌注后缺血区P－选择素tuRNA和蛋白的表达,降低再灌注炎症损伤程度。本实验提示VIP具有体外神经保护作用。     

琐琐葡萄总黄酮对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞Bax表达的影响

目的研究琐琐葡萄总黄酮(Flavones from Vitis viniferal L,VTF)对Aβ25-35诱导PC12细胞Bax表达的影响。方法体外培养PC12细胞,分为5组,对照组正常培养,模型组加入20μmol·L-1Aβ25-35作用24h建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,实验组分别加入20,40,80mg·L-1浓度VTF干预24h,通过检测细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放,观察细胞损伤情况,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Bax mRNA表达,Western bolt检测Bax蛋白表达。结果模型组较对照组细胞活性降低,LDH释放增加(P0.01),Aβ25-35诱导PC12细胞明显损伤,VTF实验组与模型组比较,细胞活性增加,LDH释放减少,有显著差异(P0.05);与模型组比较,给药组Bax表达下降(P0.01)。结论 VTF通过调节Bax表达,对Aβ25-35诱导的细胞损伤有保护作用。     

脑溢安对脑缺血大鼠脑组织MMP-2，9表达的影响

目的观察脑溢安对脑缺血大鼠脑组织的基质金属蛋白酶（MMPs）表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,免疫组化染色检测脑组织MMP-2．9蛋白的表达。结果脑缺血组大鼠伤侧脑组织基质金属蛋白酶（MMP-2,9）的表达水平明显高于假手术组（P〈0．05）。治疗组基质金属蛋白酶（MMP-2,9）的表达水平明显低于脑缺血组（P〈0．05）。结论脑溢安能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-2,9蛋白表达,减轻缺血再灌注损伤。     

参地补肾胶囊含药血清对高糖诱导转分化HK-2细胞ZO-1、α-SMA表达的影响

目的:通过观察参地补肾胶囊含药血清对高糖诱导转分化的人肾小管上皮(HK-2)细胞ZO-1(紧密连接蛋白)、α-SMA(α平滑肌肌动蛋白)表达的影响,从分子生物学水平探讨参地补肾胶囊干预肾小管上皮细胞转分化的机制。方法:制备空白及参地补肾胶囊、贝那普利含药血清,以高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)作为观察对象,实验分为正常对照组、高糖模型组、参地补肾胶囊组和贝那普利组,各组HK-2细胞培养48 h,采用Western Blot方法检测ZO-1、α-SMA蛋白的表达情况,Real-time PCR技术检测ZO-1mRNA的表达情况。结果:与高糖模型组比较,贝那普利组、参地补肾胶囊组HK-2细胞ZO-1表达量增加(P 0. 05),参地补肾胶囊组ZO-1表达较贝那普利组增强(P 0. 05);贝那普利组及参地补肾胶囊组HK-2细胞a-SMA表达均低于高糖模型组(P 0. 05),参地补肾胶囊组aSMA表达低于贝那普利组(P 0. 05);参地补肾胶囊组ZO-1mRNA表达增加(P 0. 05),高于贝那普利组(P 0. 05)。结论:参地补肾胶囊可能是通过调节细胞ZO-1、α-SMA的表达抑制肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞的转分化。     

黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用

 目的 观察黄芩苷、栀子苷对神经细胞缺氧缺糖/再灌注损伤的保护作用,在细胞水平阐明黄芩苷、栀子苷治疗脑缺血/再灌注损伤的作用机制。方法 选用SH-SY5Y细胞,采用缺氧、复氧结合缺糖、复糖的方法,对其进行攻击,模拟人体神经细胞的缺血再灌注损伤,观察黄芩苷、栀子苷对此损伤的治疗作用。结果 缺氧、缺糖8 h结合复氧、复糖12 h对神经细胞可造成明显损伤,导致SH-SY5Y细胞突起皱缩、变圆,可见有部分细胞漂起,细胞轮廓不清,凋亡率明显上升,线粒体的活性下降;而黄芩苷、栀子苷可以显著减轻上述损伤。结论 黄芩苷、栀子苷对缺氧缺糖/再灌注损伤的神经细胞有保护作用。