川芎嗪对胃癌细胞及血管内皮细胞增殖的影响

目的 研究川芎嗪对SGC-7901胃腺癌细胞及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响.方法 将不同浓度川芎嗪分别加入体外培养的胃癌细胞,在无因子培养基和在条件培养基中培养的HUVEC中,用MTT法检测细胞增殖情况.结果 川芎嗪浓度为25～625 μg/mL时,对SGC-7901胃腺癌细胞和无因子基培养的HUVEC增殖均无影响(P＞0.05);川芎嗪浓度为125 μg/mL作用48、72 h、浓度为625 μg/mL作用24、48、72 h对条件培养基诱导的HUVEC增殖有明显影响(P＜0.05),增殖抑制率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而升高.结论 川芎嗪对胃腺癌细胞和血管内皮细胞无直接杀伤作用,但对条件培养基诱导的HUVEC增殖具有抑制作用.     

TNP-470与IL-2对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的：应用体外细胞培养法,探讨TNP-470对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的影响及其机制,以及TNP-470与IL-2联合用药的效应。方法：用免疫细胞化学方法检测血管内皮细胞PCNA、VEGFR-2／Flk-1、FGFR的表达,采用阳性细胞计数法及图像分析法对结果进行分析：用流式细胞分析仪对血管内皮细胞的细胞周期进行分析。结果：TNP-470以剂量依赖方式抑制肺癌细胞条件培养液或细胞粉碎液诱导的血管内皮细胞PCNA、Flk-1、FGFR的表达（与对照组比较P〈0．05）。TNP-470与IL-2均可抑制血管内皮细胞进入S期．但两者联合应用时,其效应与各自单独应用无差异（P〉0．05）。结论：TNP-470通过降低内皮细胞表面Flk-1、FGFR的表达,抑制内皮细胞进入S期,使内皮细胞阻滞于G0／G1期途径,发挥其抑制血管内皮细胞增殖的效应：而IL-2则通过对内皮细胞的毒性或诱导凋亡作用而发挥其抑制内皮细胞增殖的效应．     

TNP-470对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的:应用体外细胞培养法探讨O-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉素(TNP-470)对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的影响及其可能机制.方法:免疫细胞化学方法检测血管内皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、胚胎肝激酶1(Flk-1)、纤维细胞生长因子受体(FGFR)的表达.结果:TNP-470以剂量依赖方式抑制肺癌细胞条件培养液或细胞粉碎液诱导的血管内皮细胞PCNA,Flk-1,FGFR的表达,与对照组比较差异均显著(P<0.05).结论:TNP-470能够相对特异地抑制血管内皮细胞增殖,可能与通过降低内皮细胞表面Flk-1,FGFR的表达,进而减弱酪氨酸激酶受体介导的细胞增殖途径有关.     

MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对p53表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV-304)细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关基因p53表达的影响。方法采用两个浓度(2μmol/L,5μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV-304细胞24 h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学检测p53蛋白表达。结果对照组ECV-304细胞凋亡率低于5%,在2μmol/L MG132作用下,凋亡率为11.3%±1.2%,MG132浓度升至5μmol/L时,细胞凋亡率增至44.5%±5.3%;免疫组化检测p53蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132上调p53基因表达有关。     

铁对人肺癌细胞及肿瘤血管内皮细胞模型增殖活性的影响

目的研究铁对体外培养的人肺腺癌细胞SPC-A-1及肿瘤血管内皮细胞模型增殖活性的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测人肺腺癌细胞SPC-A-1及肿瘤血管内皮细胞模型的增殖活性,流式细胞仪检测铁对SPC-A-1细胞周期和细胞凋亡的效应。结果10、30、100及300lamol／L浓度组铁可明显促进SPC-A-1细胞的增殖活性;10、30及100μmol／L浓度组铁使SPC-A-1的G1期细胞比例减少,S期和G2期细胞比例增多;30及100μmol／L浓度组铁使SPC-A-1的凋亡率显著降低;30及100μmol／L的铁可明显促进肿瘤血管内皮细胞的增殖活性。结论铁可通过促进肿瘤细胞向S期转化、降低凋亡率从而促进SPC-A-1细胞增殖,还可通过刺激血管内皮细胞的增殖促进肿瘤的增长。     

TNP-470联合CTX对小鼠LA795肺腺癌皮下移植瘤生长的影响

目的研究血管生成抑制剂TNP-470联合CTX对小鼠L795肺腺癌生长的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞1739小鼠随机分成5组：对照组、溶剂对照组、TNP-470组、环磷酰胺（CTX）组和TNP-470＋CTX组。接种4d后开始用药，用药期间，每隔1d测量皮下移植瘤体积，20d后处死全部小鼠，剥离皮下移植瘤并称重。采用免疫组化和图像分析系统定量检测皮下移植瘤中微血管密度（MVD）、血管生长因子bFGF及增殖核抗原PCNA的表达，用原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果各用药组肿瘤的生长明显受到抑制，而联合用药组抗瘤作用进一步增强，且具有协同作用。CTX组、TNP-470组和联合用药组与对照组相比都能减少bFGF表达；与CTX组相反，TNP-470组肿瘤组织中抗原PCNA的表达与对照组相比无差异显著性。TNP-470组和联合用药组肿瘤组织中的MVD与对照组相比都明显减小；而各用药组的凋亡指数比对照组都明显增高。结论TNP-470组,CTX组中LA795肺腺癌生长受到明显抑制，两者联合应用具有协同作用。     

基因转染肺癌细胞表达之血管内皮抑素对血管内皮细胞的影响

目的:研究肺癌A549细胞体外转染重组腺病毒介导的血管内皮抑素基因后,其产物对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法:体外培养肺癌A549细胞,分为3组:实验组、缺陷型腺病毒组、PBS组。以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将血管内皮抑素基因导入体外培养的肺癌A549细胞,ELISA检测外源基因内皮抑素,在体外培养的肺癌A549细胞中的表达。体外培养血管内皮细胞,以MTT法评价重组血管内皮抑素基因腺病毒(Ad.Endostatin)转染肺癌细胞后含内皮抑素的上清液对内皮细胞增殖的抑制作用。结果:ELISA检测结果:重组腺病毒介导的血管内皮抑素基因在转染的肺癌A549细胞中高效表达,在转染肺癌细胞后第1天即有内皮抑素的表达,在第3天达到高峰,5～7天后逐渐减弱。缺陷型腺病毒组及PBS组未见有表达。MTT检测结果:Ad.Endostatin转染肺癌A549细胞后表达的内皮抑素可抑制体外培养的血管内皮细胞的增殖,而缺陷型腺病毒组及PBS组对血管内皮细胞的增殖未见有抑制作用。结论:腺病毒介导的血管内皮抑素基因转染肺癌细胞表达之血管内皮抑素,能很好抑制血管内皮细胞的生长和增殖,为进一步开展肺癌基因治疗打下基础。     

内皮细胞生长因子诱导大鼠血管内皮细胞增殖过程中FKBP12的表达

目的探讨内皮细胞生长因子(Endothelial cell growth factor，ECGF)诱导的血管内皮细胞(Vascular endothelial cell，VEC)增殖过程中FK506结合蛋白12(FK506 binding protein 12，FKBP12)表达的变化，为VEC的鉴定提供新的方法。方法培养大鼠VEC并传代。倒置显微镜下观察其在ECGF作用下的增殖情况，检测Ⅷ因子相关抗原、FKBP12和不同时期FKBP12 mRNA水平的表达。结果VEC表达FKBP12；VEC传代后第4天FKBP12 mRNA表达水平达到最高，6—8d下降。结论FKBP12既可作为VEC的标志物，又可反映VEC的增殖情况。     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

多种病理因素对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响及VEGF的干预作用

目的 研究缺氧、H2O2、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞(VEC)增殖、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的干预作用,探讨VEGF预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄和支架内血栓形成的机制.方法 将VEC分成对照组、缺氧处理组、缺氧+VEGF处理组、H2O2处理组、H2O2+VEGF处理组、OX-LDL处理组、OX-LDL+VEGF处理组、TNF-α处理组和TNF-α+VEGF处理组.利用四氮唑盐比色法检测各组细胞吸光度值,观察VEC增殖情况,采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,通过RT-PCR法了解各组细胞凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/Fas mRNA表达情况.结果 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α处理组凋亡细胞和Apo-1/Fas mRNA表达明显多于对照组和相应VEGF处理组,而细胞增殖和Bcl-2 mRNA表达则明显低于对照组和相应VEGF处理组(均P<0.01).结论 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α能抑制VEC增殖,诱导VEC凋亡,而VEGF能部分拮抗上述作用,其抗凋亡作用可能与Bcl-2 mRNA表达上调和Apo-1/Fas mRNA表达下调有关,为VEGF用于预防PCI后再狭窄和支架内血栓形成进一步提供了理论依据.     

五氧化二砷对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 评估五氧化二砷(As_2O_5)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及凋亡的影响,比较As_2O_5和三氧化二砷(As_2O_3)影响HUVEC增殖的差异.方法 以不同浓度As_2O_5和As_2O_3作用于指数生长期的3～5代HUVEC,采用3-(4,5-二甲基)-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)检测HUVEC存活情况,相差显微镜观察和Annexin V/PI双染法流式细胞仪观察HUVEC凋亡情况.结果 MTT检测结果显示,0.5、1.0、5.0、10.0 mg/L As_2O_5作用48 h下HUVEC存活率分别为(72.5±13.8)%、(52.9±6.2)%、(15.0 ± 12.8)%、 (13.8 ± 13.2)%,其中1.0(P=0.006)、5.0(P=0.007)和10.0mg/L(P=0.008)作用组的HUVEC存活率明显低于对照组,但5.0与10.0mg/L组间差异无统计学意义(P=0.119);在1.0 mg/L As_2O_5作用下,24、48、72、96 h时HUVEC存活率分别为(88.4 ± 6.3)%、(53.1 ±8.8)%、(30.7 ± 7.9)%、(16.3 ± 4.6)%,其中48(P=0.042)、72(P=0.025)和96 h(P=0.012)时间组的HU-VEC存活率明显低于对照组.相差显微镜和Annexin V/PI双染法观测结果显示,As_2O_5可诱导HUVEC凋亡.培养48 h时,As_2O_5和As_2O_5对HUVEC的IC_(50)值分别为1.1和0.3 mg/L.结论 As_2O_5可抑制HUVEC增殖,起效浓度为1 mg/L.As_2O_5导致HUVEC死亡的主要方式是细胞凋亡.As_2O_5对HUVEC增殖的抑制作用弱于As_2O_3.     

重组高效复合干扰素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究重组高效复合干扰素(rSIFN-co)对肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法 筛选rSIFN-co对A549细胞的有效浓度,及与顺铂联合用药的最佳浓度和作用时间。分为rSIFN-co（5 μg/mL）组、传统重组集成干扰素α(干复津,5 μg/mL）组、rSIFN-co（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、干复津（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、顺铂（2 μg/mL）组和RPMI-1640液空白组,分别干预A549细胞。MTT法检测各组7 d活细胞数并作生存曲线,流式细胞仪检测48 h各组细胞凋亡率,免疫荧光法检测48 h各组凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2表达。结果 rSIFN-co的有效浓度为1 ～64 μg/mL,顺铂的最低有效浓度为2 μg/mL,与2 μg/mL顺铂联合用药时rSIFN-co 的最佳浓度为5 μg/mL,最佳作用时间为48 h。生存曲线示rSIFN-co对A549的抑制作用强于干复津,rSIFN-co+顺铂的抑制作用强于干复津+顺铂。rSIFN-co可诱导A549细胞凋亡,rSIFN-co组凋亡率高于干复津组(P=0.000),rSIFN-co+顺铂组凋亡率高于rSIFN-co组（P=0.004）及顺铂组（P=0.023）。rSIFN-co能增强A549中Fas的表达,并抑制Bcl-2的表达,其中rSIFN-co组Bcl-2表达低于干复津组(P<0.05)。结论 rSIFN-co能抑制A549增殖,且作用强于干复津,与顺铂联合应用的抑制作用增强,其对A549的抑制作用与调节凋亡相关基因表达有关。     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

阿司匹林对人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞生长和凋亡的影响

 目的研究阿司匹林对体外培养的人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度及作用时间下阿司匹林对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测不同浓度阿司匹林对细胞周期和凋亡率的影响;应用透射电镜观察阿司匹林作用后细胞的形态学变化。结果阿司匹林对人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈时间与剂量依赖性(P<0.05);阿司匹林使细胞阻滞在G1期,细胞凋亡率增加,与药物作用浓度相关(P<0.05);阿司匹林作用后细胞体积缩小,染色质浓缩致密,可见凋亡小体形成。结论阿司匹林能够显著抑制人子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的增殖,并诱导其发生凋亡。     

RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制荆RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞，采用细胞计数法、MTT比色法及Giemsa染色法对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞进行分析。结果：与对照组相比，RG50864处理组能在24h、48h、72h显著抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖，且呈剂量依赖性。结论：RG50864可显著抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖。     

反义寡核苷酸抑制MMP7基因表达对肺腺癌A549细胞凋亡敏感性影响的研究

目的观察基质溶解素(matrilysin,MMP7)反义寡核苷酸(antisense ligodeoxynucleotide,ASODN)对肺腺癌A549细胞凋亡敏感性的影响。方法采用硫代磷酸修饰的MMP7ASODN,通过脂质体导入A549细胞后,RT-PCR检测MMP7 ASODN对MMP7 mRNA表达的影响;流式细胞仪检测其对细胞膜Fas抗原表达率的影响;加入重组FasL,诱导凋亡,流式细胞仪检测凋亡率。结果RT-PCR结果表明,MMP7 ASODN转染能显著抑制A549细胞MMP7 mRNA表达。流式细胞仪检测表明,MMP7ASODN转染A549细胞后,与未转染组和错义寡核苷酸(scrambled oligodeoxynucleotide,SCODN)组比较,细胞膜Fas蛋白表达率增高,有显著性差异(P<0.01)。加入重组FasL,诱导细胞凋亡,细胞凋亡率明显增高,与未转染组和SCODN组有显著性差异(P<0.01)。结论MMP7ASODN可以抑制肺腺癌A549细胞株MMP7基因的表达,上调细胞膜Fas抗原表达,增强A549细胞凋亡敏感性。     

缺血再灌注诱导大鼠脑毛细血管内皮细胞凋亡

研究了大鼠大脑中动脉短暂闭塞后血脑屏障通透性与凋亡脑毛细血管内皮细胞的关系。结果表明，血脑屏障受损程度与凋亡脑毛细血管内皮细胞数量随缺血时间延长而增加，脑毛细血管内皮细胞凋亡可能参与了血管源性脑水肿的形成机制。     

清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响

目的研究清热消积方对体外肿瘤细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响。方法将不同浓度清热消积方与人肺腺癌细胞SPC-A-1和人脐静脉内皮细胞HUVEC共同作用,用MTT法检测清热消积方对SPC-A-1及HUVEC细胞增殖的影响;流式细胞术检测对HUVCE细胞周期及凋亡的影响。结果不同浓度的清热消积方能够抑制SPC-A-1及HU-VEC细胞的增殖(P<0.01),呈现一定的剂量依赖性;并对两者存在差异细胞毒作用,对HUVEC细胞的增殖抑制显著高于SPC-A-1细胞(P<0.01);可将SPC-A-1细胞诱导的HUVEC细胞阻滞于细胞周期G2～M期;并引起HUVEC细胞凋亡。结论清热消积方可抑制SPC-A-1及HUVEC细胞的增殖、阻滞SPC-A-1诱导的HUVEC细胞周期,并引起该细胞凋亡,清热消积方可能具有抗肿瘤血管形成效应。