抗原致敏DC与CIK共培养体外抗肾癌效应的研究

目的： 探讨肾癌(RCC)抗原致敏树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养后的DC-CIK细胞对RCC的杀伤活性。 方法： 将健康成人外周血单个核细胞（PBMC）来源的DC经RCC(786-0细胞株)抗原致敏后与同源CIK细胞共培养，实验分3组：RCC抗原致敏DC与CIK共培养组（A组），未致敏DC与CIK共培养组（B组），单纯CIK组（C组）。流式细胞仪检测DC及CIK免疫表型。MTT法检测3组效应细胞对786-0细胞杀伤活性。 结果： 效靶比 20∶1 时，A、B、C组对786-0细胞杀伤活性分别为（70.64±8.26）%、（53.40±7.33）%、（46.64±6.01）%，各组比较差异显著（P<0.05）；以前列腺癌PC3细胞作靶细胞对照，A组对786-0及PC3细胞的杀伤活性有显著差异（P<0.05）。 结论： RCC抗原致敏DC与CIK共培养后的DC-CIK细胞可明显提高CIK细胞对RCC的杀伤特异性和杀伤活性。     

体外肿瘤细胞对血管内皮细胞影响的观察

目的 观察肿瘤细胞与血管内皮细胞的关系及其在体外直接接触培养时内皮细胞的形态变化。方法 免疫磁珠阳性选择法分离培养大鼠肺血管内皮细胞,生长至汇合状态时加入不同的肿瘤细胞(小鼠树突状细胞肉瘤细胞DCS、人胃癌细胞MGC-803、小鼠肺腺癌细胞LA795)共培养,光镜、扫描电镜、免疫组织化学、transwell法及荧光分子传递等方法观察内皮细胞的形态、功能的变化。结果培养的内皮细胞部分呈卵石样,部分呈长梭形。长至汇合状态的内皮细胞再加入肿瘤细胞后,内皮细胞形态发生明显变化,汇合细胞中间出现许多圆形管腔样结构;肿瘤细胞往往分布在新形成的腔隙内;肿瘤细胞条件培养基可支持内皮细胞的生长,促进内皮细胞的运动;luciffer yellow分子可直接从肿瘤细胞传递到内皮细胞。结论 肿瘤细胞与内皮细胞可进行通讯,肿瘤细胞可直接引起内皮细胞结构和功能表型的改变。     

间充质干细胞调节树突状细胞相关功能的研究进展

树突状细胞(DCs)作为体内最强大的抗原提呈细胞,是适应性免疫应答的始动者,在较多疾病的发生发展过程中起着重要作用.间充质干细胞(MSCs)是具有多向分化潜能的成体干细胞,由于其强大的自我修复、抑制炎症以及免疫调节作用已成为研究的热点.大量的研究表明MSCs能通过影响DCs的成熟及功能,达到缓解疾病的目的.通过对MSCs调节DCs功能调节的深入研究有望取得疾病治疗的新进展.     

酵母细胞表面展示的hDAF对补体在酵母细胞表面沉积的抑制作用

目的 :研究酿酒酵母细胞表面展示的人衰变加速因子 (hDAF) ,是否具有天然衰变加速因子的补体抑制活性。方法 :先用正常人血清处理酵母细胞EBY10 0 ,然后用流式细胞仪检测酵母细胞表面C5b 9复合物的沉积和hDAF在酵母细胞表面的表达。结果 :酵母细胞EBY10 0可直接活化人血清中的补体成分 ,导致酵母细胞表面C5b 9的沉积 ;而表达DAF的酵母细胞表面C5b 9的沉积明显减少。结论 :酵母细胞表面展示的DAF可正确折叠 ,并表现出DAF分子的补体抑制活性     

小鼠白血病骨髓基质细胞对白血病细胞体外生长的作用

用Dexter培养体系作L615小鼠白血病骨髓长期培养,观察基质细胞对白血病细胞体外生长的影响。结果显示:大量白血病细胞在1周内死亡。少数粘附于骨髓基质的细胞能在此体系繁殖,经过8周以上传代后获得独立生长能力,成为不死的细胞系,命名为L615-1。这种细胞能在BALB/C裸鼠皮下形成淋巴肉瘤,但不能诱发同系小鼠发生白血病。本文结果提示骨髓基质细胞能支持恶性造血细胞体外生长。     

组织工程皮肤细胞对朗格汉斯细胞表型的影响

目的:研究异体组织工程皮肤种子细胞(角质形成细胞、成纤维细胞)对朗格汉斯细胞的表型影响.方法:外周血单个核细胞在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素4(IL-4)和转化生长因子β1(TGF-β1)的诱导下培养出朗格汉斯细胞.培养的朗格汉斯细胞与异体组织工程皮肤种子细胞共同培养后,检测其表型变化情况.随后将朗格汉斯细胞与淋巴细胞共培养后检测淋巴细胞的增殖程度.结果:诱导培养的朗格汉斯细胞低表达HLA-DR、CD80和CD86,不表达CD83.与异体组织工程皮肤种子细胞共培养后朗格汉斯细胞表型无明显变化,共培养后的朗格汉斯细胞无法刺激自体淋巴细胞增殖.结论:与异体组织工程皮肤种子细胞共培养后,朗格汉斯细胞仍保持不成熟的状态,这提示组织工程皮肤种子细胞免疫原性较低,移植后不易引起宿主的免疫排斥反应.     

细胞因子对骨骼肌细胞和胰岛β细胞的作用

BACKGROUND: A variety of cytokines such as cytokines, growth factors and inflammatory proteins play an important role in the development of skeletal muscle. OBJECTIVE:To investigate the biological characteristics of a variety of cytokines and their effects on skeletal muscle cells and pancreatic β cells. METHODS: Relevant articles published from 2002 to 2015 were retrieved in CNKI and PubMed databases using the English keywords “cytokines, adiponectin, leptin, visfatin, skeletal muscle cells, pancreatic β cells”. Initially 253 literatures were obtained, and finally 53 eligible literatures were included based on the exclusion criteria. RESULTS AND CONCLUSION: As a fat-specific protein newly found, adiponectin can improve the insulin sensitivity by promoting glucose uptake, storage and utilization in skeletal muscle cells. The activation of muscle satellite cells and skeletal myoblast proliferation are both dependent on leptin, so leptin plays a vital role in the skeletal muscle cell growth and development. Visfatin, a pleiotropic cytokine, widely presents in the skeletal muscle, liver and bone marrow, and participates in the regulation of inflammation and immune function. Furthermore, visfatin contributes to glucose uptake and metabolism in the skeletal muscle, and makes considerable effects on the stress and signal transduction of skeletal muscle cells. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合的研究

目的 使肺癌细胞表达共刺激分子,探讨其作为疫苗的可能性。方法 小鼠骨髓细胞在体外经GM－CSF和TNF－α诱导,使之成为成熟树突状细胞（BmDC)。将其与小鼠Lewis肺癌细胞AL9901融合,并以S－P免疫细胞化学染色法检测融合细胞和BmDC上有关分子的表达。结果 通过GM－CSF和TNF－α诱导获得BmDC,以诱导5d时收获为佳。获得的BmDC能高表达B7－1和CD40分子,与肺癌细胞融合后,获得的融合细胞仍能高表达B7－1和CD40分子。结论 通过将小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合,使肺癌细胞获得了BmDC表达的B7－1和CD40分子,从而提高了其免疫原性,为制备肺癌疫苗奠定了基础。     

天花粉蛋白对HepA-H细胞和HeLa细胞抑癌活性研究

目的：比较分析商品天花粉蛋白(TCS1) 和从鲜药材中提取分离出的天花粉蛋白粗品（TCS2），对HepA-H细胞（腹水型肝癌高转移株细胞）和HeLa细胞（人宫颈癌肿瘤细胞）的杀伤作用，并进一步探讨其抑癌作用机理。方法： MTT法检测药物的细胞毒作用，电镜观察细胞超微结构改变，电泳检测细胞DNA生物化学特征改变。结果： TCS1和TCS2对HepA-H细胞作用不明显（P>0.05），而对HeLa细胞具有显著性作用，呈明显时效、量效关系（r>0.864, P<0.05或P<0.01）。在相同作用时间内，TCS2作用组对细胞生长抑制率均高于TCS1组（P<0.01）。进一步研究发现，HeLa细胞经TCS2作用后，细胞表面微绒毛消失，胞膜发泡，核染色质浓缩边集，并出现凋亡小体，细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳呈典型的梯形带。结论： HepA-H细胞对天花粉蛋白不敏感，而HeLa细胞对TCS1和TCS2敏感，其中TCS2抑癌活性明显强于TCS1，细胞生长受抑制作用显著，作用机制与诱导细胞凋亡相关。     

鼠与人MUC1分子同源性位点的分析

目的：分析鼠与人粘蛋白1（MUC1）的同源性位点。方法：用抗人类MUC1单克隆抗体GP1.4、CA15－3,通过细胞ELISA和Western blot鉴定鼠Lewis肺癌细胞表面MUC1分子的表达，并用蛋白分析软件分析鼠与人MUC1分子的同源性。结果：抗人类MUC1单克隆抗体GP1．4和CA15－3与Lewis肺癌细胞表面MUC1存在交叉反应；鼠与人MUC1分子约具有49．1％的同源性。结论：鼠与人MUC1分子具有一定的同源性，可用鼠Lewis肺癌细胞作荷瘤鼠研究人类MUC1肿瘤疫苗；鼠源性MUC1蛋白也可用于制备人类的肿瘤疫苗。     

骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制。方法贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组。对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h。收集培养上清液,ELISA法检测细胞因子:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8检测细胞增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMSCs衰老。分离提取正常骨髓单个核细胞(BMMNCs),在衰老组与对照组BMMSCs上种植正常BMMNCs共培养24h,收集上层悬浮BMMNCs。CCK-8法测定细胞增殖能力;多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)半固体培养法检测细胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色观察衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期与细胞凋亡;DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测细胞内丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果衰老组BMSCs增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,细胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-2、TNF-α水平显著升高。与衰老BMSCs共培养后,BMMNCs的增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著上升,BMMNCs形成CFUMix集落数量明显降低,细胞周期呈现阻滞且细胞凋亡率上升,细胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降。结论本实验中D-Gal成功复制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可诱导骨髓造血细胞衰老,其机制可能与BMSCs导致造血细胞氧化损伤有关。     

Effects of human mesenchymal stem cells on the differentiation of dendritic cells from CD34+ cells

Mesenchymal stem cells (MSCs) have profound immunomodulatory functions both in vitro and in vivo. However, their effects on the differentiation of dendritic cells (DCs) are unknown. In this study, we employed an in vitro model to investigate the effects of human MSCs on the development of DCs. CD34(+) cells isolated from cord blood were cultured under conventional DC(cDC) or plasmacytoid DC (pDC) differentiation conditions, in the presence or absence of MSCs or their conditioned medium. Here we show that both MSCs and their conditioned medium dramatically increased the numbers of cells generated under either condition. The percentage of cells with the cDC phenotype is significantly reduced in the presence of MSCs or their conditioned medium, whereas the percentage of pDC increased. The capacity of cDCs from MSCs or their conditioned medium-treated CD34(+) cells to stimulate allogeneic T cells was weakened. Furthermore, MSCs can skew the DC function from cDC to pDC, thus biasing the immune system toward Th2 and away from Th1 responses. Blocking the prostaglandin E(2) (PGE(2)) synthesis of MSCs can reverse most of these influences of MSCs on DCs differentiation and function. Therefore, MSCs can significantly influence DC development through PGE(2) production.     

Effect of antihistamines on epithelial cells

Antihistamines have mostly been used in the management of allergic rhinitis, primarily for their symptomatic relief. Recent studies, however, have suggested that the non-sedating second-generation antihistamines also possess anti-inflammatory activity, and consequently may be useful in the management of inflammation in allergic airways disease. Several in vivo studies have demonstrated that antihistamines decrease inflammatory cell infiltration in allergic disease, mediator release from mast/basophil cells, and the expression of adhesion molecules on epithelial cells. Similarly, in vitro studies have demonstrated that antihistamines decrease the migration and activation of eosinophils and the release of pro-inflammatory mediators from mast/basophil cells, induced by immunological and non-immunological stimuli. More recent evidence suggests that the antihistamines may modulate airway inflammation by influencing the activity of airway epithelial cells, which due to their spatial arrangement and predominance in the airways, are thought to play a pivotal role in the aetiology of airway disease. We and others have demonstrated that antihistamines attenuate allergen- or chemical-induced expression and/or release of mediators which influence the activity of inflammatory cells, such as eosinophils, mast cells, basophils and lymphocytes, known to be involved in the pathogenesis of allergic airway diseases. Collectively, these studies suggest that second-generation H₁-histamine receptor antagonists may have potential use either as safe anti-inflammatory alternatives to corticosteroids, or as rescue medication in combination with corticosteroids, for the management of severe airway disease.     

大鼠骨髓间充质干细胞对T细胞免疫活性的影响

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stemcells,MSCs)对脾脏T细胞的免疫调节作用。方法:从大鼠骨髓中分离培养间充质干细胞,通过瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,并用流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测其细胞表面特征分子表达情况。MTT法测定经刀豆蛋白A(ConA)刺激后,不同数量MSCs对T细胞增殖能力的影响;ELISA法检测MSCs对T细胞分泌IFN-γ和IL-4水平的影响。FCM检测MSCs对脾脏T细胞凋亡水平的影响。MTT法测定MSCs对细胞毒性T细胞(Cytotoxic Tcells,CTL)杀伤活性的影响。结果:经不同数量MSCs作用后,脾脏T细胞增殖水平明显低于阳性对照组(P<0.01),而且MSCs比例越高,其抑制作用越强(P<0.01)。经MSCs作用后,T细胞分泌IFN-γ的水平明显降低,而分泌IL-4的水平明显升高,且这种作用随MSCs比例的增加而增强(P<0.01)。MSCs能够抑制在体外培养过程中T细胞的自发凋亡。与MSCs共培养后,T细胞对L1210细胞的杀伤活性和单独培养组相比明显下降(P<0.05)。结论:MSCs能够抑制T细胞增殖反应和CTL活性,该作用可能与MSCs改变T细胞分泌细胞因子水平有关,但与诱导T细胞凋亡无关。     

小鼠睾丸支持细胞对大脑皮质细胞的体外营养作用

目的通过观察睾丸支持细胞(SCs)对大脑皮质细胞体外的营养作用,探讨移植的SCs在体内对神经组织营养作用的方式。方法将原代分离的小鼠大脑皮质细胞单独培养(对照组)或与小鼠SCs共培养(实验组),比较两组中神经元、神经干细胞(NSC)及神经胶质细胞的生长情况。结果实验组的神经元数及其突起数、神经元特异性烯醇化酶光密度(P<0.01)和神经胶质细胞数均较对照组高,两组各时期的神经元胞体面积也不相同(P<0.05),实验组于第3天出现NSC的集落形成。结论SCs在体外对大脑皮质的神经元、NSC和神经胶质细胞均有较强的营养作用,在中枢神经系统疾病的细胞移植治疗中将具有很大的应用价值。