肝癌单克隆抗体——氨甲喋呤结合物对肝癌导向治疗的实验研究

本文选择鼠抗人肝癌单克隆抗体Hab18与抗癌药物氨甲喋呤(MTX)交联制备Hab-18-MTX结合物,检测该结合物的抗体活性,体外对肿瘤靶细胞的特异性杀伤作用,     

A群脑膜炎球菌多糖结合物的免疫原性研究

目的：制备A群脑膜炎球菌多糖（PS）结合物，观察其免疫原性。方法：A群脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后共价接上己二酰肼手臂，在碳二亚胺催化下与精制破伤风类毒素（TT）偶联剂备结合物。单独多糖、多糖结合物和TT按相同程序免疫NIH小鼠，用ELISA法检测小鼠血清抗多糖抗体滴度和特异性及抗TT抗体滴度。结果：用上述实验方法制备的结合物具有多糖和蛋白质的抗原性，免疫小鼠可诱导高滴度的血清抗多糖IgG抗体，免疫2针后高滴度抗体至少持续存在3周。血清抗体可中和多糖。加强免疫提示有免疫记忆性。结合物还可诱导产生一定水平的TT抗体。结论：A群脑膜炎球菌多糖结合到TT上可明显增强多糖在小鼠中的免疫原性，为制备结合疫苗并研究其对婴幼儿的免疫原性提供了实验基础。     

乙型肝炎表面抗原-破伤风类毒素结合疫苗的制备及免疫学特性

目的 制备乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)与破伤风类毒素(TT)结合疫苗,并研究其免疫学特性.方法 TT经溴化氢活化后与己二酰肼形成TT-酰肼基衍生物,在碳二亚胺作用下与HBsAg共价结合.将结合物、HBsAg及乙肝疫苗免疫小鼠,并设生理盐水对照组,分别于7、14、21、28 d取血,应用化学发光法检测小鼠血清抗-HBs,于第7、28天应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测脾单个核细胞(mouomlclear cells,MNC)分泌HBsAg特异性IFN-γ和IL-2能力.结果 成功制备了HBsAg-TT结合物,该结合物诱导抗-HBs阳转率及抗体滴度均较单独免疫HBsAg及乙肝疫苗组高,主要以IgG2a抗体为主,且分泌IFN-γ和IL-2的淋巴细胞数也显著增加.结论 用该方法 制备的HBsAg-TY结合疫苗,不仅可诱导较强的体液免疫,还可诱导以TH1应答为主的细胞免疫.     

抗H5N1禽流感病毒羊驼重链单域抗体的制备和功能鉴定

目的:获得具有中和活性、高特异性和稳定性的抗H5N1禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的羊驼重链单域(VHH)抗体。方法:利用pET-22b表达载体诱导表达抗H5N1禽流感病毒HA VHH抗体蛋白,以包涵体形式表达的VHH抗体蛋白采用最优复性方法进行复性后,获得高纯度的VHH抗体,分别采用ELISA法鉴定VHH抗体的亲和力和热稳定性,采用血凝抑制实验鉴定抗体的特异性和体外中和活性。结果:经复性的抗H5N1禽流感HA VHH抗体对H5N1禽流感病毒HA具有良好的特异性。通过对三种不同复性方法比较,利用柱上复性的VHH23抗体具有较好的热稳定性,亲和力为9.1×10-7mol/L,同时对H5N1禽流感病毒HA具有良好的体外中和活性。结论:实验结果表明通过原核表达获得具有较好中和活性、特异性及稳定性的抗H5N1禽流感病毒VHH抗体,为进一步开展抗体的体内病毒中和试验奠定良好基础。     

单克隆抗体-酶结合物选择性清除淋巴细胞亚群

本文建立了一种选择性清除淋巴细胞亚群的新方法。葡萄糖氧化酶(GO_x)、磷脂酶(PL-C)分别与小鼠抗大鼠单克隆IgG(MAR)的结合物,在不同的大鼠单克隆抗体存在下(可识别鼠细胞表面抗原),已表明对靶淋巴细胞亚群有选择性细胞毒作用。细胞计数显示了两种结合物能显著地与大鼠单克隆抗体结合。PL-C-MAR比GO_x-MAR结合物稳定。根据细胞对促有丝分装原反应能力下降和细胞计数显示的特异性细胞数目明显缺失,可判定PL-C结合物(与原始小鼠抗大鼠IgG单克隆抗体结合)对T细胞和B细胞产生了选择性杀伤。正常鼠血清可抵抗由游离酶引起的细胞毒作用,但酶结合物的作用则不受影响。因为体内这些酶的底物很丰富,血清不能阻止其细胞毒作用。这些抗体-酶结合物对体内选择性清除淋巴细胞可能具有价值。     

特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定

目的 从人源化噬菌体抗体库(human single fold scFv libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础.方法 以H5N1病毒的血凝素(hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(nucleoprotein,NP)为目的 蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过3轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的 蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析.结果 经过3轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300、302和935 bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同.结论 从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息.     

FITC-抗FITC系统在夹心法ELISA检测IFN-γ和IL-4中的应用

异硫氰酸荧光黄(FTTC)是一种具有抗原性的荧光素分子，极易与免疫球蛋白形成稳定的结合物，并且不影响抗体结合抗原的活性。偶联了辣根过氧化物酶(HRP)的高效价的抗FITC分子单克隆抗体(mAb)，与FITC标记的特异性一抗组成的FITC-抗FTTC放大系统，可以有效地提高酶联免疫吸附试验(ELISA)的敏感性、特异性，     

抗CCP抗体和AKA在类风湿关节炎诊断的应用价值

目的 比较抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)和抗角蛋白抗体(AKA)在类风湿关节炎诊断中作用,探讨RA的早期诊断方法.方法 对已确诊的85例RA患者、74例非RA的自身免疫病患者同时测定抗CCP抗体(ELISA法)、AKA(间接免疫荧光检测).结果 抗CCP抗体对诊断RA的灵敏度和特异性分别为75.3％和93.2％;AKA对RA诊断的灵敏度和特异性分别为89.4％和85.14％.抗CCP抗体的灵敏度与AKA灵敏度差异无统计学意义(P＞0.05),特异性差异有统计学意义(P＜0.05);抗CCP抗体或AKA与二者联合检测的灵敏度差异有统计学意义(P＜0.05),特异性差异有统计学意义(P＜0.05).阳性预测值抗CCP抗体较高,阴性预测值以二者联合检测较好,Youden index二者联合检测比单独检测抗CCP抗体或AKA高.抗CCP抗体和AKA在检测RA组中抗CCP抗体和AKA同时阳性检出58例;抗CCP抗体或AKA阳性共检出85例.抗CCP抗体或AKA阳性率(96.5％)比二者同时阳性率(68.2％)大大提高.结论 抗CCP抗体、AKA对RA具有较好的灵敏度和高度的特异性,联合检测抗CCP抗体和AKA可作为早期RA患者及RF阴性RA患者的早期诊断指标.     

小鼠抵抗射线的IgE分泌细胞:对抑制性T细胞的敏感性

作者用氢氧化铝-卵清蛋白结合物(AH-OA)免疫Balb/c小鼠,并用800R或1000Rx-射线照射。分别用被动皮肤过敏(PCA)和血凝(HA)试验测定抗OA的IgE类及IgG类抗体。结果观察到,对OA表现持续高效价IgE应答的Balb/c小鼠经800R或1000R     

用HRP——抗IgM法快速诊断流行性出血热

本文报道用流行性出血热(EHF)病毒抗原片,以酶标抗人IgMu链单克隆抗体染色法(简称HRP-抗IgM)检测患者血清中的IgM抗体,从而对EHF进行早期诊断。为确证本方法的可靠性,同时与间接免疫荧光IgG法(IFA-IgG)进行了比较.经阻断试验和2-巯基乙醇耐性试验证明,HRP-抗IgM检出的抗体系EHF特异性抗体.用双盲法检测了51份血清,结果全部符合。实验结果表明,HRP-抗IgM特异性强.敏感性高,用普通显微镜便可观察,结果清晰.4小时内可获得诊断结果,可以用作早期诊断.     

检测循环免疫复合物的快速ELISA捕捉法

以兔抗日本脑炎病毒(JEV) IgG与JEV形成的免疫复合物(IC)为模型,羊抗兔IgG为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的JEV种特异性单抗为结合物,通过选择适宜的试验条件,建立了检测IC的快速ELISA捕捉法(RICC-ELISA);并初步用于检测感染JEV的恒河猴多次注射单抗后,猴抗鼠IgG及IgM与单抗形成的IC的动态变化.应用该法,在60分钟内就可得出结果,具有快速、简便、特异、敏感等特点,并可推广应用,检测其它类型的IC.     

针对SARS⁃CoV2不同突变株广谱特异性中和抗体的筛选与鉴定

目的 筛选对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS?CoV2)不同突变株具有广谱特异性的、高亲和性中和抗体,并进行功能验证.方法 用脂质体包被的SARS?CoV2刺突蛋白(S蛋白)mRNA疫苗对Balb/c小鼠进行2次免疫,测定小鼠血清中特异性抗体含量,选取抗体含量较高的小鼠进行冲击免疫;取冲击免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤...     

免疫毒素：特异性杀瘤细胞的单克隆抗体和毒素亚单位的杂交分子

在体外实验中,应用化疗剂或有效毒素与抗体形成的结合物(免疫毒素)攻击肿瘤已获成功,在某些例子中,还显示了高度的靶特异性。但迄今为止,体内实验进展不大,这可能是由于下述两个主要原因:第一,传统的杂克隆抗体含有大量非抗     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

抗CCP抗体、APF在类风湿关节炎诊断中的意义

目的 探讨抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗核周因子(APF)在类风湿关节炎(RA)诊断中的意义.方法 以2013年6月至2015年8月在我院接受治疗的100例RA患者为观察对象,同时选取100例干燥综合征和100例健康成年人作为对照.观察3组研究对象抗CCP抗体、APF阳性率的差异,比较炎症细胞因子水平的变化,探讨抗CCP抗体、APF联合检测对RA诊断的特异性和灵敏度.结果 3组患者抗CCP抗体、APF阳性率从高到低分别为RA组、干燥综合征组和对照组;3组患者的IL-18、IL-6和hs-CRP水平由高到低分别为RA组、干燥综合征组、对照组;RA患者的抗CCP抗体、APF阳性率与IL-18和hs-CRP水平正相关,而与IL-6水平无明显相关关系;抗CCP抗体、APF联合检测对RA诊断的灵敏度为60.53%,特异性为68.87%,明显高于上述指标单项检测时的灵敏度和特异性.结论 抗环瓜氨酸肽抗体和抗核周因子阳性表达率在类风湿性关节炎患者中较高,并与患者血清炎症细胞因子水平密切相关,且两者联合检测的灵敏度和特异性较高,可作为临床检测的重要指标.     

抗生殖抗体与习惯性流产关系的研究

目的 通过对原因不明的习惯性流产(HA)患者进行多项抗生殖抗体检查,研究HA与抗生殖抗体的关系。方法 149例原因不明的HA患者为流产组,60例健康孕妇为对照组,对两组人群同时采用金标免疫斑点法检测血清抗新磷脂抗体(ACA)、抗子宫内膜抗体(EMAb)和抗精子抗体(AsAb),用酶联免疫吸附法检测血清抗绒毛膜促性腺激素抗体(HCGAb)。结果 实验组ACA阳性率为18.12％,EMAb阳性率为32.31％,AsAb阳性率为28.18％,HCGAb阳性率为26.1％;对照组以上指标分别为5.00％,3.33％,5.00％和11.66％,即自身抗体阳性率实验组均明显高于对照组,P<0.05。结论 多数原因不明HA患者体内存在抗生殖抗体,其中ACA、EMAb、AsAb、HCGAb可能为HA原因之一。     

抗核抗体谱检测的临床诊断意义

目的:分析抗核抗体线性免疫印迹分析法( ANA-LIA)和抗核抗体间接免疫荧光法在自身免疫性疾病临床的诊断价值.方法:ANA-LIA使用德国IMTEC公司IMTEC-Human GmbH抗核抗体谱试剂检测；抗核抗体用间接免疫荧光法检测.结果:用间接免疫荧光法检测抗核抗体300例,用免疫印迹法检测抗核抗体谱263例,ANA荧光法与ANA-LIA免疫印迹法检测阳性结果无显著性差异(P＞0.05)；30例同时进行ANA、ANA-LIA检测,结果一致率73.3％；ANA-LIA漏检率20％,错检率6.7％.结论:以间接免疫荧光法检测抗核抗体缺乏特异性,而抗核抗体谱免疫印迹法具有高特异性,但存在着较高的漏检率,因此在临床实际应用中将两种方法联合应用,检测效果更好.     

抗地高辛单克隆抗体的制备

抗地高辛单克隆抗体(以下简称单抗)对免疫化学的基础研究是一种有用的样品,可用于研究内源性地高辛样物质及对强心甙进行免疫测定。全部表型的特性鉴定对选择不同用途具有理想结合参数的抗体是不可缺少的。在两次融合试验中,获得22株高亲和性抗地高辛单抗。应用硫氰酸钾(KSCN)处理抗原抗体复合物和吸收ELISA可在杂     

抗人端粒酶蛋白亚基单域抗体制备和鉴定

目的　研制抗人端粒酶逆转录酶 (hTERT)蛋白亚基单域重组抗体。方法　以重组His taghTERT融合蛋白为抗原免疫小鼠 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增小鼠脾细胞重链可变区 ;经克隆噬菌粒载体pCANTAB 5E及转染大肠杆菌建立噬菌体抗体展示文库 ,经过亲和性富集选择阳性克隆 ,并于大肠杆菌 (E .coli.HB2 15 1)中表达为可溶性单域抗体 ;Westernblot确定单域抗体结合特性。结果　以RT PCR扩增His taghTERT免疫小鼠脾细胞RNA ,得到 35 0bp小鼠重链可变区DNA片段 ;通过克隆及转染制备出噬菌体展示抗体文库 ,文库大小是 8× 10 4 ;经过抗原 抗体亲和性筛选 ,得到 4个克隆 ,并表达为可溶性单域抗体 (相对分子质量 16 0 0 0 ) ;WesternBlot分析显示 :其中 2个克隆的可溶性单域抗体可特异性结合His taghTERT融合蛋白 (相对分子质量 16 70 0 ) ,与His tag无关 ;与人癌细胞表达的天然hTERT蛋白 (相对分子质量 12 70 0 0 )分析亦显示其特异性结合能力。DNA序列分析证实可溶性单域抗体为小鼠抗体重链可变区VH基因编码。结论　利用噬菌体展示技术已初步制备出小鼠重链可变区编码的抗hTERT蛋白的特异单域抗体 ,为进一步探索其抑制端粒酶活性及抗肿瘤作用奠定了基础。     

抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围.结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1:105.纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验.结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具.