牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞产生sICAM-1的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对人类脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)的影响。方法：应用厌氧袋法培养P.gingivalis，并用其感染HUVECs，采和酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清中sICAM-1的含量，结果：HUVECs基础表达少量的sICAM-1;P.gingivalis剂量依赖性增强HUVECs产生sICAM-1蛋白的水平；紫外线、超声波和65℃的热处理都不能抑制P.gingivalis的作用；sICAM-1蛋白水平在P.gingivalis刺激后的4h未见改变，增高的作用从刺激后的8h开始，在12h,16h和20h继续增加。结论：活的和灭活的P.gingivalis都剂量依赖性和时间依赖性地增强HUVECs产生sICAM-1,P.gingivalis可能同样诱导牙龈血管内皮细胞表达sICAM-1，升高的sICAM-1可能参与调节牙周病炎症反应和免疫反应过程。     

两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探究两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养ⅠfimA、ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌,并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养;在共培养2、8、24和48 h 时,采用 CCK-8法检测细胞生长状况。结果：ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐动脉平滑肌细胞后8 h,促增殖作用明显,但是24和48 h 平滑肌细胞增殖受到抑制（P ＜0．05）;ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞没有明显促细胞增殖或细胞毒性作用。结论：ⅠfimA 型和ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞的作用存在差异,ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌有明显的促平滑肌细胞增殖和细胞毒性作用。     

牙龈卟啉单胞菌感染对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277感染对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 建立体外牙龈卟啉单胞菌感染大鼠VSMC模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ICAM-1基因的表达。结果 牙龈卟啉单胞菌感染VSMC 8、16、24 h后,ICAM-1表达明显增多,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。感染16 h达高峰,感染8 h与感染16、24 h比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌感染可引起VSMC ICAM-1高表达,这提示牙周致病菌可能参与血管壁的炎症反应,在动脉粥样硬化的发生、发展中有重要的意义。     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响

目的研究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）感染对血管内皮细胞（vein endothelial cell,VEC）血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1）mRNA表达的影响。方法建立P.g感染VEC的体外模型,采用Real Time-PCR技术检测P.g381菌株感染人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞株EA.hy926不同时间后,LOX-1 mRNA表达的变化。结果 P.g381侵入HUVEC促进LOX-1 mRNA的表达,与对照组相比较（△Ct值为3.78±0.16）,2 h时开始升高（△Ct值为3.60±0.33,P=0.240）,8 h达高峰（△Ct值为2.72±0.35,P=0.000）,12 h后显著回落（△Ct值为3.22±0.17,P=0.001）,至24 h时恢复至最初水平（△Ct值为3.65±0.24,P=0.390）。结论 P.g感染促进HUVEC表达LOX-1 mRNA。     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞LOX-1mRNA表达的影响

目的 研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)感染对血管内皮细胞(vein endothelial cell,VEC)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)mRN...     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究

目的:分别观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)和大肠杆菌(E.coli)LPS对人主动脉内皮细胞(HAECs)在转录和翻译水平表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:在体外分别以P.gingivalisLPS和E.coliLPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalisLPS作用6 h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coliLPS作用2 h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均能在蛋白水平上调ICAM-1的表达,这种上调作用呈浓度和时间依赖,且P.gingivalisLPS的作用较之E.coliLPS要缓和。结论:P.gingivalisLPS能够在转录和翻译水平上调HAECs表达ICAM-1,提示P.gingivalisLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥了重要作用。E.coliLPS可能与急性炎症性疾病有关而与AS无关。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉血管内皮细胞cGMP生成的影响

目的:体外研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)cGMP水平的影响。方法:用Pg ATCC 33277分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)1∶10、1∶50、1∶250干预HUVEC,并以未受Pg ATCC 33277干预的HUVEC作为阴性对照,分别培养4、12、36 h,在倒置显微镜下观察各组细胞形态;125I cGMP放射免疫试剂盒检测各组HUVECcGMP的水平。结果:与对照组相比,Pg ATCC 33277分别以MOI 1∶10、1∶50、1∶250干预HUVEC 4、12、36 h后,实验各组HUVEC的细胞形态未见明显改变,仍呈典型的铺路石状单层贴壁生长;Pg ATCC 33277 MOI1∶250时可呈时间依赖性地降低HUVEC cGMP水平,而同一时间点内,各浓度组的cGMP水平并无明显差异。结论:短时间内,Pg ATCC 33277对HUVEC的细胞形态无明显影响,但可降低HUVEC cGMP的生成,HUVECNO生物利用度下降。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞茵(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的作用提供依据.方法 应用厌氧罐培养Pg ATCC33277,用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1:10、1:100、1:1000的Pg干预HUVEC,未受Pg干预的HUVEC作为阴性对照组,分别于4、8、12、24 h时收集细胞上清液,利用硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO的浓度.结果 在24 h内,Pg MOI 1:10、1:100均能促进HUVEC NO的生成,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);Pg MOI 1:1000干预HUVEC后,12 h内可促进HUVEC NO的生成,但与阴性对照组相比差异无统计学意义,24 h时HUVEC NO的生成降低[(57.83±9.09)mmol/L],与其他各组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Pg对内皮细胞NO的生成有影响.Pg MOI 1:10、1:100能够促进内皮细胞NO的生成,Pg MOI 1:1000则抑制内皮细胞NO的生成.     

牙龈卟啉单胞菌对兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对体外培养的兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:组织块法培养兔腹主动脉血管平滑肌细胞,并对其细胞来源进行鉴定。用4.3×106 CFU/mL的Pg上清液刺激细胞12、24、48 h后,通过ELISA检测IL-1β、IL-6的水平;同时用RT-PCR检测其mRNA表达的情况。结果:Pg上清液刺激24 h和48 h时能促进血管平滑肌细胞分泌IL-6,分别与同一时间点的对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),而且24 h时,IL-6表达最强,而IL-1β的表达最低,明显低于相同时间的对照组和其他时间点的实验组(P<0.05)。RT-PCR检测显示,4.3×106 CFU/mL的Pg上清刺激血管平滑细胞12、24、48 h后细胞内均有IL-1β、IL-6的基因表达,在24 h时,血管平滑肌细胞的IL-1β基因表达减少,而IL-6基因表达增加。结论:Pg上清液可促进细胞合成和分泌IL-6,在动脉粥样硬化的发生发展过程中可能发挥一定作用。     

牙龈卟啉单胞菌入侵血管内皮细胞的实验研究

目的:体外观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的影响,观察Pg对HUVEC的入侵能力,从而探讨Pg对内皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)发病机制中的作用提供依据。方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1:10,1:100PgATCC33277分别干预HUVEC 4h、8h、12h、24h,未受Pg ATCC33277干预的HUVEC作为阴性对照组,倒置显微镜下观察HUVEC形态,CCK-8法测定HUVEC细胞的增殖情况,透射电镜下观察Pg ATCC33277对HUVEC的入侵情况。结果:在24h内,与对照组相比,受Pg ATCC33277感染的HUVEC的细胞形态未见明显影响,仍呈典型的"铺路石"单层贴壁生长,Pg ATCC33277对HUVEC细胞增殖未见明显影响,透射电镜下观察发现Pg ATCC33277可以黏附HUVEC细胞膜表面,入侵HUVEC,直接定植或以空泡的形式存在于细胞的胞质中。结论:Pg可以入侵内皮细胞,以在细胞内定植的方式逃避宿主的防御反应,内皮细胞的形态和增殖未见明显改变,从而形成第二次慢性感染过程,进一步影响内皮细胞正常功能的发挥。     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响

目的：研究Pg感染对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与单核细胞黏附的影响。方法：建立Pg感染HUVEC细胞株EA．hy926的体外模型,虎红染色法观察Pg381和Pg33277菌株感染HUVEC 6 h和24 h后,HUVEC与人单核细胞株THP-1细胞黏附量的变化。结果：培养6 h时Pg381感染组的THP-1细胞黏附量相对值为0．210±0．025,高于Pg33277感染组（0．078±0．024,P＜0．05）和空白对照组（0．062±0．022,P＜0．05）,Pg33277感染组和空白对照组无差异。24 h时3组间无差异（P＞0．05）。结论：Pg381感染HUVEC后能显著促进其与单核细胞的黏附。     

牙龈卟啉单胞菌侵入对人血管内皮细胞分泌MCP-1影响的研究

目的　通过研究牙龈卟啉单胞菌（porphyrmonas gingivalis,P.g）侵入对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）分泌单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的影响,了解P.g对其趋化功能的影响。方法　建立P.g侵入HUVEC的体外模型,采用酶联免疫吸附法（ELISA）研究P.g381和P.g33277菌株侵入HUVEC 6、24 h后的培养上清液中MCP-1浓度。结果　ELISA结果显示当P.g381侵入HUVEC 6、24 h和P.g33277侵入HUVEC 6 h时,HUVEC分泌的MCP-1水平升高（P＜0.01）;P.g33277侵入HUVEC 24 h时,HUVEC分泌的MCP-1水平恢复最初水平（P=0.46）;P.g381诱导HUVEC表达MCP-1的水平高于P.g33277（P＜0.01）。结论　P.g侵入HUVEC后可促进其表达MCP-1,从而上调其趋化功能,在牙周炎与心血管疾病的相关性中可能发挥作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对共培养体系中人脐动脉平滑肌细胞增殖及迁移能力的影响

目的:研究Ⅰ、Ⅳ fimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖（ Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）对共培养条件下人脐动脉平滑肌细胞（human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC）增殖和迁移能力的影响,...     

牙龈卟啉单胞菌与细胞自噬相关性的研究进展

细胞自噬是真核细胞的溶酶体依赖的代谢机制之一,参与宿主抵御病原菌感染的过程。牙龈卟啉单胞菌（P.gingivdis）能够侵入血管内皮细胞并利用自噬逃避宿主清除、持续并传播感染。本文就P.gingivdis以括与细胞自噬相关性研究的进展作一综述。     

牙龈卟啉单胞菌与细胞自噬相关性的研究进展

细胞自噬是真核细胞的溶酶体依赖的代谢机制之一,参与宿主抵御病原菌感染的过程。牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)能够侵入血管内皮细胞并利用自噬逃避宿主清除、持续并传播感染。本文就P.gingivalis与细胞自噬相关性研究的进展作一综述。     

多粘菌素B和热处理对牙龈卟啉单胞菌诱导ECHUV产生sICAM-1的影响

目的：观察多粘菌素B和热处理对牙龈卟啉菌诱导人类脐静脉血管内皮细胞（endothelial cells of human umbilical vein,ECHUV）产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1）的影响，以探讨P．gingivalis诱导ECHUV产生sICAM-1的有效部位。方法：采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定培养上清中sICAM-1的含量。结果：P.gingivalis、大肠杆菌脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）强烈诱导ECHUV产生sICAM-1，多粘菌素B明显抑制大肠杆菌LPS的诱导作用，热处理完全废除了TNF－α的作用，而这两种方法都不能降低P.gingivalis对ECHUV产生sICAM-1的影响。另外，P.gingivalis毒力株W83的诱导强度明显高于非毒力株ATCC33277。结论：P.gingivalis可能通过LPS以外的耐热的有效位点诱导ECHUV产生sICAM-1，这一位点可能与P.gingivalis的有效毒力因子有关。     

牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对牛主动脉内皮细胞存活的影响

目的:探讨牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对体外培养牛主动脉内皮细胞(BAECs)存活的影响.方法:盐析法提取牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白;不同浓度的胞外蛋白(200、300、400、500、600μg/mL)分别作用于体外培养的BAECs 24 h,对照组为无细菌胞外蛋白作用的BAECs;另外,用400μg/mL胞外蛋白分别作用于BAECs 6、12、24、36h,对照组细胞同样培养6、12、24、36 h,比较实验组与对照组BAECs存活率的变化;采用台盼蓝染色法检测BAECs存活率.采用SPSS 10.0软件包对数据进行独立样本t检验.结果:当作用于BAECs的牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白浓度在200～600μg/ml.范围内时,BAECs存活率均低于对照组(P<0.05),且随细菌蛋白浓度增加而降低;在36 h内,随着时间的延长,实验组和对照组的BAECs存活率均有下降,但实验组降低的幅度大于对照组(P<0.05),显示细菌胞外蛋白对BAECs存活率的影响具有时间依赖性.结论:牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白可导致体外培养的牛主动脉内皮细胞存活率降低,并呈现剂量和时间依赖性.     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌IL-1β和IL-6的影响研究

目的:研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对人脐静脉内皮细胞(hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:酶消化法原代培养HUVECs,并对细胞进行来源鉴定,用5×106CFU/mL的Pg上清液刺激HUVECs 6、12、18、24 h后,RT-PCR检测IL-1β、IL-6 mRNA的表达;同时ELISA方法测定IL-1β及IL-6蛋白的水平。结果:Pg上清液刺激HUVECs后,IL-1βmRNA水平在12、18 h时蛋白明显高于对照组(P<0.05);IL-6 mRNA水平在12 h的表达明显高于对照组(P<0.05)。IL-1β蛋白在18、24 h的表达明显高于对照组(P<0.05);IL-6蛋白在12、18、24 h 3个时点均明显高于对照组(P<0.05)。结论:5×106CFU/mL Pg上清液可促进人脐静脉内皮细胞IL-1β和IL-6的基因及蛋白表达,提示Pg感染可能在As的发生发展中起一定作用。     

两种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激下口腔上皮细胞ICAM-1的表达

目的比较2种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P．gingivalis）刺激下口腔上皮细胞ICAM-1的表达水平。方法实验组用P．gingivalis ATCC 33277（Ⅰ型菌毛组）,W83（Ⅳ型菌毛组）,47A-1（Ⅳ型菌毛组）分别与KB细胞（ATCC CCL17）共同孵育24h;对照组为未受P.gingivalis刺激的KB细胞。分别在1h、3h、6h和24h收集细胞,运用流式细胞仪检测KB细胞膜上ICAM-1的动态表达。结果P．gingivalis刺激细胞后3h、6h和24h,实验组ICAM-1的表达水平均高于对照组;2种fimA基因型P．gingivalis调节KB细胞表达ICAM-1的方式相似,Ⅳ型菌毛组的调节作用强于Ⅰ型菌毛组。结论P.gingivalis上调口腔上皮细胞表达ICAM-1的水平与其fimA基因型相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关。