逆转录病毒载体介导人 GM-CSF 基因在 HL-60 白血病细胞的高效转移和表达

目的探讨将外源基因导入白血病细胞的条件及可行性，为造血系统恶性肿瘤的基因治疗奠定基础。方法采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包装技术将Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ｈＧＭ－ＣＳＦ导入包装细胞ＰＡ３１７，获得重组逆转录病毒，将重组病毒悬液感染人髓系白血病ＨＬ－６０细胞，经Ｇ４１８筛选出ＨＬ－６０转基因细胞群，应１用ＭＴＴ法测定ＧＭ－ＣＳＦ活性。结果ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测结果证实，ＧＭ－ＣＳＦ基因成功地转移并整合到ＨＬ－６０细胞基因组中，而未转基因和转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞经ＰＣＲ检测未能扩增出特异性片段。经ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ－１检测，转基因细胞分泌的ＧＭ－ＣＳＦ生物学活性为６０～２００ｎｇ／ｍｌ（细胞１×１０６，培养２４小时），而未转基因及转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞培养上清无ＧＭ－ＣＳＦ活性。结论逆转录病毒载体介导的ｈＧＭ－ＣＳＦ基因能在体外培养的人ＨＬ－６０白血病细胞中获得高效的转移和表达。     

免疫毒素（TCS—Hepama—1）及其与阿霉素（ADM）合用对荷人肝癌裸鼠的治？…

荷瘤裸鼠分治疗组４组，Ｔ１为ＴＣＳ－Ｈｅｐａｍａ－１＋ＡＤＭ组，Ｔ２为ＴＣＳ－Ｈｅｐａｍａ－１高剂量组，Ｔ３为ＴＣＳ－Ｈｅｏｐａｍａ－１低剂量组，Ｔ４为ＡＤＭ组，对照组也分４组，Ｃ１为生理盐水组，Ｃ２为ＴＣＳ组，Ｃ３为ＴＣＳ＋Ｈｅｐａｍａ－１组及Ｃ４为ＴＣＳ－ＮＭＩｇＧ组。     

Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２和Ｔｉｅ-２表达与肝癌血管生成的关系

目的：检测血管生成素１（Ａｎｇ-１）、血管生成素２（Ａｎｇ-２）及其共同受体Ｔｉｅ-２在肝癌中的表达及与肝癌血管生成的关系。方法：采用免疫组化（ＳＰ法）对５３例肝癌标本、３０例癌旁组织及１０例正常肝组织中Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２、Ｔｉｅ-２及ＣＤ３１标记的微血管密度（ＭＶＤ）进行检测,分析它们与肝癌血管生成的关系。结果：Ａｎｇ-２及Ｔｉｅ-２在肝癌组织中的阳性表达率分别为６７.９％、７５.５％,明显高于癌旁组织４３.３％、４２.３％和正常肝组织２０.０％、２０.０％（Ｐ＜０.０５）;Ａｎｇ-１在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率无显著性差异（Ｐ＞０.０５）;ＣＤ３１标记的ＭＶＤ与Ａｎｇ-２、Ｔｉｅ-２表达密切相关。ＣＤ３１标记的ＭＶＤ与Ａｎｇ.２、Ｔｉｅ.２在肝癌组织中表达呈正相关（Ｐ＜０.０５）。结论：Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２和Ｔｉｅ-２的表达在调节肝癌的血管生成中可能起重要作用。     

白血病患儿血中β_2－MG和中分子物质水平的研究

本研究同时检测儿童白血病患者血中β２－微球蛋白和中分子物质的含变化，并动态观察它们与疗效转好的关系，结果发现，无论是急淋还是急非淋白血病血中β２－ＭＧ和ＭＭＳ均显著升高（β２－ＭＧ在急淋组为３．１９ｎｇ／Ｌ±０．５４ｎｇ／Ｌ，急非淋组为４．３ｌｎｇ／Ｌ±１．０５ｎｇ／Ｌ，正常对照为１．７０ｎｇ／Ｌ±０．２６ｎｇ／Ｌ，ＭＭＳ在急淋组为４８．４ｕ／Ｌ±１８．８ｕ／Ｌ，急非淋组为３６．０ｕ／Ｌ±７．８ｕ／Ｌ，正常对照为２２．０ｕ／Ｌ±３．０ｕ／Ｌ，急性白血病患儿得到有效治疗获得完全缓解时，它们则显著下降，趋向正常水平（β２－ＭＧ为１·９７ｎｇ／Ｌ±０．３５ｎｇ／Ｌ，ＭＭＳ为２９．０ｕ／Ｌ±８．９ｕ／Ｌ），反之，治疗无效者则居高不下（β２－ＭＧ为２．６７ｎｇ／Ｌ±０．４５ｎｇ／Ｌ，ＭＭＳ为４０．４ｕ／Ｌ±９．３ｕ／Ｌ）。研究结果提示，血清β２－ＭＧ和ＭＭＳ检测对急性白血病的实验诊断有重大意义，并可供治疗和预后参考。     

Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２和Ｔｉｅ-２表达在乳腺癌血管生成中的作用

目的　检测乳腺癌Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２及其受体Ｔｉｅ-２的表达水平,探讨三者在乳腺癌发生发展及血管生成中的调节作用。方法　采用免疫组化ＳＰ法对７９例乳腺癌标本、６８例癌旁组织及４２例乳腺纤维腺瘤组织中Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２、Ｔｉｅ-２及ＣＤ３４标记的微血管密度（ＭＶＤ）进行检测,分析它们与乳腺癌血管生成的关系。结果　Ａｎｇ-２及Ｔｉｅ-２在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为７１.３％、６７.５％,明显高于癌旁组织的２１.６％、１９.２％和乳腺纤维腺瘤组织的２３.３％、１８.９％ （Ｐ＜０.０５）;Ａｎｇ-１在乳腺癌组织中的阳性表达率为１７.８％,明显低于癌旁组织的４８.６％及乳腺纤维腺瘤组织的５１.７％（Ｐ＜０.０５）。Ａｎｇ-２、Ｔｉｅ-２的表达与分期及腋窝淋巴结转移有关（Ｐ＜０.０５）。乳腺癌组织的ＭＶＤ为２５.６±９.８,明显高于癌旁组织的５.６±２.７和乳腺纤维腺瘤的６.９±３.１（Ｐ＜０.０５）。Ａｎｇ-１表达与ＭＶＤ呈负相关（ｒ＝－０.３９１,Ｐ＜０.０５）,Ａｎｇ-２、Ｔｉｅ-２的表达与ＭＶＤ均呈正相关（ｒ＝０.５８６,Ｐ＜０.０５;ｒ＝０.４１７,Ｐ＜０.０５）。结论　Ａｎｇ-１、Ａｎｇ-２和Ｔｉｅ-２在乳腺癌血管生成过程中发挥重要作用,并且Ａｎｇ-２、Ｔｉｅ-２的表达与乳腺癌的分期、腋窝淋巴结转移有关。     

PSA测定前列腺癌术后复发

最近，能测定血清前列腺特异性抗原（ＰＳＡ）水平为 ０．００３ｎｇ／ｍｌ左右的第三代高敏感性ＩＳＡ（ＨＳ－ＰＳＡ）试剂盒已经问世。日本九州大学泌尿科小藤秀嗣等分析了１００例手术后的前列腺癌病人ＨＳ－ＰＳＡ的测定结果与病理学结果的关系。从病理学上看，这１００例中４２例病变局限于器官（ＯＣＤ），５８例病变不局限于器官（ＮＣＤ）。 ＨＳ－ＰＳＡ ２次连续升高且为初期值的２倍以上，超过限值（０．００３ｎｇ／ｍｌ）１０倍，或第２次测定值上升３倍以上，这种情况称为 ＰＳＡｆａｉｌｕｒｅ（ＰＳＡ－ｆ。而ＰＳＡ－ｆ提…     

N—CWS对膀胱癌荷瘤鼠IL—1,IL—2,IL—6及NK活性的影响

目的：探讨红色诺卡氏菌细胞壁骨架（Ｎｏｃａｒｄｉａｒｕｂｒａ Ｃｅｌｌ Ｗａｌｌ Ｓｋｅｌｅｔｏｎ,Ｎ－ ＣＷＳ） 对膀胱肿瘤治疗效果和机理。方法：用Ｎ－ ＣＷＳ注射膀胱癌荷瘤鼠,观察Ｎ－ ＣＷＳ的抑瘤效果及Ｎ－ ＣＷＳ对ＩＬ－ １,ＩＬ－ ２,ＩＬ－ ６ 和ＮＫ活性的影响。结果：注射Ｎ－ ＣＷＳ的膀胱癌荷瘤鼠的抑瘤率为９６２ ％ ;肿瘤对照组小鼠ＩＬ－１ ,ＩＬ－ ２,ＩＬ－６ 水平及ＮＫ 细胞活性均明显低于正常小鼠（ Ｐ＜００１） ,提示荷瘤鼠免疫功能受到抑制。Ｎ－ ＣＷＳ组ＩＬ－ １,ＩＬ－ ２ ,ＩＬ－ ６ 水平及ＮＫ 细胞活性则明显高于肿瘤对照组。结论：Ｎ－ ＣＷＳ对膀胱癌具有明显的抑制作用,其机理可能是通过提高机体的ＩＬ－ １ ,ＩＬ－ ２,ＩＬ－ ６ 水平和ＮＫ 的活性促进机体的抗肿瘤免疫而实现的     

LiCl协同IL—2对脐血有核细胞增殖,凋亡及NK活性的影响

目的 探讨ＬｉＣｌ、ＩＬ－２对脐血有核细胞（ＣＢＮＣ）的细胞周期、增殖、凋亡及ＮＫ生的影响,为临床应用提供依据。方法 （１）＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＬｉＣｌ、ＩＬ－２、ＬｉＣｌ＋ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＳＦ对ＣＢＮＣ细胞增殖作用的影响。（２）用流式细胞仪测定ＬｉＣｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ对ＣＢＮＣ细胞周期及凋亡的影响。（３）测定ＬｉＣｌ、ＩＬ－２、ＬｉＣｌ＋ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ对ＣＢＮＣ的     

GATA－1、GATA－2和SCL基因在髓性白血病中的表达和联合表达

应用聚合酶链反应方法，检测了８０例ＡＮＬＬ和１７例ＣＭＬ中新报道的转录因子ＧＡＴＡ－１、ＧＡＴＡ－２和干细胞白血病（ＳＣＬ）基因的表达和联合表达情况。结果显示ＧＡＴＡ－２广泛表达于髓性白血病细胞中，在ＡＮＬＬ和ＣＭＬ中的表达率分别为８８．７５％和８８．２４％。ＧＡＴＡ－１和ＳＣＬ基因在ＡＮＬＬ中的表达率分别为４５％和６３．７５％，而在ＣＭＬ中均为８８．２４％。绝大部分ＧＡＴＡ－１阳性或ＳＣＬ阳性者都联合表达了ＧＡＴＡ－２，推测ＧＡＴＡ－２在髓性白血病中可能调节ＧＡＴＡ－１和ＳＣＬ的表达。另外，ＧＡＴＡ－１和ＳＣＬ的持续表达，可能与在干细胞或祖细胞水平上，细胞的异常增殖和分化成熟障碍并致白血病有关。     

三对引物聚合酶链反应扩增检测肝细胞癌肝组织中乙型肝炎病毒…

用聚合酶链反应技术检测了１６例肝细胞癌患者癌灶和癌旁肝组织中乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸。所用三对引物Ｓ１／Ｓ２、Ｃ１／Ｃ２、Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２分别选自ＨＶＢＤＮＡ的Ｓ区，前Ｃ和Ｃ区，以及Ｘ区，以质粒提取ＨＢＶＤＮＡ作灵敏度测定，ＰＣＲ－ＥＢ可达１０＾－２ｐｇ，ＰＣＲ－ＳＢＨ可达１０＾６Ｐｇ，以Ｓ，Ｃ和Ｘ引物扩增，阳性率分别为４３．８％（１４／３２），７１．９％（２３／３２）和７１．９％（２３／３     

非小细胞肺癌p16基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ１６基因突变的情况,本研究应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中ｐ１６基因外显子２的突变情况,现将结果报告如下。１　材料与方法２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织及同一病例非肿瘤肺组织均为住院病例手术切除标本,并经病理证实。按常规方法提取ＤＮＡ。ＰＣＲ反应在ＰＥ９６００热循环仪中进行,扩增ｐ１６基因第２外显子,引物序列：　　ＰＳ１：５′－ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ－３′ＰＳ２：５′－ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ－３′循…     

绿茶儿茶素对人肝癌细胞生长的抑制作用

绿茶儿茶素（ＧｒｅｅｎＴｅａＣａｔｅｃｈｉｎ,ＧＴＣ）是绿茶的主要成分,流行病学和动物实验研究表明,ＧＴＣ具有抑瘤作用。本文旨在研究ＧＴＣ对体外培养人肝癌细胞生长的影响。１　材料与方法１１　材料人肝癌ＢＥＬ－７４０２、ＳＭＭＣ－７７２１细胞由中国医学科学院血液学研究所提供。ＧＴＣ由中国医学科学院肿瘤学研究所程书钧教授惠赠。ＭＴＴ（四唑盐）为Ｓｉｇｍａ公司产品。１２　方法１２１　ＧＴＣ对ＢＥＬ－７４０２和ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长抑制作用　该两种细胞均培养于含１５％胎牛血清的ＰＲＭＩ１６…     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB

目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制,对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照,采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒,以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ;③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应;④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料,应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法,确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物     

肿瘤放射线诱导性TNF基因疗法的实验研究

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对机体具有一定的放射线保护作用，并能增强肿瘤的放疗效果。用可被放射线转录激活的Ｅｇｒ－１启动子与人ＴＮＦ的融合基因，构建成放射线诱导性的人ＴＮＦ双拷贝逆转录病毒载体ｐＥＴＤＣ，经包装细胞Ｐｓｉ－２和Ｃｒｉｐ的两次包装后，其病毒上清的病毒滴度达４×１０５ＣＦＵ／ｍｌ。用此病毒上清感染小鼠成纤维细胞株ＮＩＨ３Ｔ３和黑色素细胞株Ｂ１６．Ｆ１０，经Ｇ４１８抗性筛选后，得到的阳性克隆分泌ＴＮＦ量分别为２．１ｎｇ／ｍｌ和１．１ｎｇ／ｍｌ，并经ＲＴ－ＰＣＲ证实了人ＴＮＦｍＲＮＡ的表达。经２０Ｇｙ的放射线体外照射后，其ＴＮＦ表达量分别升至１３．８ｎｇ／ｍｌ和５．７ｎｇ／ｍｌ，即分别为照射前的５．６倍和４．２倍。此结果为其将来瘤体内注射该ＴＮＦ基因表达载体并辅助局部放疗的体内实验打下了基础。     

非小细胞肺癌中P—gp,p53,bcl—2蛋白表达及其相关性研究

目的 研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｐ５３、ｂｃｌ－２蛋白以及耐多药基因ＭＤＲ１产物Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）的表达及相互关系,探讨它们在ＮＳＣＬＣ发展、预后及耐药中的作用。方法 采用免疫组化Ｓ－Ｐ法,对６０例ＮＳＣＬＣ及其癌旁正常肺组织中ｐ５３、ｂｃｌ－２蛋白和Ｐ－ｇｐ进行检测。结果 ｐ５３、ｂｃｌ－２蛋白及Ｐｇｐ在ＮＳＣＬＣ中表达明显高于癌旁正常组织（Ｐ〈０．０１）。两者都与患者预后显著负相关（     

^125I标记的免疫毒素（TCS—Hepama—1）在荷人肝癌裸鼠体内分布及…

＾１２５Ｉ标记的免疫毒素ＴＣＳ－Ｈｅｐａｍａ－１及对照用ＴＣＳ－ＮＭＩｇＧ在荷瘤裸鼠体内分布及肿瘤显像结果表明：实验组裸鼠尾静脉注入＾１２５Ｉ－ＴＣＳ－Ｈｅｐａｍａ－１后第２天，血的放射性提高，随着时间延长，血各组织宫官的放射量逐渐减少。而肿瘤组织的每克放射剂量逐渐增多，第６起Ｔ／ＮＴ值均〉１，第８天达最高，瘤／血，瘤／肝比为１．４５及２．０。５     

脑脊液中β2—微球蛋白,铁蛋白,癌胚抗原联合检测对诊断中枢神经？…

我们对３４例急性白血病（ＡＬ）合并中枢神经系统白血病（ＣＮＳ－Ｌ）和８２例ＡＬ不合并ＣＮＳ－１患者患者了脑脊液（ＣＳＦ）中β２－微球蛋白（β２－ＭＧ）、铁蛋白（Ｆｔ）和癌胚抗原（ＣＥＡ）含量测定（ＣＥＡ）含量测定。结果表明：合并ＣＮＳ－Ｌ患者ＣＳＦ中的各单项标记物平均含量均高于不合并ＣＮＳ－Ｌ患者。用阶梯分割线法分析β２－ＭＧ＋ＣＥＡ或≥β２－ＭＧ＋Ｆｔ联合应用的结果表明双标记物联合测定的诊断特异     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

重组人睫状神经营养因子对肿瘤细胞体外生长的影响

观察了重组人睫状神经营养因子（ｒｈＣＮＴＦ）对５个肿瘤细胞系（大鼠胶质Ｃ６系，人多形性胶质母细胞瘤ＳＨＧ－４４系，小鼠黑色素瘤Ｂ１８系增殖人胃粘液腺癌ＭＧＣ－８０３系和人肝细胞癌ＳＭＭＣ－７７２１系）体外增殖的影响，发现ｒｈＣＮＴＦ（２０ｎｇ／ｍｌ－２０００ｎｇ／ｍｌ）可抑制Ｃ６和ＳＨＧ－４４细胞增殖，对Ｂ１６细胞有刺激增殖作用，但对ＭＧＣ－８０３和ＳＭＭＣ－７７２１细胞的增无明显影响。结果表明，     

IL－2的肌肉注射与药理作用的关系

为了避免ＩＬ－２静脉输入所造成的明显毒副作用，在临床应用中常采用肌肉注射方式。本文研究ＩＬ－２肌肉注射后的吸收情况，以确定该类药物临床应用的适宜注射途径。１材料与方法１．１ＩＬ－２的标记人ＩＬ－２生产菌珠，常规方法制备ＩＬ－２，并采用环ＤＴＰＡ法标记９９ｍＴｃ，比活１．００Ｕ／ｎｇ，纯度＞９５％，热原、细菌检测均为阴性。１．２肌肉注射ＩＬ－２家兔体内分布家兔３只，雄性，体重２．６－３．７ｋｇ，禁食水２天。臀大肌肌肉注射ＩＬ－２，ＤＴＰＡ－９９ｍＴｃ２ｍＣｉ／１０ｇ／０．５ｍｌ，并于注射后１，５，…