补骨脂素对人乳腺癌多药耐药 Bcl-2基因蛋白表达的影响

多药耐药性（MDR）是肿瘤化疗失败的主要原因之一。补骨脂是补益药中少有的钙离子通道拮抗剂，补骨脂素是其主要成分之一，以往我们对其逆转MDR进行了几方面研究，明确其有明显的逆转耐药作用。目前已有报道探讨Bcl-2家族与白血病MDR形成的关系。本实验就补骨脂素对MCF-7多药耐药细胞株Bcl-2基因蛋白表达影响报道如下。     

阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡及Bcl-2／bax基因mRNA表达的影响

目的探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响及对凋亡相关基因的作用。方法培养卵巢癌细胞株SK-OV-3,用不同浓度阿司匹林进行干预,用Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪方法定量检测细胞的凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2／bax表达。结果阿司匹林对SK-OV-3增殖的抑制率随作用时间的延长和药物浓度的增加而增加;阿司匹林作用后SK-OV-3细胞出现了典型的凋亡形态学变化,可见凋亡小体;不同浓度的阿司匹林处理细胞48h后,流式细胞术（FCM）显示细胞的凋亡呈剂量依赖性。1、5、10mmol／L阿司匹林诱导SK-OV-3细胞的凋亡率分别为（11．1±0．5）％、（17．9±0．4）％、（30．8±0．4）％均高于对照组（P〈0．01）;同时,随着阿司匹林浓度的增加,Co／G期细胞比例下降,G／M期细胞比例升高,细胞被阻断在G2／M期,细胞周期发生明显改变;阿司匹林作用后的卵巢癌细胞的凋亡相关基因Bcl-2表达降低,bax基因表达升高。结论阿司匹林能抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡．且阿司匹林诱导SK-OV-3细胞凋亡是通过下调Bcl-2表达和上调bax表达,而达到抗肿瘤的作用。     

血糖水平对大鼠脑挫裂伤后伤灶周围神经细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响

目的 研究大鼠脑挫裂伤后不同血糖水平对伤灶周围神经细胞中凋亡相关基因Bcl- 2和Bax mRNA表达水平的影响.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分成对照组和实验组,以自由落体法制造大鼠脑挫裂伤模型后,颈静脉置管输入50%葡萄糖溶液建立高血糖动物模型,对照组以相同方法输入等量生理盐水溶液.在伤后即刻、6、12、24、48h 5个时间点,抽提大鼠伤灶周围组织总RNA,RT-PCR方法分析两组大鼠伤灶周围的脑组织中Bcl-2和Bax mRNA表达水平.结果 正常脑组织中Bcl-2 mRNA表达几乎为阴性;脑挫裂伤后早期伤灶周围神经细胞Bcl-2 mRNA表达明显增加,在伤后24h达到高峰,之后渐下降.而正常脑组织中有Bax mRNA表达,脑挫裂伤后早期伤灶周围脑细胞Bax mRNA表达亦有明显增加,伤后12h达到高峰,之后渐下降.伤后各时间点实验组大鼠Bcl-2 mRNA的表达水平较对照组大鼠明显减低,而Bax mRNA表达则明显升高.结论 脑挫裂伤后高血糖水平对挫裂伤灶周围神经细胞中Bcl- 2基因的表达有抑制作用,而对Bax基因的表达则有促进作用.脑挫裂伤后高血糖水平会加重伤灶周围神经细胞的凋亡.     

维拉帕米对肝星状细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的:观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)凋亡的影响以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。方法:流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HSCs细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测Bcl-2表达的变化。结果:AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs细胞凋亡,且有剂量相关性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化检测显示,与对照组比较,维拉帕米组Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:维拉帕米可诱导HSCs凋亡,减弱Bcl-2的表达。     

索拉非尼联合热疗对肝癌HepG-2细胞中Bax、Bcl-2表达的影响

目的 探讨索拉非尼联合热疗对人肝癌HepG-2细胞株中Bax及Bcl-2蛋白表达的影响.方法 将实验细胞分为4组:对照组(正常培养的HepG-2细胞)、索拉非尼组(索拉非尼药物浓度为12 μmol/L)、热疗组(加热温度为43℃,加热时间为2 h)及索拉非尼联合热疗组.用免疫组织化学染色法观察各组人肝癌HepG-2细胞...     

圣和散对胃癌SGC-7901细胞Bcl-2表达的影响

目的研究中药圣和散对胃腺癌细胞SGC-7901Bcl-2表达的影响。方法圣和散作用于胃腺癌细胞SGC-7901,48h后收集细胞爬片,用抗Bcl-2mAb和免疫组织化学SABC法及图像分析技术分析Bcl-2。结果圣和散作用的胃腺癌细胞Bcl-2表达量A值120.13±0.18,较对照组细胞104.536±0.091下降显著(P<0.05)。结论圣和散对胃癌细胞的凋亡诱导作用可能与其影响Bcl-2表达有关。     

Bcl-2小干扰RNA对HL-60／VCR细胞耐药性逆转的研究

为探讨以bcl-2基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性，构建bcl-2基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60／VCR细胞，G418筛选后应用Western blot进行鉴定；MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化；Western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bax和耐药相关蛋白ZNRD1的表达变化。结果：成功地构建了bcl-2的小干扰RNA载体并转染HL-60／VCR；经蛋白质水平检测证实成功地建立了Bcl-2低表达的白血病细胞模型；转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强，且低表达耐药相关蛋白ZNRD1。结论：该小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性。     

新型反义寡核苷酸F951对HL60细胞Bcl-2基因表达及细胞增殖的抑制作用

目的　研究新型反义寡核苷酸F951对白血病细胞Bcl- 2基因表达及细胞增殖的影响。方法　不同浓度的F951与HL60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL60细胞增殖,用流式细胞术和RT -PCR法检测Bcl- 2蛋白及其mRNA表达,DNA片段化分析法检测凋亡细胞。结果　5, 10, 20μmol·L-1F951分别与HL60细胞共孵育1~5d,细胞生长明显受抑,这一抑制作用随F951浓度的升高和作用时间的延长而增强。MTTA值与未处理组相比F951 5, 10, 20μmol·L-1组细胞抑制率分别为: 20 .56%、37 .66%、54 .11%与对照组相比差异均有显著性;F951处理后HL60细胞Bcl 2mRNA水平下降,Bcl- 2蛋白减少;凝胶电泳可见典型的梯形带,且随着浓度提高诱导DNALadder的作用更加明显。结论　F951可下调Bcl -2基因表达,促进细胞凋亡而抑制白血病细胞增殖。     

丝裂霉素C诱导喉癌细胞凋亡及其对Bcl-2基因表达的影响

目的 探讨药物体外诱导喉癌细胞凋亡及其相关基因的作用.方法 丝裂霉素(MMC)处理喉癌细胞系Hep-2细胞,观察喉癌细胞的形态学改变,琼脂糖电泳检测DNA片断;免疫组化法检测Bcl-2基因表达.结果 2&#215;10-2 g/L MMC作用24 h后,可见细胞浓缩,核固缩,染色质浓聚等;出现DNA ladder;12 h后,Bcl-2蛋白表达量明显增加.结论 MMC诱导喉癌细胞凋亡,MMC可能由于上调了Bcl-2蛋白的表达而减弱了自身对喉癌细胞的诱导凋亡.     

湘产菝葜高效液相色谱指纹图谱的研究

目的建立湘产菝葜的高效液相色谱指纹图谱。方法采用Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,体积流量1 m L·min-1,柱温35℃,检测波长290 nm,运用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"软件处理图谱。结果 10批菝葜药材HPLC指纹图谱共标定16个特征峰,10批样品的相似度均>0.9。结论本方法操作简便且重现性好,可用于湘产菝葜药材的质量控制。     

菝葜药理活性部位的纯化

目的确定大孔吸附树脂纯化菝葜药理活性部位并保证其化学成分整体性的最佳工艺。方法以甾体总皂苷的含量为指标,选用D101大孔吸附树脂纯化,采用三级管阵列检测器 高效液相色谱法建立各纯化物色谱图。结果最佳纯化工艺为：先分别用纯化水和3倍柱体积的30%乙醇洗脱去杂质,再收集4倍柱体积的70%乙醇洗脱液得皂苷,最后用95%乙醇清洗树脂。结论该纯化工艺所得纯化物的纯度高,化学成分整体性好。     

反相高效液相色谱法测定中药菝葜中芪类成分的含量

目的:建立菝葜中芪类成分含量测定的RP-HPLC方法.方法:色谱柱为Zorbax SB C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%磷酸水溶液系统梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为320 nm,进样体积为10 μL,柱温为30℃.结果:本方法可以准确测定菝葜中5个芪类成分:虎杖苷(polydatin),云杉鞣酚(piceatann01),氧化白藜芦醇(oxyresveratr01),白藜芦醇(resveratr01),三棱素A(scirpusin A)的含量.结论:本方法简便、准确、专属性强,可以实现对菝葜药材以及相关制剂质量全面、准确的控制和评价.     

菝葜、土茯苓和土萆薜的薄层色谱鉴别

目的建立一种方法对药材性状相似的三种药材菝葜、土茯苓和土草醉进行定性鉴别。方法应用TLC对菝葜、土茯苓和土草薜水解前后的化学成分进行分析比较。结果实验表明菝葜、土茯苓和土草醉均含有β-谷甾醇。菝葜含有薯蓣皂苷元，可能含有菝葜皂苷元；土茯苓和土草醉不合薯蓣皂苷元或量微，可能含有菝葜皂苷元。结论三者既含有相同的化学成分，又有不同的化学成分，可以区别。     

菝葜、土茯苓和土萆薢的薄层色谱鉴别

目的 建立一种方法对药材性状相似的三种药材菝葜、土茯苓和土萆薢进行定性鉴别.方法 应用TLC对菝葜、土茯苓和土萆薢水解前后的化学成分进行分析比较.结果 实验表明菝葜、土茯苓和土草薢均含有β-谷甾醇.菝葜含有薯蓣皂苷元,可能含有菝葜皂苷元;土茯苓和土草薢不含薯蓣皂苷元或量微,可能含有菝葜皂苷元.结论 三者既含有相同的化学成分,又有不同的化学成分,可以区别.     

菝葜抗炎活性部位的血清药物化学研究

摘要目的对菝葜抗炎活性部位进行血清药物化学研究,探讨菝葜药效物质基础。方法建立菝葜提取物高效液相色谱（HPLC）分析法,通过HPLC图分析比较空白血清、含药血清、菝葜提取物的成分的差异,确定菝葜提取物大鼠灌胃后血中移行成分。结果在菝葜提取物含药血清中发现了45种入血成分,其中25种为原型成分,20种可能为原型成分的代谢产物。结论45种入血成分可能是菝葜的体内直接作用物质,对其进行深入研究将有助于阐明菝葜的药效物质基础及药效机制。     

菝葜抗小鼠移植性肿瘤的实验研究

目的研究菝葜乙酸乙酯提取物体内抗移植性肿瘤的作用及其对小鼠的免疫调节作用,为菝葜的临床应用提供理论依据。方法菝葜乙酸乙酯提取物灌饲接种过H22的荷瘤小鼠,并通过测定其抑瘤率、胸腺指数、脾指数及碳廓清指数(K值)和吞噬指数(a值)来进一步探讨其抗瘤活性和对机体的免疫调节作用。结果菝葜乙酸乙酯提取物具有抗移植性肿瘤H22的作用,抑瘤率达43.3%;同时对机体也有明显的提高免疫力作用。结论菝葜具有抗移植肿瘤的作用,并可提高荷瘤小鼠的机体免疫力。     

RP—HPLC同时测定菝葜药材中总槲皮素和山柰酚含量

目的:建立同时测定菝葜药材中槲皮素和山柰酚含量的反相高效液相色谱法。方法:色谱柱:Lichrospher C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液(55:45),流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长:365 nm。结果:槲皮素在2.97～29.7μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),山柰酚在3.01—30.1μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),方法回收率分别为98.9%和99.7%。结论:本方法简便、准确,灵敏度高,重复性好,可为评价菝葜药材质量提供依据。     

菝葜高效液相色谱指纹图谱的建立

目的 建立菝葜提取物的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱测定方法 ,并同时对其中落新妇苷和黄杞苷的含量进行测定. 方法 采用DIKMA Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇 0.1%磷酸溶液梯度洗脱,体积流量1.0 mL.min^-1,柱温30 ℃,检测波长303 nm. 结果落新妇苷和黄杞苷分别在0.08～20.52 μg和0.08～20.28 μg范围内线性关系良好,r分别为 0.997和0.998. 建立10个不同产地样品的HPLC指纹图谱. 结论 该方法 准确、稳定、可靠,可用于菝葜的质量研究和评价.     

菝葜乙酸乙酯提取物抑菌作用研究

目的菝葜属百合科植物,为一种常用中药,目前所用的菝葜提取物多为其40％的乙醇提取物,本实验室首创了菝葜的乙酸乙酯提取工艺并对其进行了抑菌活性研究,旨在开发出一种更加符合现代中药要求的新制剂。方法使用液体试管二倍稀释法及小鼠体内抑菌实验,检测菝葜乙酸乙酯提取物在体内外对常见菌的抑制作用。结果菝葜乙酸乙酯提取物可以在体外有效抑制常见菌的增殖,并对染菌小鼠起到显著的保护作用。结论菝葜乙酸乙酯提取物可以在小剂量使用时与菝葜乙醇提取物大剂量使用起到相同的抑菌作用。