土荆皮酸对HeLa细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究土荆皮酸对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法:采用PCR-ELISA方法检测HeLa细胞经PAB作用前后端粒酶活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布。结果:经PAB作用后,HeLa细胞端粒酶活性下降,随药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用增强;PAB作用24h后,HeLa细胞G2/M期细胞增多,S期细胞减少,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性。结论:PAB能抑制HeLa细胞的端粒酶活性,其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关。     

三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响。方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达。结果0.25μmol/LAs2O3(24~72h)可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应。结论AsO可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性。     

三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3 )对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响.方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达.结果 0.25μmol/ L As2O3 (24～72 h) 可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应.结论 As2O3可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性.     

Caspase 3在土荆皮酸诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用

目的:探讨Caspase 3在土荆皮酸(PAB)诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用。方法:使用不同浓度的PAB处理SKOV3细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,采用Western Blot法检测SKOV3细胞经PAB作用前后Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达变化。结果:经PAB作用后,SKOV3细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞伴随细胞凋亡,随药物浓度增加,Bcl-2蛋白表达逐渐下降,Caspase 3蛋白表达上调,Caspase 3活化百分率增高。结论:PAB能通过调节Bcl-2蛋白的表达激活Caspase 3,从而诱导SKOV3细胞发生凋亡。     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡对端粒酶活性影响的研究

目的：研究紫杉醇对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法：0.001-1μm的紫杉醇处理SGC7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率。通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP－银染法测定端粒酶活性变化。结果 不同浓度的紫杉醇对胃细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性,光镜及流式细胞术分析表明,0.01μm的紫杉醇处理后24小时,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,24小时酶活性即显著受抑制,72小时变为阴性。结论：紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一,端粒酶可作为肿瘤化疗的敏感性指标。     

端粒酶活性与卵巢癌预后的关系

目的:探讨端粒酶活性水平对卵巢癌化疗敏感性和预后的影响。方法:以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶的活性。结果:在34例卵巢癌组织中,端粒酶阳性者30例。在16例端粒酶活性低于2 U者中,15例化疗有效,仅1例出现复发,无死亡。在14例端粒酶活性高于2 U者中,化疗有效9例,进展与复发或死亡5例。结论:随着端粒酶活性的增高,卵巢癌对化疗的敏感性下降,复发率增加。     

端粒酶活性与卵巢癌预后的关系

目的:探讨端粒酶活性水平对卵巢癌化疗敏感性和预后的影响.方法:以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶的活性.结果:在34例卵巢癌组织中,端粒酶阳性者30例.在16例端粒酶活性低于2U者中,15例化疗有效,仅1例出现复发,无死亡.在14例端粒酶活性高于2U者中,化疗有效9例,进展与复发或死亡5例.结论:随着端粒酶活性的增高,卵巢癌对化疗的敏感性下降,复发率增加.     

鬼臼毒素衍生物GP-14对HL-60细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的 观察自旋标记鬼臼毒素衍生物4β-N-^[4\     

hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性影响

目的 检测hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性的影响及其机制.方法 TRAP法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测hTERT蛋白表达.结果 端粒酶活性检测结果显示,A2780细胞吸光度A值为0.492±0.051,hTERT反义核酸作用48h A值降为0.351±0.047,hTERT反义核酸作用72h A值降为0.238±0.024.hTERT蛋白表达检测结果显示,A2780细胞hTERT蛋白阳性率89.513%±3.389%,hTERT反义核酸作用48h后hTERT蛋白阳性率低至71.237%±2.872%,hTERT反义核酸作用72h hTERT蛋白阳性率低至47.767%±1.226%.而hTERT正义核酸无上述作用. 结论 hTERT反义核酸能降低A2780细胞端粒酶活性,其机制可能是降低hTERT蛋白表达量.     

丁酸钠对大肠癌HT-29细胞凋亡以及钙离子浓度的影响

目的研究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)诱导大肠癌细胞HT-29凋亡的机制。方法 Hoechst 33342染色、Annexin V+PI和免疫印迹法检测NaB诱导大肠癌HT-29细胞的凋亡作用;激光共聚焦显微镜检测内质网(endoplasmic reticulum,ER)和细胞质中游离Ca2+浓度。结果 NaB可诱导大肠癌HT-29细胞凋亡,且具有剂量和时间反应关系;NaB浓度为2.5mmol/L,作用24h时凋亡标志分子(poly ADP-ribose polymerase,PARP)出现明显的切割片段;NaB可降低ER中游离Ca2+浓度以及升高细胞质内游离Ca2+浓度。结论 NaB可通过调节ER和细胞质中Ca2+浓度而诱导大肠癌HT-29细胞凋亡。     

c-myc在植酸诱导人胃癌细胞凋亡中的作用研究

目的研究植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法采用MTT实验法观察植酸对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜下观察植酸对细胞形态的改变;免疫组化法和Westernblot法检测凋亡调控基因c-myc的表达。结果MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量与时间的效应关系;倒置显微镜下的形态学观察表明加药组细胞的生长受到抑制;植酸组细胞中c-myc蛋白比对照组表达降低,且呈现剂量-反应关系。结论植酸对人胃癌SGC-7901细胞具有诱导凋亡作用,c-myc参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

人端粒酶逆转录酶调控的CD基因对卵巢癌细胞株的选择性杀伤作用研究

[目的]构建人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控下的自杀基因—胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶/5-氟胞嘧啶(CD-TK/5-FC)系统对人卵巢细胞及正常细胞株的体外杀伤作用。[方法]应用脂质体转染法将hTERT核心启动子启动质粒pBTdel-279转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞(NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性;应用RT-PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测pBTdel-279-CD-TK/5-FC系统和pcDNA3-CD-TK/5-FC系统对上述3种细胞不同的杀伤作用;利用RT-PCR技术检测转染前后3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的不表达情况。[结果]卵巢癌细胞系3AO中hTERT启动子活性增高,为23.2%,与pBTdel-279-TK/GCV系统作用相比,pBTdel-279-CD-TK/5-FC+GCV系统对端粒酶阳性的卵巢癌细胞系3AO的杀伤作用显著增强,对于端粒酶阴性正常细胞NOEC和HELF则无杀伤作用;pcDNA3-CD-TK转染后,3种细胞中均可检测到CD和TK基因;pBTdel-279-TK转染后,3AO可检测到CD和TK基因,正常细胞中则呈阴性。[结论]人端粒酶逆转录酶启动子调控下的CD自杀基因对卵巢癌细胞株选择性杀伤作用治疗是一种高效、靶向的卵巢癌基因治疗方式。     

蔬菜粉提取物对人肺癌细胞端粒酶活性的影响

目的 :　探讨蔬菜粉脂溶性提取物 (FEFVP)、β-胡萝卜素 (β-Car)对云锡矿工肺癌细胞YTMLC-90端粒酶活性的影响。方法 :　用 3∶ 7丙酮 -石油醚提取蔬菜粉 ,体外培养人肺癌细胞YTMLC-90 ,采用反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)、聚合酶链反应端粒重复序列扩增法 (PCR-TRAP)检测端粒酶活性。结果 :　证实云锡肺癌细胞端粒酶阳性 ;高浓度的 FEFVP(相当β-胡萝卜素 2 .5× 1 0 - 6 mol/L)和 β-胡萝卜素 (1× 1 0 - 4mol/L)处理 48h,显著抑制 YTMLC-90细胞端粒酶活性 (P<0 .0 5 )。结论 :　高浓度的蔬菜粉脂溶性提取物和 β-胡萝卜素可抑制 YTMLC-90细胞端粒酶活性。     

葡多酚对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用研究

目的研究葡多酚(GPC)对人乳腺癌(MCF-7)细胞增殖活性的影响及雌激素受体(ER)的调节作用。方法将GPC与MCF-7细胞共同培养,共设肿瘤细胞对照组、高、中、低(200、100、10μg/ml)剂量GPC组、ER阻断剂对照组(ICI10-6mol/L)和ER阻断剂(ICI10-6mol/L)+GPC(200μg/ml)6个组。用MTT法测定各组乳腺癌细胞的增殖活性水平,用免疫组化方法检测乳腺癌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和Bax蛋白的表达水平。结果与肿瘤细胞对照组比,高剂量GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平和PCNA阳性表达率降低,Bax蛋白阳性表达率升高(P<0.05);ER阻断剂+GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平、PCNA阳性表达率,均较高剂量GPC组升高,Bax蛋白阳性表达率降低,各项差别均有显著性意义(P<0.05)。结论GPC可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡;其作用与ER调节有密切关系。     

全反式视黄酸调控乳腺癌细胞的增殖及机制研究

目的研究全反式视黄酸(ATRA)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及ATRA与X射线照射对视黄醇类X受体α(RXRα)表达水平的影响。方法 MTT法检测细胞增殖,Western blot检测RXRα表达水平。结果 ATRA浓度在100～1000 nmol/L,72 h可抑制细胞的增殖。观察不同时间100 nmol/L的ATRA作用,24 h内,促进MDA-MB-231细胞的增殖,而作用48 h后,可抑制细胞的增殖。ATRA在100～1000 nmol/L范围内可诱导RXRα的表达,且存在浓度依赖性。100 nmol/L的ATRA作用24 h即可诱导RXRα的表达,并且存在时间依赖性。X射线照射未能诱导RXRα的表达。结论 100～1000 nmol/L的ATRA作用48 h即可抑制MDA-MB-231细胞增殖,且其对MDA-MB-231细胞RXRα蛋白表达存在浓度和时间依赖性,为ATRA用于临床乳腺癌的治疗提供了理论基础,也提示RXRα可能是ATRA抑制乳腺癌细胞增殖的机制之一。     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

维生素B_1、C和鲜桔汁对人肺癌细胞的作用

目的 :　观察维生素 B1、C及富含维生素 C的鲜桔汁在体外对人肺癌细胞 YTMLC-90生长的影响。方法 :　实验分 4组 :溶剂对照组 ,鲜桔汁组 (含维生素 C终浓度 30 ,60 ,1 2 0 μg/ml) ,维生素 C组 ( 30 ,60 ,1 2 0 μg/ml) ,维生素 B1组 ( 0 .0 1 ,0 .1 ,1 μg/ml)。实验方法包括四唑盐( MTT)比色实验 ,集落形成实验和 3H- Td R掺入实验。鲜桔汁中维生素 C含量及培养基中维生素 C稳定性用高效液相色谱法 ( HPLC)测定。结果与结论 :　以上三项实验均显示鲜桔汁、维生素 C及B1对人肺癌细胞 YTMLC- 90生长有一定抑制作用 ,且呈剂量 -效应和时间 -效应关系 ;维生素 B1、C的抑癌作用在 72 h后才能显示出 ;鲜桔汁组抑癌作用强于纯品维生素 B1和 C组。     

雌马酚对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的观察雌马酚(equol)对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用的分子机制。方法用不同浓度(10-8、10-7、10-6、10-5、5×10-5、10-4mol/L)雌马酚处理SKOV-3细胞24、48、72h后,及同时用10μmol/LERK通路抑制剂U0126或雌激素受体抑制剂ICI182,780处理1h后再用50μmol/L雌马酚处理2h,测定各组SKOV-3细胞存活率,用Westernblotting检测总ERK和磷酸化ERK1/2(p-ERK)的蛋白表达水平。结果各实验组SKOV-3细胞存活率随着雌马酚作用浓度和时间的增加而降低,总ERK蛋白表达量不变,p-ERK的表达量随雌马酚处理浓度的增加而逐渐降低。U0126、ICI182,780单独使用或与雌马酚联合使用均能够降低p-ERK的蛋白表达。结论雌马酚显著抑制人卵巢癌SKOV-3细胞的增殖,其机制是通过下调磷酸化ERK蛋白的表达发挥作用。